Бактериологическое исследование. Бактериолоическое исследование мочи
БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ , ыи- кробиологич. анализ, служит для обнаружения различного рода микроорганизмов и определения их вида в подлежащем обследованию материале (в почве, воде, продуктах разного рода, отделениях животных и т. д.); состоит в изучении биологии микроба (его морфологических, биолог, и иммунологических свойств), а для патогенных микробов также и в определении их способности вызывать у экспериментальных животных специ-фич. пат. процессы. Изучение морфологии микробов производится при помощи микроскопа, для чего материал, подлежащий обследованию, подвергается предварительной обработке с тем, чтобы сделать микробов ясно видимыми среди неорганизованного распада, в к-ром они обычно находятся. Достигается это окрашиванием препаратов из исследуемого материала различными естественными или искусственными красками. Так как мертвые микробы окрашиваются 6»1 лучше, то препараты предварительно подвергаются т. н. фиксированию, т. е. обработке разного рода физич. и хим. агентами, быстро убивающими протоплазму-■ жаром, спиртом и т. д. Иногда материал микроеко-пируется и без предварит, обработки, когда требуется по ходу анализа изучение под микроскопом живых микробов (наблюдение подвижности их, отношения к О и пр.). В таких случаях приготовляется препарат в виде т. н. висячей капли. Наблюдение ведется или обычным способом или при затемненном поле зрения микроскопа. При исследовании на присутствие Protozoa весь анализ ограничивается одним микроскопированием, что считается достаточным, т. к. методы культивирования протозоа очень сложны и в широкую практику еще не вошли. В бактериологии анализ не останавливается на изучении формы микроба. Необычайно широкая изменчивость бактерий при ничтожнейших изменениях окружающей среды, прежде всего отражается на форме их; изучение только одной формы микробов привело бы к грубейшим ошибкам при определении их вида. Поэтому, для суждения о виде микроба необходимо знание, кроме морфологии,-и всех его биол. особенностей, его биохим. и иммунологических свойств, а для патогенных-и результата опыта на животном; только совокупность всех этих данных дает возможность б. или м. точно идентифицировать того или иного микроба, определить вид и тип его. Этому и служит вся бактериологическая техника. Культивирование микробов на искусственных питательных субстратах для изучения их биохим. свойств является главнейшим моментом Б. а. В настоящее время такое культивирование встречает еще ряд затруднений. Многих микробов и теперь еще нельзя получить в искусственных культурах. Препятствием служит ряд условий, заключающихся в необычайном разнообразии микробного мира, в резко выраженной специфичности биохим. функций микробов и вытекающей отсюда их изменчивости. Наше незнание многих из этих условий не дает возможности подобрать такие питательные среды, к-рые всегда были бы пригодны. Тем не менее, именно культивирование доступных нам микробов является основным методом их Б. а. В наст, время Б. а. начинается с получения отдельных микробов, подлежащих изучению, в чистых культурах, т. е. в культурах, состоящих из одного вида микроба, без примеси какого-либо другого. Достигается это тем, что материал, подлежащий изучению, распределяется на поверхности твердых питательных сред. Это распределение имеет целью отделить микробов друг от друга. Через известный период времени, чаще всего через сутки, на тех местах субстрата, на которых оказались микробные клетки, образуются скопления микробов, т. н. колонии разросшегося микроба. Эти колонии у многих микробных видов имеют очень характерную форму, чем и пользуются для первого ориентирования в составе микробной флоры. Отдельные колонии извлекаются и переносятся на подходящие питательные среды для дальнейшего культи- вирования. Предполагается, что каждая колония вырастает из одной клетки; но это бывает не всегда, и последнее время все больше и больше в практику входит способ получения колоний из заведомо одной микробной клетки. Такое отделение микроба производится под контролем глаза в микроскопе с помощью прибора, называемого микроманипулятором. Т.