Was ist die Hämagglutinationsreaktion? Hämagglutinationshemmreaktion in der Virologie
HÄMAGLUTINATION
Hämagglutination(von griech. háima-Blut und lat. agglutinatio kleben), Verkleben und Ausfällen von Erythrozyten unter dem Einfluss von Bakterien, Viren, Toxinen etc., die an der Oberfläche von Erythrozyten adsorbieren können, sowie von Hämagglutininen. Die Erythrozyten eines Tieres können durch das Serum eines anderen aufgrund des Vorhandenseins normaler Isohämagglutinine (Antikörper) darin agglutiniert werden. Mit Hilfe einer Reaktion G. Installieren . Phänomen G. in mikrobiologischen und immunologischen Studien verwendet.
Unterscheiden Sie zwischen direkt oder aktiv und indirekt oder passiv. G. Gerade G. aufgrund der direkten Wirkung von Bakterien und Viren auf Erythrozyten. Gleichzeitig interagieren Hämagglutinine mit Mucoprotease-Naturrezeptoren, die sich auf der Oberfläche von Erythrozyten befinden, mit Hilfe des Mucinase-Enzyms, wodurch eine Adsorption des Antigens verursacht wird. Infolgedessen bildet eine Suspension von Erythrozyten (z. B. Huhn) einen breiten Niederschlag in Form eines Regenschirms mit unebenen Kanten. Diese Reaktion ist nicht spezifisch, verläuft ohne Beteiligung des Immunserums. Direkte G. Wird in serologischen Studien verwendet, insbesondere zur Bestimmung der Arbeitsverdünnung des in der Hemmreaktion verwendeten Antigens G., die auf der Verzögerung der hämagglutinierenden Wirkung des Antigens durch das immunspezifische Serum beruht. Direkte G. wird auch zur ungefähren Diagnose einiger Viruserkrankungen (Pferdegrippe, Vogelpest, Newcastle-Krankheit, Entengrippe) verwendet. indirekt G.(RNHA) beruht auf der Fähigkeit sensibilisierter Erythrozyten (durch Adsorption eines Antigens an ihnen), mit homologen Antikörpern des Immunserums zu agglutinieren. Aufgrund der hohen Empfindlichkeit und Spezifität der indirekten G. Es wird verwendet, um viele virale, bakterielle und Rickettsien-Erkrankungen zu diagnostizieren. Es gibt mehrere Modifikationen des indirekten G. Reaktionen der Hemmung, Verzögerung, Neutralisierung von Antikörpern usw. Mit Hilfe von RNHA und ihren Modifikationen werden sowohl Antikörper im Blutserum von Tieren und Menschen (bei Verwendung von mit einem bekannten Antigen sensibilisierten Erythrozyten) als auch Antigen (bei Verwendung von mit bestimmten sensibilisierten Erythrozyten). Antikörper) nachgewiesen werden. Für die Reaktion werden gewaschene Erythrozyten verschiedener Tierarten verwendet (meistens Erythrozyten von Schaf und Huhn). Die Fähigkeit von Erythrozyten, großmolekulare Antigene mit Proteinnatur zu adsorbieren, nimmt nach ihrer Behandlung mit Tannin zu. Um die Haltbarkeit der Erythrozyten zu erhöhen, werden sie mit Formalin konserviert. Diagnostika, die aus formalisierten Erythrozyten gewonnen werden, können ihre Aktivität über lange Zeit beibehalten. In Gegenwart von fertigen Erythrozyten-Diagnostika wird die Formulierung der Reaktion stark vereinfacht. In der tierärztlichen Praxis wird RNGA verwendet, um einige (hauptsächlich virale) Tierkrankheiten zu diagnostizieren – klassische Geflügelpest, Newcastle-Krankheit, Kuhpocken, Pferdegrippe, Schweine- und Entengrippe, Pullorose – Vogeltyphus usw. Siehe auch.
Literatur:
Laboruntersuchungen in der Veterinärmedizin, M., 1971;
Handbuch mikrobiologischer und virologischer Forschungsmethoden, hrsg. M. O. Birger 2. Aufl., M., 1973.
Lexikon der Veterinärmedizin. - M.: "Sowjetische Enzyklopädie". Chefredakteur V.P. Schischkow. 1981 .
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Hämagglutination- Hämagglutination... Rechtschreibwörterbuch
Hämagglutination- Gedränge, Agglutation Wörterbuch der russischen Synonyme. Hämagglutination Substantiv, Anzahl Synonyme: 2 Agglutination (3) … Synonymwörterbuch
HÄMAGLUTINATION- (von Hämo- und lat. Agglutinationsbindung) Bindung und Ausfällung von in einer Flüssigkeit suspendierten Erythrozyten unter dem Einfluss verschiedener Agenzien, zB Antikörper, Bakterien oder Viren. Der Hämagglutinationstest dient der Diagnose ... ... Großes enzyklopädisches Wörterbuch
Hämagglutination- der Prozess des Verklebens von Erythrozyten zu Aggregaten, die mit bloßem Auge sichtbar sind. G. verursachen: 1) At zu Erythrozyten und heterophiles Ag; 2) Ab zu Ag, fremd für Erythrozyten, adsorbiert auf ihrer Oberfläche (siehe Hämagglutination, passive Reaktion); 3) ... Wörterbuch der Mikrobiologie
HÄMAGLUTINATION- HÄMAGLUTINATION, Agglutination (Verklumpung) von Erythrozyten bei Mischung mit homologen Seren. Werden menschliche Erythrozyten durch das Serum derselben Person ersetzt, so erhält man durch Schütteln eine einheitliche Suspension. Wenn die roten Blutkörperchen einer Person ... ... Große medizinische Enzyklopädie
Hämagglutination- Das dem Verfahren zur Bestimmung von Antikörpern zugrunde liegende Phänomen, das auf deren Agglutination von Erythrozyten durch Bindung entweder an die Antigene der Erythrozyten selbst oder an andere, künstlich an der Oberfläche der Erythrozyten angebrachte Antigene beruht. ... ... Handbuch für technische Übersetzer- (Häm + Agglutination) Agglutination von Erythrozyten ... Großes medizinisches Wörterbuch
Hämagglutination- aus dem Griechischen. Haima-Blut und lat. agglutinatio agglutination), der Prozess der Agglutination und anschließenden Sedimentation von roten Blutkörperchen; verursacht durch Hämagglutinine (siehe. Hämagglutinine), Bakterien und Viren, Adsorptionsmittel an ... ... Große sowjetische Enzyklopädie
Hämagglutination- Verkleben (Agglutination) von Erythrozyten. Es entwickelt sich, auch bei der Transfusion von inkompatiblem Blut.
