Флюресценцийг in situ эрлийзжүүлэх аргын үе шатууд. FISH тест: хорт хавдрыг хурдан оношлох

Флюресценцийг in situ эрлийзжүүлэх (FISF) арга нь өвчтөнөөс олж авсан материалаас хүссэн ДНХ-ийн дарааллыг хайж олохын тулд ДНХ-ийн нуклеотидын өвөрмөц дарааллыг датчик болгон ашигладаг. Орон нутгийн өвөрмөц эсвэл генийн өвөрмөц ДНХ-ийн датчик нь тодорхой маркераар (жишээлбэл, флюрохром) шошгологдсон бөгөөд үүнийг флюресценцийн микроскопоор илрүүлэх боломжийг олгодог. Судалгаанд хамрагдаж буй ДНХ нь микроскопийн шинжилгээнд зориулагдсан хромосомын бэлдмэл бөгөөд метафазын цөмд интерфазын (хуваагдахгүй төлөвт) утас агуулсан байдаг. ДНХ-ийн датчик болон сонирхож буй ДНХ нь денатурат болж, нэг хэлхээтэй ДНХ үүсдэг. ДНХ мэдрэгчийг хромосомын бэлдмэлд нэмж, хэрэв өвчтөнд ДНХ мэдрэгчтэй нэмэлт ДНХ-ийн бүс байгаа бол өвчтөний ДНХ датчик болон нэмэлт ДНХ-ийн дарааллыг эрлийзжүүлэхэд хангалттай хугацаагаар өсгөвөрлөнө. Гибридизаци нь зөвхөн ДНХ-ийн нэмэлт хэсгүүдэд тохиолддог бөгөөд геномын бусад хэсгүүдийн бусад ДНХ-ийн дараалалтай фрагментуудад нөлөөлдөггүй. Эрлийзжүүлсний дараа ДНХ-д флюрохром шошготой датчик байгаа эсэх нь флюресценцийн микроскоп ашиглан хромосомыг судлах замаар тодорхойлогддог. Үр дүн нь дүрмээр бол эргэлзээгүй (Зураг 28.1).

FISH-ийн давуу тал нь олон тооны эсийг хурдан шинжлэх, өндөр мэдрэмж, өвөрмөц чанар, соёлгүй, хуваагддаггүй эсийг судлах чадвартай байдаг. Энэ аргыг ашиглан парафины хэсгүүдэд агуулагдах эсийг шалгаж болно. Аргын сул тал нь судалж буй ДНХ эсвэл хромосомын хэсгийн физик байдлын талаарх мэдээллийг олж авах боломжгүй байдаг. FISH хийх нь хромосомын гажилтанд оролцож буй байршлын талаархи мэдлэг, түүнчлэн энэ гажигийг илрүүлэх боломжтой ДНХ-ийн датчикийг сонгох шаардлагатай. FISH-ийг илрүүлэх арга болгон ашигладаггүй. Энэ аргыг тодорхой асуултын хариултыг авахын тулд ашигладаг (өвөрмөц мутаци байхгүй эсвэл сэжиглэгдсэн эсэхийг тодорхойлох). Дүрмээр бол энэ нь хромосомын будгийн сонгодог аргуудыг нөхөж, метафаз эсвэл интерфазын хромосом, тодорхой өвчний (фенотип) суурь болох ДНХ-ийн нуклеотидын тодорхой дарааллыг тодорхойлох гол арга юм.

FISH нь жирэмсний үеийн оношлогоо, хавдрын шинж чанарыг тодорхойлоход хэрэглэгддэг; хүүхдийн практикт энэ нь дүрмээр бол хөгжлийн тодорхой согогтой холбоотой микроскопийн устгалыг тодорхойлоход ашиглагддаг. Микроделецид суурилсан хам шинжийг урьд өмнө нь үл мэдэгдэх этиологийн өвчин гэж үздэг байсан, учир нь эдгээр өвчний хөгжилд хүргэдэг хромосомын устгал, өөрчлөлтийг хромосомын шинжилгээний уламжлалт аргуудыг ашиглан ихэвчлэн дүрсэлдэггүй. Хромосомын тодорхой хэсэг дэх ийм жижиг устгалыг FISH-ийн тусламжтайгаар маш нарийвчлалтай илрүүлж болно. Дэд микроскопийн устгалын улмаас үүссэн өвчнүүд орно

Эрдэмтэд онкологийн эмгэгийг эмчлэхийн тулд эдгэрэлтийг дэмжих төгс эмчилгээний аргыг хараахан боловсруулаагүй байна. Хөхний хорт хавдрын загасны шинжилгээ нь өвчнийг эрт оношлох найдвар төрүүлдэг. Энэ арга нь эмэгтэйчүүдэд эмчилгээг хамгийн эрт үе шатанд эхлүүлэх боломжийг олгодог бөгөөд энэ нь эдгэрэх боломжийг нэмэгдүүлэх болно.

Энэ юу вэ?

Хөхний хорт хавдрыг илрүүлэх загасны шинжилгээ нь эрт оношлох дэвшилтэт, хамааралтай арга хэрэгслийн нэг юм. Англи хэлнээс орчуулбал эсийн доторх флюресцент эрлийзжүүлэх туршилт гэсэн үг. Энэхүү генийн шинжилгээг ашиглан хавдар судлаачид хавдрын гарал үүслийг шинжилдэг. Шинжилгээ нь түрэмгий хэлбэрийн хорт хавдрын эмгэг жам, хөгжилд оролцдог генийн эерэг эсвэл сөрөг нөлөөг харуулж байна - HER2.