к. материал, подлежащий обследованию, заключает в себе огромное количество разнообразных микробов, выделить же необходимо одного определенного из них, то в таких случаях применяются особые питательные среды. В последних или содержатся хим. вещества, вступающие между собой во взаимодействие под влиянием роста микробов, что обнаруживается каким-либо легко доступным проявлением, напр., изменением цвета, выпадением или растворением осадка (среды Эндо, Дригальского, среды с мелом, с кровью), или эти среды заведомо благоприятствуют росту искомого микроба и подавляют рост микробов сопутствующих, напр., среды обогащения для тифа, дифтерии. Только после такой предварительной обработки получают чистые культуры. В тех случаях, когда искомый микроб находится в исходном материале в очень незначительном количестве и трудно поддается непосредственному культивированию, прибегают к опыту на животных (tbc). Материал впрыскивают животному, и после того, как разовьются характерные для данного микроба пат. изменения, выделяют чистую культуру. Получив чистую культуру, приступают к изучению биохим. особенностей данного микроба. Т. к. состав питательных сред очень сложен, то для изучения биохимии к средам прибавляются различные, химически более простые вещества, изменения которых под влиянием роста микробов легко могут быть обнаружены прибавлением какого-либо индикатора-лакмуса,нейтраль-рота и др. Для этой цели служат различные углеводы, моно-, ди-, полисахариды и многоатомные спирты, а также желатина и кровь (эритроциты). На основании изменения того или иного из этих веществ заключают о биохимич. особенностях данного микроба. Громадное значение при определении вида микроба имеет иммунологический метод, основанный на способности животного организма крайне специфически реагировать на парэнтеральное введение инородных белков образованием и накоплением в крови различных т. н. антител. Сыворотка крови таких животных и служит реактивом. В ней присутствие этих антител легко может быть обнаружено рядом простых реакций. Некоторые из этих реакций получили широкое распространение и являются обязательными при идентификации микробных видов. Эти реакции-агглютинация, преципитация и реакция отклонения комплемента. Для непатогенных микробов Б. а. на этом может быть закончен. Для микробов же патогенных обязателен еще эксперимент на животном, особенно при обнаружении нового вида. Идеалом определения всякого патогенного микроба является получение у подходящего животного патологич. изменений, вызываемых данным микробом в естеств. условиях. Однако, наши знания необходимые для такого опыта условий далеко не полны, почему опыты и бывают часто безуспешными. Затем, пат.-анат. данные, полученные в результате опыта, не всегда могут быть достоверны, т. к. видимое здоровое состояние животного ничего не говорит о перенесенных им инфекциях и друг, заболеваниях; обнаруженные изменения, могут быть результатом уже ранее перенесенных заболеваний. Все эти соображения заставляют очень осторожно относиться к получаемым при эксперименте результатам и никогда не удовлетворяться одним удачным опытом. Все же в тех случаях, где реакция со стороны опытного животного по отношению к данному микробу строго определенна и постоянна (как, напр., отношение морской свинки к дифтерии или tbc, или кролика к оспе и бешенству), там эксперимент на животном является обязательным. Б. а. без такого эксперимента недостаточно убедителен. В нек-рых случаях при удачном опыте необходимо выделить в чистой культуре того микроба, который послужил для эксперимента, и идентифицировать его с исходным. Это необходимо потому, что часто введение в животный организм инородного материала пробуждает дремлющие там патогенные процессы и вызывает генерализацию ограниченного страдания, повышая активность находящихся там микробов. При выделении чистой культуры надо поэтому иметь в виду, что можно выделить не исходного микроба, а микроба, случайно находившегося в организме. Кроме того, кровь многих, видимо здоровых, животных содержит в себе различных микробов, к-рые также могут быть выделены и могут ввести в заблуждение исследователя. Общая схема хода Б. а. может быть представлена в таком виде: 1) изготовление