IFA-д хэрхэн дүн шинжилгээ хийдэг вэ? ELISA шинжилгээ: энэ юу вэ? яагаад хэрэгтэй байна вэ? аргын давуу болон сул талууд

ELISA шинжилгээ - энэ юу вэ? Энэхүү оношилгооны аргын бүтэн нэрийг ферменттэй холбоотой иммуносорбент тест гэж нэрлэдэг бөгөөд энэ нь хүний ​​бие махбодид үүсдэг янз бүрийн ангиллын эсрэгбие буюу иммуноглобулиныг захын цусанд тодорхойлоход суурилдаг.

Эмчийн практикт аливаа халдварт эмгэгийг оношлох шаардлагатай үед ELISA шинжилгээ нь маш чухал байр суурь эзэлдэг. Энэхүү шинжилгээ нь зөвхөн халдварт өвчин байгаа эсэхээс гадна эмгэг процессын үе шатыг харуулдаг. Түүнчлэн, зөвхөн эмгэг төрүүлэгчтэй холбоотой төдийгүй ELISA аргыг хэрэглэхэд зориулагдсан: харшлын эмгэгийг оношлоход ашигладаг. Энэхүү шинжилгээ нь дархлааны систем, гематопоэтик тогтолцооны олон өвчин, аутоиммун болон бусад эмгэгийн эмгэгийг тодорхойлох боломжийг олгодог.

ELISA яагаад хэрэгтэй вэ?

Бүх судлаачид "эсрэгбие" гэсэн нэрийг хэтэрхий муу сонгосон гэж үзэх хандлагатай байдаг. Гэсэн хэдий ч энэ нь иммуноглобулины нэг чухал шинж чанарыг тусгасан байдаг: тэдгээр нь хортой бодисыг холбож, саармагжуулж, "түгжээний" түлхүүр мэт ойртдог. Цусан дахь эсрэгбиеийн хэмжээ нь зөвхөн бие махбодийн халдвараас хамгаалах ерөнхий чадварыг төдийгүй янз бүрийн аутоиммун өвчин, жишээлбэл, ревматоид артрит эсвэл анкилозын спондилит зэрэгт тохиолдож болох эргэлтийн дархлааны цогцолборыг бий болгох чадварыг илэрхийлдэг.

Антиген (халдварт шинж чанартай хортой хүчин зүйл) бүхий эсрэгбиеийн цогцолбор нь "танихгүй хүмүүс" -ийг нэвтрүүлэхэд бие махбодийн хариу үйл ажиллагааны үр дүн юм. Тиймээс дархлааны систем нь тэдгээрийг таньж сурдаг бөгөөд лимфоцитын тусламжтайгаар дархлаатай эсүүдийг сургаж, өндөр өвөрмөц эсрэгбие үүсгэх чадвартай байдаг. Тиймээс Эпштейн вирүсийн эсрэгбие нь вируст гепатит С эсвэл Е савханцарын эсрэгбиемүүдээс өөр бүтэцтэй, харин анти-HAV буюу гепатит А вирусын эсрэгбие нь мөгөөрсний эдэд агуулагдах аутоэсрэгбиемүүдээс өөр бүтэцтэй байдаг. Энэ нь иммуноглобулины өндөр өвөрмөц байдал, халдварт өвчин үүсгэгчтэй харьцах явдал юм. Ийм лабораторийн шинжилгээг ферменттэй холбоотой иммуносорбентийн сорил өндөр үнэ цэнэтэй болгодог.

Эсрэгбие ба эсрэгтөрөгчийг нэг цогцолборт (эсрэгтөрөгч-эсрэгбие) хүчтэй холбосны дараа хортой хүчин зүйлүүд нь биеийн эд эсийг гэмтээх чадвараа алддаг бөгөөд дараа нь эдгээр цогцолборууд нь нейтрофилуудын фагоцитозоор саармагжиж, задарч, "шинжлэгдэж" биеэс гадагшилдаг. .

ELISA-ийн цусны шинжилгээ нь бидний бие ямар эмгэг төрүүлэгч хүчин зүйлтэй тулгардаг, халдвартай бие махбодийн харилцан үйлчлэл ямар үе шатанд байгааг харуулж чадна. Судалгааны дараа эмч өндөр итгэлтэй таамаглал дэвшүүлж, тодорхой төрлийн эмчилгээг зааж өгч, зарим тохиолдолд өвчтөний дундаж наслалтыг, ялангуяа архаг вируст халдвар, жишээлбэл, вируст гепатит С-тэй хамт тодорхойлох боломжтой.

Гэхдээ зарим тохиолдолд бие махбодид халдварт бодис огт байдаггүй бөгөөд дархлааны тогтолцооны эсүүд худал мэдээлэл хүлээн авсан тул эсрэгбие нь өөрийн эрхтэн, эд эсэд "санаагаар" халддаг. Ийм өвчнийг аутоиммун гэж нэрлэдэг бөгөөд ферменттэй холбоотой дархлааны сорил нь энэ архаг эмгэгийг таньж, оношлоход тусалдаг.

Иммуноглобулины талаар дэлгэрэнгүй

Нийтдээ хүний ​​бие нь тодорхойлогдсон 5 төрлийн эсрэгбие үүсгэдэг Ig(энэ нь иммуноглобулин гэсэн үг), A, M, G, E, D ангилалд багтдаг. Эдгээр нь бүгд ELISA шинжилгээний үр дүнг тайлбарлахад чухал ач холбогдолтой. Мэдээжийн хэрэг, илүү олон цогцолборууд байгаа бөгөөд бүгд хараахан нээгдээгүй байна. Гэхдээ янз бүрийн өвчнийг оношлоход эхний гурван төрлийн эсрэгбие нь хамгийн үнэ цэнэтэй байдаг. ELISA-ийн цусны шинжилгээ нь хамгийн их мэдээллийг ашигладаг: цусан дахь эсрэгбие гарч ирэх мөч, цаг хугацаанаас хамааран тэдгээрийн концентраци өөрчлөгдөх, алга болох хугацаа, түүнчлэн өвөрмөц эсрэгбиеийн төрөл.

Тиймээс анхдагч, цочмог халдварт үйл явцын оролцогчид нь M ангиллын иммуноглобулинууд бөгөөд энэ нь өвчний клиник явц арилсан ч цочмог үе шатыг үргэлж харуулдаг. Энгийн жишээ бол цочмог вируст гепатит В эсвэл С-ийн аниктерик хэлбэр юм. Гепатит илрүүлэх ферментийн цусны шинжилгээ нь цочмог гепатиттай болохыг харуулж, гипохондри, ам хуурайших, үе мөч өвдөх, бусад өвөрмөц бус шинж тэмдгүүд илэрдэг. амархан ойлгомжтой.

Хэдэн долоо хоногийн дараа эдгээр эсрэгбие нь G ангиллын иммуноглобулинуудаас доогуур концентрацитай байдаг бөгөөд тэдгээр нь олон сар, тэр ч байтугай олон жилийн турш цусанд илэрч, эдгэрэхийг илтгэдэг бөгөөд дараа нь тэд насан туршдаа үлдэж, удаан хугацааны дархлаа үүсгэдэг. . Энэ нь эмгэг төрүүлэгчийн эсрэгтөрөгчийн эсрэг хүчтэй хамгаалалтыг илтгэнэ. Тиймээс энэ ангиллын эсрэгбие нь хүнийг боом, тахлын давтагдах тохиолдлуудад дархлаатай болгодог. Гэхдээ эдгээр эсрэгбиемүүд нь эсрэгтөрөгчийг хортой нөлөөллөөс нь сэргийлж чаддаггүй тохиолдол байдаг. Энэ тохиолдолд архаг явцын үйл ажиллагааг нэмэгдүүлэх талаар ярьж болно.

Юуны өмнө та ийм шинжилгээ байхгүй гэдгийг ойлгох хэрэгтэй - "зөвхөн ELISA-д зориулсан цус". Гепатит, заримдаа уреаплазма, тэмбүүгийн шинжилгээ байдаг. Тиймээс ELISA-д цусаа хандивлах нь зөвхөн зорилтот түвшинд хүрч, хүссэн халдварыг хайж олох "захиалга" болно. Юу хайхаа мэдэхгүй байж яагаад венийн цусыг хандивлах нь тодорхойгүй байна. Тийм ч учраас ферментийн дархлаа судлалын арга нь оношлогооны эрэл хайгуулд чухал ач холбогдолтой хүчирхэг хэрэгсэл юм. Зөвхөн эмч эдгээр шинж тэмдгүүдээр тодорхойлогддог халдварыг хайж байгаа тул энэ шинжилгээг зааж өгч болно. Мэдээжийн хэрэг жирийн хүн ELISA аргыг ашиглан "бүх халдвар"-д 150 цусны шинжилгээ захиалж болно, гэхдээ энэ нь оношлох, бүх зүйлийг шалгах үндэслэлгүй бөгөөд өртөг өндөртэй арга юм.

Эдгээр шинжилгээнүүд нь дараахь өвчин, нөхцөл байдалд хамгийн их эрэлт хэрэгцээтэй байдаг.

Төрөл бүрийн бичил биетний болон вирусын халдвар, халдварт өвчний шинж тэмдэг - тууралт, халуурах, шарлалт, хавдсан тунгалгийн булчирхай, суулгалт хамшинж, бэлгийн замын халдварт өвчний сэжиг.

ELISA арга нь уреаплазма ба микоплазма, тэмбүү ба хламиди, сүрьеэ ба цитомегаловирусын халдвар, герпес, вируст гепатит, Эпштейн-Барр вирусыг тодорхойлоход тусалдаг. Одоогийн байдлаар 500 орчим янз бүрийн халдварыг ферментийн дархлаа судлалын аргыг ашиглан шалгаж болно.

Гельминтийн халдварыг сэжиглэж, харшил, цусан дахь эозинофили, арьс загатнах, диспепси, турах зэрэг шинж тэмдэг илэрвэл,

Ангиоэдема, чонон хөрвөс, амьсгал давчдах, астматик амьсгал боогдох халдлага үүсгэдэг харшил үүсгэгчийг тодорхойлохдоо.

Энэ тохиолдолд тодорхой Ig E илэрсэн бөгөөд харшил үүсгэгчийг үнэн зөв тодорхойлоход туслах бүхэл бүтэн харшлын хавтан байдаг - далайн амьтан эсвэл сам хорхой, дафни агуулсан хуурай загасны хоол, гэрийн тоос. Хадлан халуурах өвчний хувьд энэ арга нь хаврын найтаах, лакримац үүсгэдэг өвс, бут, модыг яг олох боломжийг олгодог.

• Энэ аргыг ревматологичдын эмчилдэг аутоиммун өвчний сэжигтэй хүмүүст зааж өгсөн болно.
• Хавдрын өсөлт, идэвхжилийг сэжиглэж байгаа бол
• Дархлал хомсдол, ХДХВ-ийн халдварын цогц оношлогоонд
• Цусны өвчин, трансплантологийн хувьд, жишээлбэл, элэг, бөөр шилжүүлэн суулгахаас өмнө дархлааг цогцоор нь үнэлэх.

Одоо бид яагаад ELISA-д цус өгөх хэрэгтэйг мэдэж байна. Энэ судалгаа хэрхэн явагддагийг сонирхоцгооё.

Шинжилгээг хэрхэн хийдэг вэ?

Сонгодог материал нь өвчтөний венийн цус юм. Гэхдээ шаардлагатай бол олон төрлийн шингэн, эд эсийг шалгаж болно: салиа, шүлс, умайн хүзүүний шүүрэл, тархи нугасны шингэн, нүдний шилний бие, хүйн ​​болон амнион шингэний агууламж. Төрөл бүрийн эм хэрэглэх, хэт их биеийн хөдөлгөөн, согтууруулах ундаа хэтрүүлэн хэрэглэх нь шинжилгээний үр дүнг ихээхэн гажуудуулдаг гэдгийг санах нь зүйтэй.

Энэ шинжилгээг хийх хэд хэдэн арга байдаг. Фотометрийн аргыг эмнэлзүйн лабораторид ихэвчлэн ашигладаг. Энэ тохиолдолд будагч бодисоор тэмдэглэгдсэн бодисыг ашигладаг бөгөөд тэдгээрийн урвал, эсрэгтөрөгч-эсрэгбиеийн цогцолборыг тэмдэглэсний дараа тэдгээрийн өнгө өөрчлөгддөг. Үүний үр дүнд уусмалын оптик нягтрал нь мөн өөрчлөгдөж, энэ өөрчлөлт нь илэрсэн эсрэгбиеийн концентрацтай шууд пропорциональ байна. Эдгээр хазайлтыг хэмжихэд лабораторийн спектрофотометрийг амжилттай ашигласан.

Түүнчлэн, ELISA-г хийхийн тулд флюресценц болох флюориметрийн аргыг ашигладаг. Энд мөн судалж буй дээж дээр хуримтлагдсан флюресцент бодисын эрчмийг тооцдог.