Шинжлэх ухааны судалгааны байнгын хөгжил нь FISH тестийн зардлыг бууруулж, илүү олон эмэгтэйчүүдэд ашиглах боломжтой болгодог.

Суга дахь тунгалагийн зангилаа ихсэх нь өвчний хөгжилд дохио өгдөг.

суга дахь тунгалагийн зангилаа томорсон;
цээжний хэсэгт бөөгнөрөл үүсэх;
хөхний толгой дээр дарах үед өвдөх;
хөхний булчирхайн тэгш бус байдал;
хөхний аль нэгэнд таагүй байдал, өвдөлт;
хөхний толгойноос ялгадас гарах;
хөхний дээр үрчлээстэй арьс;
урвуу хөх.

Шинжилгээг бэлтгэх, хүргэх

Фиш тестийг давахын тулд тусгай бэлтгэл хийх шаардлагагүй. Ямар нэгэн шинжилгээ өгөхийн өмнөх шиг архи ууж болохгүй, өөх тос, махлаг, хүнд хоол идээрэй. Хоол нь хөнгөн байх ёстой, хүнсний ногооны хоол, шүүс байвал илүү дээр юм. Хөхний хорт хавдрыг илрүүлэх загасны шинжилгээ нь хоёр үе шаттайгаар явагддаг хор хөнөөлгүй, аюулгүй процедур юм.

Гистологи. Орон нутгийн мэдээ алдуулалтын дор хөхний биоматериалын биопси хийдэг. Үүссэн материалыг флюресцент маркер бүхий тусгай будгаар боловсруулдаг. Химийн шинж чанартаа үндэслэн эдгээр маркерууд нь зөвхөн тусгайлсан хромосомууд болон тэдгээрийн эсүүд дэх багцуудтай холбогддог. Судалгааны үр дүнд маркераар хамгийн их будагдсан хромосомын багцууд харагдах бөгөөд энэ нь хорт хавдрын дагуу геномын өөрчлөлтийн түвшинг харуулж байна.
Загасны шинжилгээ. Тодорхой маркераар будсан ДНХ-ийн бүрэлдэхүүн хэсэг болох дезоксирибонуклеины хүчил нь судсанд нэвчдэг. Тэмдэглэгээний шошго нь эсийн түвшинд геномд нэгтгэгддэг. Судалгааг өвчтөний дэргэд хийж, шинжилгээний үр дүнг нэн даруй өгдөг.

Үр дүн нь юу харуулж байна вэ?

Хөхний булчирхайн гистологи нь хавдрын төрөл, түүний илрэлийн шалтгааныг тодорхойлох боломжийг олгодог.

Хөхний хорт хавдрын загасны шинжилгээ нь дараахь үр дүнг харуулж байна.

Гистологийн шинжилгээ. Үр дүн нь хромосомын багц хэсгүүдийн маркеруудын ханалт дээр суурилдаг. 1 ба түүнээс бага тоо нь аюул байхгүй гэсэн үг. Тоо нь нэмэлт дүн шинжилгээ хийх шаардлагатай хилийн нөхцөл байдлыг харуулж байна. 3-р тоо нь онкологийн үйл явцын хөгжлийг илтгэнэ.
Хөхний хорт хавдрын үед загасны хариу урвал. Сөрөг хариу урвал нь дезоксирибонуклеины хүчлийн молекулууд хэвийн бус эсийн эмгэг жамын үйл явцад оролцдоггүй гэсэн үг юм. Хорт хавдар үүсэх үед HER2 ген нь хорт хавдрын эсэд нөлөөлдөггүй. Эерэг хариу үйлдэл хийснээр хорт хавдрын молекулын эмгэг жаманд оролцдог генийн хуваагдлын хурд хоёр дахин нэмэгддэг.

Гибридизацийн арга газар дээр нь* (in situ, лат.) нь ДНХ эсвэл РНХ нь тогтмол хромосом ба интерфазын бөөмүүдийн бэлдмэл дээр шууд ДНХ/РНХ мэдрэгч бүхий тогтвортой эрлийз молекул үүсгэх чадварт суурилдаг. Энэ аргыг ашиглан бараг бүх ДНХ эсвэл РНХ-ийн дарааллыг эс, эсийн цөм эсвэл хромосом дээр шууд яг таг тодорхойлох боломжтой.

Гибридизаци хийх газар дээр ньСтандарт аргын дагуу бэлтгэсэн аливаа эд, эрхтний эсийн цитологийн эсвэл гистологийн бэлдмэл тохиромжтой. Эмнэлзүйн цитогенетикийн лабораторид өсгөвөрлөсөн захын цусны лимфоцит, chorionic эпителийн цитотрофобластын эсүүд, өсгөвөрлөсөн болон өсгөвөрлөөгүй амнион шингэний эсүүд, үр хөндөлтийн материалаас янз бүрийн эд эсүүд, мөн амны хөндийн хучуур эдийн эс, цусны түрхэцийг ашигладаг.

