ХДХВ-ийн иммуноблотоор ДОХ-ын оношлогоо. Полимеразын гинжин урвал (ПГУ) Дархлаа арилгах механизмын практик хэрэглээ

Immunoblotting (immunoblot, Western Blot, western blot)- ферменттэй холбоотой иммуносорбент шинжилгээг (ELISA) вирусын эсрэгтөрөгчийг нитроцеллюлозын тууз (тууз) руу урьдчилан электрофорезээр шилжүүлэхтэй хослуулдаг.

Шинжлэх ухааны энэхүү үзэсгэлэнт нэрэнд "блот" нь "блот", "баруун" гэж орчуулагддаг тул "баруун" нь цаасан дээр зүүнээс баруун тийш, өөрөөр хэлбэл "блот" -ын тархалтын чиглэлийг тусгасан байдаг. газарзүйн газрын зураг нь баруунаас зүүн тийш чиглэж байна. "Дархлааны толбо" аргын мөн чанар нь иммуноферментийн урвалыг эсрэгтөрөгчийн холимогоор бус, харин нитроцеллюлозын мембраны гадаргуу дээр молекулын жингийн дагуу байрлах фракцуудад иммунофорезээр тараасан ХДХВ-ийн эсрэгтөрөгчтэй гүйцэтгэдэг явдал юм. Үүний үр дүнд ХДХВ-ийн үндсэн уургууд болох антиген тодорхойлогч бодисууд нь ферменттэй холбоотой дархлааны урвалын үед гарч ирдэг тусдаа судал хэлбэрээр гадаргуу дээр тархдаг.

Immunoblot нь хэд хэдэн үе шатыг агуулдаг.

Тууз бэлтгэх.Дархлал хомсдолын вирусыг (ХДХВ) өмнө нь цэвэршүүлж, бүрэлдэхүүн хэсгүүдэд нь устгаж, электрофорез хийж, ХДХВ-ийн эсрэгтөрөгчийг молекул жингээр нь ялгаж авдаг. Дараа нь арилгах аргыг ашиглан (илүүдэл бэхийг шавхах дэвсгэр дээр шахаж авахтай адил) эсрэгтөрөгчийг нитроцеллюлозын туузанд шилжүүлж, одоо ХДХВ-ийн шинж чанартай эсрэгтөрөгчийн зурвасын спектрийг агуулдаг бөгөөд энэ нь нүдэнд үл үзэгдэх хэвээр байна.

Шалгалтын дээж.Туршилтын материалыг (ийлдэс, өвчтөний цусны сийвэн гэх мэт) нитроцеллюлозын туузан дээр түрхэж, хэрэв дээжинд өвөрмөц эсрэгбие байгаа бол тэдгээр нь хатуу харгалзах (нэмэлт) эсрэгтөрөгчийн туузтай холбогддог. Дараачийн заль мэхийн үр дүнд энэхүү харилцан үйлчлэлийн үр дүнг дүрслэн харагдуулдаг.

Үр дүнгийн тайлбар.Нитроцеллюлозын хавтангийн тодорхой хэсгүүдэд тууз байгаа нь ХДХВ-ийн эсрэгтөрөгчийг хатуу тодорхойлсон эсрэгбиеийн шинжилгээнд хамрагдсан ийлдсэнд байгааг баталж байна.

    A зурвас - Эерэг хяналт

    Б зурвас - Сул эерэг хяналт

    C эгнээ - Сөрөг хяналт

    D эгнээ - Эерэг дээж (ХДХВ-1-ийн эсрэгбие илэрсэн)

Одоогийн байдлаар иммуноблот (иммуноблот) нь шинжилгээний ийлдсэнд вирусын өвөрмөц эсрэгбие байгаа эсэхийг баталгаажуулах гол арга юм. ХДХВ-ийн халдварын зарим тохиолдлуудад сероконверси үүсэхээс өмнө өвөрмөц эсрэгбие нь ELISA-аас илүү дархлаажуулалтаар илүү үр дүнтэй байдаг. Дархлаажуулалтын аргыг судлахдаа ДОХ-той өвчтөнүүдийн ийлдэсээс gp 41-ийн эсрэгбиемүүд ихэвчлэн илэрдэг бөгөөд урьдчилан сэргийлэх зорилгоор шинжилгээнд хамрагдсан хүмүүст p24-ийг илрүүлэх нь ХДХВ-ийн халдвартай эсэхийг тодорхойлох нэмэлт судалгаа шаарддаг. Генийн инженерчлэгдсэн рекомбинант уураг дээр суурилсан иммуноблотын тестийн систем нь цэвэршүүлсэн вирусын лизат дээр суурилсан уламжлалт системээс илүү өвөрмөц болох нь батлагдсан. Рекомбинант эсрэгтөрөгчийг хэрэглэх үед сарнисан биш харин тодорхой тодорхойлогдсон эсрэгтөрөгчийн нарийн зурвас үүсдэг бөгөөд үүнийг бүртгэх, үнэлэхэд хялбар байдаг.

ХДХВ-1-ийн халдвартай хүмүүсийн ийлдэс нь дараахь гол уураг ба гликопротейнүүдийн эсрэгбиемүүдийг илрүүлдэг - бүтцийн бүрхүүлийн уураг (env) - gp160, gp120, gp41; гол (гаг) - p17, p24, p55, түүнчлэн вирусын ферментүүд (pol) - p31, p51, p66. Env-ийн эсрэгбие нь ХДХВ-2-ын хувьд ердийн зүйл юм - gp140, gp105, gp36; gag - p16, p25, p56; pol - p68.