Erweiterte Agglutinationsreaktion (RA). Um AT im Blutserum des Patienten zu bestimmen, setzen Sie Erweiterte Agglutinationsreaktion (RA). Dazu wird einer Reihe von Blutserumverdünnungen ein Diagnostikum zugesetzt - eine Suspension von abgetöteten Mikroorganismen oder Partikeln mit adsorbiertem Ag. Die maximale Verdünnung geben Agglutination Ag, genannt der Titer des Blutserums.
Sorten der Agglutinationsreaktion (RA) zum Nachweis von AT - einem Bluttropfentest für Tularämie (mit dem Auftragen eines Diagnostikums auf einen Blutstropfen und dem Auftreten von sichtbaren weißlichen Verklumpungen) und der Huddleson-Reaktion für Brucellose (mit einem mit Enzianviolett gefärbten Diagnostikum, das auf einen Tropfen aufgetragen wird von Blutserum).
Ungefähre Agglutinationsreaktion (RA)
Um die isolierten Mikroorganismen zu identifizieren, wird eine ungefähre RA auf Glasobjektträger gelegt. Dazu wird ein Tropfen diagnostisches Standard-Antiserum (in einer Verdünnung von 1:10, 1:20) mit einer Kultur des Erregers versetzt. Bei positivem Ergebnis setzen sie eine ausführliche Reaktion mit zunehmenden Verdünnungen des Antiserums.
Reaktion als positiv angesehen, wenn eine Agglutination in Verdünnungen nahe dem Titer des diagnostischen Serums beobachtet wird.
OAS. Somatisches O-Ag sie sind thermisch stabil und widerstehen dem Kochen für 2 h.Bei der Wechselwirkung mit AT bilden sie feinkörnige Aggregate.
Gaul. H-Ag (Flagellat) thermolabil und bei 100 °C sowie unter Einwirkung von Ethanol schnell zerstört. Bei Reaktionen mit H-Antiserum bilden sich nach 2-stündiger Inkubation lose große Flocken (gebildet durch Verkleben von Bakterien mit Geißeln).
Vi Ar Typhusbakterien sind relativ thermostabil (halten einer Temperatur von 60-62 ° C für 2 Stunden stand); bei Inkubation mit Vi-Antiserum bildet sich feinkörniges Agglutinat.
Direkte Hämagglutinationsreaktionen
Die einfachste davon Reaktionen - Agglutination Erythrozyten oder Hämagglutination, die zur Bestimmung von Blutgruppen im AB0-System verwendet werden. Zum Bestimmen Agglutination(oder dessen Fehlen) werden Standard-Antiseren mit Anti-A- und Anti-B-Agglutininen verwendet. Die Reaktion wird als direkt bezeichnet, da die untersuchten Antigene natürliche Bestandteile von Erythrozyten sind.
Geteilt mit direkte Hämagglutination Mechanismen hat virale Hämagglutination. Viele Viren sind in der Lage, Erythrozyten von Vögeln und Säugetieren spontan zu agglutinieren, und ihre Zugabe zu einer Suspension von Erythrozyten bewirkt die Bildung von Aggregaten aus ihnen.
RTGA-Prinzip besteht darin, dass gleiche Volumina Blutserum und Virussuspension in einem Reagenzglas gemischt werden und nach der Exposition durch Zugabe einer Erythrozytensuspension festgestellt wird, ob das Virus in der Mischung konserviert ist. Die Agglutination von Erythrozyten zeigt das Vorhandensein an, und das Fehlen einer Hämagglutination zeigt das Fehlen des Virus in der Mischung an. Das Verschwinden des Virus aus dem Virus-Serum-Gemisch wird als Zeichen der Wechselwirkung von Serum und Virus-Antikörpern gewertet.
Aber Antikörper interagieren mit Antigenen in streng definierten quantitativen Verhältnissen. Damit einer bestimmten Virusmenge die hämagglutinierende Fähigkeit entzogen wird, ist daher ein bestimmtes Minimum an Antikörpern erforderlich, und da eine der Komponenten von RTHA immer unbekannt ist, ist es notwendig, die Reaktion in eine Reihe von Reagenzgläsern zu geben mit unterschiedlichen Dosen von Antikörpern und denselben Virusdosen oder umgekehrt. Dies wird erreicht, indem entweder unterschiedliche Serumverdünnungen und dieselbe Virusverdünnung oder unterschiedliche Virusverdünnungen und dieselbe Serumverdünnung eingenommen werden.
Mit RTGA können Sie die folgenden Aufgaben lösen: den Titer von Antikörpern gegen das hämagglutinierende Virus im Serum bestimmen; ein unbekanntes hämagglutinierendes Virus aus bekannten Seren identifizieren; den Grad der antigenen Verwandtschaft der beiden Viren feststellen.
Vorteile von RTGA: Einfachheit der Technik, Schnelligkeit, steriles Arbeiten ist nicht erforderlich, Spezifität, niedrige Kosten. Nachteil: RTGA ist nur mit hämagglutinierenden Viren möglich.
Das Prinzip der Antikörpertitration in RTGA besteht aus folgendem:
- eine Reihe aufeinanderfolgender (normalerweise 2-facher) Verdünnungen des Testserums in gleichen Volumina (normalerweise 0,25 oder 0,2 ml) herstellen;
– zu jeder Verdünnung die gleichen Volumina des homologen Virus in einem Titer von 4 HAU hinzufügen;
– Mischungen werden für eine bestimmte Zeit bei einer bestimmten Temperatur aufbewahrt (für das Virus der Newcastle-Krankheit 40-60 Minuten bei Raumtemperatur);
– allen Mischungen werden gleiche Volumina einer 1%igen Suspension gewaschener Erythrozyten zugesetzt;
- Nach der Exposition wird die Hämagglutination in jeder Mischung in Kreuzen bewertet.