Гибридизацийн арга газар дээр нь цацраг идэвхт бус өөрчилсөн нуклеотид бүхий датчикийг ашиглахад үндэслэсэн изотопын бус хувилбарыг хөгжүүлсний ачаар практик цитогенетикийн хувьд онцгой ач холбогдолтой юм. Бэлдмэл (ялангуяа флюресцент) дээр эрлийзжүүлэх изотопын бус сонголтууд нь изотоптой харьцуулахад хэд хэдэн давуу талтай: микроскопын нарийвчлалтай (0.1 - 0.2 микрон) илүү нарийвчлалтай, үр дүнг статистик боловсруулах шаардлагагүй, хурд эрүүл мэндийн судлаачдын аюулгүй байдал

Нэмж дурдахад, янз бүрийн илрүүлэх системийг ашиглан илрүүлсэн янз бүрийн өөрчлөгдсөн дээжүүдийн хослол нь нэг эс эсвэл нэг метафазын хавтан дээрх хоёр ба түүнээс дээш ДНХ-ийн дарааллын байршлыг нэгэн зэрэг тодорхойлох боломжийг олгодог. ДНХ-ийн датчик болгон фторхромоор тэмдэглэсэн давталтын дарааллыг ашиглах нь процедурын хугацааг 7-9 цаг хүртэл бууруулдаг (гибридизацийн сонгодог изотопын хувилбар нь хоёр өдөр, изотопын хувилбарууд нь долоо хоногоос нэг сар хүртэл үргэлжилдэг) бөгөөд энэ нь төрөхийн өмнөх үед онцгой ач холбогдолтой юм. оношлогоо. Хэрэглээ FISH аргацитогенетик оношлогооны хувьд энэ нь хромосомын бүтцийн өөрчлөлтийг тодорхойлох, маркер хромосомын шинж чанарыг тогтоох, метафазын хромосом болон интерфазын цөм дэх хромосомын багцын тоон зөрчлийг шинжлэх боломжийг олгодог.

FISH аргын зарчим

Гол нь FISH аргаЭнэ нь зохиомлоор үүсгэсэн ДНХ мэдрэгч ба цөмийн ДНХ-ийн нэмэлт нуклеотидын дарааллын хоорондох эрлийзжих урвал юм. ДНХ-ийн молекул нь мушгиа хэлбэрээр холбогдсон хоёр нуклеотидын гинжээс бүрдэх ба гинжийг салгасан тохиолдолд л эрлийзжих боломжтой. ДНХ-ийн нуклеотидын гинжийг салгахын тулд тэд денатурацийг хийдэг (дараагийн эрлийзжүүлэхийн тулд шинжилгээний дээжийн цөм дэх ДНХ болон ДНХ датчик хоёулаа денатураци хийх ёстой). Денатурацийн дараа ДНХ-ийн датчик нь нэмэлт нуклеотидын дараалалд эрлийзжих ба флюресценцийн микроскоп ашиглан илрүүлж болно.

Тиймээс, тохируулах протоколын ерөнхий дүр төрх ЗАГАСдараах хэлбэрээр төлөөлж болно.

1. Гистологи эсвэл цитологийн сорьц бэлтгэх.
Гистологийн дээжийг бэлтгэх нь стандарт журмын дагуу хийгддэг: зүсэх, тэмдэглэгээ хийх, утсыг холбох, дүүргэх, микротоми хийх, зүсэлтийг шилэн слайд дээр байрлуулах, лав арилгах. Цитологийн бэлдмэлийг бэлтгэхдээ тусгай тунадасжуулах уусмал, центрифуг ашигладаг бөгөөд энэ нь эсийн төвлөрсөн суспензийг авах боломжтой болгодог.

2. Урьдчилсан эмчилгээ (шаардлагатай бол).
Гибридизацид саад учруулах уураг байгаа эсэхийг арилгахын тулд эмийг протеазаар эмчилдэг.

3. ДНХ-ийн датчикийг бэлдмэлд хэрэглэх ба дараа нь денатураци хийх.
Зонд болон дээжийн ДНХ-ийг денатуратжуулахын тулд тэдгээрийг формамидаар эмчилж, ойролцоогоор 85-90 хэм хүртэл халаана.

4. Эрлийзжүүлэх.
Денатураци хийсний дараа эмийг тодорхой температурт (эмнэлзүйн судалгаагаар 37 ° C) хөргөж, чийгтэй камерт хэдэн цагийн турш өсгөвөрлөнө (инкубацийн үргэлжлэх хугацааг тусгай протокол бүрт заасан байдаг). Одоогоор денатураци болон эрлийзжүүлэхэд автомат эрлийзжүүлэгчийг ашиглаж байна.

5. Угаах.
Эрлийзжүүлэлт дууссаны дараа холбоогүй датчикуудыг угаах шаардлагатай бөгөөд энэ нь FISH шинжилгээний үр дүнг үнэлэхэд хүндрэл учруулах дэвсгэр үүсгэх болно. Натрийн цитрат ба хлорид (SSC) агуулсан уусмалыг ихэвчлэн зайлж угаана.

6. Эсрэг будалт.
Флюресцент будагч бодис (DAPI - 4,6-диамидин-2-фенилиндол; пропидиум иодид) ашиглан бүх цөмийн ДНХ-г будна.

7. Флюресцент микроскоп ашиглан үр дүнгийн шинжилгээ. Тогтмол үйлдлүүдийг (девакс, урьдчилан цэвэрлэх, угаах) автоматжуулж болно.

* - Материалыг нээлттэй эх сурвалжаас авсан мэдээлэлд үндэслэн бэлтгэсэн.