Эцэст нь, дархлаа судлалын шинжилгээнд антиген ба эсрэгбиеийн тусгай шошго болох ферментийн идэвхийг тодорхойлохын тулд цахилгаан химийн аргуудыг ашигладаг. Ферментийн дархлаа судлалын арга нь ихэвчлэн шүлтлэг фосфатаза, тунхууны пероксидаза, галактозидаза зэрэг ферментийн хэрэглээг хамардаг. Эдгээр ферментүүд нь эсрэгбие эсвэл эсрэгтөрөгчтэй холбогдож, тэдгээрийн үйл ажиллагааны улмаас тэдгээрийг тэмдэглэж чаддаг.

Аргын сул тал ба түүний давуу талууд

Илэрхий "давуу тал" нь шинжилгээний боломжийн өртөг, хүн амын өргөн хүрээний бүлэгт, жишээлбэл, жирэмсэн эмэгтэйчүүдийг ХДХВ-ийн халдвартай эсэхийг шалгах үед скрининг ашиглах боломжийг багтаадаг. Ферментийн дархлаа судлалын арга нь нэлээд өвөрмөц бөгөөд олон өвчний эмчилгээний чанарыг хянахад ашиглаж болно. Шинжилгээг хурдан бэлтгэх, өвчтөнд энгийн, аюулгүй байх нь чухал юм.

Гэсэн хэдий ч олон бэрхшээл бий. Тиймээс, хэрэв иммуноглобулин илрээгүй бол энэ нь өвчин 100% байхгүй гэсэн үг биш юм. Үнэн хэрэгтээ, дархлал хомсдолын үед бие нь эсрэгбие нийлэгжүүлэх "хүч чадалгүй" байж магадгүй юм. Хэрэв өвчтөн элэгний хүнд хэлбэрийн дутагдалтай бол элэг нь эсрэгбие үүсгэх материал болох уураг нийлэгжүүлэх чадваргүй болно. Энэ тохиолдолд үр дүнг серонегатив гэж нэрлэдэг бөгөөд халдварыг баталгаажуулах нь шууд бөгөөд хамгийн дэвшилтэт судалгааны арга - ПГУ буюу полимеразын гинжин урвалаар шаардлагатай байдаг. Ферментийн дархлааны шинжилгээнээс ялгаатай нь энэ арга нь бие махбодийн халдварт үйл явцын хариу урвалыг илрүүлдэггүй (энэ нь гэмтэлтэй эсвэл огт байхгүй байж болно. ПГУ нь удамшлын материалыг эсвэл эмгэг төрүүлэгчийг өөрөө тодорхойлдог);

– Цусан дахь өвөрмөц эсрэгбие буюу тодорхой өвчний эсрэгтөрөгчийг хайдаг орчин үеийн лабораторийн шинжилгээ нь зөвхөн шалтгаанаас гадна өвчний үе шатыг тодорхойлох зорилготой юм. ELISA үр дүнг чанарын болон тоон байдлаар өгч болно.

Одоогийн байдлаар ELISA-г дараахь тохиолдолд ашиглаж байна.

1) Аливаа халдварт өвчний өвөрмөц эсрэгбиемүүдийг хайх;
2) аливаа өвчний эсрэгтөрөгчийг хайх (халдварт, венерологийн);
3) өвчтөний дааврын төлөв байдлыг судлах;
4) хавдрын маркерын шинжилгээ;
5) аутоиммун өвчин байгаа эсэхийг шалгах.

ELISA аргын давуу талууд:

1) ELISA аргын өндөр өвөрмөц байдал, мэдрэмж (90% -иас дээш).
2) Өвчинг тодорхойлох, үйл явцын динамикийг хянах чадвар, өөрөөр хэлбэл өөр өөр хугацаанд эсрэгбиеийн хэмжээг харьцуулах.
3) Аль ч эмнэлгийн байгууллагад ELISA оношилгоо хийх боломжтой байх.

Харьцангуй сул тал:

1) Дархлааны хариу урвалыг илрүүлэх (эсрэгбие), гэхдээ эмгэг төрүүлэгч өөрөө биш.

Үндсэн ойлголтууд

ELISA аргын мөн чанарыг тодруулахын өмнө зарим ойлголтыг товчхон авч үзье.
Эсрэгбие (эсвэл иммуноглобулин - Ig) - В-ийн үйлдвэрлэсэн өвөрмөц уураг
лимфоцитууд (дархлааны эсүүд) бие махбодид нэвтэрч буй аливаа халдварт эмгэг төрүүлэгчид (вирус, бактери, мөөгөнцөр гэх мэт). Иммуноглобулин A (IgA), иммуноглобулин Е (IgE), иммуноглобулин M (IgM), иммуноглобулин G (IgG), иммуноглобулин D (IgD) байдаг. Тэд бие биенээсээ молекулын хэлбэр ба жин, хагас задралын хугацаа, халдварт үйл явцад оролцох/оролцоогүй, халдвар авсан үеэс эхлэн илрүүлэх хугацаа зэргээрээ ялгаатай байдаг. Хэрэв бид молекулын жинг авч үзвэл IgM нь хамгийн том жинтэй байдаг - энэ нь бусад Ig-ээс (150-аас 200,000 Да) ялгаатай нь пентамер (950,000 дальтон) бөгөөд IgM нь ихэсийн саадыг даван туулж чаддаггүй. Тиймээс 1 настай хүүхдэд IgM-ийг илрүүлэх нь үргэлж урагт халдварын шинж тэмдэг болдог. Цусны ийлдэс дэх иммуноглобулины дийлэнх хэсгийг IgG (75-85%), хамгийн бага нь IgE (0.003%) агуулдаг. Зөвхөн IgA, M, G нь халдварт үйл явцад шууд оролцдог бөгөөд IgE нь харшлын урвал, өвчний шинж тэмдэг бөгөөд IgD нь зөвхөн тунгалгийн булчирхай, гүйлсэн булчирхайн эдэд илэрч, орон нутгийн дархлаа үүсгэх үүрэг гүйцэтгэдэг.

Антигенууд Органик гаралтай өндөр молекулт бодисууд, ялангуяа халдварт болон бусад өвчний эмгэг төрүүлэгчид, түүнчлэн тодорхой өвчний үед үүссэн янз бүрийн өөрчлөгдсөн эсийн бодисууд (аутоиммун өвчин, онкологи).

Дархлааны цогцолбор - дархлааны үйл явцад оролцдог эсрэгтөрөгч-эсрэгбиеийн цогцолбор.

ELISA аргыг юунд үндэслэдэг вэ?

ELISA-ийн хэд хэдэн төрөл (шууд, шууд бус, хориглох арга, өрсөлдөх чадвартай) байдаг боловч практикт гетероген хатуу фазын дархлааны шинжилгээ эсвэл ELISA (ферменттэй холбоотой иммуносорбент шинжилгээ) ихэвчлэн ашиглагддаг.

Ферментийн дархлаа судлалын үндэс нь эсрэгтөрөгч ба эсрэгбиеийн дархлааны урвал бөгөөд дархлааны цогцолборыг үүсгэдэг: эсрэгтөрөгч-эсрэгбие нь эсрэгбиеийн гадаргуу дээрх өвөрмөц тэмдгүүдийн ферментийн идэвхийг өөрчилдөг.

Энгийнээр хэлбэл, энэ үйл явцыг хэд хэдэн үе шатанд хувааж болно:

1) Шалгалт явуулж буй эмчийн таблетын нүхний гадаргуу дээр тодорхой эмгэг төрүүлэгчийн цэвэршүүлсэн антиген байдаг. Өвчтөний биологийн материалыг (цусны ийлдэс) нэмэхэд энэ эсрэгтөрөгч болон хүссэн эсрэгбие (иммуноглобулин) хооронд тодорхой урвал үүсдэг. Энэ нэгдэл нь дараагийн шатанд "тусгай эсрэгтөрөгч" болж ажиллах болно.

2) Энэ үе шатанд IC (дархлааны цогцолбор) үүсдэг - "тусгай эсрэгтөрөгч" ба коньюгат хоорондын урвал (энэ нь пероксидаза ферментээр тэмдэглэгдсэн иммуноглобулин юм). Тусгай хромоген нэмдэг. Энэхүү ферментийн урвалын үр дүн нь таблетын нүхэнд өнгөт бодис үүсэх бөгөөд өнгөний эрч хүч нь өвчтөний материалд агуулагдах иммуноглобулины (эсрэгбие) хэмжээнээс хамаарна.

3) Дараа нь үр дүнг үнэлнэ: олон сувгийн спектрофотометр ашиглан фотометри хийх, судалж буй материалын оптик нягтыг хяналтын дээжийн оптик нягтралтай харьцуулах, үр дүнг математик боловсруулах. Өвчтөнд байгаа эсрэгбиеийн хэмжээ нь тухайн худгийн оптик нягтын өндрөөс шууд хамаардаг.

Ихэвчлэн 96 худагтай хавтанг практикт ашигладаг.

Туршилтын шингэний оптик нягтралыг (OD) хэмжихдээ эзлэхүүний тодорхой нэгж дэх эсрэгбиеийн хэмжээг (эсвэл концентраци) тооцоолно. Дараа нь үр дүнг хяналтын дээжтэй харьцуулна.

Санах хэрэгтэй:Туршилтын систем бүрийн хувьд үр дүн, хэвийн байдал, эмгэг судлалын үзүүлэлтүүдийг (өөрөөр хэлбэл "лавлагаа утга") бүртгэхийн тулд бие даасан үзүүлэлтүүдийг боловсруулдаг. Тодорхой судалгаа бүрийн үр дүнг үнэлэхдээ үүнийг анхаарч үзэх хэрэгтэй. Нэг лабораторийн үр дүнг өөр лабораторийн “жишиг утгууд”-аар тайлбарлах нь буруу. Мөн өөр өөр лабораторийн үр дүнг өөр хоорондоо харьцуулах нь буруу.

ELISA урвалыг гүйцэтгэхдээ эсрэгбиеийн авидитийн тухай ойлголт бас чухал юм.
Эсрэгбиеийн дуршил - энэ нь эсрэгбие ба эсрэгтөрөгчийн хоорондын холболтын хүч, иммуноглобулинтай (эсрэгбие) хамааралтай эсрэгтөрөгчийн хэмжээ юм. Авидит нь халдварын хүлээгдэж буй үргэлжлэх хугацааг үнэлэхэд чухал ач холбогдолтой бөгөөд энэ нь жирэмсэн эмэгтэйчүүдэд анхдагч халдварыг оношлоход маш чухал юм.

Эсрэгбиеийн авидитийн шинжилгээний үндэс нь дархлааны цогцолборыг (эсрэгтөрөгч-эсрэгбие) уураг устгахын тулд мочевины уусмалаар эмчлэхэд оршино. Өндөр авидиттай бондууд хэвээр үлддэг бол авидит багатай холбоо устдаг. Үр дүнг хувиар (%)-аар илэрхийлсэн авидитийн индексээр өгнө.

ELISA оношлогооны тусламжтайгаар ямар өвчин илрэх вэ?

2. Аутоиммун өвчний маркерууд ба хүний ​​дархлааны үзүүлэлтүүд(нийт IgE, нийт IgG, нийт IgA, нийт IgM, нийт IgD, шүүрлийн IgA, IgG 2, IgG4, CEC-ийн эргэлтийн дархлааны цогцолборууд, IgA ба IgG-аас глиадин болон бусад)

3. Хавдар судлалын маркерууд(TNF - хавдрын үхжилийн хүчин зүйл, CEA - хорт хавдрын эсрэгтөрөгч, PSA - түрүү булчирхайн өвөрмөц эсрэгтөрөгч, hCG - хүний ​​chorionic gonadotropin, CA 125, alveomucin болон бусад олон)

4. Нөхөн үржихүйн эмгэг I (эстрадиол, прогестерон, пролактин, тестостерон, AFP-альфафетопротеин, FSH - уутанцраас өдөөгч даавар болон бусад)

5. Бамбай булчирхайн өвчин(чөлөөт ба холбогдсон T3, T4, тироглобулин, бамбай булчирхайн пероксидаза - TPO, бамбай булчирхайг өдөөдөг даавар - TSH).

Энэ жагсаалт нь иммуноферментийн шинжилгээгээр оношлогддог бүх өвчнийг төлөөлдөггүй.

ELISA шинжилгээний материал ба түүнийг цуглуулах дүрэм

ELISA урвалын хамгийн түгээмэл материал бол өвчтөний цусны ийлдсийг хоосон ходоодонд авдаг. Материал нь тархи нугасны шингэн, амнион шингэн, шилэн эсийн агууламж, умайн хүзүүний суваг, шээсний сүвний салиа, т рхэц байж болно.

ELISA-д материал өгөх өвчтөнүүдийг бэлтгэх

ELISA-ийн үйлдвэрлэлийн хугацаа

Материалын ферментийн дархлааны шинжилгээг 24 цагийн дотор хурдан хийдэг. Тодорхой хэмжээний ийлдэс хуримтлагдсанаас болж янз бүрийн лабораторид саатал үүсч болно.