Die Reaktion umfasst Serum-, Virus- und Erythrozytenkontrollen.
Als Indikator für den Antikörpertiter in diesem Serum gilt diejenige höchste Serumverdünnung, die die Hämagglutination noch vollständig hemmt.
Verwendung in der Virologie der Hämadsorptionsreaktion.
RGAd. Die Hämadsorption - die Verbindung von Erythrozyten mit der Oberfläche virusbefallener Zellen - wurde erstmals von Vogel und Shchelokov (1957) an einer mit dem Influenzavirus infizierten Gewebekultur entdeckt. Dieses Phänomen beruht auf der Affinität der auf der Oberfläche der betroffenen Zelle befindlichen Virusrezeptoren zu den Erythrozytenrezeptoren, die zu deren gegenseitiger Kopplung ähnlich der Hämagglutinationsreaktion führt. Der Vorteil dieser Reaktion besteht darin, dass sie bereits vor dem Auftreten deutlicher zytopathischer Veränderungen in infizierten Zellen positiv wird.
RGAd-Methodik besteht aus folgendem. Am 3.–4. Tag nach der Zellinfektion werden zwei Röhrchen mit derselben Zellkultur entnommen, von denen eines mit virushaltigem Material infiziert ist und das zweite ein Kontrollröhrchen ist. Die Kulturflüssigkeit wird aus beiden Reagenzgläsern abgelassen und in beide Reagenzgläser werden 2–3 Tropfen einer 0,5%igen Suspension gewaschener Erythrozyten gegeben. Beide Röhrchen werden für 5-10 Minuten belassen, so dass die Erythrozyten auf der Oberfläche der Zellen sind (waagerecht auf den Tisch gelegt), dann leicht mit Kochsalzlösung gespült und unter einem Mikroskop untersucht (kleine Vergrößerung). Im Kontrollröhrchen werden Erythrozyten vollständig mit Kochsalzlösung entfernt, und einige der verbleibenden schwimmen mit der Flüssigkeit. Wenn die Erythrozyten im infizierten Reagenzglas nicht mit Kochsalzlösung entfernt werden und nicht schwimmen, sondern an der Oberfläche der Zellen haften, sollte der RHAd als positiv betrachtet werden.
Je nach Virus und Zelltyp kann die Anordnung der roten Blutkörperchen dreifach sein:
- Erythrozyten werden nur an der Peripherie der Zellschicht in Form einer "Halskette" (Afrikanisches Schweinepest-Virus) adsorbiert;
- Erythrozyten befinden sich auf der Zellschicht in Herden oder Clustern (Grippevirus);
- Erythrozyten sind diffus auf der Zellschicht lokalisiert (Parainfluenzavirus).
Jedes Virus ist in der Lage, die roten Blutkörperchen bestimmter Tierarten zu adsorbieren.
Serologische Diagnostik viraler Erkrankungen durch Erhöhung des Antikörpertiters in gepaarten Blutseren.
Hämagglutinationsreaktion (RGA) und Häma(HITA), Mechanismus, Komponenten und Anwendung von Reaktionen.
Grundlage der Hämagglutinationsreaktion ist das Phänomen der Erythrozyten-Agglutination, das unter dem Einfluss verschiedener Faktoren auftritt. Unterscheiden Sie zwischen direkter und indirekter Hämagglutination.
Zunächst werden die Erythrozyten mit einer isotonischen Kochsalzlösung gewaschen, dann gegebenenfalls (bei Verwendung von Antigenen proteinartiger Natur) mit einer 1:20.000 Tanninlösung behandelt und mit löslichen Antigenen sensibilisiert. Nach dem Waschen mit einer gepufferten isotonischen Kochsalzlösung ist das Erythrozyten-Antigen gebrauchsfertig.
Die Testseren werden in Reagenzgläsern oder speziellen Plastikplatten mit Löchern mit isotonischer Natriumchloridlösung verdünnt, dann wird jeder Serumverdünnung ein Erythrozyten-Diagnostikum zugesetzt. Die Ergebnisse der indirekten Hämagglutinationsreaktion werden durch die Art des am Boden des Röhrchens gebildeten Erythrozytensediments berücksichtigt. Das Ergebnis der Reaktion gilt als positiv, wenn die Erythrozyten den gesamten Boden des Reagenzglases gleichmäßig bedecken. Bei einer negativen Reaktion befinden sich rote Blutkörperchen in Form einer kleinen Scheibe oder eines "Knopfes" in der Mitte des Bodens des Reagenzglases.
Die Hauptbestandteile des RP:
A) lösliches Antigen
B) Spezifische Antikörper (Serum)
(RTGA) ist ein Verfahren zur Identifizierung eines Virus oder zum Nachweis antiviraler Antikörper im Blutserum des Patienten, basierend auf dem Phänomen der fehlenden Agglutination von Erythrozyten durch ein virushaltiges Arzneimittel in Gegenwart von dagegen immunem Blutserum.
basiert auf der Blockade, Unterdrückung von Antigenen von Viren durch Antikörper des Immunserums, wodurch die Viren ihre Fähigkeit verlieren, rote Blutkörperchen zu agglutinieren.
RTHA wird zur Diagnose vieler Viruserkrankungen eingesetzt, deren Erreger (Influenza, Masern, Röteln, Zeckenenzephalitis etc.) die Erythrozyten verschiedener Tiere agglutinieren können.
Mechanismus. Die Virustypisierung erfolgt im Hämagglutinationshemmtest (HITA) mit einem Satz typspezifischer Seren. Die Ergebnisse der Reaktion werden durch das Fehlen einer Hämagglutination berücksichtigt. Subtypen von Virus A mit Antigenen H0N1, H1N1, H2N2, H3N2 usw.
können in RTGA mit einem Satz homologer typspezifischer Seren differenziert werden.