Урвалын өвөрмөц байдлыг тогтооход шаардлагатай лабораторийн аргуудын дотроос хамгийн өргөнөөр хүлээн зөвшөөрөгдсөн нь ХДХВ-1-ийн бүрхүүлийн уураг болох gp41, gp120, gp160, ХДХВ-2 - gp36, gp105, gp140-ийн эсрэгбие илрүүлэх явдал юм.

ДЭМБ ХДХВ-ийн аль ч хоёр гликопротеины эсрэгбие нь иммуноблотын аргаар илэрсэн эерэг ийлдэс гэж үздэг. Эдгээр зөвлөмжийн дагуу хэрэв дугтуйны уургуудын зөвхөн нэгийг нь (gp 160, gp 120, gp 41) хослуулан эсвэл бусад уурагтай урвалгүй урвалд оруулбал үр дүн нь эргэлзээтэй гэж үзэж, дахин туршилт хийхийг зөвлөж байна. өөр цуврал эсвэл өөр компаний иж бүрдэл. Үүний дараа үр дүн нь эргэлзээтэй хэвээр байвал 6 сарын турш ажиглалт хийхийг зөвлөж байна (3 сарын дараа судалгаа).

Энэ уургийн эсрэгбие нь заримдаа эхлээд гарч ирдэг тул p24 антигентэй эерэг урвал байгаа нь сероконверцийн үеийг илтгэж болно. Энэ тохиолдолд эмнэлзүйн болон эпидемиологийн өгөгдлөөс хамааран дор хаяж 2 долоо хоногийн дараа сийвэнгийн дээжээр судалгааг давтан хийхийг зөвлөж байна, энэ нь ХДХВ-ийн халдварын үед хосолсон ийлдэс шинжилгээ хийх шаардлагатай байдаг.

Env уурагтай урвалд ороогүй гаг ба полын уурагтай эерэг урвал үзүүлэх нь эрт үеийн сероконверцийг илэрхийлж, ХДХВ-2 халдвар эсвэл өвөрмөц бус урвалыг илтгэнэ. ХДХВ-2-ын шинжилгээ хийсний дараа ийм үр дүн гарсан хүмүүсийг 3 сарын дараа (6 сарын дотор) дахин шинжилгээнд хамруулдаг.

ХДХВ-ийн халдварыг цаг тухайд нь оношлох нь маш чухал арга хэмжээ болдог, учир нь эмчилгээг эрт эхлүүлэх нь өвчний цаашдын хөгжлийг тодорхойлж, өвчтөний амьдралыг уртасгах боломжтой байдаг. Сүүлийн жилүүдэд энэхүү аймшигт өвчнийг илрүүлэхэд ихээхэн ахиц дэвшил гарсан: хуучин тестийн системүүд илүү дэвшилтэт системүүдээр солигдож, шинжилгээний аргууд илүү хүртээмжтэй болж, тэдгээрийн нарийвчлал мэдэгдэхүйц нэмэгдэж байна.

Энэ нийтлэлд бид ХДХВ-ийн халдварыг оношлох орчин үеийн аргуудын талаар ярих болно, мэдлэг нь энэ асуудлыг цаг тухайд нь эмчлэх, өвчтөний амьдралын чанарыг хэвийн байлгахад тустай.

ХДХВ-ийн оношлогооны аргууд

ОХУ-д ХДХВ-ийн халдварыг оношлох стандарт процедурыг явуулдаг бөгөөд үүнд хоёр түвшний орно.

  • ELISA тестийн систем (скрининг шинжилгээ);
  • иммуноблотинг (IB).

Оношлогоонд бусад аргуудыг ашиглаж болно:

  • хурдан туршилтууд.

ELISA тестийн системүүд

Оношилгооны эхний үе шатанд ХДХВ-ийн халдварыг илрүүлэхийн тулд скрининг тестийг (ELISA) ашигладаг бөгөөд энэ нь халдварын хариуд бие махбодид үүссэн тодорхой эсрэгбиемүүдийг барьж авдаг лабораторид бий болсон ХДХВ-ийн уураг дээр суурилдаг. Туршилтын системийн урвалжууд (ферментүүд) -тэй харилцан үйлчилсний дараа индикаторын өнгө өөрчлөгддөг. Дараа нь эдгээр өнгөний өөрчлөлтийг тусгай төхөөрөмж ашиглан боловсруулдаг бөгөөд энэ нь гүйцэтгэсэн шинжилгээний үр дүнг тодорхойлдог.

Ийм ELISA шинжилгээ нь ХДХВ-ийн халдварыг нэвтрүүлснээс хойш хэдхэн долоо хоногийн дотор үр дүнг харуулж чадна. Энэ шинжилгээ нь вирус байгаа эсэхийг тодорхойлохгүй, харин эсрэгбие үүсэхийг илрүүлдэг. Заримдаа хүний ​​биед ХДХВ-ийн эсрэгбие нь халдвар авснаас хойш 2 долоо хоногийн дараа эхэлдэг боловч ихэнх хүмүүст энэ нь хожуу буюу 3-6 долоо хоногийн дараа үүсдэг.

Янз бүрийн мэдрэмжтэй ELISA тестийн дөрвөн үе байдаг. Сүүлийн жилүүдэд синтетик пептид эсвэл рекомбинант уураг дээр суурилсан, илүү өвөрмөц, нарийвчлалтай гурав, дөрөв дэх үеийн туршилтын системүүд улам бүр ашиглагдаж байна. Эдгээрийг ХДХВ-ийн халдварыг оношлох, ХДХВ-ийн халдварын тархалтыг хянах, хандивласан цусыг шинжлэхэд аюулгүй байдлыг хангахад ашиглаж болно. III ба IV үеийн ELISA тестийн системийн нарийвчлал 93-99% (Баруун Европт үйлдвэрлэсэн туршилтууд илүү мэдрэмтгий байдаг - 99%).