1986 онд Ливерморын үндэсний лабораторид (АНУ) FISH будах аргыг (флюресцентээр эрлийзжүүлэх) боловсруулсан. Энэ нь хромосомыг судлах цоо шинэ арга буюу ДНХ-ийг тусгай молекулын датчик ашиглан in situ эрлийзжүүлэх замаар флюресцентээр илрүүлэх арга юм. Энэ арга нь хромосомын ДНХ-ийг тодорхой нөхцөлд хромосомын ДНХ-д нэмэлт нуклеотидын дарааллыг багтаасан ДНХ-ийн хэсгүүдтэй (ДНХ-ийн датчик) холбох чадварт суурилдаг. ДНХ-ийн датчикийг тусгай бодисоор (жишээлбэл, биотин эсвэл дигоксигенин) урьдчилан тэмдэглэсэн байдаг. Шошготой ДНХ датчикийг эрлийзжүүлэхэд бэлтгэсэн метафазын хромосомын цитогенетик бэлдмэлүүдэд хэрэглэнэ. Гибридизаци явагдсаны дараа бэлдмэлийг биотин эсвэл дигоксигенинтэй сонгомол байдлаар холбож чаддаг бодисоор холбосон тусгай флюресцент будагч бодисоор эмчилдэг. Хромосом бүр тодорхой өнгөтэй байдаг. Эрлийзжүүлэлтийг мөн цацраг идэвхт шошготой датчик ашиглан хийж болно. Цитогенетик шинжилгээг хэт ягаан туяаны дор флюресцент микроскопоор хийдэг.

FISH аргыг жижиг устгал, шилжүүлэн суулгахыг илрүүлэхэд ашигладаг. Янз бүрийн өнгөтэй хромосомуудын хоорондох хромосомын солилцоо (шилжүүлэлт ба дицентрик) нь олон өнгийн бүтэц гэж амархан тодорхойлогддог.

Ажлын төгсгөл -

Энэ сэдэв нь дараах хэсэгт хамаарна.

Сургалтын модуль. Эсийн биологи

Мэргэжлийн дээд боловсрол.. Башкирын улсын анагаах ухааны их сургууль.. Эрүүл мэнд, нийгмийн хөгжлийн яам..

Хэрэв танд энэ сэдвээр нэмэлт материал хэрэгтэй бол эсвэл хайж байсан зүйлээ олоогүй бол манай ажлын мэдээллийн санд байгаа хайлтыг ашиглахыг зөвлөж байна.

Хүлээн авсан материалыг бид юу хийх вэ:

Хэрэв энэ материал танд хэрэгтэй байсан бол та үүнийг нийгмийн сүлжээн дэх хуудсандаа хадгалах боломжтой.

Энэ хэсгийн бүх сэдвүүд:

Сургалтын модуль. Ерөнхий ба эмнэлгийн генетикийн үндэс
(Оюутнуудад зориулсан арга зүйн заавар) Эрдмийн хичээл Биологи Бэлтгэлийн чиглэлийн хувьд General Medicine Co.

Лабораторийн ажлыг гүйцэтгэх дүрэм
Объектыг микроскопоор судлахад зайлшгүй шаардлагатай элемент бол түүнийг цомогт зурах явдал юм. Ноорог зургийн зорилго нь объектын бүтэц, бие даасан бүтцийн хэлбэрийг илүү сайн ойлгож, санах ойд нэгтгэх явдал юм.

Практик ажил
1. “Сонгины хальстай эс” түр бэлдмэл бэлтгэх Сонгины хальстай түр зуурын бэлдмэл бэлтгэхийн тулд

Цитоплазмын мембраны бүтэц. Мембрануудын тээвэрлэлтийн функц
2. Боловсролын зорилго: Мэдэх: - бүх нийтийн биологийн мембраны бүтэц - бодисыг мембранаар идэвхгүй тээвэрлэх зүй тогтол.

Эукариот эсийн бүтэц. Цитоплазм ба түүний бүрэлдэхүүн хэсгүүд
2. Сургалтын зорилго: Мэдэх: - эукариот эсийн зохион байгуулалтын онцлог - цитоплазмын органеллуудын бүтэц, үйл ажиллагаа.

Бодисын нийлэгжилтэнд оролцдог органеллууд
Аливаа эсэд түүний онцлог шинж чанартай бодисуудын нийлэгжилт явагддаг бөгөөд энэ нь хуучирсан бүтцийг орлуулах шинээр бий болсон бүтцийн барилгын материал эсвэл биохимийн урвалд оролцдог фермент юм.

Хамгаалах, хоол боловсруулах үүрэгтэй эрхтэнүүд
Лизосом Эдгээр органеллууд нь 20-р зууны 50-аад оноос хойш мэдэгдэж байсан бөгөөд Бельгийн биохимич де Дюв элэгний эсэд гидролизийн бодис агуулсан жижиг мөхлөгүүдийг олж илрүүлсэн.

Эсийг эрчим хүчээр хангахад оролцдог органеллууд
Эсийн үйл ажиллагааны дийлэнх нь эрчим хүчний зарцуулалттай холбоотой байдаг. Амьд эс нь байнга тохиолддог исэлдэлтийн процессын үр дүнд үүсдэг

Эсийн хуваагдал, хөдөлгөөнд оролцдог эрхтэнүүд
Үүнд эсийн төв ба түүний деривативууд - cilia болон flagella орно. Эсийн төв Эсийн төв нь амьтны эс, заримд нь байдаг

Практик ажил №1
1. “Нурууны зангилааны эс дэх Голги цогцолбор” байнгын бэлдмэлийн микроскопийн шинжилгээ Бэлдмэл дээр мэдрэлийн эсүүд байдаг.