ELISA оношлогооны боломжит үр дүн

Тодорхой халдварын үр дүнг үнэлэхдээ илэрсэн эсрэгбиеийн ангилал, тэдгээрийн тоо хэмжээ чухал байдаг. Зөвхөн халдварын этиологийн асуудал (энэ нь байгаа эсэхээс үл хамааран), мөн өвчний хүлээгдэж буй үе шат (цочмог, архаг), түүнчлэн идэвхтэй халдвар (цочмог эсвэл архаг явцтай) байгаа эсэх. Шалгалтын хугацаа үүнээс хамаарна.

Эсрэгбие (иммуноглобулин - Ig) гарч ирэхэд ойролцоогоор ямар хугацаа байдаг вэ?

Хамгийн эртний эсрэгбие нь IgM юм. Тэд халдварт өвчний цочмог үе шатыг тодорхойлдог халдвараас хойш 1-3 долоо хоногийн дараа илрүүлж болно. IgM эсрэгбие үүсэх хоёр дахь нөхцөл байдал нь архаг үйл явцыг идэвхжүүлэх (эсвэл хурцатгах) юм. IgM эсрэгбие нь дунджаар 3 сар орчим эргэлдэж, дараа нь тэдний тоо аажмаар алга болдог. Гэсэн хэдий ч зарим өвчтөнд IgM-ийн ул мөрийг халдвар авснаас хойш 1-2 жилийн дотор илрүүлж болно.

Орчин үеийн тестийн системүүд нь маш мэдрэмтгий байдаг тул өвөрмөц бус худал эерэг үр дүн гардаг (ихэвчлэн жирэмсэн эмэгтэйчүүдэд). Тиймээс энэ бүлгийн өвчтөнүүдэд эерэг IgM-ийг дахин шалгах шаардлагатай!

IgA эсрэгбие нь халдвар авснаас хойш 2-4 долоо хоногийн дараа гарч ирдэг боловч нэг сарын дотор илрүүлэхэд хангалттай хэмжээтэй байдаг. Цусны сийвэнгийн IgA нь дэлүү, тунгалагийн зангилаа, салст бүрхэвчийн плазмын эсүүдээр нийлэгждэг IgA нь хамгаалалтын функцийг гүйцэтгэхийн тулд салст бүрхэвч дээр төвлөрдөг - тэд орон нутгийн дархлаанд оролцдог.

Халдвар авснаас хойш 4 дэх долоо хоногоос эхлэн IgG эсрэгбие илэрч эхэлдэг. Ихэнх халдварын үед тэдгээрийн титр нь өөр өөр хугацаанд (дунджаар 1.5-2 сарын дараа) аажмаар нэмэгдэж, дараа нь титр нь бага түвшинд хэвээр үлдэж, дархлааг илтгэнэ. Зарим өвчний үед (микоплазмоз, хламиди, трихомониаз) IgG-ийн түвшин өндөр биш бөгөөд эдгээр халдварын үед дархлаа дутагдсанаас ихээхэн буурдаг.

Янз бүрийн ангиллын эсрэгбие илрүүлэх сонголтууд:

IgM эсрэгбиемийг тусгаарлах нь анхдагч шинж тэмдэг илрэхийг харуулж байна
халдвар.
- Цусан дахь IgM болон IgG-ийг нэгэн зэрэг илрүүлэх нь анхдагч халдварын шинж юм
өмнөх 2-3 сард, түүнчлэн архаг өвчний хурцадмал үед. Тиймээс жирэмсэн үед IgM байгаа нь анхдагч халдварын шинж тэмдэг биш юм.
- Тусгаарлагдсан IgG илрэх нь энэ өвчний дархлааг илтгэнэ.
түүнчлэн архаг халдварын хувьд. Хоёрдахь тохиолдолд эсрэгбиеийн хэмжээ (титр) болон цаг хугацааны явцад энэ титр дэх өөрчлөлт хоёулаа чухал юм. Ихэвчлэн судалгааг 2-4-6 долоо хоногийн зайтай явуулдаг.
- IgA тусгаарлагдсан эсвэл IgM-тэй илрэх нь анхдагч халдварыг илтгэнэ. At
IgG-ийн хамт IgA-ийн илрэл нь архаг халдварыг идэвхжүүлж байгааг харуулж байна (даамжрах мөчөөс хойш дунджаар 2 долоо хоног).

Тодорхойлолт IgG эсрэгбиеийн авидитЭнэ нь удаан үргэлжилсэн халдварын анхдагч халдварыг оношлох маш сайн нэмэлт үе шат бөгөөд энэ нь юуны түрүүнд ургийн доторх халдварын эрсдлийг үнэлэхэд эмнэлзүйн ач холбогдолтой юм. Авидит багатай IgG илэрсэн нь анхдагч халдварыг илтгэдэг бөгөөд халдвар авснаас хойш дунджаар 4-6 сарын дараа илрэх нь ховор байдаг. Авидит багатай IgG нь анхдагч халдварын (IgM) бусад лабораторийн баталгааг шаарддаг. Өндөр авидиттай эсрэгбие нь архаг өвчин, түүний хурцадмал шинж тэмдэг, эсвэл үүссэн дархлааны шинж тэмдэг юм.

Нярайн шинж чанар:нэг нас хүртэл, заримдаа бүр 1.5 настай хүүхдүүдэд янз бүрийн халдварын эхийн IgG нь цусанд эргэлддэг (өөрөөр хэлбэл тэд умайн доторх хөгжлийн явцад эхээс ураг руу ихэсээр дамжин нэвтэрдэг). Тэд өөрсдөө одоогийн байдлаар халдвар байгаагийн шинж тэмдэг биш юм. Хэрэв энэ насанд IgM илэрсэн бол (эхийн IgM ихэст нэвтэрч чадахгүй гэдгийг санаарай) энэ нь умайн доторх халдвар эсвэл төрсний дараа олж авсан халдварын шинж тэмдэг юм.

Тоон ELISA арга

ELISA-ийн оношлогооны үр дүнг (ферментийн дархлааны анализатор ашиглан) тодорхой хэмжилтийн нэгжээр өгсөн болно.
- Дээжний оптик нягтрал (OD) - нэгж эзэлхүүн дэх тодорхой эсрэгбиеийн концентраци. Дээжний OD өндөр байх тусам эсрэгбиеийн концентраци өндөр болно. Зарим үр дүн нь эерэг коэффициентийг (CP) илэрхийлдэг бөгөөд энэ нь дээжийн оптик нягтрал юм.
- Эсрэгбиеийн концентрацийн нэгж (нанограмм/миллилитр эсвэл нг/мл).
- Сийвэнгийн титр хэлбэрээр: 1:20, 1:40, 1:100, 1:200, 1:400, 1:800, 1:1200 гэх мэт. Оношлогооны титрүүд (халдвар биш харин өвчний оношийг тавьдаг) янз бүрийн өвчний хувьд өөр өөр байдаг.
- Тэмдгийн хэлбэрээр – “+”, “-”, “?” (+, ++, +++, ++++).
- Өгөгдсөн шалгуурын дагуу (эерэг эсвэл сөрөг) чанарын үнэлгээний хэлбэрээр.

Зөвхөн эмч л эсрэгбиеийн тоо, иммуноглобулины ангиллыг илрүүлэх сонголтыг зөв үнэлж, улмаар өвчний үе шат, эмчилгээний хэрэгцээг тогтоож чадна.

Аливаа туршилтын системийн хувьд өөрийн "лавлагаа утгууд" (нормуудын хувилбарууд) боловсруулагддаг бөгөөд хэтрүүлсэн тохиолдолд тодорхой өвчин оношлогддог (эмгэг судлалын хувилбарууд) гэдгийг бид мартаж болохгүй. Өөр өөр туршилтын системүүдийн хувьд "лавлагаа утгууд" нь өөр өөр байдаг.

Цаг хугацааны явцад авсан ELISA үр дүнг зөв харьцуулах нь зөвхөн нэг лабораторид хийгдсэн тохиолдолд л боломжтой юм.

Халдварт өвчний эмч Н.И

Агуулга

Орчин үеийн оношлогоо нь өндөр мэдрэмжтэй лабораторийн шинжилгээгүйгээр хийх боломжгүй юм. Өмнө нь өвчний шалтгааныг тогтоох, халдварын үүсгэгч бодисыг илрүүлэхийн тулд эмч нар янз бүрийн микроскопийн олон үе шаттай судалгааг явуулсан. Өнөөдөр анхны оношийг няцаах эсвэл батлахын тулд та нэг шинжилгээ хийх хэрэгтэй - ферменттэй холбоотой иммуносорбент шинжилгээ (ELISA). Энэхүү лабораторийн шинжилгээ нь хүний ​​эрүүл мэндийн байдлыг үнэлж, гематологи, онкологи, аутоиммун, халдварт эмгэгийг оношлоход тусалдаг.

Ферментийн дархлаа судлалын цусны шинжилгээ гэж юу вэ?

Ферментийн дархлаа судлалын арга нь өвчний эмгэг төрүүлэгч ба вирусын эсрэгтөрөгч ба эсрэгбие байгаа эсэхийг тодорхойлох орчин үеийн лабораторийн цусны шинжилгээ юм. ELISA арга нь эмч өвчний этиологийг тодорхойлох, түүний үе шат, гарал үүслийн нас, хүний ​​​​аюулын түвшинг тодорхойлох, эмчилгээнд шаардлагатай залруулга хийхэд тусалдаг. Бусдаас илүү олон удаа ферментийн дархлааны шинжилгээ нь M ба G бүлгийн эсрэгбие байгаа эсэхийг шалгадаг. Тэд юу вэ?

Эмгэг төрүүлэгч бичил биетэн цусны урсгал руу ороход дархлааны систем нь эсрэгбие (иммуноглобулин) ялгаруулах хэлбэрээр хамгаалалтын урвалыг эхлүүлдэг. Эдгээр бодисууд нь эстэй холбогдож, энэ нь биеийн нэг хэсэг юм уу эсвэл гаднаас ирсэн эсэхийг харуулдаг. Хэрэв систем нь бичил биетнийг гадны гэж тодорхойлсон бол эмгэг төрүүлэгч вирустэй тэмцэхийн тулд эсрэгбиеийн тоо нэмэгддэг. Иммуноглобулинууд (Ig) хэд хэдэн төрлөөр ирдэг: зарим нь халдварын үед гарч ирдэг, бусад нь амьдралын туршид үлдэж, удаан хугацааны дархлаа бий болгодог. Анагаах ухаанд эсрэгбие нь: A, D, E, M, G гэж нэрлэгддэг.

ELISA арга нь цусыг шалгадаг боловч бусад төрлийн ферментийн дархлааны шинжилгээ байдаг. Дүрмээр бол тэдгээр нь авсан шингэний төрлөөр ялгаатай бөгөөд үүний үндсэн дээр найрлагыг нь судалж, эсрэгтөрөгч байгаа эсэхийг тодорхойлдог. Энэ тохиолдолд хүний ​​цус болон бусад шингэнийг судалгаанд авна.

• шилэн агууламж;
• умайн хүзүүний суваг, шээсний сувгаас салс;
• амнион шингэн;
• цус харвалт;
• тархи нугасны шингэн.

Хэрэглэх заалт

• харшлын урвал;
• дархлал хомсдол;
• вирусын гаралтай өвчин (гепатит, герпес, Эпштейн-Барр вирус, цитомегаловирус);
• бэлгийн замын өвчин, бэлгийн замын халдварт өвчин (ureaplasma, тэмбүү, трихомонас, хламиди, микоплазма);
• элэгний өвчин;
• neurosyphilis (төв мэдрэлийн тогтолцооны халдварт гэмтэл).

Дааврын түвшинг тодорхойлох, эмчилгээний чанарыг үнэлэх зорилгоор мэс заслын өмнөх цогц үзлэгийн үеэр ELISA-ийн цусны шинжилгээг ихэвчлэн хийдэг. Хүлээн авсан мэдээллийн өндөр нарийвчлал нь эмчийн эрүүл мэндийн байдлын талаархи бүрэн дүр зургийг гаргахад тусалдаг. Үүний зэрэгцээ үр дүн нь богино хугацаанд гарч ирдэг бөгөөд энэ нь өвчний хөгжлийн динамикийг хянах боломжийг олгодог.

Аргын давуу тал

Цусны ELISA аргын маргаангүй давуу тал нь түүний өндөр мэдрэмжтэй, i.e. бага концентрацитай байсан ч хүссэн бодисыг тодорхойлох чадвар; болон өвөрмөц байдал нь алдаагүй оношийг илтгэнэ. Үүнээс гадна цусны ийлдсийг ELISA аргаар судлах нь дараахь давуу талуудтай.