Im Kern Hämagglutinationsreaktionen liegt das Phänomen der Erythrozyten-Agglutination, die unter dem Einfluss verschiedener Faktoren auftritt.
Unterscheiden Sie zwischen direkter und indirekter Hämagglutination.
Bei der direkten Hämagglutinationsreaktion verkleben Erythrozyten, wenn bestimmte Antigene, beispielsweise Viren, an sie adsorbiert werden.
In serologischen Studien wird die direkte Hämagglutinationshemmreaktion verwendet, wenn das aus dem Patienten isolierte Virus mit einem spezifischen Immunserum neutralisiert und dann mit roten Blutkörperchen kombiniert wird.
Das Fehlen einer Hämagglutination weist auf die Übereinstimmung des Virus und des verwendeten Immunserums hin.
Eine indirekte Hämagglutination (passive Hämagglutination) wird beobachtet, wenn mit verschiedenen Antigenen vorbehandelte (sensibilisierte) Erythrozyten mit Immunserum oder Patientenserum ergänzt werden, das die entsprechenden Antikörper enthält.
Es gibt eine spezifische Bindung von Erythrozyten, ihre passive Hämagglutination.
Die Reaktion der indirekten oder passiven Hämagglutination ist in Sensitivität und Spezifität anderen serologischen Methoden überlegen und wird bei der Diagnose von Infektionen verwendet, die durch Bakterien, Rickettsien und Protozoen verursacht werden.
Das Verfahren zur Einstellung der Reaktion der indirekten Hämagglutination besteht aus mehreren Stufen.
Zunächst werden die Erythrozyten mit einer isotonischen Kochsalzlösung gewaschen, dann gegebenenfalls (bei Verwendung von Antigenen proteinartiger Natur) mit einer 1:20.000 Tanninlösung behandelt und mit löslichen Antigenen sensibilisiert.
Nach dem Waschen mit einer gepufferten isotonischen Kochsalzlösung ist das Erythrozyten-Antigen gebrauchsfertig. Die Testseren werden in Reagenzgläsern oder speziellen Plastikplatten mit Löchern mit isotonischer Natriumchloridlösung verdünnt, dann wird jeder Serumverdünnung ein Erythrozyten-Diagnostikum zugesetzt.
Die Ergebnisse der indirekten Hämagglutinationsreaktion werden durch die Art des am Boden des Röhrchens gebildeten Erythrozytensediments berücksichtigt. Das Ergebnis der Reaktion gilt als positiv, wenn die Erythrozyten den gesamten Boden des Reagenzglases gleichmäßig bedecken. Bei einer negativen Reaktion befinden sich Erythrozyten in Form einer kleinen Scheibe oder eines „Knopfes“ in der Mitte des Bodens des Reagenzglases.
Hemmungsreaktion der Hämagglutination- eine serologische Reaktion, die auf der Fähigkeit von Antikörpern beruht, die Erythrozyten-Agglutination durch hämagglutinierende Virustypen (Adenoviren, Arboviren, einige Enteroviren, Influenza- und Parainfluenzaviren, Masern, Reoviren) zu verhindern.
Spezifische antivirale Antikörper interagieren mit den Oberflächenmolekülen von Hämagglutininen der Virionen dieser Viren und blockieren deren Bindung an komplementäre Moleküle der Erythrozytenmembran.
In jüngster Zeit wurde die Reaktion in Laboratorien der klinischen Virologie zur Bestimmung der Titer spezifischer Antikörper gegen bestimmte Viren sowie zur serologischen Identifizierung und Typisierung von Virusisolaten aus klinischem Material von Patienten eingesetzt.
Die Verwendung ist etwas eingeschränkt, da im Blutserum von Menschen unspezifische Inhibitoren von Viren sowie natürliche Antikörper - Agglutinine - vorhanden sind.
Neutralisationsreaktion – Hämagglutinationshemmreaktion (RTGA).
RTGA wird angewendet:
-zur Virus-Serotypisierung;
- zur Serodiagnostik von Infektionen.
Es gibt zwei Möglichkeiten der Einstellung:
- Tropfmethode auf Glas (ungefähre Reaktion), die zum Serokopieren von Viren verwendet wird;
- in Reagenzgläsern eingesetzt.
Mechanismus.
Einige Viren (z. B. Influenza) enthalten Hämagglutinin, das je nach Virustyp eine Agglutination von Erythrozyten verschiedener Tiere verursacht.
In Gegenwart von Antikörpern im Serum - Antihämagglutininen wird eine Hemmung der Aktivität von Viren beobachtet.
RTGA.
Zweck: Serotypisierung des Influenza-A-Virus
Komponenten:
1. Das untersuchte Material ist die Allantoisflüssigkeit des Hühnerembryos,
2. diagnostische antiinfluenzatypspezifische Seren,
3. 5% Suspension von Hühnererythrozyten.
4.
Kochsalzlösung.
Die Reaktion wird nach der Tropfmethode auf das Glas gegeben. 1 Tropfen diagnostische Seren und Testmaterial werden auf das Glas gegeben, gemischt, dann wird 1 Tropfen Erythrozytensuspension hinzugefügt. Bei einer positiven Reaktion wird eine homogene Rötung beobachtet, bei einer negativen Reaktion treten rote Flocken auf (Hämagglutination).
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Eigenschaften von Influenzaviren. Epidemiologie und Diagnose der Influenza. Verwendung von RTGA für die Influenzavirus-Serotypisierung. Präparate zur spezifischen Prophylaxe und Behandlung.
Influenza oder Influenza ist eine akute Infektionskrankheit, die durch Schädigung der Schleimhäute der oberen Atemwege, Fieber, allgemeine Vergiftung und Störung des Herz-Kreislauf- und Nervensystems gekennzeichnet ist.
Influenza ist aufgrund der hohen Ansteckungs- und Variabilität des Erregers durch eine Tendenz zur epidemischen und pandemischen Ausbreitung gekennzeichnet.