Рибосомууд
Тэдгээрийг электрон микроскоп ашиглан бүх про- ба эукариот организмын эсүүдэд илрүүлдэг, хэмжээ нь 8-35 нм, эндоплазмын торны гаднах мембрантай зэргэлдээ байдаг. Энэ нь рибосомууд дээр явагддаг

Мөхлөгт эндоплазмын торлог бүрхэвч
Барзгар эндоплазмын торлогийн субмикроскопийн бүтцийг электрон микрографаар авч үзье. Мацаг барьдаг сарьсан багваахайнаас нойр булчирхайн ацинар эсийн гурван бүсийг тодорхойлсон. Өмнө нь

Цитоплазмын бичил гуурсан хоолой
Цитоплазмын хоолой нь бүх амьтан, ургамлын эсэд байдаг. Эдгээр нь цилиндр хэлбэртэй, утас хэлбэртэй 20-30 микрон урттай, 1

Эд, эс дэх митозын үйл ажиллагаа
Одоогийн байдлаар олон амьтан, ургамлын эд эсийн митозын мөчлөг, митозын үйл ажиллагааны горимыг судалж байна. Эд бүр тодорхой хэмжээний митозын идэвхжилтэй байдаг нь тогтоогдсон. Өө м

Сонгины үндэс эс дэх митоз (шууд бус хуваагдал).
Бага томруулдаг микроскоп ашиглан сонгины үзүүрийн нөхөн үржихүйн бүсийг олж, идэвхтэй хуваагдаж буй эсүүд тод харагдах хэсгийг харах талбайн төвд байрлуулна. Дараа нь бэлтгэлийг өндөр өсгөлтөөр тохируулна

Хулганы элэгний эс дэх амитоз (шууд хуваагдал).
Хулганы элэгний эсийг микроскопоор өндөр өсгөлтөөр шалгана. Бэлтгэх явцад эсүүд нь олон талт хэлбэртэй байдаг. Хуваагддаггүй эсүүдэд цөм нь бөөмтэй дугуй хэлбэртэй байдаг. Хувааж эхэлсэн эсүүдэд

Дугуй хорхойн синкарион өндөгний эс
Бага томруулдаг микроскоп ашиглан өндөг агуулсан уутанцраас дүүрсэн дугуй өтний умайн хэсгийг ол. Сорьцыг өндөр өсгөлтөөр шалгана. Өндөгний цитоплазм нь багасч, хальслана

ДНХ ба РНХ-ийн бүтэц, үүрэг. Про ба эукариотуудад генийн бүтэц, генийн илэрхийлэлийн зохицуулалт. Уургийн биосинтезийн үе шатууд
2. Сургалтын зорилго: Мэдэх: - нуклейн хүчлийн химийн найрлага, зохион байгуулалтын онцлог; - ДНХ ба РНХ-ийн ялгаа;

Монгибрид огтлолцол дахь шинж тэмдгүүдийн удамшлын хэв маяг. Аллель генүүдийн харилцан үйлчлэлийн төрлүүд
2. Боловсролын зорилго: Мэдэх: - моногибрид огтлолцох зүй тогтол; - Менделийн I ба II хуулиуд; - харилцан үйлчлэлийн төрлүүд

Онцлог шинж чанаруудын бие даасан удамшлын хууль. Аллель бус генүүдийн харилцан үйлчлэлийн төрлүүд
2. Боловсролын зорилго: Мэдэх: - ди- ба поли эрлийз огтлолцох зүй тогтол; - Менделийн III хууль; - харилцан үйлчлэлийн төрлүүд

Хувьсах чанар нь амьд биетийн шинж чанар, түүний хэлбэр. Фенотип (өөрчлөх эсвэл удамшлын бус) хувьсагч. Генотипийн хэлбэлзэл
2. Сурах зорилго: Мэдэх: - хувьсах үндсэн хэлбэрүүд; - танин мэдэхүйн нэвтрэлт, илэрхий байдлын талаархи санаа бодлыг олж авах

Багшийн удирдлаган дор оюутнуудын бие даасан ажил
Практик ажил Байгаль орчны нөхцлөөс хамааран шинж чанарын хувьсах түвшин ба хэлбэлзлийн коэффициентийг тодорхойлох.

Ургийн шинжилгээ
Хүний зарим шинж чанарын удамшлын шинжилгээнд генетикийн бүх аргыг хэрэглэх боломжгүй байдаг. Гэсэн хэдий ч төрөл төрөгсдийн хэд хэдэн үеийн фенотипийг судалснаар удамшлын мөн чанарыг тогтоох боломжтой.

Хүний генетикийг судлах хос арга
Ихэр арга нь тодорхой шинж чанар, өвчний хөгжилд генетик болон хүрээлэн буй орчны хүчин зүйлсийн харьцангуй үүргийг үнэлэх боломжийг олгодог. Ихрүүд нь монозигот (ижил) эсвэл дизигот (ижил) байж болно

Хүний генетикийг судлах дерматоглифийн арга
Дерматоглифийн шинжилгээ нь хуруу, алга, хөлний папилляр хэлбэрийн судалгаа юм. Арьсны эдгээр хэсгүүдэд арьсны том папилляр байдаг бөгөөд тэдгээрийг бүрхсэн эпидерми нь g хэлбэрийг үүсгэдэг

Хүний генетикийн судалгаанд цитогенетик арга
Хүний удамшлын эмгэгийг судлах олон аргуудын дунд цитогенетик арга нь чухал байр суурийг эзэлдэг. Цитогенетик аргыг ашиглан удамшлын материаллаг үндэслэлийг шинжлэх боломжтой

Хромосомын багц судалгаа
Хоёр аргаар хийж болно: 1) шууд арга - хуваагдах эс дэх метафазын хромосомыг судлах, жишээлбэл, ясны чөмөг (хэрэглэх).