ELISA шинжилгээг хийхийн тулд өвчтөний судаснаас 5 мл цус авдаг. Сүүлчийн хоол болон шинжилгээний хооронд дор хаяж 8 цаг өнгөрөх ёстой (ихэвчлэн өглөө нь өлөн элгэн дээр хийдэг). Сэжигтэй халдварын дараа (жишээлбэл, шинэ бэлгийн хавьтагчтай хамгаалалтгүй бэлгийн харьцаанд орсны дараа) 3 долоо хоногийн өмнө ийм шинжилгээ хийхийг зөвлөж байна.

ELISA шинжилгээний хариу 2-10 хоногийн дотор гарна.

  • сөрөг үр дүн: ХДХВ-ийн халдвар байхгүй байгааг илтгэж, мэргэжилтэнтэй холбоо барих шаардлагагүй;
  • хуурамч сөрөг үр дүн: халдварын эхний үе шатанд (3 долоо хоног хүртэл), ДОХ-ын сүүлийн үе шатанд дархлааны тогтолцоог хүчтэй дарангуйлж, цусыг буруу бэлдсэн үед ажиглагдаж болно;
  • хуурамч эерэг үр дүн: зарим өвчин, цусыг буруу бэлтгэсэн тохиолдолд ажиглагдаж болно;
  • эерэг үр дүн: ХДХВ-ийн халдварыг илтгэнэ, IB хийх шаардлагатай бөгөөд өвчтөн ДОХ-ын төвийн мэргэжилтэнтэй холбоо барина.

ELISA тест яагаад хуурамч эерэг үр дүнг өгч чадах вэ?

ХДХВ-ийн ELISA шинжилгээний хуурамч эерэг үр дүн нь цусыг буруу боловсруулсны улмаас эсвэл дараахь эмгэг, өвчтэй өвчтөнүүдэд гарч болно.

  • олон миелома;
  • Эпштейн-Барр вирусын улмаас үүссэн халдварт өвчин;
  • дараа нь төлөв;
  • аутоиммун өвчин;
  • жирэмсний арын дэвсгэр дээр;
  • вакцин хийлгэсний дараах нөхцөл байдал.

Дээр дурдсан шалтгааны улмаас цусанд өвөрмөц бус хөндлөн урвал бүхий эсрэгбие илэрч болох бөгөөд тэдгээрийн үйлдвэрлэл нь ХДХВ-ийн халдвараас шалтгаалаагүй болно.

Сүүлийн жилүүдэд илүү мэдрэмтгий пептид ба рекомбинант уураг агуулсан (тэдгээрийг генийн инженерчлэлийг in vitro ашиглан нийлэгжүүлдэг) III ба IV үеийн туршилтын системийг ашигласнаар хуурамч эерэг үр дүнгийн давтамж мэдэгдэхүйц буурч байна. Ийм ELISA тестийг нэвтрүүлсний дараа хуурамч эерэг үр дүнгийн давтамж мэдэгдэхүйц буурч, ойролцоогоор 0.02-0.5% байна.

Хуурамч эерэг үр дүн нь тухайн хүн ХДХВ-ийн халдвар авсан гэсэн үг биш юм. Ийм тохиолдолд ДЭМБ дахин ELISA шинжилгээ хийхийг зөвлөж байна (заавал IV үе).

Өвчтөний цусыг лавлагаа эсвэл арбитрын лабораторид "давтах" тэмдэгтэйгээр илгээж, IV үеийн ELISA тестийн системийг ашиглан шинжилдэг. Хэрэв шинэ шинжилгээний үр дүн сөрөг байвал эхний үр дүнг алдаатай (худал эерэг) гэж үзэж, IS хийгдэхгүй. Хоёр дахь шинжилгээний явцад эерэг эсвэл эргэлзээтэй үр дүн гарсан тохиолдолд өвчтөн 4-6 долоо хоногийн дараа ХДХВ-ийн халдварыг батлах эсвэл үгүйсгэхийн тулд IB-д хамрагдах ёстой.

Дархлаа арилгах

ХДХВ-ийн халдварын эцсийн оношийг дархлаажуулалтын (IB) эерэг үр дүн гарсны дараа л хийж болно. Үүнийг хийхийн тулд вирусын уураг түрхсэн нитроцеллюлозын туузыг ашигладаг.

IB-ийн цусны дээжийг судсаар хийдэг. Дараа нь тусгай боловсруулалтанд хамрагдаж, түүний сийвэн дэх уурагуудыг цэнэг, молекулын жингийн дагуу тусгай гель болгон тусгаарладаг (цахилгаан талбайн нөлөөн дор тусгай төхөөрөмж ашиглан залруулга хийдэг). Цусны ийлдэс гель дээр нитроцеллюлозын туузыг түрхэж, тусгай тасалгаанд "блотинг" хийдэг. Туузыг боловсруулж, ашигласан материал нь ХДХВ-ийн эсрэгбие агуулсан бол тэдгээр нь IB дээрх эсрэгтөрөгчийн туузтай холбогдож, шугам хэлбэрээр харагдана.

Дараах тохиолдолд IB эерэг гэж үзнэ.