Eigenschaften von Krankheitserregern. Krankheitserreger - Influenzaviren gehören zur Familie. Orthomyxoviridae, Gattungen Influenzavirus A, B und Influenzavirus C. Influenzaviren sind RNA-Viren. Typ-A-Influenzavirus wurde 1933 von W. Smith, K. Andrews, P. Laidlaw isoliert. 1940 T.
Anwendung der Hämagglutinationsmethode in der Virologie.
Francis und R. Medzhill isolierten Typ B-Influenzaviren, 1949 R. Taylor - Typ C. In Russland wurden die ersten Influenzaviren 1936 von A. A. Smorodintsev isoliert und Typ A zugeordnet. Morphologie. Influenzaviren haben eine Kugelform (Kugelform) - 80 - 120 nm, seltener haben sie eine fadenförmige Form. Sie bestehen aus: 1) Kern – einem Nukleokapsid mit spiralförmiger Symmetrie (einzelsträngiger linearer „-“-Strang von RNA + Proteinkapsid); 2) Basalmembran - äußere Lipoproteinmembran - Superkapsid.
Auf der Oberfläche der Membran befinden sich Glykoproteine (in Form von Stacheln und Zotten) von 2 Typen: 1) Hämagglutinin - fördert die Anhaftung an Zellrezeptoren; 2) Neuraminidase – fördert die Freisetzung des Virus aus der Zelle. Anbau. Für die Kultivierung werden Hühnerembryos, primär trypsinierte Zellkulturen und manchmal Labortiere verwendet.
Das bequemste Modell sind Hühnerembryos im Alter von 10-12 Tagen. Es ermöglicht Ihnen, große Mengen des Virus zu erhalten, das für die Herstellung von Impfstoffen und Bakterienpräparaten erforderlich ist.
Die Infektion erfolgt in der Allontoishöhle, auf der Chorion-Allontoismembran, in der Amnionhöhle, im Amnion. Das Vorhandensein des Virus im Hühnerembryo wird im Hämagglutinationstest nachgewiesen. Antigene Struktur. Viren haben ein internes Antigen - S und Oberflächenantigene: HA-Hämagglutinin und NA-Neuraminidase. S-Antigen - gruppenspezifisch, dem ganzen Typ gemeinsam, nach diesem Antigen werden Influenzaviren in die Typen A, B und C eingeteilt. Dies ist ein komplementfixierendes, stabiles (unveränderliches) Antigen.
HA- und NA-Antigene sind spezifische Antigene. Das HA-Antigen bewirkt die Bildung virusneutralisierender Antikörper und die Agglutination von Erythrozyten.
Das NA-Antigen bewirkt die Bildung von Antikörpern, die Viren teilweise neutralisieren.
Typ B-Virus ist weniger variabel, während Typ C sehr stabil ist.
toxische Eigenschaften. Die toxische Wirkung des Virus auf den Körper (Kopfschmerzen, Muskelschmerzen, Fieber, katarrhalische Erscheinungen) ist auf die Proteine des Virus (das Viruspartikel selbst) zurückzuführen. Diese Wirkung ist streng spezifisch und wird nur durch das Immunserum des entsprechenden Typs oder Subtyps oder durch das Serum von Erkrankten neutralisiert. Widerstand. Influenzaviren sind empfindlich gegenüber UV-Strahlen, Desinfektionsmitteln (Formalin, Alkohol, Phenol, Chloramin) und Fettlösungsmitteln.
In einem flüssigen Medium sterben sie einige Minuten lang bei einer Temperatur von 50 - 60 ° C. Bei Zimmertemperatur an der Luft bleiben Viren mehrere Stunden infektiös. Sie werden lange in getrockneter Form gelagert und bleiben im gefrorenen Zustand (-70 ° C) nicht nur lange erhalten, sondern verlieren auch nicht ihre Virulenz.
tierische Anfälligkeit. Unter natürlichen Bedingungen infizieren Viren vom Typ A Menschen und Tiere (Pferde und Schweine werden krank), während Viren vom Typ B und C nur Menschen infizieren. Unter den Labortieren sind weiße Mäuse, afrikanische Frettchen, syrische Hamster und Affen anfällig für Viren.
Die Krankheit bei Tieren ist durch Lungenschäden, Fieber gekennzeichnet und kann zum Tod der Tiere führen. Epidemiologie der Krankheit. Die Infektionsquelle ist eine kranke Person mit einer klinisch ausgeprägten oder asymptomatischen Form. Ein Erkrankter gibt das Virus beim Husten, Sprechen, Niesen mit Speicheltropfen, Schleim, Auswurf bereits in der Inkubationszeit an die Umgebung ab.
Der Patient wird 24 Stunden vor dem Auftreten der Hauptsymptome ansteckend und stellt innerhalb von 48 Stunden nach ihrem Verschwinden eine Seuchengefahr dar.
Der Übertragungsmechanismus ist aerogen. Der Übertragungsweg ist die Luft. Die Anfälligkeit des Menschen für Influenza ist sehr hoch. Alle Altersgruppen sind erkrankt, hauptsächlich im Winter. Kinder und ältere Menschen sind am anfälligsten. Der Name der Krankheit spiegelt die Merkmale der Epidemiologie wider: Influenza aus dem Französischen. Greifer - greifen, Influenza - aus dem Italienischen. Influenza di freddo - der Einfluss der Erkältung.
Von allen akuten Atemwegserkrankungen ist die Influenza die massivste und schwerste Erkrankung. Grippepandemien und -epidemien bedecken bis zu 30-50 % oder mehr der Weltbevölkerung und verursachen enorme Schäden für die Gesundheit und Wirtschaft der Länder. Die ersten Beschreibungen von Influenza-Epidemien stammen aus dem 12. bis 14. Jahrhundert. Das Auftreten von Pandemien und großen Epidemien wird durch das Influenzavirus Typ A verursacht, was auf die hohe Variabilität des Virus zurückzuführen ist und durch Antigenverschiebung mit der Entstehung eines neuen Subtyps einhergeht.