препаратов из подлежащего обследованию материала; фиксация их; 2) микроскопирова-ние а) в неокрашенном виде, б) в окрашенном виде; 3) посев на агаровые пластинки для выделения чистой культуры; если необходимо, то после предварительного посева на избирательные или обогащающие среды; 4) биохим. анализ; 5) реакции иммунитета; 6) эксперимент на животных. Целью Б. а., кроме определения вида бактерии, служит и установление его места в систематике микробов. Однако, систематика микробов еще недостаточно разработана, вернее, существует несколько систематик, очень неполных, построенных на различных основах. Все это затрудняет точность анализа. В 1917 г. американские микробиологи создали специальную комиссию, к-рая и разработала систематику бактерий, базируясь, гл. обр., на их иммуно-биологических особенностях и свойствах, обнаруживаемых в культурах. Эта комиссия проверила характеристики всех известных микробов в указанном выше смысле, и результаты ее работ опубликованы. Все выходящие теперь на англ. яз. работы уже придерживаются номенклатуры, принятой в этом руководстве. Лит.: Златогоров С. И., Учение о микроорганизмах, П., 1914; Т а р а с е в и ч Л. А., Ме- дицинская микробиология, Киев, 1910; Омелян-с к и й В. Л., Основы микробиологии, М.-Л., 1926; К о 1 I e W. u. Wassermann A., Handbuch d. path. Mikroorg., В. I, 2 Ausg., Jena, 1912; К о 1 m e r J., Infection, immunity a. biologic therapy, L., 1924; Bergey H., Manual of determinative bacteriology, L., 1927; P a r k W. a. Williams A., Pathogenic microorganisms, N. Y., 1925; В e s s о n A., Technique microbiologique, P., 1925; Wadsworth A., Standard methods, N. Y., 1927.А. Челышй.При соответствии полученных результатов по тестированию выделенной культуры с вышеуказанными данными полученный бактериальный штамм определяют как бактериальную культуру вида Yersinia enterocolitica.
В случае, если изучаемая бактериальная культура не типируется как бактерии вида Yersinia enterocolitica, возможен вариант повторного использования бактериальной суспензии со средой накопления, хранящейся в холодильнике при +4°С.
Оптимальным решением является постановка на исследование не одной пробы исследуемого образца, а целой серии проб.
Общие сроки бактериологического исследования материала - в пределах 7 суток.
Идентификация вида осуществляется биохимическими и серологическими методами.
Для проведения ускоренной диагностики заболевания можно использовать чумной бактериофаг. Бактериофаг Y. pestis выделяют из различных источников, включая ткани больного человека и животных, а также блох. Многие авторы связывают естественное быстрое угасание заболевания в очаге с наличием бактериофага. Его высокая специфичность и вирулентность для чумной палочки позволяют применять его для идентификации чумы внесением в исследуемый материал перед посевом либо по увеличению титра бактериофага в среде.
Для быстрого обнаружения также применяют AT, меченные флюоресцинами (позволяют обнаружить Y. pestis в различных объектах в течение первых 2 ч исследования), реакцию нейтрализации AT, реакцию преципитации в стандартных агаровых пластинках и метод ускоренного роста Y. pestis на средах обогащения.
Также разработаны методы, ускоряющие биологическую пробу, например, введение зараженным животным глюкокортикоидов или куриного желтка, что позволяет ускорить диагностику чумы в случаях снижения вирулентности или при применении малой заражающей дозы.
Основные биохимические свойства, дифференцирующие Y.pseudotuberculosis и Y. enterocolitica, представлены в таблицах 15 и 16. Дополнительными признаками могут служить результаты реакции Фoгеса-Проскауэра: всегда отрицательные у Y. pseudotuberculosis и положительные при 22-28°С у Y. enterocolitica. В последнее время для выделения Y.enterocolitica из фекалий предложена селективная среда, содержащая цефсулодин, иргазан и новобиоцин (CIN-агар).
Питательные среды для культивирования иерсиний Фосфатно-буферный раствор (фбр)
Раствор А: KH 2 PO 4 – 9,08 г в 1,0 л дистиллированной воды; раствор Б: Na 2 HPO 4 2H 2 O – 11,87 г в 1 л дистиллированной воды (pH 7,6-7,8). 150 мл раствора А соединить с 850 мл раствора Б. Разлить по 5 мл в пробирки, стерилизовать при 1 атм. в течение 1 часа.