Алдаа дутагдал

Ферментийн дархлааны сорилтын гол сул тал нь судалгаа хийхдээ эмч өвчний шинж чанарын талаар урьдчилан таамаглах ёстой. Халдварт өвчнийг оношлохдоо эмгэг төрүүлэгчийг санамсаргүйгээр олж, түүний дархлааны ферментийн шинж чанарыг тогтоох боломжгүй юм. Туршилт нь зөвхөн өвчтөний цусан дахь эсрэгбие байгаа эсэхийг илтгэж болох бөгөөд энэ нь шууд бусаар хортой бичил биетэн байгааг илтгэнэ.

Түүнчлэн, хэрэв техникийг зөрчсөн эсвэл бэлтгэл буруу хийгдсэн бол дүн шинжилгээ нь хуурамч эерэг эсвэл хуурамч сөрөг үр дүнг харуулж болно. Цусны сийвэнгийн ELISA шинжилгээ нь үнэн зөв боловч үнэтэй арга тул онцгой тохиолдолд ашиглах ёстой. Үр дүнгийн тайлбарыг зөвхөн мэргэшсэн мэргэжилтэнд итгэх ёстой.

Бэлтгэл

Ферментийн дархлааны шинжилгээг эмчийн зөвлөмжийн дагуу хийх ёстой, учир нь Судалгааны үр дүнд ихэвчлэн гадны янз бүрийн хүчин зүйлс нөлөөлдөг. ELISA-д бэлтгэх үндсэн дүрмүүд:

• венийн цусыг зөвхөн өлөн элгэн дээр өгөх ёстой (ихэвчлэн сүүлийн хоол нь шинжилгээнээс 12 цагийн өмнө байх ёстой);
• шинжилгээний өмнөхөн аливаа эм хэрэглэхээс татгалзах шаардлагатай (хэрэв өвчтөн антигистамин (харшлын эсрэг) эм ууж байгаа бол ELISA эхлэхээс хэр удаан зогсоох талаар эмчтэй зөвлөлдөх хэрэгтэй);
• Шалгалтын өмнө тамхи татах, архи уухыг хориглоно, учир нь энэ нь үр дүнд сөргөөр нөлөөлнө;
• дүн шинжилгээ хийхийн өмнө та хангалттай унтах ёстой;
• биеийн тамирын дасгал, стрессийн хүчин зүйлийг хасах шаардлагатай;
• Эмэгтэйн нөхөн үржихүйн тогтолцооны ихэнх дааврыг оношлохын тулд сарын тэмдгийн мөчлөгийн тодорхой өдрүүдэд цусны дээж авах шаардлагатай болно.

Үүнийг хэрхэн хэрэгжүүлж байна вэ?

Ферментийн дархлааны шинжилгээг хийхийн тулд өвчтөний өлөн элгэн дээр урд талын судаснаас цус авдаг. Судалгааны үр дүнг гажуудуулахгүйн тулд өвчтөн өвчин эмгэг, эм уусан эсэх талаар эмчид урьдчилан мэдэгдэх ёстой. Дүрмээр бол бүх эмийг ELISA-аас 16 хоногийн өмнө зогсооно. Процедурын явцад мэдрэхүй нь биохимийн шинжилгээний үед цус авахтай төстэй байдаг.

Материалыг лабораторид илгээж, эсрэгбие агуулсан ийлдсийг цуснаас тусгаарладаг. Үүссэн найрлагыг эсрэгтөрөгчтэй туршилтын хоолойд хийнэ. Эдгээр нь янз бүрийн харшил үүсгэгч (сүү, ноос, цэцгийн тоос, цитрус), вируст болон халдварт өвчний эмгэг төрүүлэгчид болон бусад байж болно. Урвалыг олж авсны дараа үлдсэн бүх шар сүүг устгана. Тусгай үзүүлэлтүүдийг ашиглан мэргэжилтнүүд эсрэгбиеийн хэмжээг тодорхойлдог. ЭЛИЗА-ийн эргэлтийн хугацаа нь лабораториос хамаарна. Дүрмээр бол судалгааны үр дүнг хоёр хоногоос долоо хоногийн дотор гаргаж болно..

ELISA кодыг тайлж байна

Ферментийн дархлаа судлалын цусны шинжилгээ нь бие махбодид эсрэгбие байгаа эсэхийг тодорхойлоход тусалдаг. Иммуноглобулины хэд хэдэн ангилал байдаг:

1. IgM. Эхнийх нь халдварын дараа гарч ирдэг. Эдгээр эсрэгбиемүүд байгаа нь ямар ч тохиолдолд өвчний илрэлийг харуулдаг, учир нь эрүүл хүнд энэ анги байдаггүй. Ихэвчлэн IgM иммуноглобулинууд цусанд ойролцоогоор 6 долоо хоног байдаг.
2. IgA. Эсрэгбие нь салст бүрхэвчинд их хэмжээгээр агуулагдаж, биеийг эмгэг төрүүлэгч бичил биетний нэвтрэлтээс хамгаалдаг. Хэрэв өвчтөн энэ ангитай бол өвчинтэй илүү эрчимтэй тэмцэх шаардлагатай. Эцсийн эцэст, иммуноглобулин А нь зөвхөн архаг өвчний үед үүсдэг. IgA алга болсон нь халдварыг устгаж байгааг илтгэнэ.
3. IgG. Энэ ангиллын иммуноглобулинууд нь тухайн хүн халдвар тээгч эсвэл аль хэдийн өвчнөөр өвчилсөн болохыг харуулж байна. Эдгээр эсрэгбие нь халдвар авснаас хойш нэг сарын дараа IgM-ийн дараа үүсдэг. G ангиллын иммуноглобулин нь бие махбодид 5-6 жилийн турш байж, өвчний дахилтаас хамгаалдаг бөгөөд тэмбүүгийн үед ийм эсрэгбие нь насан туршдаа байдаг.

Бага насны (1.5 нас хүртэл) ELISA шинжилгээ хийхдээ хүүхдийн цусанд халдварын эсрэг эхийн IgG эсрэгбие агуулагддаг гэдгийг анхаарах хэрэгтэй. Хэдийгээр энэ нь хүүхэд өвчтэй гэсэн үг биш ч энэ нь норм юм. Ангилал М байгаа нь төрсний дараа умайн дотор буюу олдмол халдварыг илтгэнэ, учир нь Эхийн IgM эсрэгбие нь ихэсээр дамжин хүүхдийн биед нэвтэрч чадахгүй. 3 ангиллын эсрэгбие байгаа эсвэл байхгүй байж болзошгүй хослолуудын задаргааг хүснэгтэд үзүүлэв.

ELISA-ийн үр дүнг мэргэшсэн эмч тайлбарлах ёстой.. Дүрмээр бол (+) нь шинжилгээний эерэг үр дүнг, (-) нь сөрөг үр дүнг илэрхийлнэ. Бодис байхгүй эсвэл байгаа эсэхийг харуулсан үр дүнг чанарын гэж нэрлэдэг. Заримдаа энэ нь бие махбод дахь янз бүрийн бодисын тоог харуулдаг тоон үзүүлэлтээр нэмэгддэг. Ихэнхдээ туршилтын систем нь өөрийн лавлагаа (харилцан) утгатай байдаг. Ийм үзүүлэлтээс давсан нь өвчтөнд эмгэг байгаа гэсэн үг юм.

Эсрэг заалтууд

Ферментийн дархлаа судлалын үндсэн эсрэг заалт тогтоогдоогүй. Заримдаа жирэмслэлтийн үед өвчтөн цусан дахь дааврын тасралтгүй өөрчлөлтийг мэдрэх үед илүү найдвартай үр дүнд хүрэхийн тулд давтан шинжилгээ хийх шаардлагатай болдог. Оношилгооны аргыг дараахь тохиолдолд хэрэглэхийг зөвлөдөггүй.

• мэс заслын оролцоо;
• цус задрал (цусны улаан эсийг устгах);
• цус сэлбэх;
• биологийн материалын хатгалт эсвэл биопси авах.

Ферментийн дархлаа судлалын цусны шинжилгээний үнэ

ELISA шинжилгээний өртөг нь эмнэлгийн байгууллагын бодлого, шинжилгээний төрөл, тодорхойлж буй эсрэгтөрөгчөөс хамаарна. Эдгээр хүчин зүйлс дээр үндэслэн урвалжийн багцын үнийг тооцоолж, судалгааны нарийн төвөгтэй байдлыг тодорхойлно. Дүрмээр бол ферментийн цусны шинжилгээ нь олон нийтэд нээлттэй процедур юм аргын дундаж үнэ 300-аас 2000 рубль хооронд хэлбэлздэг; Москва дахь ферментийн дархлаа судлалын цусны шинжилгээний ойролцоо үнийг хүснэгтэд үзүүлэв.

Видео

Орчин үеийн оношлогооны аргууд нь тусгай шинжилгээ ашиглан тодорхой өвчнийг лабораторид тодорхойлох боломжийг олгодог. Эдгээрийн нэг нь ферменттэй холбоотой дархлалын цусны шинжилгээ бөгөөд өмнө нь хийсэн оношийг батлах боломжтой.

Enzyme immunoassay ELISA нь дархлаа ба дааврын тэнцвэргүй байдал, түүнчлэн онкологийн үйл явцтай холбоотой эмгэгийг тодорхойлох хамгийн үр дүнтэй, орчин үеийн аргуудын нэг юм. Шинжилгээний явцад бие махбодид халдварын үед үүссэн эсрэгбиемүүдийг цусанд илрүүлж болно. Энэ нюансыг харгалзан үзвэл өвчнийг хөгжлийнхөө эхний үе шатанд ч илрүүлж болно.

Техникийн үндэс нь юу вэ?

ELISA шинжилгээний үр дүн нь ферментийн химийн урвалыг олж авахад үндэслэсэн бөгөөд энэ нь эсрэгбиемийг таних тусгай таних тэмдэг болдог. Тиймээс дархлааны химийн урвалын үед эсрэгбие нь тодорхой эсрэгтөрөгчтэй харилцан үйлчилж эхэлдэг. Энэ бүхэн нь ELISA-д цус өгөхөд хуурамч үр дүн бага байдаг гэдгийг батлах үндэслэл болж байна.

Энэхүү судалгаа нь дархлааны эсийн тоо, тэдгээрийн шинж чанар, шаардлагатай эсрэгбие байгаа эсэхийг тодорхойлох боломжийг олгодог.

Уусмалын өнгө илэрсэн үед үр дүнг эерэг гэж үзнэ. Өнгө нь эсрэгтөрөгч нь эсрэгбиетэй харилцан үйлчилж байгааг харуулж байна. Хэрэв ийм зүйл тохиолдоогүй бол үр дүн нь сөрөг байна.

Самойликов Павел Владимирович Клиникийн лабораторийн оношлогооны тэнхимийн дадлагажигч

Оросын Улсын Анагаах Ухааны Их Сургууль

Эмнэлгийн практикт дархлаа судлалын аргууд өргөн хэрэглэгддэг. Орчин үеийн анагаах ухааны бүх салбарт дархлаа судлалын шинжилгээг голчлон оношлогоо, шинжилгээний зорилгоор ашигладаг. Эдгээр нь биологийн бүрэлдэхүүн хэсгүүдийг (даавар, фермент, нейропептид, дархлааны тогтолцооны бүтээгдэхүүн, эсрэгтөрөгч гэх мэт) бага ба маш бага концентрацитай тодорхойлох боломжтой болгох нь онцгой чухал юм. Эсрэгбие авах боломжтой бүх бүтээгдэхүүнийг эдгээр аргуудаар илрүүлдэг.

Дархлалын шинжилгээ нь бүрэлдэхүүн хэсгүүдийн аль нэгийг (фермент, радионуклид, флюресцент будаг гэх мэт) шошголох янз бүрийн сонголтыг ашиглан эсрэгтөрөгч (AG) ба эсрэгбие (AT) харилцан үйлчлэлд суурилдаг. Тусгай төхөөрөмж ашиглан урвалыг автоматаар үнэлдэг бөгөөд энэ нь эдгээр аргуудыг стандартчилах боломжийг олгодог.

Ашигласан шошгоны төрөл болон туршилтын нөхцлөөс хамааран дархлаа судлалын шинжилгээг ферменттэй холбоотой иммуносорбент шинжилгээ (ELISA), радиоиммуно шинжилгээ (RIA), иммунофлуоресцент болон бусад гэж тодорхойлдог. Урвал нь нэг буюу хэд хэдэн үе шаттайгаар явагдах үед тэдгээрийг шууд ба шууд бус гэж тодорхойлдог. Урвал явагдаж буй орчин нь чухал юм. Хэрэв урвалыг гадаргуу дээр бэхэлсэн урвалжаар хийсэн бол туршилтыг хатуу фаз гэж нэрлэнэ, жишээлбэл ELISA (ферменттэй холбоотой иммуносорбент шинжилгээ).

Энэ ажилд биологи, анагаах ухаанд өргөн хэрэглэгддэг, практик болон үндсэн аль алинд нь өргөн хэрэглэгддэг арга болох ферментийн дархлааны шинжилгээг авч үзэх болно.