Zwischen Pandemien kommt es alle 1,5 bis 2 Jahre zu epidemischen Ausbrüchen, die mit der antigenen Drift von Viren verbunden sind. 1918 wurde die Spanische Grippepandemie (1,5 Milliarden Menschen erkrankten, 20 Millionen Menschen starben) durch das Influenzavirus A1 verursacht, die hauptsächlich in Spanien registriert wurde und fast die gesamte Erdbevölkerung erfasste; Die Krankheit war durch die Entwicklung einer außergewöhnlich schweren hämorrhagischen Lungenentzündung mit einer Rekordsterblichkeitsrate (bis zu 1 % aller Fälle) gekennzeichnet.
1957 wurde die "asiatische" Pandemie (2 Milliarden Menschen erkrankten) von einem neuen Subtyp verursacht - dem Subtyp A2. 1968 wurde die „Hongkong“-Pandemie (1 Milliarde Menschen erkrankten) durch einen neu aufgetretenen Subtyp verursacht – den Subtyp A3. In der Regel verdrängt eine neue Variante eines Virus eine früher zirkulierende Variante aus der menschlichen Bevölkerung.
Doch 1977, nach 20 Jahren Pause, „kehrte“ der Typ A1 unerwartet „zurück“, was zu einer großen Epidemie führte. Folglich bleiben die verdrängten Varianten des Influenzavirus bestehen und können in gewissen Abständen erneut eine Epidemie auslösen. Typ B-Virus verursacht lokale Epidemien, während Typ C keine Epidemien verursacht. Pathogenese und Klinik der Krankheit. Das Eingangstor sind die oberen Atemwege. Das Virus dringt in die Epithelzellen der Schleimhaut ein und vermehrt sich darin.
Der Einfluss des Virus auf Epithelzellen verursacht deren Nekrose und Desquamation (Abstoßung) des Epithels, wodurch die Schleimhaut für Viren und Bakterien durchlässig wird. Sie dringen ins Blut ein und breiten sich im ganzen Körper aus.“ Begleitet wird die Virämie von multiplen Läsionen des Kapillarendothels mit einer Zunahme ihrer Durchlässigkeit.
In schweren Fällen kommt es zu ausgedehnten Blutungen in Lunge, Myokard und parenchymalen Organen. Die Zerfallsprodukte geschädigter Zellen und Virusproteine wirken toxisch auf verschiedene Organe und Organsysteme. Die Toxine des Virus dämpfen das Zentralnervensystem stark, und obwohl der Prozess nicht lange anhält (3-5 Tage), bleibt die kranke Person lange Zeit geschwächt und jede Sekundärinfektion tritt in den geschwächten Körper ein und es treten Komplikationen auf: Grippepneumonie , akutes Lungenödem, Nierenschäden , Herz, Bronchien.
Eine häufige Komplikation der Influenza ist eine bakterielle Lungenentzündung (Streptokokken der Gruppe B). Während der Spanischen Grippe-Pandemie starben Menschen vor allem an einer sekundären bakteriellen Lungenentzündung.
Bei der Pathogenese der Influenza ist nicht nur eine Intoxikation wichtig, sondern auch eine Allergisierung sowie eine Verletzung der funktionellen Eigenschaften immunkompetenter Zellen mit der Entwicklung einer Immunschwäche. Die Inkubationszeit beträgt mehrere Stunden - 1-3 Tage. Gekennzeichnet durch einen akuten Beginn, Fieber bis 37,5 - 38 ° C, allgemeine Intoxikation, ausgedrückt in Unwohlsein, Kopfschmerzen, Schmerzen in den Augäpfeln, entzündlichen Prozessen der Atemwege unterschiedlicher Schwere (Rhinitis, Laryngitis, Tracheitis, Pharyngitis).
Ein Fieberzustand mit Influenza ohne Komplikationen dauert 5-6 Tage. Immunität. Nach der Krankheit wird eine typspezifische und stammspezifische Immunität gebildet, die durch spezifische und unspezifische zelluläre und humorale Faktoren bereitgestellt wird. Ig A-Antikörper sind von großer Bedeutung, eine Kreuzimmunität entsteht nicht, nach einer Influenza Typ A1 kann man eine Influenza Typ A2 bekommen usw. Nach einem Virus vom Typ Immunität - 1-2 Jahre, nach einem Virus vom Typ B - 3-5 Jahre.
Passive natürliche Immunität - bei Kindern bis zu 8 - 11 Monaten. Aufgrund der hohen antigenen Variabilität des Virus führt die Genesung nicht zur Entwicklung einer anhaltenden Immunität gegen eine Reinfektion.
Labordiagnostik. Untersuchtes Material: Abstriche – Abdrücke von der Nasenschleimhaut, Nasen-Rachen-Sekret, Lungenstücke, Gehirn bei tödlichem Ausgang.
Diagnostische Methoden: 1) Cytorhinoskopie-Methode - Nachweis von virusspezifischen intrazellulären Einschlüssen - bei Färbung mit Pyoctanin unter einem Mikroskop sind in den Zellen des Ziliarepithels hellrote Einschlüsse des Influenzavirus sichtbar; 2) virologische Methode - Isolierung des Influenzavirus aus dem menschlichen Körper durch Infektion von Hühnerembryos mit einer Spülung aus dem Nasopharynx des Patienten; die Indikation (Vorhandensein) des Virus erfolgt mittels RGA (Influenzaviren agglutinieren Erythrozyten des Menschen und verschiedener Tiere), die Identifizierung des Virus erfolgt stufenweise: im RSC wird der Typ bestimmt, im Hämagglutinin-Subtyp bestimmt die RTGA, und der Neuraminidase-Subtyp wird in der Enzymaktivitäts-Hemmungsreaktion bestimmt; 3) serologische Methode - Nachweis eines Anstiegs des Titers (4-mal) spezifischer Antikörper im Blutserum des Patienten mit RSK, RTGA, PH in Zellkultur, Gelpräzipitationsreaktion, ELISA; 4) biologisches Verfahren - intranasale Infektion von Mäusen - Einbringen von Material in die Lungen unter Ätheranästhesie; Mäuse sterben nach 2 - 3 Tagen an Lungenentzündung; 5) Express-Diagnostik – Nachweis des viralen Antigens mit RIF.
Behandlung und Vorbeugung.