Буферно-казеиново-дрожжевая среда (бкд)
Гидролизат казеина средней степени расщепления – 2,0 мл (Дагестанский НИИ питательных сред); экстракт пекарских дрожжей – 5,0 мл; фосфатно-буферный раствор (pH 7,6-7,8) – до общего объема 1 л. Экстракт пекарских дрожжей: к 500 г дрожжей, предварительно размельченных до гомогенной массы в фарфоровой ступке в малом объеме дистиллированной воды добавить до 1 л дистиллята. Взвесь слить в колбу и кипятить в течение 60 минут на медленном огне при помешивании. Взвесь охладить при 5°С в течение 16-18 часов. Затем надосадочную жидкость слить и профильтровать через широкопористый бумажный фильтр. Приготовленный дрожжевой экстракт разлить во флаконы, простерилизовать под давлением 0,5 атм. 30 минут; хранить при температуре 5-8°С в течение 12 месяцев.
К 0,5 л фосфатно-буферного раствора добавить 2,0 г гидролизата казеина (предворительно подготовленного согласно указаниям на этикетке) и 5,0 мл экстракта дрожжей. Смешать встряхиванием, добавить фосфатно-буферный раствор до общего объема 1 л и проверить pH готовой среды (должен быть 7,6-7,8). Далее смесь разлить в пробирки по 5,0 мл и автоклавировать под давлением 0,5 атм. в течение 20 минут. Среду можно использовать в течение 7-10 суток при хранении в условиях холодильника.
Исследование, применяемое для выявления патогенных бактерий в материале от больных животных или их трупов, обнаружение микробов в объектах внешней среды, кормах, мясе и т. д. Характер и методика взятия проб, способ пересылки материала при различных инфекционных болезнях неодинаковы, но существуют общие положения, которые необходимо учитывать независимо от объекта исследования и свойств материала. Исследуемый материал по возможности собирают в асептических условиях в стерильную посуду и доставляют в ближайшее время с сопроводительным документом в лабораторию (в нём указаны дата взятия, характер и источник материала, основные клинические признаки болезни и патологоанатомические изменения, цель исследования). Б. и. включает 3 основных метода: микроскопию (бактериоскопию) мазков из патологического или др. исследуемого материала; выделение чистой культуры бактерий с последующим изучением морфологических, культурально-биохимических, антигенных и патогенных свойств бактерий.
Бактериологическое исследование начинают с микроскопии, что позволяет обнаружить в материале микробов, изучить их морфологию (форму, размер, строение). При микроскопии патологического материала готовят мазки-отпечатки из органов, тканей или тонкие мазки из другого исследуемого материала, высушивают их на воздухе, фиксируют (чаще фламбированием) и окрашивают тем или иным методом в зависимости от направленности исследования (см. Окраска микроорганизмов). Для обнаружения некоторых бактерий (например, возбудителя туберкулёза) патологический материал предварительно обрабатывают одним из методов обогащения, чтобы повысить в нём концентрацию бактерий и избавиться от посторонних микробов. Для ускоренного обнаружения бактерий применяют люминесцентную микроскопию. Для изучения подвижности бактерий, обусловленной наличием жгутиков, используют микроскопию молодой (12-24 ч) живой культуры с помощью препаратов висячей капли или раздавленной капли. Подвижность бактерий может быть установлена также на основе особенностей роста культуры в полужидком МПА. Выделение культуры бактерий проводят путём посева материала на среды питательные. Чтобы облегчить и ускорить выделение бактерий, используют дифференциально-диагностические и элективные питательные среды (плотные и жидкие), на которых определённые виды бактерий дают характерный для них рост (при этом задерживается рост посторонних микробов). Посев на плотные питательные среды в бактериологических чашках проводят путём растирания шпателем нескольких капель материала по поверхности среды. При исследовании паренхиматозных органов убитых или павших животных обжигают или фламбируют кусочек органа, затем надрезают его стерильными ножницами и с помощью пинцета проводят надрезанной поверхностью по питательной среде в чашке. В жидкую среду посев материала делают пастеровской пипеткой. Чтобы получить рост изолированных колоний микробов на плотной среде и отделить исследуемые бактерии от сопутствующих микроорганизмов, проводят дробный посев по методу Дригальского. Засеянные чашки и пробирки инкубируют в термостате при оптимальной для роста каждого вида бактерий температуре (чаще 37°C) в течение 1-2 сут, в некоторых случаях (туберкулёзные бактерии) - до 3-4 нед. Наиболее длительный и сложный этап Б. и. - родовая и видовая идентификация выделенных культур. Изучают только чистые культуры, полученные после пересева из одной колонии и имеющие идентичные морфологические и тинкториальные свойства (см. Идентификация микробов). Антигенные свойства культуры изучают в реакции агглютинации. Определение патогенных свойств бактерий проводят путём заражения лабораторных животных культурой или фильтратом культуры (при определении токсинообразования).