ELISA нь 60-аад оны дундуур гарч ирсэн бөгөөд гистологийн сорьц дахь эсрэгтөрөгчийг тодорхойлох, мөн дархлаа сулрах, иммуноэлектрофорезын шинжилгээнд хур тунадасны шугамыг дүрслэх арга болгон анх боловсруулагдсан бөгөөд дараа нь антиген ба эсрэгбиемийг тоон тодорхойлоход ашиглаж эхэлсэн. биологийн шингэн. Уг аргыг боловсруулахад Э.Энгвалл, Р.Пелман нар оролцсоноос гадна В.Ван Виман, Р.Шурс нар бие даан оролцсон.

Зураг 1. ELISA-ийн үндсэн зарчим.

1) Антигенийг тодорхойлох. 2) Эсрэгбие илрүүлэх.

Энэ арга нь эсрэгбиемийг эсрэгтөрөгчтэй тусгай холбоход суурилдаг бөгөөд бүрэлдэхүүн хэсгүүдийн аль нэг нь харгалзах хромоген субстраттай урвалд орсны үр дүнд өнгөт бүтээгдэхүүн үүсдэг бөгөөд тэдгээрийн хэмжээг тодорхойлох боломжтой; спектрофотометрийн аргаар (Зураг 1).

Антиген ба эсрэгбиеийг янз бүрийн зөөвөрлөгч дээр хөдөлгөөнгүй болгох, тэдгээрийн холбогдох идэвхийг хадгалах боломжийг нээсэн нь биологи, анагаах ухааны янз бүрийн салбарт ELISA-ийн хэрэглээг өргөжүүлэх боломжийг олгосон.

Моноклональ эсрэгбие үүссэн нь ELISA-ийн цаашдын хөгжилд хувь нэмэр оруулсан бөгөөд энэ нь түүний мэдрэмж, өвөрмөц байдал, үр дүнгийн давтагдах чадварыг нэмэгдүүлэх боломжийг олгосон.

Онолын хувьд ELISA нь орчин үеийн иммунохими ба химийн энзимологийн өгөгдөл, эсрэгтөрөгч-эсрэгбиеийн урвалын физик-химийн хуулиудын мэдлэг, түүнчлэн аналитик химийн үндсэн зарчмууд дээр суурилдаг. ELISA-ийн мэдрэмтгий байдал, цаг хугацаа нь хэд хэдэн үндсэн хүчин зүйлээр тодорхойлогддог: эсрэгтөрөгч-эсрэгбиеийн урвалын кинетик ба термодинамик шинж чанар, урвалжуудын харьцаа, ферментийн идэвхжил, түүнийг илрүүлэх аргуудын нарийвчлал. Ерөнхийдөө эсрэгтөрөгч-эсрэгбиеийн урвалыг энгийн схемээр тодорхойлж болно.

+[AG]↔[ATAG]

Бага молекулын нэгдлүүдээс эхлээд вирус, бактери хүртэлх судалгааны олон янзын объектууд, түүнчлэн ELISA-г ашиглах олон янзын нөхцөлтэй холбоотой ер бусын өргөн хүрээний даалгаварууд нь энэ аргын маш олон тооны хувилбаруудыг хөгжүүлэхийг тодорхойлдог.

ELISA-ийн аль ч хувилбар нь заавал байх ёстой 3 үе шатыг агуулна.

1. дархлааны цогцолбор үүсэхэд хүргэдэг өвөрмөц эсрэгбиемээр туршилтын нэгдлийг хүлээн зөвшөөрөх үе шат;

2. коньюгатыг дархлааны цогцолбор эсвэл чөлөөт холболтын газруудтай холбох үе шат;

3. ферментийн шошгыг бүртгэгдсэн дохио болгон хувиргах үе шат.

ELISA аргуудын ангилал нь хэд хэдэн хандлагад суурилдаг.

1. ELISA-ийн эхний үе шатанд байгаа урвалжуудын төрлөөс хамааран өрсөлдөх чадвартай ба өрсөлдөхгүй аргуудыг ялгадаг.

A) Өрсөлдөх чадвартай ELISA-ийн хувьд эхний шатанд систем нь ферментээр тэмдэглэгдсэн, үүнтэй холбогдох тодорхой газруудын төлөө өрсөлдөж буй анализ хийсэн нэгдэл болон түүний аналогийг хоёуланг нь агуулна.

B) Өрсөлдөөнгүй аргууд нь эхний шатанд системд зөвхөн шинжлэгдсэн нэгдлүүд болон түүнд хамаарах холбох төвүүдээр тодорхойлогддог.

2. ELISA-ийн бүх аргуудыг нэгэн төрлийн ба гетероген гэж хуваана.

Хэрэв ELISA-ийн бүх гурван үе шат нь уусмалд явагддаг бөгөөд үндсэн үе шатуудын хооронд үүссэн дархлааны цогцолборыг урвалд ороогүй бүрэлдэхүүн хэсгүүдээс салгах нэмэлт алхам байхгүй бол арга нь нэгэн төрлийн бүлэгт хамаарна.

Дүрмээр бол бага молекултай бодисыг тодорхойлоход ашигладаг нэгэн төрлийн ELISA-ийн үндэс нь эсрэгтөрөгч эсвэл эсрэгбиетэй нэгдэх үед ферментийн үйл ажиллагааг дарангуйлах явдал юм. Антиген-эсрэгбиеийн урвалын үр дүнд ферментийн үйл ажиллагаа сэргээгддэг.

Эсрэгбие нь ферментийн шошго агуулсан эсрэгтөрөгчтэй холбогдох үед ферментийн идэвхжил нь өндөр молекул жинтэй субстраттай харьцуулахад 95% -иар дарангуйлдаг бөгөөд энэ нь ферментийн идэвхтэй төвөөс субстратыг стерик байдлаар хассантай холбоотой юм. Антигений концентраци нэмэгдэхийн хэрээр илүү олон эсрэгбиемүүд холбогдож, өндөр молекул жинтэй субстратыг гидролиз хийх чадвартай илүү чөлөөт антиген-ферментийн коньюгатууд үлддэг. Шинжилгээг маш хурдан хийдэг, нэг тодорхойлоход 1 минут шаардагдана. Аргын мэдрэмж нь нэлээд өндөр байдаг. Үүнийг пикомолын түвшинд бодисыг тодорхойлоход ашиглаж болно.

Гетероген аргууд нь хатуу зөөвөрлөгчийн фазын оролцоотой хоёр фазын системд дүн шинжилгээ хийх, янз бүрийн үе шатанд (үүссэн дархлааны цогцолборууд дээр байдаг) урвалд ороогүй бүрэлдэхүүн хэсгүүдээс (угаах) дархлааны цогцолборыг заавал ялгах үе шатаар тодорхойлогддог. хатуу фаз ба урвалд ороогүй цогцолборууд уусмалд байна) . Хатуу фазын эхний үе шатанд дархлааны цогцолбор үүсэх гетероген аргуудыг хатуу фазын аргууд гэж нэрлэдэг.

Хэрэв 1-р үе шат - уусмалд тодорхой цогцолбор үүсэх, дараа нь бүрэлдэхүүн хэсгүүдийг салгахад хөдөлгөөнгүй урвалж бүхий хатуу фазыг ашигладаг бол аргуудыг нэгэн төрлийн-гетероген гэж ангилдаг.

3. Шинжилгээний бодисыг тодорхойлох зарчмын дагуу:

A) Бодисын концентрацийг (эсрэгтөрөгч эсвэл эсрэгбие) түүнтэй харилцан үйлчлэлцдэг холбоосын тоогоор шууд тодорхойлох. Энэ тохиолдолд ферментийн шошго нь үүссэн тодорхой AG-AT цогцолборт байрлана. Шинжлэх бодисын концентраци нь бүртгэгдсэн дохиотой шууд пропорциональ байна.

B) Бодисын концентрацийг холбох газруудын нийт тоо болон үлдсэн чөлөөт холбоосын зөрүүгээр тодорхойлох. Энэ тохиолдолд анализаторын концентраци нэмэгдэж, бүртгэгдсэн дохио буурах тул энэ тохиолдолд бүртгэгдсэн дохионы хэмжээнээс урвуу хамааралтай болно.

Ферментүүд.

Ферментийн шошго нь маш хүчтэй катализаторын нөлөөтэй байдаг. Тиймээс цөөн тооны ферментийг бүтээгдэхүүн үүсэх, түүний катализаторын урвалаар тодорхойлж, тоо хэмжээг нь тодорхойлох боломжтой. Ферментийг шошго болгон ашиглахын бас нэг давуу тал нь молекулд олон тооны функциональ бүлгүүд (сульфгидрил, карбоксил, тиразины үлдэгдэл гэх мэт) агуулагддаг бөгөөд үүгээр дамжуулан лиганд молекулуудыг ковалент байдлаар холбож болно.

ELISA-д ашигласан ферментийн маркерууд дараах шинж чанартай байх ёстой.

- аналитик нөхцөлд ферментийн өндөр идэвхжил, тогтвортой байдал, өөрчлөгдсөн, эсрэгбие эсвэл бусад уурагтай хавсарсан үед;

- мэдрэмтгий субстрат байгаа эсэх, ферментийн урвалын бүтээгдэхүүн эсвэл субстратыг тодорхойлох аргын энгийн байдал;

- субстратын системийг цаашид бэхжүүлэхэд дасан зохицох боломж;

- судалж буй биологийн шингэнд фермент ба түүний дарангуйлагч байхгүй байх.

ELISA-д дор хаяж 15 өөр фермент хэрэглэж болно. Дээрх шаардлагын дагуу хамгийн өргөн хэрэглэгддэг нь тунхууны пероксидаза (HRP), шүлтлэг фосфатаза (ALP) болон β-D-галактозидаза юм (Хүснэгт 1). Гурав нь тогтвортой бөгөөд маш мэдрэмтгий урвалыг хурдасгадаг. Үүнээс гадна эдгээр ферментийн катализаторын урвалын үр дүнд үүссэн бүтээгдэхүүнийг ашигласан субстратаас хамааран зөвхөн колориметрийн аргаар төдийгүй флюресцент аргаар илрүүлж болно. Бусад ферментүүдийг бага ашигладаг. Энэ нь PC болон AP-тай харьцуулахад тэдний үйл ажиллагаа бага байгаатай холбоотой юм.

Субстрат.

Фермент-субстратын урвал нь маш өвөрмөц байдаг тул субстратын сонголтыг голчлон тэмдэглэгээ болгон ашигладаг ферментээр тодорхойлдог.

Субстратад тавигдах үндсэн шаардлага:

- коньюгат дахь ферментийг илрүүлэх аргын өндөр мэдрэмжийг хангах;

- фермент-субстратын урвалын бүтээгдэхүүн (жишээлбэл, өнгөт) үүсэх;

– субстрат нь аюулгүй, хямд, хүртээмжтэй, хэрэглэхэд тохиромжтой байх ёстой.

Хүснэгт 1.

Ферментүүд ба тэдгээрийн субстратууд нь ELISA-д хамгийн өргөн хэрэглэгддэг.

Ихэнхдээ хромоген субстратуудыг ашигладаг бөгөөд тэдгээр нь устсан үед өнгөт бодис үүсгэдэг. Өндөр энергитэй субстратуудыг ашиглах нь флюресцент, химилюминесцент - ирээдүйтэй. Ийм субстратыг ашиглах нь онолын хувьд ELISA-ийн мэдрэмжийг хоёр дарааллаар нэмэгдүүлэх боломжтой болгодог.

Антиген ба эсрэгбие.

ELISA-д ашигласан AG болон AT нь маш цэвэршсэн, өндөр идэвхтэй байх ёстой. Үүнээс гадна эсрэгтөрөгч нь өндөр антиген, оновчтой нягтрал, эсрэгтөрөгчийн тодорхойлогчдын тоо, харийн байдал, нэгэн төрлийн байх ёстой. Вирус ба бактерийн олон синтетик болон рекомбинант антигенүүд нь ELISA-д хэрэглэхэд өөрсдийгөө сайнаар нотолсон. Энэ нь хөндлөн урвалыг багасгах замаар аргын өвөрмөц байдал, давтагдах чадварыг ихээхэн нэмэгдүүлсэн.

ELISA-ийн хамгийн чухал урвалжуудын нэг нь эсрэгбие юм. ELISA-ийн мэдрэмж нь ашигласан эсрэгбиеийн концентраци, идэвхжил, өвөрмөц байдлаас хамаарна. Ашигласан эсрэгбие нь янз бүрийн ангиллын (IgG эсвэл IgM) болон дэд ангиллын (IgGl, IgG2), аллотипийн эсрэг эсвэл антидиотипийн поли- эсвэл моноклональ байж болно. AT-ийн хамаарал багатай үед AG-AT цогцолбор задрах нь холбогдсон AG-ийг системээс зайлуулахад хүргэдэг. Моноклональ эсрэгбиемүүдийг хэрэглэх үед аргын мэдрэмж, өвөрмөц байдал нэмэгддэг. Энэ тохиолдолд туршилтын дээжинд AG (AT) бага концентрацийг илрүүлэх боломжтой болно.