Практик ажил
1. Цитогенетикийн лабораторид "Хүний кариотип" үзүүлэх бэлдмэлийг үзэх нь X90 томруулсан үед лейкоцитууд харагдах талбарт харагдана

Хромосомын өвчтэй өвчтөнүүдийн кариотипийн шинжилгээ (зурагнаас)
No 1. 13-р хромосом дээрх трисоми (Патау хам шинж). Кариотип 47, +13. No 2. 18-р хромосом дээрх трисоми (Эдвардсын хам шинж). Кариотип 47, +18. No 3. трисоми 21 (Дауны өвчин).

Хурууны хээний шинжилгээ хийж байна
Хурууны хээг өөрөө хийхийн тулд танд дараахь хэрэгслүүд хэрэгтэй болно: гэрэл зургийн бул, 20х20 см2 хэмжээтэй шил, хөөс резин, хэвлэх бэх (эсвэл үүнтэй төстэй зүйл).

Кариотипийн цитогенетик шинжилгээ (метафазын ялтсуудын микрофото зураг дээр үндэслэсэн)
1. Метафазын хавтанг зур. 2. Хромосомын нийт тоог тоол. 3. А (3 хос том метацентрик хромосом), В (хоёр хос том хромосом) бүлгийн хромосомуудыг тодорхойлох.

Амны хөндийн салст бүрхүүлийн хучуур эдийн цөм дэх X-секс хроматиныг судлах экспресс арга
Хусахаасаа өмнө өвчтөн хацрын салст бүрхэвчийг шүдээрээ хазаж, хацрын дотоод гадаргууг самбайгаар арчихыг хүсдэг. Энэ процедур нь устгасан эсийг арилгахад зайлшгүй шаардлагатай, g

Хүн амын статистикийн арга
Популяци гэдэг нь нэг нутаг дэвсгэрт удаан хугацаагаар оршин суудаг, энэ зүйлийн бусад бүлгүүдээс харьцангуй тусгаарлагдсан, чөлөөтэй харилцан үржиж, үрждэг нэг зүйлийн бодгальуудын цуглуулга юм.

Биохимийн арга
Биохимийн аргууд нь ферментийн системийн үйл ажиллагааг судлахад суурилдаг (ферментийн үйл ажиллагаа эсвэл энэ ферментийн катализаторын урвалын эцсийн бүтээгдэхүүний тоогоор). Биохимийн бодисууд

Молекул генетикийн арга
Молекулын генетикийн бүх аргууд нь ДНХ-ийн бүтцийг судлахад суурилдаг. ДНХ-ийн шинжилгээний үе шатууд: 1. Цөм агуулсан эсээс ДНХ тусгаарлах (цус

ДНХ-ийн синтезийн полимеразын гинжин урвал
Полимеразын гинжин урвал (ПГУ) нь in vitro-д ДНХ-ийг олшруулах (нөхөн үржүүлэх) арга бөгөөд түүний тусламжтайгаар хэдхэн цагийн дотор 80-аас дээш хэмжээтэй ДНХ-ийн фрагментийг тодорхойлж, үржүүлэх боломжтой.

No Бүтэн нэр Генотип Иванов АА Петров Аа

Ажиглагдсан генотип ба аллелийн давтамж
Генотип, аллель Тохиолдлын тоо Давтамж (бутархайгаар) АА 1 / 5 = 0.2 Аа

Генотип ба аллелийн ажигласан, хүлээгдэж буй давтамж
Ажиглагдсан тохиолдлын тоо Ажиглагдсан давтамж AA-ийн хүлээгдэж буй давтамж (p2)

Ажиглагдсан генотип ба аллелийн давтамж
Үгүй. Хэлээ хуруу шилэнд оруулах чадвар Генотип Би чадна (тийм) A_

Товчхондоо: Флюресценцийг in situ эрлийзжүүлэх (FISH) арга нь өвчтөнөөс олж авсан материалаас хүссэн ДНХ-ийн дарааллыг хайж олохын тулд ДНХ-ийн нуклеотидын өвөрмөц дарааллыг датчик болгон ашиглах явдал юм. Энэ арга нь ДНХ датчикийг метафазын хромосом эсвэл фазын эсүүдийн ДНХ-тэй нэмэлт холбоход суурилдаг. ДНХ-ийн датчик болон шалгаж буй ДНХ нь денатурат болж, нэг хэлхээтэй ДНХ үүсдэг. ДНХ-ийн датчикийг хромосомын бэлдмэлд нэмж, тодорхой хугацаанд өсгөвөрлөнө. Эрлийзжүүлсний дараа ДНХ-д флюрохром шошготой датчик байгаа эсэх нь флюресценцийн микроскоп ашиглан хромосомыг судлах замаар тодорхойлогддог.