  • Америкийн CDC шалгуурын дагуу - туузан дээр gp41, p24, gp120/gp160 хоёр буюу гурван мөр байна;
  • Америкийн FDA-ийн шалгуурын дагуу тууз нь p24, p31 гэсэн хоёр мөр, gp41 эсвэл gp120/gp160 мөртэй байна.

Тохиолдлын 99.9% -д IB эерэг үр дүн нь ХДХВ-ийн халдварыг илтгэнэ.

Хэрэв шугам байхгүй бол IB сөрөг байна.

gr160, gr120, gr41-тэй мөрүүдийг тодорхойлохдоо IB эргэлзээтэй байна. Энэ үр дүн дараах тохиолдолд тохиолдож болно:

  • онкологийн өвчин;
  • жирэмслэлт;
  • байнга цус сэлбэх.

Ийм тохиолдолд өөр компаний иж бүрдэл ашиглан судалгааг давтан хийхийг зөвлөж байна. Хэрэв нэмэлт IB хийсний дараа үр дүн нь эргэлзээтэй хэвээр байвал зургаан сарын турш ажиглалт хийх шаардлагатай (IB 3 сар тутамд хийгддэг).

Полимеразын гинжин урвал

ПГУ-ын шинжилгээ нь вирусын РНХ-ийг илрүүлэх боломжтой. Түүний мэдрэмтгий чанар нь нэлээд өндөр бөгөөд халдвар авсанаас хойш 10 хоногийн дотор ХДХВ-ийн халдварыг илрүүлэх боломжийг олгодог. Зарим тохиолдолд ПГУ-ын өндөр мэдрэмж нь бусад халдварын эсрэгбиемүүдэд хариу үйлдэл үзүүлдэг тул хуурамч эерэг үр дүн өгч болно.

Энэхүү оношлогооны арга нь үнэтэй бөгөөд тусгай тоног төхөөрөмж, өндөр мэргэшсэн мэргэжилтнүүд шаарддаг. Эдгээр шалтгаанууд нь хүн амын массын шинжилгээг хийх боломжгүй юм.

ПГУ-ыг дараах тохиолдолд хэрэглэнэ.

  • ХДХВ-ийн халдвартай эхээс төрсөн нярайд ХДХВ-ийн халдвар илрүүлэх;
  • ХДХВ-ийн халдварыг "цонх үе" буюу IB-ийн эргэлзээтэй үед илрүүлэх;
  • цусан дахь ХДХВ-ийн концентрацийг хянах;
  • донорын цусыг судлах зорилгоор.

ПГУ-ын шинжилгээ нь дангаараа ХДХВ-ийн халдварыг оношлохгүй, харин маргаантай нөхцөл байдлыг шийдвэрлэх нэмэлт оношлогооны арга болгон явуулдаг.


Экспресс аргууд

ХДХВ-ийн халдварын оношилгооны нэг шинэлэг зүйл бол 10-15 минутын дотор үр дүнг үнэлэх боломжтой хурдан шинжилгээ юм. Хамгийн үр дүнтэй, үнэн зөв үр дүнг капиллярын урсгалын зарчим дээр үндэслэн иммунохроматографийн туршилтыг ашиглан олж авдаг. Эдгээр нь цус эсвэл бусад сорилтын шингэн (шүлс, шээс) түрхдэг тусгай тууз юм. Хэрэв ХДХВ-ийн эсрэгбие байгаа бол 10-15 минутын дараа тест дээр өнгөт болон хяналтын тууз гарч ирнэ - эерэг үр дүн. Хэрэв үр дүн сөрөг байвал зөвхөн хяналтын зурвас гарч ирнэ.

ELISA тестийн нэгэн адил түргэн шинжилгээний үр дүнг IB шинжилгээгээр баталгаажуулах ёстой. Үүний дараа л ХДХВ-ийн халдварыг оношлох боломжтой.

Гэрийн хурдан шинжилгээний иж бүрдэл байдаг. OraSure Technologies1 тест (АНУ) нь FDA-аас зөвшөөрөгдсөн бөгөөд лангуун дээр байдаг бөгөөд ХДХВ-ийг илрүүлэхэд ашиглаж болно. Туршилтын дараа эерэг үр дүн гарсан тохиолдолд өвчтөн оношийг баталгаажуулахын тулд тусгай төвд үзлэг хийхийг зөвлөж байна.

Гэрийн хэрэглээнд зориулсан бусад туршилтуудыг FDA хараахан батлаагүй байгаа бөгөөд үр дүн нь маш эргэлзээтэй байж магадгүй юм.

Шуурхай тестүүд нь IV үеийн ELISA тестийн нарийвчлалаас доогуур байдаг ч хүн амын нэмэлт шинжилгээнд өргөн хэрэглэгддэг.

Та аль ч эмнэлэг, дүүргийн төв эмнэлэг, ДОХ-ын төрөлжсөн төвүүдэд ХДХВ-ийн халдвар илрүүлэх шинжилгээнд хамрагдах боломжтой. ОХУ-ын нутаг дэвсгэр дээр тэдгээрийг бүрэн нууцлалтайгаар эсвэл нэргүй байдлаар явуулдаг. Өвчтөн бүр шинжилгээний өмнө болон дараа нь эмнэлгийн болон сэтгэл зүйн зөвлөгөө авах боломжтой. Та зөвхөн арилжааны эмнэлгийн байгууллагад ХДХВ-ийн шинжилгээг төлөх шаардлагатай болно, харин улсын эмнэлэг, эмнэлгүүдэд үүнийг үнэ төлбөргүй хийдэг.

ХДХВ-ийн халдвар авах арга замууд болон халдвар авах боломжийн талаар ямар домог байдаг талаар уншина уу.