После изучения свойств бактерий сопоставляют полученные данные с признаками бактерий, имеющимися в классификационных схемах или определителях микробов (Д. Берджи, 1974; Н. А. Красильников, 1949, и др.), и проводят их родовую и видовую дифференциацию. В сомнительных случаях проводят повторное исследование материала. Результаты Б. и. записывают в регистрационный журнал или на бланке лабораторной экспертизы, в заключении которой указывают, какой микроб выделен из исследуемого материала. Диагноз на инфекционную болезнь может быть поставлен только при учёте эпизоотологических, клинических и патологоанатомических данных.
БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ исследование, применяемое для выявления патогенных бактерий в материале от больных животных или их трупов, обнаружение микробов в объектах внешней среды, кормах, мясе и т. д. Характер и методика взятия проб, способ пересылки материала при различных инфекц. болезнях неодинаковы, но существуют общие положения, к-рые необходимо учитывать независимо от объекта исследования и свойств материала. Исследуемый материал по возможности собирают в асептич. условиях в стерильную посуду и доставляют в ближайшее время с сопроводительным документом в лабораторию (в нём указаны дата взятия, характер и источник материала, осн. клинич. признаки болезни и патологоанатомич. изменения, цель исследования). Б. и. включает 3 осн. метода: микроскопию (бактериоскопию) мазков из патол. или др. исследуемого материала; выделение чистой культуры бактерий с последующим изучением морфологич., культурально-биохимич., антигенных и патогенных свойств бактерий.
Б. и. начинают с микроскопии, что позволяет обнаружить в материале микробов, изучить их морфологию (форму, размер, строение). При микроскопии патол. материала готовят мазки-отпечатки из органов, тканей или тонкие мазки из др. исследуемого материала, высушивают их на воздухе, фиксируют (чаще фламбированием) и окрашивают тем или иным методом в зависимости от направленности исследования (см. Окраска микроорганизмов ). Для обнаружения нек-рых бактерий (напр., возбудителя туберкулёза) патол. материал предварительно обрабатывают одним из методов обогащения, чтобы повысить в нем концентрацию бактерий и избавиться от посторонних микробов. Для ускоренного обнаружения бактерии применяют люминесцентную микроскопию. Для изучения подвижности бактерий, обусловленной наличием жгутиков, используют микроскопию молодой (12-24 ч) живой культуры с помощью препаратов висячей капли или раздавленной капли . Подвижность бактерий может быть установлена также на основе особенностей роста культуры в полужидком МПА.