Zur Vorbeugung und Behandlung in den ersten Tagen der Krankheit wird humanes Leukozyten-Interferon (intranasal) verwendet. Zu therapeutischen Zwecken werden antivirale Medikamente verwendet - Rimantadin (Grippe Typ A), Adapromin, Virazol und immunmodulatorische Medikamente - Dibazol, Prodigiosan, Levomisol.
Bei schwerer Influenza, insbesondere bei Kindern, wird Spender-Anti-Influenza-Immunglobulin sowie Medikamente - Inhibitoren zellulärer Proteasen (Gordox, Contrical, Aminocapronsäure) - verwendet.
Besondere Prävention. Die folgenden antiviralen Medikamente und Immunmodulatoren sowie Lebend- und inaktivierte Impfstoffe werden verwendet: 1) lebende Monovakzine zur oralen Verabreichung – abgeschwächte Stämme derzeit zirkulierender Viren (A1, A3 und B); zeigen die größte Immunogenität; 2) Vollvirion-Impfstoffe aus virulenten Stämmen, die durch Formaldehyd oder UV-Strahlen inaktiviert wurden; 3) Influenza-Untereinheiten-Impfstoffe nur aus Oberflächenantigenen - HA- und NA-Antigenen (haben eine minimale Reaktogenität).
Zur Gewinnung von Impfstoffen werden Viren in Hühnerembryos und in Hühnerembryo-Zellkulturen kultiviert.
Mit der Einführung von Impfstoffen wird eine lokale und humorale Immunität gebildet. Die Impfung wird in Zeiten des größten Seuchenrisikos durchgeführt. Es ist eher für junge und alte Menschen geeignet. Die Verwendung von Totimpfstoffen erfordert eine jährliche Wiederholungsimpfung; ihre Effizienz übersteigt 60-70% nicht.
Da Da häufig antigene Variationen des Erregers beobachtet werden, kann der Antigensatz des entsprechenden Virus zur Immunisierung erst nach Beginn des Ausbruchs bestimmt werden.
Eintrittskarte 15.
Hämagglutinationsreaktion (RGA).
Im Labor werden zwei verschiedene Hämagglutinationsreaktionen verwendet.
Die erste RGA bezieht sich auf serologische. Bei dieser Reaktion werden Erythrozyten in Wechselwirkung mit den entsprechenden Antikörpern (Hämagglutininen) agglutiniert.
Die Reaktion wird häufig zur Bestimmung von Blutgruppen verwendet.
Die zweite RHA ist nicht serologisch. Darin wird nicht die Agglutination der Erythrozyten herbeigerufen
Antikörper, sondern spezielle Substanzen, die von Viren gebildet werden. Beispielsweise agglutiniert das Influenzavirus die Erythrozyten von Hühnern und Meerschweinchen, das Poliovirus agglutiniert die Erythrozyten von Schafen. Diese Reaktion ermöglicht die Beurteilung des Vorhandenseins eines bestimmten Virus im Untersuchungsmaterial.
Die Reaktion wird in Reagenzgläsern oder auf speziellen Platten mit Vertiefungen durchgeführt.
Das auf das Vorhandensein des Virus zu untersuchende Material wird mit isotonischer Lösung von 1:10 bis 1:1280 verdünnt; 0,5 ml jeder Verdünnung werden mit einem gleichen Volumen 1-2 %iger Erythrozytensuspension gemischt. Bei der Kontrolle werden 0,5 ml Erythrozyten mit 0,5 ml isotonischer Lösung gemischt. Die Reagenzgläser werden 30 Minuten lang in einen Thermostat gestellt und die Platten werden 45 Minuten lang bei Raumtemperatur belassen.
Bilanzierung von Ergebnissen. Bei einem positiven Ergebnis der Reaktion am Boden des Reagenzglases oder der Vertiefung fällt ein Niederschlag von Erythrozyten mit überbackenen Rändern ("Regenschirm"), der den gesamten Boden der Vertiefung bedeckt.
Hemmungsreaktion der Hämagglutination
Bei negativem Ergebnis bilden die Erythrozyten einen dichten Niederschlag mit glatten Rändern („Knopf“). Derselbe Niederschlag sollte die Kontrolle haben.
Die Intensität der Reaktion wird durch "+"-Zeichen ausgedrückt. Der Titer des Virus ist die maximale Verdünnung des Materials, bei dem eine Agglutination auftritt.
Hemmungsreaktion der Hämagglutination
Dies ist eine serologische Reaktion, bei der spezifische antivirale Antikörper, die mit dem Virus (Antigen) interagieren, es neutralisieren und ihm die Fähigkeit nehmen, rote Blutkörperchen zu agglutinieren, d.h.
B. die Hämagglutinationsreaktion hemmen. Mit dieser Reaktion können Sie den Typ und die Art der Viren bestimmen.
Reaktionseinstellung. 0,25 ml antivirales Serum werden mit dem gleichen Volumen virushaltigem Material gemischt. Die Mischung wird geschüttelt und 30 Minuten lang in einen Thermostat gestellt, wonach 0,5 ml 1–2%ige Erythrozytensuspension zugegeben werden.
Bilanzierung von Ergebnissen. Bei richtiger Einstellung des Experiments bei der Kontrolle von Serum und Erythrozyten sollte sich ein "Knopf" bilden - es gibt keinen Faktor, der Erythrozyten agglutiniert; Bei der Antigenkontrolle bildet sich ein "Regenschirm" - das Virus verursacht eine Erythrozyten-Agglutination.
Wenn das Serum homolog zum untersuchten Virus ist, wird ein "Knopf" gebildet - das Serum hat das Virus neutralisiert.
Indirekte Hämagglutinationsreaktion
Die Reaktion der indirekten (passiven) Hämagglutination (RIHA) basiert auf der Tatsache, dass Erythrozyten, wenn ein lösliches Antigen auf ihrer Oberfläche adsorbiert wird, die Fähigkeit zur Agglutination erwerben, wenn sie mit Antikörpern gegen das adsorbierte Antigen interagieren.
Reaktionseinstellung.