Immunoblot гэж юу вэ? Энэ нь хүний ​​вируст халдварын лабораторийн оношлогооны нийтлэг арга юм. Энэ нь ХДХВ-ийн халдварыг илрүүлэх хамгийн үнэн зөв, найдвартай аргуудын нэг гэж тооцогддог. Найдвартай байдлын хувьд энэ нь иммуноблотын үр дүнг үгүйсгэх аргагүй бөгөөд эцсийн үр дүнгээс ч давж гардаг.

ерөнхий мэдээлэл

Immunoblot - энэ юу вэ? Хүнд ХДХВ-ийн халдварыг танихын тулд цусны ийлдэс дэх эсрэгбие байгаа эсэхийг лабораторийн шинжилгээнд хамруулах шаардлагатай. Дархлаа арилгах аргыг мөн Western blot гэж нэрлэдэг. Энэ нь хүний ​​вирусийн халдварыг илрүүлэхэд нэмэлт шинжээчийн арга болгон ашигладаг. Цусан дахь ХДХВ-ийн эсрэгбие байгаа эсэхийг тодорхойлох лабораторийн шинжилгээ болох ELISA-г баталгаажуулах шаардлагатай. ELISA-ийн эерэг сорилыг иммуноблотын аргаар давхар шалгадаг. Энэ нь хамгийн мэдрэмтгий, төвөгтэй, үнэтэй гэж тооцогддог.

Зорилго

Immunoblot гэж юу вэ? Энэ нь цусны ийлдэс дэх вирусын эсрэгбие байгаа эсэхийг шалгах лабораторийн арга юм. Судалгааны явцад мэргэжилтэн эхлээд вирусын уурагуудыг гель хэлбэрээр ялгаж, нитроцеллюлозын мембран руу шилжүүлдэг. Immunoblotting процедур нь янз бүрийн үе шатанд ХДХВ-ийг илрүүлэх зорилготой юм. Эхний үе шатанд түүний бүрэлдэхүүн хэсгүүдээс цэвэршүүлсэн вирусыг электрофорезд хамруулж, түүний найрлагад орсон антигенийг молекулын жингээр тусгаарладаг.

Энэ нь амьд эсэд удамшлын мэдээллээ суулгаж, үржүүлдэг. Энэ үе шатанд хүн халдвар авсан бол ХДХВ-ийн вирус тээгч болдог. Өвчний өвөрмөц байдал нь удаан хугацааны туршид өөрийгөө илэрхийлэхгүй байж болно. Вирус нь лимфоцитуудыг устгадаг тул хүний ​​дархлаа буурч, бие нь халдварыг эсэргүүцэх чадваргүй болдог. Хэрэв ХДХВ-ийн эмчилгээг цаг тухайд нь зөв хийж чадвал өвчтөн өндөр наслах болно. Эмчилгээний дутагдал нь үхэлд хүргэдэг. Халдвар авсан үеэс эхлэн эмчилгээ хийлгээгүй тохиолдолд хамгийн дээд нас нь арван жилээс илүүгүй байна.

Онцлог шинж чанарууд

Immunoblot шинжилгээ нь эхний болон хоёрдугаар хэлбэрийн ХДХВ-ийн эсрэгтөрөгчийн эсрэгбие байгаа эсэхийг тодорхойлох найдвартай арга юм. Хэрэв хүн халдвар авсан бол хоёр долоо хоногийн дотор эсрэгбиемүүд гарч ирдэг бөгөөд үүнийг хожим нь илрүүлж болно. ХДХВ-ийн өвөрмөц онцлог нь эсрэгбиеийн хэмжээ хурдан нэмэгдэж, өвчтөний цусанд үлддэг. Хэдийгээр тэдгээр нь байгаа ч гэсэн өвчин нь хоёр ба түүнээс дээш жилийн хугацаанд илэрдэггүй. ELISA арга нь өвчин байгаа эсэхийг үргэлж үнэн зөв тодорхойлж чаддаггүй тул ферментийн иммуно шинжилгээнд эерэг үр дүн гарсан тохиолдолд immunoblotting болон PCR ашиглан үр дүнг баталгаажуулах шаардлагатай.

Хэрэглэх заалт

"Дархлаа" гэж юу болохыг аль хэдийн олж мэдсэн боловч энэ судалгааг хэнд зориулагдсан бэ? Immunoblotting ашиглан шинжилгээнд хамрагдах шалтгаан нь ELISA эерэг үр дүн юм. Мэс засал хийлгэх өвчтөнд ферментийн дархлааны шинжилгээ хийлгэх шаардлагатай. Үүнээс гадна жирэмслэхээр төлөвлөж буй эмэгтэйчүүд, түүнчлэн садар самуунтай бүх хүмүүс шинжилгээнд хамрагдах ёстой. ELISA-ийн үр дүн эргэлзэж байвал ХДХВ-ийн халдвартай өвчтөнүүдэд дархлаажуулалтыг тогтооно. Дараах түгшүүртэй шинж тэмдгүүд нь эмчид хандах шалтгаан байж болно.

  • гэнэт жин хасах;
  • сул дорой байдал, гүйцэтгэлийн алдагдал;
  • гурван долоо хоног үргэлжилдэг гэдэсний хямрал (суулгалт);
  • шингэн алдалт;
  • халуурах;
  • биеийн тунгалгын булчирхайн томрол;
  • кандидоз, сүрьеэ, уушгины хатгалгаа, токсоплазмоз, герпес өвчний хөгжил.