Коньюгат үүсэх

Коньюгат нь ферментийн шошготой эсрэгтөрөгч эсвэл эсрэгбие юм. Коньюгат үүсэх нь ELISA-ийн чухал үе шатуудын нэг юм.

Коньюгат үүсгэх үед ферментийн шошгыг нэвтрүүлэх оновчтой аргыг сонгосон бөгөөд ингэснээр коньюгат хоёр бүрэлдэхүүн хэсэг нь биологийн идэвхээ хадгалах болно: фермент - субстраттай харилцан үйлчлэх чадвар, эсрэгтөрөгч эсвэл эсрэгбие - эсрэгтөрөгч ба эсрэгтөрөгчийг холбох үйл ажиллагаа. , тус тус. Шошготой, өндөр цэвэршүүлсэн эсрэгтөрөгч байгаа нь өрсөлдөх чадвартай аргыг ашиглах боломжийг олгодог. Энэ тохиолдолд эцсийн шатанд хөдөлгөөнгүй эсрэгбиемүүдтэй холбоогүй коньюгатуудын үйл ажиллагааг хэмжих боломжтой бөгөөд энэ нь угаах процедураас зайлсхийж, шинжилгээг илүү тохиромжтой болгодог. Гэсэн хэдий ч эсрэгтөрөгч нь физик-химийн шинж чанар, бүтцээрээ олон янз байдаг тул эсрэгтөрөгчтэй коньюгат авах бүх нийтийн аргыг боловсруулах боломжгүй юм. Энэ тохиолдолд эсрэгтөрөгч-ферментийн коньюгатыг олж авах нь тусдаа нарийн төвөгтэй ажил юм. ELISA-д зориулсан шошготой эсрэгбие бэлтгэх нь арга зүйн хувьд илүү хүртээмжтэй байдаг.

Ферментийг иммунохимийн идэвхтэй уурагтай холбох нь янз бүрийн аргаар явагддаг: химийн хөндлөн холбоос, ферментийн молекулыг Ag эсвэл AT-тай ковалент холбох, ковалент бус холбоогоор дамжуулан нэгдлүүдийг үүсгэх, жишээлбэл, фермент хоорондын холболт ба Ag эсвэл AT нь эсрэгтөрөгч-эсрэгбиеийн харилцан үйлчлэлээр дархлаа судлалын аргаар явагддаг.

Хамгийн өргөн хэрэглэгддэг нь коньюгат бэлтгэх ковалент аргууд юм. Холбох урвалын сонголтыг тухайн уургийн молекулуудад байдаг функциональ бүлгүүдийн төрлөөр тодорхойлно. Глутаральдегид, натрийн периодат гэх мэтийг ферментийг эсрэгтөрөгч ба эсрэгбиеийн молекулуудад нэвтрүүлэхэд ашигладаг урвалж болгон ашигладаг.

Глютаральдегидийг ашиглан коньюгат авах нэг ба хоёр үе шаттай аргууд байдаг. Ферментийн идэвхжил буурсан (чөлөөт ферментийн 15-60%) янз бүрийн хэмжээтэй коньюгатууд үүсч болно. Үүссэн том хэмжээтэй коньюгат нь туршилтын бодисыг тодорхойлоход саад учруулж болзошгүй юм. Харьцангуй бага молекул жинтэй коньюгатууд нь Fab фрагмент ба нэг ферментийн молекулаас бүрдэнэ.

Хоёр үе шаттай синтезийн үр дүнд эхлээд хөндлөн холбогч бодисоор өөрчлөгдсөн ферментийг алхам алхмаар үйлдвэрлэх, тусгаарлах, дараа нь эсрэгтөрөгч (эсрэгбие) -ийн молекулуудтай харилцан үйлчлэлцэхээс бүрддэг. Нэг төрлийн иммуноглобулины молекул тутамд 1-2 ферментийн молекул агуулсан, ферментийн болон дархлаа судлалын өндөр идэвхийг хадгалдаг нэгэн төрлийн найрлага үүсдэг. Гэсэн хэдий ч үүссэн ийм коньюгатуудын тоо бага байдаг (тунхууны пероксидазын хувьд энэ нь 5-10%).

Хамгийн их практик хэрэглээ нь ферментийн нүүрсустөрөгчийн бүрэлдэхүүн хэсгийг натрийн периодатаар исэлдүүлэхэд үндэслэсэн иммунопероксидазын коньюгатыг олж авах аргад олдсон (пероксидазыг коньюгаттай холбох нь ферментийн анхны хэмжээний 70-90% хүрдэг).

Найдвартай коньюгат нь дараахь шинж чанартай байх ёстой.

Эсрэгбиеийн өндөр хүч чадал, эсрэгтөрөгчтэй өндөр хамааралтай тул түүнийг өндөр шингэрүүлэлтэнд хэрэглэж, улмаар өвөрмөц бус холболтыг бууруулдаг;

Ажлын шингэрүүлэлтийн хангалттай өвөрмөц байдал;

Полимерээс мономер хэлбэрийн давамгайлал, учир нь полимер хэлбэрүүд нь хуванцард өвөрмөц бус наалддаг бөгөөд энэ нь өндөр түвшний урвал үүсгэдэг;

Фермент ба эсрэгбиемүүдийн хоорондох оновчтой молийн харьцаа (хамгийн оновчтой харьцаа нь ойролцоогоор 1: 1);

Коньюгатийн ферментийн үйл ажиллагаа хангалттай. Энэ шинж чанарыг голчлон коньюгацийн нөхцөл, коньюгат дахь ферментийн молекул ба эсрэгбиеийн харьцаагаар тодорхойлдог.

Хатуу фаз

Төрөл бүрийн материалыг ELISA-ийн хатуу фаз болгон ашиглаж болно: полистирол, поливинил хлорид, полипропилен болон бусад бодисууд. Хатуу фаз нь туршилтын хоолой, 96 худаг болон бусад хавтан, бөмбөлгүүдийг, бөмбөлгүүдийг, түүнчлэн нитроцеллюлоз болон уураг идэвхтэй шингээдэг бусад мембрануудын хана байж болно.

Хатуу фаз дээр эсрэгтөрөгч эсвэл эсрэгбиеийг хөдөлгөөнгүй болгох нь гурван аргаар боломжтой.

- уураг ба синтетик гадаргуугийн хоорондох хүчтэй гидрофобик харилцан үйлчлэлд суурилсан идэвхгүй шингээлт;

– хатуу фазын ковалент холболт;

– иммунохимийн гэх мэт (ковалентын бус ба шингээлтийн бус нэмэлт).

Идэвхгүй уургийн шингээлтийг титрлэлтийн хавтан болон нитроцеллюлозын мембран дээр ELISA хийх үед өргөн ашигладаг. Идэвхгүй шингээлт нь ханалтын зарчмыг баримталдаг бөгөөд шингэсэн бодисын молекул жинтэй хамааралтай байдаг. Төрөл бүрийн (нитроцеллюлоз, нейлон гэх мэт) мембраны шингээх гадаргуу нь хуванцараас 100-1000 дахин их байдаг.

Полисахаридууд болон өндөр гликозилжсэн уургууд нь полистиролтой харьцангуй бага байдаг. Тэдгээрийг хөдөлгөөнгүй болгохын тулд глютаральдегидийг ашиглан ковалент холбох гэх мэт өөр аргууд хэрэгтэй. Ковалент бэхэлгээ нь гидрофиль бөмбөлгүүдийг (агароз) болон полистирол ирмэгийг хатуу фаз болгон ашиглахад үр дүнтэй байдаг.

Дархлаа химийн аргууд нь эсрэгтөрөгч эсвэл эсрэгбиемийг хөдөлгөөнгүй болгохын тулд урьдчилан шингэсэн "хавх" эсрэгбиемүүдийг ашиглахад суурилдаг. Дархлаа химийн аргаар идэвхгүйжүүлсэн эсрэгтөрөгч нь идэвхгүй шингэсэн эсрэгтөрөгчөөс 10 дахин илүү идэвхтэй байдаг. Конканавалин А (Кон А) эсвэл стафилококкийн уураг А зэрэг хуванцар болон бусад гидрофобик гадаргууд амархан шингэдэг бактерийн лектин эсвэл иммуноглобулин холбогч уураг хэрэглэж болно. Con A нь ХДХВ-ийн вирусын уураг болох gp 120-ийг хөдөлгөөнгүй болгох чадвартай.

Туршилтын явцад сорбсон бодистой холбогдоогүй хатуу фазын гадаргуу дээрх чөлөөт хэсгүүд нь бусад молекулууд, түүний дотор коньюгатуудыг засах боломжтой бөгөөд энэ нь арын дохиог нэмэгдүүлэхэд хүргэдэг. Өвөрмөц бус холболтоос урьдчилан сэргийлэхийн тулд хөдөлгөөнгүй болгосны дараа үндсэн материалын хатуу фазыг туршилтанд төвийг сахисан бодисоор эмчилдэг. Хамгийн алдартай хориглогч бодисууд нь үхрийн сийвэнгийн альбумин (BSA), казеин гэх мэт. Блоклох бодисыг сонгох ба энэ үе шатны нөхцөл нь хатуу фазын төрөл, системийн мэдрэмжээс хамаарна.

Одоогийн байдлаар ELISA-ийн олон тооны янз бүрийн сорт, өөрчлөлтүүдийг ашиглаж байна. Ферменттэй холбоотой дархлаа судлалын (ELISA) янз бүрийн хувилбарууд өргөн тархсан.

Хатуу фазын ELISA-г 1971 онд санал болгосон. Хатуу фазын ELISA-ийн үндсэн зарчмууд нь өөрчлөлтөөс үл хамааран дараах байдалтай байна.

1. Урвалын 1-р шатанд эсрэгтөрөгч буюу эсрэгбие нь хатуу фаз дээр шингэдэг. Энэ тохиолдолд хатуу фазтай холбоогүй урвалжуудыг угаах замаар амархан арилгадаг.

2. Туршилтын дээжийг мэдрэмтгий цооногуудад өсгөвөрлөнө. Эерэг хяналтын цооногууд нь стандарт урвалжуудыг агуулдаг. Энэ тохиолдолд хатуу фазын гадаргуу дээр дархлааны цогцолборууд үүсдэг. Холбогдоогүй бүрэлдэхүүн хэсгүүдийг угаах замаар арилгадаг.

3. Эсрэгбие-фермент эсвэл эсрэгтөрөгч-ферментийн коньюгат нэмж, хөдөлгөөнгүй дархлааны цогцолборт холбогдох үед ферментийн идэвхтэй хэсэг нь субстраттай дараагийн харилцан үйлчлэлд бэлэн хэвээр байна. Хөдөлгөөнгүй коньюгат бүхий худагт субстратыг инкубацлах нь өнгөт урвал үүсэхэд хүргэдэг. Энэ урвалыг хүссэн үе шатанд зогсоож, будгийн ноцтой байдлыг нүдээр эсвэл оптик нягтралаар үнэлж болно.

Хатуу фазын шинжилгээний аливаа хувилбарын чухал үе шат бол холбоогүй урвалжаас угаах журам юм. Зөвхөн хатуу үе шатанд бэхлэгдсэн бүрэлдэхүүн хэсгүүдийг зайлж зогсохгүй давхаргын бүх гүнээс урвалжуудыг зайлуулах нь чухал юм. Эдгээр нь шинжилгээний хамгийн их цаг хугацаа, хөдөлмөр их шаарддаг үе шатууд юм. Дээжийг тусгай төхөөрөмж - угаагч эсвэл гараар олон сувгийн соруур ашиглан автоматаар угааж болно. ELISA-г хийхийн тулд танд дараахь зүйлс хэрэгтэй болно.

Полистирол шахмал эсвэл бусад хатуу фазын сонголтууд;

- угаах уусмал;

– коньюгат (ферментээр тэмдэглэгдсэн эсрэгтөрөгч эсвэл эсрэгбие);

- ашигласан субстратын холимог;

– зогсоох уусмал (Stop урвалж – урвалыг зогсоох уусмал);

– эерэг ба/эсвэл сөрөг хяналтанд ашигласан дээж;

– стандарт антиген (шалгалт тохируулгын муруй байгуулахад зориулагдсан);

– нэг ба олон сувгийн пипетк;

- угаагч (угаагч);

– туршилтын уусмалын оптик нягтыг тодорхойлох оптик төхөөрөмж (ELISA уншигч, бүх худгийг дараалан фотометрээр хэмждэг уншигч);

– 5-100 мкл биологийн материалыг судалж байна.

Шууд ELISA

1. Антиген буюу эсрэгбие (туршилтын материал) нь хавтангийн нүхэнд шингэсэн байна. Антиген нь ямар төрлийн бодис (уураг, нүүрс ус эсвэл липопротейн) хамаарахаас хамааран өөр өөр төрлийн хуванцар дээр шингээх чадвараараа ихээхэн ялгаатай болохыг дээр дурдсан. Ихэнхдээ шууд ELISA-д хатуу фаз дээр хөдөлгөөнгүй болсон эсрэгтөрөгч нь эсүүд болон бусад корпускуляр эсрэгтөрөгч юм.