Выделение культуры бактерий проводят путём посева материала на среды питательные . Чтобы облегчить и ускорить выделение бактерий, используют дифференциально-диагностические и элективные питат. среды (плотные и жидкие), на к-рых определенные виды бактерий дают характерный для них рост (при этом задерживается рост посторонних микробов). Посев на плотные питат. среды в бактериол. чашках проводят путём растирания шпателем нескольких капель материала по поверхности среды. При исследовании паренхиматозных органов убитых или павших животных обжигают или фламбируют кусочек органа, затем надрезают его стерильными ножницами и с помощью пинцета проводят надрезанной поверхностью по питат. среде в чашке. В жидкую среду посев материала делают пастеровской пипеткой. Чтобы получить рост изолированных колоний микробов на плотной среде и отделить исследуемые бактерии от сопутствующих микроорганизмов, проводят дробный посев по методу Дригальского. Засеянные чашки и пробирки инкубируют в термостате при оптимальной для роста каждого вида бактерий темп-ре (чаще 37 °С) в течение 1-2 сут, в нек-рых случаях (туберкулёзные бактерии) - до 3-4 нед. Наиболее длительный и сложный этап Б. и.- родовая и видовая идентификация выделенных культур. Изучают только чистые культуры, полученные после пересева из одной колонии и имеющие идентичные морфологич. и тинкториальные свойства (см. Идентификация микробов ). Антигенные свойства культуры изучают в реакции агглютинации . Определение патогенных свойств бактерий проводят путём заражения лабораторных животных культурой или фильтратом культуры (при определении токсинообразования).
После изучения свойств бактерий сопоставляют полученные данные с признаками бактерий, имеющимися в классификационных схемах или определителях микробов (Д. Берджи, 1974; Н. А. Кра-силышков, 1949, и др.), и проводят их родовую и видовую дифференциацию. В сомнительных случаях проводят повторное исследование материала. Результаты Б. и. записывают в регистрационный журнал или на бланке лабораторной экспертизы, в заключении к-рой указывают, какой микроб выделен из исследуемого материала. Диагноз на инфекционную болезнь может быть поставлен только при учёте эпизоотологич., клинич. и патологоанатомич. данных.
Лит.: Лабораторные исследования в ветеринарии, под ред. В. Я. Антонова и П. Н. Блинова, М., 1971.
Ветеринарный энциклопедический словарь. - М.: "Советская Энциклопедия" . Главный редактор В.П. Шишков . 1981 .
Смотреть что такое "БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ" в других словарях:
копрологическое исследование - лабораторное (макро и микроскопическое, химическое, бактериологическое) исследование кала с диагностической целью … Большой медицинский словарь
Изоля́ция инфекцио́нных больны́х - противоэпидемическое мероприятие, направленное на разобщение с окружающими людьми больных инфекционными болезнями, а также лиц, подозрительных на эти болезни или имевших контакт с больными, для предупреждения дальнейшего распространения инфекции … Медицинская энциклопедия
БРЮШНОЙ ТИФ - – инфекционная болезнь из группы кишечных инфекций, характеризующаяся язвенным поражением лимфатического аппарата тонкой кишки, циклическим течением, бактериемией, симптомами интоксикации, сыпью на коже. Возбудитель – Salmonella typhi,… … Энциклопедический словарь по психологии и педагогике
Название болезни Возбудитель Источник возбудителя инфекции Пути передачи возбудителя инфекции Основные поражаемые группы животных Длительность инкубационного периода Носительство возбудителя Важнейшие клинические признаки Патологоанатомические… … Ветеринарный энциклопедический словарь - I Обследование больного Обследование больного комплекс исследований, направленных на выявление индивидуальных особенностей больного, установление диагноза болезни, обоснование рационального лечения, определение прогноза. Объем исследований при О … Медицинская энциклопедия
ГОНОРЕЯ - ГОНОРЕЯ. Содержание: Исторические данные..............686 Биология гонококка в организме........6 87 Клинический иммунитет и реиифекция.....689 Лабораторный диагноз Г.............690 Г. как общее заболевание............695 Общая патология… … Большая медицинская энциклопедия
Туберкулёз внелёгочный - Туберкулез внелегочный условное понятие, объединяющее формы туберкулеза любой локализации, кроме легких и других органов дыхания. В соответствии с клинической классификацией туберкулеза (Туберкулёз), принятой в нашей стране, к Т. в. относят… … Медицинская энциклопедия