Өвчтөн венийн цус өгөхөөс өмнө бэлтгэл хийх шаардлагагүй. Туршилтаас 8-10 цагийн өмнө хоол идэж болохгүй. Цусаа өгөхийн өмнөх өдөр согтууруулах ундаа, кофе уухыг зөвлөдөггүй, хүнд дасгал хийх, сэтгэлийн түгшүүр мэдрэхийг зөвлөдөггүй.

Шинжилгээг хаана хийх вэ?

Би хаана ХДХВ-ийн шинжилгээ өгөх вэ? ELISA ба иммуноблотын судалгааг хотын хувийн эмнэлгүүдэд хийдэг бөгөөд үр дүнг 24 цагийн дотор өгдөг. Яаралтай оношлох боломжтой. Төрийн эмнэлгийн байгууллагуудад ОХУ-ын хууль тогтоомжийн дагуу ELISA шинжилгээ, дархлаажуулалтыг үнэ төлбөргүй хийдэг. Жирэмсэн эмэгтэйчүүд, түүнчлэн эмнэлэгт хэвтэх, мэс засал хийлгэж буй өвчтөнүүд халдварт өвчний шинжилгээнд хамрагдах шаардлагатай.

Судалгааг хэрхэн явуулдаг вэ?

ELISA шинжилгээг хэрхэн хийдэг вэ? Эерэг/сөрөг immunoblot нь ферментийн дархлаа судлалын үр дүнг баталгаажуулж эсвэл үгүйсгэдэг. Судалгааны журам нь маш энгийн. Мэргэжилтэн нь венийн цусыг авдаг бөгөөд энэ нь таван минутаас ихгүй хугацаа шаардагдана. Дээж авсны дараа тарилгын талбайг халдваргүйжүүлж, боолтоор хучих хэрэгтэй. Дээжийг өлөн элгэн дээр хийдэг тул процедурын дараа нэг баар хар шоколад идэх эсвэл чихэрлэг халуун ундаа уух нь гэмтээхгүй.

Улсын эмнэлгийн байгууллагад үнэ төлбөргүй шинжилгээ хийлгэхийн тулд ерөнхий эмчийн үзлэгт хамрагдах ёстой. Ерөнхийдөө immunoblotting нь дээж авах аргын хувьд бусад цусны шинжилгээнээс ялгаатай биш юм. Судалгааны арга зүй нь энгийн. Хэрэв хүний ​​цусанд вирус байгаа бол бие нь түүнийг устгах эсрэгбие үүсгэж эхэлдэг. Вирус бүр өөрийн гэсэн эсрэгтөрөгчийн уурагтай байдаг. Эдгээр эсрэгбиемүүдийг илрүүлэх нь дархлаажуулалтын аргын үндэс юм.

Үнэ

Шинжилгээ хэр үнэтэй вэ? ХДХВ-ийн иммуноблот нь хямдхан шинжилгээ биш юм. Дунджаар ферментийн дархлаа судлалын аргыг ашиглан скрининг шинжилгээ хийх нь 500-900 рубль байдаг. Immunoblotting нь баталгаажуулалтын судалгаа бөгөөд өртөг нь гурваас таван мянган рубль юм. Илүү нарийн төвөгтэй аргууд нь илүү үнэтэй байдаг. Жишээлбэл, та ойролцоогоор 12,000 рубль төлөх шаардлагатай болно.

Үр дүнгийн тайлбар

ХДХВ-ийн халдварыг оношлох хамгийн түгээмэл аргууд бол ферменттэй холбоотой иммуносорбент шинжилгээ ба иммуноблот юм. Эдгээр нь цусны ийлдэс дэх дархлал хомсдолын вирусын эсрэгбиемүүдийг тодорхойлоход хэрэглэгддэг. Халдвар байгаа эсэхийг ихэвчлэн скрининг болон баталгаажуулах гэсэн хоёр шинжилгээгээр баталгаажуулдаг. Судалгааны үр дүнгийн тайлбарыг эмч оношлох, эмчилгээг зааж өгөх ёстой. Хэрэв иммуноблот эерэг байвал энэ нь хүний ​​биед вирус байгаа гэсэн үг юм.

Эерэг үр дүн нь бие даасан эмчилгээ хийх шалтгаан байж болохгүй, учир нь өвчтөн бүр өвчний өөр өөр дүр төрхтэй байж болно. Чанарын шинжилгээнд скрининг, баталгаажуулалт орно. Хэрэв өвчтөнд вирус байхгүй бол үр дүнг "сөрөг" гэж тэмдэглэнэ. Шалгалтаар илэрсэн тохиолдолд нэмэлт баталгаажуулалтын судалгааг хийнэ. Иммуноблот нь скринингийг батлах эсвэл үгүйсгэдэг шинжилгээ юм. Тодорхой хэсэгт (уургийн байршил) туршилтын туузан дээр харанхуйлах шинж тэмдэг илэрвэл ХДХВ-ийн оношийг тавьдаг. Хэрэв үр дүн нь эргэлзээтэй байвал гурван сарын дотор шинжилгээ хийдэг.

Хэрэв та тодорхой дүрмийг дагаж мөрдвөл дархлал хомсдолын вирусын халдвараас урьдчилан сэргийлэх боломжтой: тохиолдлын бэлгийн хавьталд орохгүй байх, хавьтлын үед бэлгэвч хэрэглэх, эм хэрэглэхгүй байх. Хэрэв жирэмсэн эмэгтэйд өвчин илэрсэн бол эмчлэгч эмчийн зөвлөмжийг чанд дагаж мөрдөх нь чухал бөгөөд вирус байгаа эсэхийг шалгаж үзэхээ бүү мартаарай.