Хяналт. Хяналтын хувьд цооногуудыг шингээсэн эерэг хяналтын дээж, заавал хүссэн эсрэгтөрөгчийг агуулсан, сөрөг хяналтын дээжийг ашигладаг бөгөөд энэ нь судалж буй эсрэгтөрөгчийг агуулаагүй нь ойлгомжтой. Хэрэв цэвэршүүлсэн стандарт антиген байгаа бол шалгалт тохируулгын муруйг бий болгохын тулд урвалыг хэд хэдэн шингэрүүлэлтээр явуулна.

2. “Хатуу фаз дээр үлдсэн чөлөөт холболтын хэсгүүдийг BSA казеин болон бусад зүйлсийг ашиглан хаах (хатуу фаз дээрх коньюгатыг өвөрмөц бус сорбоос сэргийлэхийн тулд).

3. Ферментийн шошготой эсрэгбие буюу эсрэгтөрөгчийг (коньюгат) нүхэнд нэмж, өсгөвөрлөнө. Коньюгатыг хатуу фазтай холбох нь системийн хоёр бүрэлдэхүүн хэсэг нь бие биенээ нөхөх тохиолдолд л явагдана. Коньюгаттай инкубацийн дараа цооногийг угааж, улмаар коньюгатаас холбоогүй хэсгийг зайлуулна.

4. Ашигласан ферментийн тусгай субстратыг дараа нь худагт нэмж, өсгөвөрлөнө. Эерэг хяналтын цооногуудад будгийн оновчтой түвшинд хүрсний дараа ферментийн урвал зогсдог.

5. Урвалын тооцоо. Нэгдүгээрт, урвалын үр дүнг нүдээр харгалздаг. Үр дүнг илүү нарийвчлалтай бүртгэхийн тулд будгийн эрчмийг тохирох гэрлийн шүүлтүүр бүхий ELISA уншигч ашиглан үнэлдэг. Шинжилгээний үр дүнд үндэслэн оптик нягтын концентрацаас хамаарах хамаарлын графикийг байгуулав (Зураг 2).

Зураг 2. Шууд ELISA.

а) эсрэгтөрөгчийг тодорхойлох; б) эсрэгбие илрүүлэх.

ELISA-ийн энэ хувилбарыг ихэвчлэн тусгай эсрэгбие илрүүлэхэд ашигладаг. Стандарт антигенийг хавтангийн нүхэнд шингээж, өвчтөнөөс авсан ийлдэс эсвэл бусад биологийн материалын дээжээр (тархи нугасны шингэн, шүлс гэх мэт) өсгөвөрлөнө. Хатуу фазын эсрэгтөрөгчтэй холбогдсон өвөрмөц эсрэгбиемүүдийг антиглобулин коньюгат ашиглан илрүүлдэг. Шинжилгээний зорилгоос хамааран янз бүрийн антиглобулины урвалжуудыг ашигладаг бөгөөд энэ нь бүх изотипийн эсрэгбиемүүдийг илрүүлэх, эсвэл иммуноглобулины бие даасан анги, дэд ангиудад зориулагдсан байдаг. Аргын гол давуу тал нь коньюгатийн олон талт байдал юм. Аливаа дээжинд олон төрлийн эсрэгтөрөгчтэй хүний ​​эсрэгбиемийг илрүүлэхэд ижил коньюгат ашиглаж болно. Урвал нь арга зүйн хувьд энгийн.

Эсрэгбиемийг тодорхойлох шууд бус ELISA-ийн үндсэн үе шатууд:

1. Антигенийг хатуу фаз дээр шингээж, дараа нь холбоогүй бүрэлдэхүүн хэсгүүдийг арилгахын тулд угаана.

2. Үнэгүй холбох сайтуудыг блоклох. Угаасан.

3. Туршилтын материалыг худагт нэмж, өсгөвөрлөж, дараа нь угаах процедурыг гүйцэтгэнэ. Үүний зэрэгцээ эерэг ба сөрөг хяналттай дээжийг байрлуулна.

4. Ажлын шингэрүүлэлтэнд антиглобулины коньюгат нэмж, өсгөвөрлөж, холбоогүй бүрэлдэхүүн хэсгүүдийг угаана.

5. Субстрат нэмж, өсгөвөрлөнө. Эерэг хяналтын цооногуудад будгийн оновчтой түвшинд хүрсний дараа зогсоох уусмал нэмж урвалыг зогсооно.

6. Урвалын бүтээгдэхүүний хэмжээг ELISA уншигч ашиглан хэмжинэ (Зураг 3).

Шинжилгээний оновчтой нөхцөлд энэ арга нь маш өвөрмөц бөгөөд мэдрэмжтэй байдаг. Энэ нь судалгаанд хамрагдсан өвчтөнүүдийн ийлдэс дэх нанограмм хэмжээний эсрэгбиемүүдийг илрүүлэх боломжийг олгодог. Тааламжтай үр дүнд хүрэхийн тулд урвалж, арга зүйн техникийг стандартчилах шаардлагатай. ELISA-ийн энэ хувилбарыг мөн моноклональ эсрэгбиемүүдийг шалгахад ашиглаж болно.

ELISA-ийн энэхүү хувилбарыг ашиглан илрүүлсэн антиген нь эсрэгбиемүүдийг холбох чадвартай олон эпитоптой байх ёстой, эсвэл ижил өвөрмөц байдлын давтагдах, орон зайд тусгаарлагдсан эпитопуудтай байх ёстой.

ELISA-ийн энэ хувилбарыг гүйцэтгэхдээ хатуу фаз дээр шингэсэн өндөр өвөрмөц поли- эсвэл моноклональ эсрэгбиемүүдийг туршилтын дээжтэй хамт өсгөвөрлөнө. Угаах процедурын дараа ижил эсрэгтөрөгчтэй ферментийн шошготой эсрэгбиемүүдийг (коньюгат) нүхэнд нэмж, дараа нь урвалын бусад бүх үе шатыг гүйцэтгэнэ. Шинжилгээний үе шат бүрт тодорхой цогцолбор үүсэх үр ашиг нь эсрэгтөрөгч-эсрэгбиеийн урвалын холболтын тогтмол байдлаас хамаарна.

Шинжилгээний үндсэн үе шатууд:

1. Моноклональ эсрэгбие буюу ойр дотно байдлаар цэвэршсэн поликлональ эсрэгбие нь хатуу фаз дээр хөдөлгөөнгүй болдог.

2. Шинжилгээний дээжийг хавтангийн нүхэнд нэмж, эерэг хяналтын дээж болон янз бүрийн шингэрүүлэлтийн сөрөг хяналтын дээжийг зэрэгцүүлэн байрлуулна. Инкубацлаад угаана.

3. Ферментийн шошготой моноклон эсвэл поликлональ эсрэгбие - коньюгат - худагт нэмнэ. Инкубацийн дараа угаах ажлыг гүйцэтгэдэг.

4. Субстрат нэмж, өсгөвөрлөнө. Эерэг хяналтын цооногуудад оновчтой будалтанд хүрэх үед урвал зогсдог.

5. Үр дүнг ELISA уншигч төхөөрөмж дээр бүртгэх.

Аргын гол давуу тал нь түүний өндөр мэдрэмжтэй, бусад ELISA схемүүдийн чадавхийг давсан байдаг (Зураг 4).

Зураг 3. Эсрэгбие илрүүлэх шууд бус ELISA.

Энэхүү шинжилгээ нь хатуу фаз дээр шингэсэн эсрэгтөрөгчтэй холбогдохын тулд шошготой (коньюгат) ба шошгогүй (туршилтын) эсрэгбиемүүдийн өрсөлдөөнд суурилдаг. Хатуу фазад хавсарсан ферментийн хэмжээ нь хольц дахь чөлөөт эсрэгбиеийн агууламжтай пропорциональ буурна. Антигенийг тодорхойлохын тулд ижил сонголтыг ашигладаг боловч энэ тохиолдолд хүссэн антиген нь хатуу фазын гадаргуу дээр хөдөлгөөнгүй эсрэгбиетэй холбогдохын тулд шошготой, стандарт антигентэй өрсөлддөг.

Өрсөлдөөнт арга нь хамгийн бага тооны үйл ажиллагаа, урвалжийн бага хэрэглээ, автоматжуулалтыг хялбархан шаарддаг. Эсрэгбиемийг илрүүлэхийн тулд өрсөлдөх чадвартай ELISA-г хийхдээ шошготой моноклональ эсрэгбиемүүдийг ашиглах нь дээр, дараа нь коньюгат нь хатуу фаз дээр шингэсэн эсрэгтөрөгчийн нэг эпитопын сорилтын дээжтэй өрсөлддөг. ELISA-ийн энэ хувилбар нь хүний ​​иммуноглобулин, хорт хавдрын эсрэгтөрөгч, инсулин гэх мэт янз бүрийн нэгдлүүдийг тодорхойлоход хэрэглэгддэг. Энэ нь халдварт бодисын оношлогооны чухал эпитопын эсрэгбиемүүдийг илрүүлэх боломжийг олгодог.

Антигенийг тодорхойлох шинжилгээний үндсэн үе шатууд (Зураг 5):

1. Илрүүлж буй эсрэгтөрөгчийн өвөрмөц моноклональ эсрэгбиемүүдийг хатуу фаз дээр хөдөлгөөнгүй болгодог.

2. Ферментийн шошготой эсрэгтөрөгч болон туршилтын дээжийг хавтангийн нүхэнд мэдэгдэж концентрацитай нэмнэ. Инкубаци хийх, угаах ажлыг гүйцэтгэдэг. Үүний зэрэгцээ эерэг ба сөрөг хяналтыг зэргэлдээх худагт байрлуулна. Тохируулга хийхдээ төрөл бүрийн шингэрүүлэлтүүд дэх стандарт шошгогүй антигенийг ашигладаг.

3. Эерэг хяналтын цооногуудад оновчтой будалт үүсэх үед субстрат нэмж, өсгөвөрлөх, урвалыг зогсооно.

4. ELISA уншигч дээрх урвалын бүртгэл.

Энэ тохиолдолд туршилтын дээж дэх эсрэгтөрөгчийн хэмжээ нь хатуу фазын ферментийн идэвхжилтэй урвуу хамааралтай байна.

ELISA-ийн энэ хувилбарт туршилтын дээжинд агуулагдах антиген нь ферментээр тэмдэглэгдсэн моноклональ эсрэгбиемүүдтэй холбогдож, хатуу фаз дээр хөдөлгөөнгүй болсон стандарт антигентэй харилцан үйлчлэлцэхийг саатуулдаг. Дээжинд ижил хэмжээний коньюгат өвөрмөц эсрэгтөрөгч байгаа нь хөдөлгөөнгүй эсрэгтөрөгчтэй шошготой эсрэгбиемүүдийг холбоход саад болно. Дарангуйллын зэрэг нь уусмал дахь эсрэгтөрөгчийн агууламжтай шууд пропорциональ байна. Тоон шинжилгээний хувьд стандарт антигенийн цуваа шингэрүүлэлтүүдийг ашиглан тохируулгын муруйг байгуулна. Антиген илрүүлэхэд дарангуйлагч ELISA-ийн үндсэн үе шатууд (Зураг 6).

1. Стандарт антигенийг хавтангийн нүхэнд шингээнэ. Шошготой эсрэгбиемүүдийн ажлын шингэрүүлэлтийг титрлэх замаар сонгоно.

Зураг 4. ELISA-ийн “Сэндвич” хувилбар.

2. Коньюгатыг урьдчилан инкубацлах нь туршилтын дээж, стандарт антиген болон эерэг хяналтын дээжийг шингэрүүлэх замаар ажлын өмнөх шингэрүүлэлтээр гүйцэтгэнэ.

3. Хольцыг хавтангийн худаг руу шилжүүлнэ. 100% холболтыг хянахын тулд дарангуйлагч эсрэгтөрөгчгүйгээр хэд хэдэн цооногт зөвхөн шошготой эсрэгбие нэмнэ. Самбарыг өсгөвөрлөж, дараа нь угаана.

4. Субстрат нэмнэ.

5. Үр дүнг тэмдэглэ.

Туршилтын дээжинд тодорхойлж буй эсрэгтөрөгчийн концентраци нь хатуу фазын ферментийн идэвхжилтэй урвуу хамааралтай байна.

ELISA нь зөвхөн уусдаг эсрэгтөрөгч эсвэл эсрэгбиемийг тодорхойлоход төдийгүй янз бүрийн уураг үүсгэдэг эсүүдийг тодорхойлох боломжтой.