Нарийвчилсан хариулт: Флюресцент эрлийзжүүлэх арга газар дээр ньнь флюресцент шошготой холбосон ДНХ-ийн датчик ба хромосом дээрх хүссэн хэсгийн нэмэлт харилцан үйлчлэлд үндэслэн метафазын хромосом эсвэл интерфазын цөмийн бэлдмэл дээр бие даасан хромосом эсвэл тэдгээрийн салангид хэсгүүдийг тодорхойлох боломжийг танд олгоно. Хромосом дээрх пептид-нуклейн хүчлийн нэгдлүүдийг дүрслэхийн тулд уургийн бүтээгдэхүүн дээр суурилсан PNA датчикийг ашигладаг.
Энэ арга нь ДНХ датчикийг метафазын хромосом эсвэл фазын эсүүдийн ДНХ-тэй нэмэлт холбоход үндэслэсэн бөгөөд дараах алхмуудыг агуулна.
1. Денатурацидавхар судалтай датчик ДНХ ба зорилтот ДНХ нь өндөр температур эсвэл химийн бодисын нөлөөн дор нэг хэлхээтэй ДНХ руу чиглэнэ.
2. ГибридизациДавхар хэлхээтэй эрлийз молекул үүсгэх нэмэлт зарчмын дагуу зорилтот ДНХ бүхий ДНХ-ийн датчик
3. Эрлийзжүүлэлтийн дараах угаалгаэрлийзжүүлээгүй ДНХ датчикийг арилгах
4. Шинжилгээфлюресцент микроскопоор эрлийзжүүлэх дохио

Давуу тал FISH молекул генетикийн оношлогооны аргууд нь олон тооны эсийг хурдан шинжлэх, өндөр мэдрэмж, өвөрмөц чанар, соёлгүй, хуваагддаггүй эсийг судлах чадвартай байдаг.
Алдаа дутагдалЭнэ арга нь судалж буй ДНХ эсвэл хромосомын хэсгийн физик төлөв байдлын талаар мэдээлэл авах боломжгүй байдаг.
FISH нь пренатал молекул генетикийн оношлогоо, хавдрын шинж чанарыг тодорхойлоход хэрэглэгддэг; Хүүхдийн практикт энэ нь дүрмээр бол хөгжлийн тодорхой согогтой холбоотой микроскопийн устгалыг тодорхойлоход ашиглагддаг. Микроделеци дээр үндэслэсэн хам шинжийг урьд өмнө нь үл мэдэгдэх шалтгаантай өвчин гэж үздэг байсан, учир нь эдгээр өвчний хөгжилд хүргэдэг хромосомын устгал, өөрчлөлтийг хромосомын шинжилгээний уламжлалт аргаар ихэвчлэн дүрсэлдэггүй. Хромосомын тодорхой хэсэг дэх ийм жижиг устгалыг FISH-ийн тусламжтайгаар маш нарийвчлалтай илрүүлж болно. Дэд микроскопийн устгалын улмаас үүссэн өвчнүүд орно Прадер-Вилли, Ангелман, Уильямс, Миллер-Дикер, Смит-Магенисын хам шинж, зүрхний велокардиофациал хам шинж. FISH нь ердийн бус тохиолдлуудад, ялангуяа нярайд өвчний олон шинж тэмдэг илрээгүй тохиолдолд эдгээр хам шинжийг оношлоход тусалдаг. Молекул генетикийн оношилгооны энэ аргыг өсвөр нас, насанд хүрсэн үед хэрэглэхийг зөвлөж байна, учир нь хүүхдийн онцлог шинж чанартай өвчний эмнэлзүйн шинж тэмдгүүд өөрчлөгддөг.

121. ДНХ датчик. Тэдний удамшлын өвчнийг тодорхойлоход ашиглах.

Богино тойм

ДНХ датчик ньЗорилтот ДНХ молекулын нэмэлт хэсэгтэй эрлийзжүүлэхэд ашигладаг флуоресцеин, фермент эсвэл цацраг идэвхт изотоптой нийлсэн ДНХ-ийн богино фрагмент.

Гол хэсэг

ДНХ-ийн оношлогооны систем

Организмын олон янзын шинж чанарын талаархи мэдээлэл нь түүний генетик материалд агуулагддаг. Тиймээс нянгийн эмгэг төрүүлэгч нь тодорхой ген эсвэл генийн багц байгаа эсэхээр тодорхойлогддог бөгөөд тодорхой генийг гэмтээсэний үр дүнд удамшлын удамшлын өвчин үүсдэг. Энэхүү биологийн шинж чанарыг тодорхойлдог ДНХ-ийн сегмент нь нарийн тодорхойлогдсон нуклеотидын дараалалтай бөгөөд оношлогооны маркер болж чаддаг.

Оношилгооны олон хурдан бөгөөд найдвартай аргуудын үндэс нь нуклейн хүчлийн эрлийзжүүлэлт буюу өөр өөр ДНХ молекулын хоёр нэмэлт сегментийг хослуулах явдал юм. Ерөнхийдөө процедур нь дараах байдалтай байна.

1. Мембран шүүлтүүр дээр нэг хэлхээтэй ДНХ байг бэхлэх.

2. Тодорхой нөхцөлд (температур ба ионы хүч) зорилтот ДНХ-тэй хослодог шошготой нэг судалтай ДНХ датчик хэрэглэх.

3. Шүүлтүүрийг угааж, илүүдэл холбоогүй хаяглагдсан ДНХ датчикийг зайлуулна.