аль гипотензи, тахикарди, амьсгал давчдах, хөхрөлт. Өвчин хүндэрсэн тохиолдолд цус алдалт, цустай холилдсон бөөлжих боломжтой. Элэг, дэлүү томорч байна. Олигури ажиглагдаж байна. Температур нь 3-10 хоногийн турш тогтмол өндөр хэвээр байна. Захын цусанд - зүүн тийш шилжих нейтрофил лейкоцитоз. Тахал өвчний тайлбарласан ерөнхий илрэлүүдээс гадна өвчний эмнэлзүйн хэлбэрүүдийн онцлог шинж чанартай гэмтэл үүсдэг.

Арьсны хэлбэр нь ховор тохиолддог (3-5%). Халдварын орох хаалганы талбайд толбо гарч ирдэг, дараа нь гипереми, хаван бүхий нэвчдэстэй бүсээр хүрээлэгдсэн сероз цусархаг агууламжаар дүүрсэн папуляц, цэврүү (phlyctena) гарч ирдэг. Phlyctena нь хүчтэй өвдөлтөөр тодорхойлогддог. Онгойлгоход ёроолд нь харанхуй яр шархтай шарх үүсдэг. Тарваган тахлын шарх нь удаан үргэлжилдэг бөгөөд удаан эдгэрч, сорви үүсгэдэг. Хэрэв энэ хэлбэр нь септисиемийн хүндрэлтэй бол хоёрдогч идээт үрэвсэл, шархлаа үүсдэг. Бүс нутгийн бубо (арьсны bubonic хэлбэр) үүсэх боломжтой.

Bubonic хэлбэр нь хамгийн түгээмэл (ойролцоогоор 80%) бөгөөд харьцангуй хоргүй явцтай байдаг. Өвчний эхний өдрөөс эхлэн бүс нутгийн тунгалгийн булчирхайн хэсэгт хурц өвдөлт гарч ирдэг бөгөөд энэ нь хөдөлгөөнийг хүндрүүлж, өвчтөнийг албадан байрлалд оруулахад хүргэдэг. Анхдагч бубо нь дүрмээр бол ганц бие байдаг; Ихэнх тохиолдолд гэдэсний болон гуяны тунгалагийн зангилаанууд өртдөг ба зарим тохиолдолд суганы болон умайн хүзүүний тунгалгийн булчирхайнууд нөлөөлдөг. Бубоны хэмжээ нь хушгагаас дунд зэргийн хэмжээтэй алим хүртэл янз бүр байдаг. Тод шинж чанарууд нь хурц өвдөлт, өтгөн тууштай байдал, доод эдэд наалдсан, периаденит үүссэний улмаас контурын жигд байдал юм. Өвчний хоёр дахь өдөр бубо үүсч эхэлдэг. Энэ нь хөгжихийн хэрээр арьс нь улаан болж, гялалзсан, ихэвчлэн хөхрөлттэй байдаг. Эхэндээ энэ нь нягт, дараа нь зөөлөрч, хэлбэлзэл гарч, контур нь тодорхойгүй болно. Өвчний 10-12 дахь өдөр энэ нь нээгддэг - фистул ба шархлаат хэлбэр. Өвчний хоргүй явцтай, орчин үеийн антибиотик эмчилгээ хийснээр түүний шингээлт эсвэл склероз ажиглагдаж байна. Эмгэг төрүүлэгчийг гематогенээр нэвтрүүлсний үр дүнд хожуу гарч ирдэг, жижиг хэмжээтэй, өвдөлт багатай, дүрмээр бол хөхрөхгүй хоёрдогч хөөс үүсч болно. Энэ хэлбэрийн ноцтой хүндрэл нь хоёрдогч уушигны эсвэл хоёрдогч септик хэлбэрийн хөгжил байж болох бөгөөд энэ нь өвчтөний нөхцөл байдлыг эрс дордуулж, бүр үхэлд хүргэдэг.

Анхдагч уушигЭнэ хэлбэр нь ховор тохиолддог, 5-10% -д тахлын үед тохиолддог бөгөөд өвчний хамгийн аюултай, хүнд хэлбэрийн эмнэлзүйн хэлбэр юм. Энэ нь хурц, ширүүн эхэлдэг. Илэрхий хордлогын хам шинжийн арын дэвсгэр дээр хуурай ханиалгах, амьсгал давчдах, цээжин дэх зүсэх өвдөлт эхний өдрүүдээс гарч ирдэг. Дараа нь ханиалга нь үр бүтээлтэй болж, цэр ялгардаг бөгөөд цэрний хэмжээ хэд хэдэн нулимахаас эхлээд асар их хэмжээгээр өөрчлөгддөг бөгөөд энэ нь ховор тохиолддог. Цэр нь эхлээд хөөсөрхөг, шилэн, тунгалаг, дараа нь цуст дүр төрхтэй болж, дараа нь цэвэр цуст болж, тахлын нян их хэмжээгээр агуулагддаг. Энэ нь ихэвчлэн шингэн тууштай байдаг - оношлогооны шинж тэмдгүүдийн нэг юм. Бие махбодийн мэдээлэл хомс: аускультациар өртсөн дэлбэнгийн цохилтын дуу бага зэрэг богиноссон, нарийн амьсгал давчдах нь өвчтөний ерөнхий ноцтой байдалтай нийцэхгүй байна. Эцсийн үе нь амьсгал давчдах, хөхрөх, ухаан алдах, уушигны хаван, ITS-ийн өсөлтөөр тодорхойлогддог. Цусны даралт буурч, импульс хурдасч, утас шиг болж, зүрхний чимээ шуугиантай, гипертерми нь гипотермиээр солигддог. Эмчилгээ хийлгээгүй тохиолдолд өвчин 2-6 хоногийн дотор үхэлд хүргэдэг. Антибиотикийг эрт хэрэглэснээр өвчний явц нь хоргүй бөгөөд бага зэрэг ялгаатай байдаг