1983 онд ELISA технологийг in vitro нөхцөлд эсрэгбие эсвэл эсрэгтөрөгч (жишээлбэл, цитокин) ялгаруулж буй лимфоид эсийг илрүүлэхэд тохируулсан. Энэ аргыг ELISPOT (ферменттэй холбоотой иммуноспотын цэгийн арга) гэж нэрлэдэг. Аргын үндсэн зарчим:

1. Полистирол худгийн гадаргуу дээр (эсийн өсгөвөрлөхөд 24 цооногийн хавтанг ашигладаг) эсрэгтөрөгч буюу эсрэгбиемүүд шингэж, "хавх" урвалж болдог.

2. Судалгаанд хамрагдах лимфоид эсийг нэмж, 370С-т хэдэн цагийн турш өсгөвөрлөж, тодорхой газар эзэлж, шүүрлийн функцийг гүйцэтгэх боломжийг олгодог. Ийм эсээс ялгарсан эсрэгбие буюу эсрэгтөрөгчийг хатуу фаз дээр шингэсэн урвалжууд барьж авдаг.

3. Эсийг задалдаг угаалгын нунтаг бүхий угаалгын уусмал ашиглан эсийг устгана.

4. Ферменттэй холбоотой эсрэгбие (антиглобулины урвалж) нэмснээр шүүрлийн бүтээгдэхүүний хуримтлалын талбайнууд илэрдэг.

5. Субстрат ба агарозын холимог нэмнэ (ашигласан субстрат нь агарозд уусаж, уусдаггүй урвалын бүтээгдэхүүн үүсгэх ёстой), хатуу фазын гадаргуу дээр бор эсвэл цэнхэр толбо үүсдэг (ашигласан фермент, субстратаас хамаарч), эсүүд үүссэн хэсгүүдийг илрүүлдэг. байрлаж байсан.

Үүссэн толбо нь микроскопоор тоологддог бөгөөд энэ нь ялгарах эсийн тоо байх болно.

Нитроцеллюлозын мембраныг хатуу фаз болгон ашиглаж болно, энэ тохиолдолд хэд хэдэн давуу талтай: NCM-ийн шингээх чадвар өндөр тул үүнээс гадна "хавх" урвалж болгон ашигладаг , субстрат дахь агарозыг оруулах шаардлагагүй.

Өөр субстрат хэрэглэх үед боломжтой байдаг цооногийн ялгаруулж буй эсийн тоо болон ялгарсан эсрэгтөрөгч буюу эсрэгбиеийн нийт хэмжээг нэгэн зэрэг тодорхойлох замаар нэг эсээр ялгарах бодисын хэмжээг тодорхойлох боломжтой.

Энэ аргыг шингээсэн эсрэгбиемүүдийн эсрэгтөрөгч ялгаруулдаг эсийн тоог тооцоолоход өргөн хэрэглэгддэг бөгөөд энэ нь цитокин ялгаруулдаг эсийн тоог тодорхойлоход хэрэглэгддэг (IL-1, IL-2, IL-4, IL-6, IFN-γ, TNF-a).

Өндөр наалдацтай эсрэгбиемүүдийг хэрэглэх үед ELISA-ийн бие даасан хувилбаруудын мэдрэмж нь маш өндөр бөгөөд онолын хувьд нэг эсрэгтөрөгчийн молекулыг илрүүлэх боломжийг олгодог боловч практикт мэдрэмтгий байдал нь ферментийн идэвхжил, дохионы эрч хүч, дохиог бүртгэх аргууд зэрэг хэд хэдэн хүчин зүйлээр хязгаарлагддаг. Дохио олшруулах системүүд нь янз бүрийн ELISA сонголтуудын мэдрэмжийг нэмэгдүүлэх боломжийг олгодог. Эдгээр системүүдийн заримыг харцгаая:

Авидин-биотины харилцан үйлчлэлд үндэслэсэн.

Биотин коэнзим молекулууд (mw 244 Da) нь биотинил-N-гидроксисуксимидыг ашиглан эсрэгбиетэй нэгддэг. Жижиг биотин молекул нь иммуноглобулин эсвэл бусад уурагтай хавсарч, түүний дархлааны болон ферментийн шинж чанарыг алдагдуулахгүйгээр хялбар байдаг. Энэ тохиолдолд фермент нь өндөгний цагаан гликопротейн avidin-тэй холбоотой байдаг. Авидиныг биотинтэй холбох чадвар нь маш өндөр (цогцолборын диссоциацийн тогтмол нь 10-15 моль), avidin-ферментийн коньюгат нь эсрэгтөрөгч-эсрэгбие-биотины цогцолбортой нягт холбоотой байдаг. Тохиромжтой субстратыг нэмсний дараа урвалын бүтээгдэхүүнийг спектрофотометрийн аргаар эсвэл гэрэлтэлтийн эрч хүчээр тодорхойлно.

Авидины нэг молекул нь дөрвөн ижил дэд нэгжээс бүрдэх ба биотинийн дөрвөн молекултай харилцан үйлчлэх чадвартай бөгөөд энэ нь биотин агуулсан хоёр нэгдлүүдийг холбогч молекул болгон ашиглах боломжийг олгодог. Энэ тохиолдолд ферментийг мөн биотинжуулсан бөгөөд avidin нь биотин үлдэгдэл агуулсан хоёр молекулыг холбосон гүүрний үүрэг гүйцэтгэдэг. Үүссэн эсрэгтөрөгч-эсрэгбие-биотины цогцолбор дээр чөлөөт авидин, дараа нь биотинжүүлсэн фермент нэмнэ. Урвалыг харгалзан үздэг.

Авидин уураг нь бусад молекулуудад өвөрмөц бус шингэж чаддаг тул Streptomyces avidinii бактерид агуулагддаг биотин холбогч өөр нэг уураг болох стрептавидиныг улам ихээр хэрэглэж байна. Стрептавидин нь мөн биотинтэй хүчтэй цогцолбор үүсгэдэг бөгөөд дөрвөн ижил дэд нэгжээс бүрдэнэ.

Авидин-биотины цогцолборыг ашиглах нь ELISA-ийн мэдрэмжийг ихээхэн нэмэгдүүлдэг, учир нь нэг AT молекултай коньюгатыг нэгтгэх үед олон арван биотин молекулууд холбогдож болно. Коньюгат (биотин бүхий эсрэгбие ба фермент) олж авах нь маш хялбар бөгөөд тэдгээрийн дархлаа, ферментийн идэвхжилд хамгийн бага өөрчлөлт дагалддаг. Биотин бүхий ферментийн коньюгатуудыг бүх нийтийн урвалж болгон ашиглаж болно.

Химилюминесцент урвалын хэрэглээ.

Химилюминесцент урвалыг ELISA-д дохио авахын тулд ашиглаж болох бөгөөд энэ нь аргын мэдрэмжийг нэмэгдүүлж, шинжилгээний хугацааг багасгадаг. Тунхууны пероксидазыг ELISA-д шошго болгон өргөн ашигладаг бөгөөд үүнийг илрүүлэхийн тулд янз бүрийн химилюминесцент урвалыг ашиглаж болно. Химилюминесцент урвал нь устөрөгчийн хэт исэлээр исэлдэх үед люминолын гэрэлтэх чадварт суурилдаг. Шууд шинжилгээнд ферментийн урвал нь устөрөгчийн хэт ислийг үүсгэж, люминолыг исэлдүүлдэг бөгөөд энэ урвал нь тунхууны пероксидазаар явагддаг. Дохио нэмэгдүүлэхийн тулд янз бүрийн нэгдлүүдийг ашигладаг, жишээлбэл, люциферин, фенолууд, энэ тохиолдолд гэрэлтүүлгийн эрчмийг 10-100 дахин, зарим тохиолдолд 500 дахин нэмэгдүүлдэг (сайжруулсан химилюминесцент шинжилгээ). Гэрэлтэгч дохио нь маш тогтвортой, түүний түвшин 30 секундын дотор дээд тал нь хүрдэг (харьцуулбал: OFD-ийн өнгөт урвал нь зөвхөн 30 минутын дотор бүрэн хөгждөг).

Шууд бус шинжилгээнд эсрэгбие нь luminol эсвэл түүний деривативаар тэмдэглэгдсэн байдаг. Чөлөөт төлөвт байгаа ийм шошгыг устөрөгчийн хэт ислээр исэлдүүлж, гэрэл ялгаруулж болно. Хэрэв энэ нь цогцолбор үүсгэсэн бол исэлдүүлэх чадвараа алддаг.

Каскадын системд суурилсан.

ELISA-ийн мэдрэмжийг нэмэгдүүлэхийн тулд ферментийн каскадын системийг ашиглаж болно. Энэ тохиолдолд эхний эсрэгбиетэй холбоотой фермент нь хоёр дахь ферментийн системийн бууруулж болох субстрат үүсгэдэг. Хоёр дахь ферментийн систем нь субстрат-циклик эсвэл редоксициклик байж болно. Энэ тохиолдолд фосфо-глюкоизомераза, альдолаза, шүлтлэг фосфатаза нь ферментийн шошго болж чаддаг. Эцсийн урвалын бүтээгдэхүүнийг нүдээр эсвэл спектрофотометрээр тодорхойлно.

ELISA олшруулалтын систем нь өндөр мэдрэмжинд хүрч чаддаг. Ийм ELISA системийг дааврын түвшинг (бамбай булчирхайг өдөөдөг, прогестерон гэх мэт) тодорхойлоход ашигладаг.

Аргын харьцангуй энгийн, өндөр мэдрэмжтэй тул ELISA нь анагаах ухаан, биологийн янз бүрийн салбарт өргөн хэрэглэгддэг. ELISA-г дараах зорилгоор амжилттай ашигласан:

Халдварт өвчний массын оношлогоо (янз бүрийн өвөрмөц эсрэгтөрөгч эсвэл тэдгээрийн эсрэгбиемүүдийг илрүүлэх);

Биологийн дээжинд гормон, эмийн түвшинг илрүүлэх, тодорхойлох;

Тодорхой эсрэгтөрөгчийн эсрэг эсрэгбиеийн изотипийг (IgG, IgM болон бусад) тодорхойлох;

Дархлааны цогцолборыг тодорхойлох;

Хавдрын маркеруудыг тодорхойлох;

Сийвэнгийн уураг (ферритин, фибронектин гэх мэт) тодорхойлох;

Нийт IgE ба өвөрмөц IgE эсрэгбиемүүдийг тодорхойлох;

Миоклональ эсрэгбиемийг илрүүлэх шинжилгээ;

Биологийн шингэн дэх цитокиныг тодорхойлох.

Аргын мэдрэмж

ELISA нь өмнө нь эмнэлзүйн практикт өргөн хэрэглэгдэж байсан агглютинац, хур тунадас, RIA аргуудыг орлуулсан. Дээрх аргуудтай харьцуулахад ELISA нь хөдөлмөр бага шаарддаг, цаг хугацаа бага шаарддаг бөгөөд олон тооны ижил төстэй туршилтуудыг хийхэд тохиромжтой.

ELISA нь иммунохимийн шинжилгээний өвөрмөц онцлогийг ферментийн шошгыг тодорхойлох өндөр мэдрэмжтэй хослуулсан. Аргын мэдрэмтгий байдал (мэдрэмж гэдэг нь эсрэгбие эсвэл эсрэгтөрөгчийн илрүүлэх хамгийн бага хэмжээг хэлнэ) дараахь хүчин зүйлээр тодорхойлогддог: эсрэгбиеийн ойр дотно байдал, моноклональ эсрэгбиемүүдийг ашиглах нь зүйтэй; ферментийн тусгай үйл ажиллагаа; дохионы эрч хүч; дохио хэмжих мэдрэмж. ELISA-ийн янз бүрийн сонголтууд нь мэдрэмжээрээ ялгаатай байдаг. Хатуу фазын ELISA-ийн зарим хувилбарууд нь дээжинд нэг молекулыг илрүүлэх боломжийг олгодог. ELISA-ийн дундаж мэдрэмж нь 10-9 - 10-12 моль юм.

Галактионов В.Г. Дархлаа судлал. Москвагийн их сургуулийн хэвлэлийн газар, 1998 он

Кишкун А.А. Эмнэлзүйн практикт халдварт өвчнийг оношлох дархлаа судлалын судалгаа, аргууд. Эмнэлгийн мэдээллийн агентлаг, 2009 он

Кондратьева И.А. Дархлаа судлалын семинар. Их дээд сургуулиудад зориулсан сурах бичиг. Академи, 2004 он

Lefkovits I., Pernis B. Дархлаа судлалын судалгааны аргууд. Дэлхий, 1988

Ройт А., Бростоф Д., Мэйл Д. Дэлхий, 2000

Соколов Е.И. Эмнэлзүйн дархлаа судлал. Анагаах ухаан, 1998 он

Frimel G. Дархлаа судлалын аргууд. Анагаах ухаан, 1987

Хайтов Р.М. Дархлаа судлал. Анагаах ухаан, 2000 он

Шигина Ю.В. Дархлаа судлал: Сурах бичиг. RIOR хэвлэлийн газар, 2007 он

Ярилин А.А. Дархлаа судлалын үндэс. Анагаах ухаан, 1999 он