4. Гибрид датчик/зорилтот молекулыг илрүүлэх.

Нуклейн хүчлийн эрлийзжүүлэлтэд суурилсан оношлогооны шинжилгээнд ДНХ-ийн датчик, зорилтот ДНХ, эрлийзжүүлэлтийн дохиог илрүүлэх арга гэсэн гурван бүрэлдэхүүн хэсэг чухал үүрэгтэй. Илрүүлэх систем нь өндөр өвөрмөц, өндөр мэдрэмжтэй байх ёстой.

*Флуоресцен (диоксифлуоран, уран А) нь органик нэгдэл, флюресцент будаг юм. Аналитик химийн хувьд флуоресцеиныг гэрэлтүүлэгч хүчил-суурь үзүүлэлт болгон ашигладаг. Биохими ба молекул биологийн хувьд флуоресцеин изотиоцианатын деривативыг биологийн будагч бодис болгон эсрэгтөрөгч ба эсрэгбиемийг тодорхойлоход ашигладаг.

* Илрүүлэх гэдэг нь аливаа зүйлийг нээх, таних, олох явдал юм.

*коньюгаци=холбоо

*Хэрэв хүн, хулгана гэх мэт ДНХ-ийн холимогийг нэг “туршилтын хоолой”-нд хайлуулж, задлахад хулганы ДНХ-ийн гинжин хэлхээний зарим хэсэг нь хүний ДНХ-ийн гинжин хэлхээний нэмэлт хэсгүүдтэй дахин нэгдэж эрлийз үүсгэдэг. Ийм сайтуудын тоо нь тухайн зүйлийн хамаарлын зэргээс хамаарна. Төрөл зүйлүүд бие биентэйгээ ойр байх тусам ДНХ-ийн хэлхээний нэмэлт хэсгүүд илүү их байдаг. Энэ үзэгдлийг гэж нэрлэдэг ДНХ-ДНХ-ийн гибридизаци.

122. ДНХ-ийн шууд оношлогоог ашиглах арга, нөхцөл.

Богино тойм:

Шууд аргуудыг ашиглан ДНХ-ийн анхдагч нуклеотидын дарааллын зөрчлийг (мутаци ба тэдгээрийн төрлүүд) илрүүлдэг. Шууд аргууд нь бараг 100% -д хүрэх нарийвчлалаар тодорхойлогддог.

Шууд оношлогооны зорилго нь мутант аллелийг (ДНХ-ийн анхдагч нуклеотидын дарааллын эмгэг, мутаци ба тэдгээрийн төрлүүд) тодорхойлох явдал юм.

ДНХ-ийн шууд оношлогооны аргын сул тал нь генийн яг байршил, түүний мутацийн спектрийг мэдэх хэрэгцээ юм. ДНХ-ийн шууд оношилгооны аргуудыг фенилкетонури (мутаци R408W), цистик фиброз (хамгийн түгээмэл мутаци delF508), Хантингтон хорея (тринуклеотидын давталтын тэлэлт - CTG давталт) гэх мэт өвчинд зориулагдсан болно.

Бүрэн хариулт:

1) удамшлын өвчний хөгжлийг хариуцдаг генийн цитогенетик нутагшуулалтыг мэддэг;

2) өвчний генийг хувилж, нуклеотидын дарааллыг мэддэг байх ёстой.

Шууд оношлогооны зорилго нь мутант аллелийг (ДНХ-ийн анхдагч нуклеотидын дарааллын эмгэг, мутаци ба тэдгээрийн төрлүүд) тодорхойлох явдал юм. ДНХ-ийн шууд оношилгооны аргын өндөр нарийвчлал нь ихэнх тохиолдолд гэр бүлийн бүх гишүүдийн ДНХ-ийн шинжилгээг шаарддаггүй, учир нь харгалзах генийн мутацийг илрүүлэх нь оношийг бараг 100% нарийвчлалтай баталж, гэр бүлийн бүх гишүүдийн генотипийг тодорхойлох боломжийг олгодог. өвчтэй хүүхэд, түүний дотор гетерозигот тээгч.

ДНХ-ийн шууд оношлогооны аргын сул тал нь генийн яг байршил, түүний мутацийн спектрийг мэдэх хэрэгцээ юм.

ДНХ-ийн шууд оношилгооны аргуудыг фенилкетонури (мутаци R408W), цистик фиброз (хамгийн түгээмэл мутаци delF508), Хантингтон хорея (тринуклеотидын давталтын тэлэлт - CTG давталт) гэх мэт өвчинд зориулагдсан болно.

Гэсэн хэдий ч өнөөг хүртэл олон өвчний генийн зураглал хийгдээгүй, тэдгээрийн экзон-интрон зохион байгуулалт тодорхойгүй, олон удамшлын өвчин нь удамшлын гетероген шинж чанартай байдаг тул ДНХ-ийн шууд оношлогооны аргыг бүрэн ашиглах боломжийг олгодоггүй. Тиймээс шууд ДНХ-ийн оношлогооны аргын мэдээллийн агуулга нь маш олон янз байдаг. Тиймээс Huntington-ийн chorea, achondroplasia оношлох үед энэ нь 100%, фенилкетонури, цистик фиброз, adrenogenital хам шинж - 70-80%, Wilson-Konovalov өвчин, Duchenne/Becker миопати - 45-60% байна. Үүнтэй холбогдуулан удамшлын өвчний молекул генетикийн оношлогооны шууд бус аргуудыг ашигладаг.