IMMUNOBLOT(western blot) - ХДХВ-ийн эсрэгбие байгаа эсэхийг цусны ийлдэс лабораторийн шинжилгээний арга; Энэ нь ELISA-аас илүү нарийвчлалтай тест бөгөөд ELISA-ын үр дүнг баталгаажуулахад ашигладаг. ELISA - ферменттэй холбоотой дархлааны шинжилгээ (ELISA) - цусан дахь ХДХВ-ийн эсрэгбие байгаа эсэхийг тодорхойлох лабораторийн шинжилгээ; ХДХВ-ийн эсрэгбиеийн шинжилгээ.

ДЭМБ-ын зөвлөмжийн дагуу immunoblotting (Western blot) нь ХДХВ-ийн халдварыг оношлоход нэмэлт шинжээчийн арга болгон ашигладаг бөгөөд энэ нь ELISA-ийн үр дүнг баталгаажуулах ёстой. Ерөнхийдөө энэ арга нь ELISA-ийн эерэг үр дүнг давхар шалгадаг, учир нь энэ нь илүү нарийн төвөгтэй, үнэтэй хэдий ч илүү мэдрэмтгий, өвөрмөц гэж тооцогддог.

Immunoblotting нь ферменттэй холбоотой иммуносорбент шинжилгээг (ELISA) хослуулан гель дэх вирусын уургийг урьдчилан электрофорезээр салгаж, нитроцеллюлозын мембран руу шилжүүлдэг. Immunoblot процедур нь хэд хэдэн үе шатаас бүрдэнэ (). Нэгдүгээрт, өмнө нь цэвэршүүлж, бүрдүүлэгч бүрэлдэхүүн хэсгүүдэд нь устгагдсан ХДХВ-ийг электрофорезд хамруулж, вируст орсон бүх антигенийг молекулын жингээр нь ялгадаг. Дараа нь тослох аргыг ашиглан эсрэгтөрөгчийг гельнээс нитроцеллюлоз эсвэл нейлон шүүлтүүрийн тууз руу шилжүүлдэг бөгөөд энэ нь одоо ХДХВ-ийн шинж чанартай, нүдэнд үл үзэгдэх уургийн спектрийг агуулдаг. Дараа нь туршилтын материалыг (ийлдэс, өвчтөний цусны сийвэн гэх мэт) туузан дээр түрхэж, хэрэв дээжинд тодорхой эсрэгбие байгаа бол тэдгээр нь эсрэгтөрөгчийн уургийн туузтай нягт холбогддог. Дараагийн заль мэхийн үр дүнд (ELISA-тай төстэй) энэхүү харилцан үйлчлэлийн үр дүнг нүдээр харж, харагдуулна. Туузны тодорхой хэсгүүдэд тууз байгаа нь ХДХВ-ийн эсрэгтөрөгчийн эсрэгбиемүүдийг шалгасан ийлдэс дотор байгааг баталж байна.

ХДХВ-ийн халдварын оношийг батлахын тулд дархлаажуулалтыг ихэвчлэн ашигладаг. ДЭМБ ХДХВ-ийн дугтуйны аль ч хоёр уургийн эсрэгбиемийг иммуноблотын аргаар илрүүлсэн эерэг ийлдэс гэж үздэг. Эдгээр зөвлөмжийн дагуу хэрэв дугтуйны уургийн аль нэгийг нь (gp160, gp120, gp41) хослуулан эсвэл бусад уурагтай урвалд оруулаагүй тохиолдолд үр дүн нь эргэлзээтэй гэж үзэж, иж бүрдэл ашиглан дахин шинжилгээ хийхийг зөвлөж байна. өөр цуврал эсвэл өөр компаниас. Үүний дараа үр дүн нь эргэлзээтэй хэвээр байвал судалгааг 3 сар тутамд үргэлжлүүлнэ.

Дархлаажуулалтыг хийхийн тулд эхний алхам бол цусны ийлдэс дэх уурагуудыг молекулын жин, цэнэгийн дагуу цахилгаан талбар (гель электрофорез) ашиглан ялгах явдал юм. Дараа нь нитроцеллюлоз эсвэл нейлон мембраныг гель дээр байрлуулж, "блодог" (энэ нь арчигдаж байна). Энэ нь тусгай камерт хийгддэг бөгөөд энэ нь материалыг гелээс мембран руу бүрэн шилжүүлэх боломжийг олгодог. Үүний үр дүнд гель дээр байсан уургийн зохион байгуулалтын хэв маягийг мембран (блот) дээр хуулбарлаж, дараа нь амархан удирдаж болно. Эхлээд мембраныг хүссэн эсрэгтөрөгчийн эсрэгбиемүүдээр эмчилдэг бөгөөд холбогдоогүй материалыг угаасны дараа эсрэгбиемүүдтэй тусгайлан холбогддог цацраг идэвхт шошготой коньюгатыг нэмнэ (ELISA шиг). Үүссэн эсрэгтөрөгч-эсрэгбиеийн шошготой коньюгат цогцолборын байршлыг рентген хальс ашиглан авторентгенографийн аргаар тодорхойлно. Түүний илрэлийн дараа цусан дахь эсрэгтөрөгч байгаа эсэх нь бүх зүйл тодорхой болно.