Das Serum wird 30 Minuten auf 56 °C erhitzt, nacheinander im Verhältnis 1:10 - 1:1280 verdünnt und in Reagenzgläser oder Vertiefungen zu 0,25 ml gegossen, wo dann 2 Tropfen Erythrozyten mit daran adsorbierten Antigenen zugegeben werden.
Kontrollen: eine Suspension von Erythrozyten mit daran adsorbierten Antigenen mit offensichtlich Immunserum, eine Suspension von Erythrozyten mit daran adsorbierten Antigenen mit normalem Serum; eine Suspension normaler Erythrozyten mit dem getesteten Serum.
Bei der ersten Kontrolle sollte eine Agglutination auftreten, bei der zweiten und dritten nicht.
Testfragen.
1. Was zeigt ein positives RGA-Ergebnis zwischen Erythrozyten und dem auf das Vorhandensein des Virus getesteten Material an?
2. Wird eine Erythrozyten-Agglutinationsreaktion auftreten, wenn ihnen ein Virus und sein entsprechendes Serum zugesetzt werden?
Wie heißt die Reaktion, die dieses Phänomen offenbart?
PRAKTISCHE ARBEIT №12.
Komplementbindungsreaktion.
Die Komplementbindungsreaktion (RCT) beruht darauf, dass ein spezifischer Antigen-Antikörper-Komplex Komplement immer an sich selbst adsorbiert (bindet).
Diese Reaktion wird häufig zur Identifizierung von Antigenen und zur Serodiagnose von Infektionen verwendet, insbesondere von Krankheiten, die durch Spirochäten (Wassermann-Reaktion), Rickettsien und Viren verursacht werden.
PCS ist eine komplexe serologische Reaktion.
Es handelt sich um ein Komplement und zwei Antigen-Antikörper-Systeme. Im Wesentlichen sind dies zwei serologische Reaktionen.
Das rechte Grundsystem besteht aus einem Antigen und einem Antikörper (einer bekannt, der andere nicht). Eine gewisse Menge Komplement wird hinzugefügt. Wenn das Antigen und der Antikörper dieses Systems übereinstimmen, werden sie sich verbinden und ein Kompliment verknüpfen. Der resultierende Komplex ist fein verteilt und nicht sichtbar.
Die Bildung dieses Komplexes ist mit Hilfe eines zweiten hämolytischen oder Indikatorsystems bekannt.
Es umfasst Schaferythrozyten (Antigen) und ihr entsprechendes hämolytisches Serum (Antikörper), d.h. Fertiger Immunkomplex. In diesem System kann die Lyse der Erythrozyten nur in Gegenwart von Komplement erfolgen. Wenn das Komplement vom ersten System gebunden wird, findet im zweiten System keine Hämolyse statt;
keine kostenlose Ergänzung. Das Fehlen einer Hämolyse (der Inhalt des Röhrchens ist trüb oder am Boden des Röhrchens befindet sich ein Erythrozytensediment) wird als positives Ergebnis der RSK aufgezeichnet.
Wenn im ersten System das Antigen nicht dem Antikörper entspricht, wird der Immunkomplex nicht gebildet und das Komplement bleibt frei. Frei bleibend, nimmt das Kompliment am zweiten System teil und verursacht Hämolyse, das Ergebnis von RSK ist negativ (der Inhalt der Röhrchen ist transparent - "Lackblut").
Komponenten, Komplementfixierungsreaktionen:
Antigen – normalerweise ein Lysat, Extrakt, Hapten,
seltener eine Suspension von Mikroorganismen.
2. Antikörper – Patientenserum.
3. Ergänzung - Meerschweinchenserum.
Antigen - Schaferythrozyten.
5. Antikörper - Hämolysin gegen Schaferythrozyten.
6. Isotonische Lösung.
Da es sich beim RSC um eine Vielzahl komplexer Komponenten handelt,
sie müssen vortitriert und in genauen Mengen und in gleichen Volumina in die Reaktion eingebracht werden: 0,5 oder 0,25 ml, seltener 0,2, 1,25 oder 1,0 ml (größere Volumina ergeben ein genaueres Ergebnis). Die Titration der Reaktionskomponenten erfolgt im gleichen Volumen wie der Versuch, wobei die fehlenden Bestandteile durch eine isotonische Lösung ersetzt werden.
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Sie beruht darauf, dass Erythrozyten, an denen Antigene voradsorbiert sind, in Gegenwart von homologen Seren (Antikörpern) die Fähigkeit zur Agglutination erwerben.
In diesem Fall spielen Erythrozyten die Rolle von Trägern mit spezifischen Determinanten, deren Agglutination als Ergebnis der Antigen + Antikörper-Reaktion auftritt.
Erythrozyten, an deren Oberfläche Antigene fest angeheftet sind, werden als Erythrozyten-Antigendiagnostika oder durch Antigene sensibilisierte Erythrozyten bezeichnet.
Ein anderer Typ von RNHA-Antikörpern wird auf der Oberfläche von Erythrozyten adsorbiert und ihre anschließende Agglutination erfolgt in Gegenwart eines homologen Antigens.
In diesem Fall werden solche Erythrozyten als Erythrozyten-Antikörper-Diagnostika oder durch Antikörper sensibilisierte Erythrozyten bezeichnet.
Auf der Grundlage dieser beiden grundlegenden methodischen Ansätze wurden viele Modifikationen des RNGA entwickelt und werden verwendet. So werden kleine Standardpartikel aus Latex als Träger verwendet.
Hämagglutinations-Hemmreaktion (HITA)
In diesem Fall wird die Reaktion als Latex-Agglutinationsreaktion (RLA) bezeichnet oder es wird Staphylococcus aureus verwendet - die Koagulationsreaktion usw. Normalerweise werden Erythrozyten-Diagnostika in Unternehmen der biologischen Industrie hergestellt, und die Haupterfahrung mit RNGA wird bereits in diagnostischen Labors gesammelt.
Die Herstellung von Erythrozytendiagnostika umfasst folgende Schritte:
- Fixierung von Erythrozyten mit Formaldehyd oder Glutar- oder Acrylaldehyd.
Solche verarbeiteten Erythrozyten werden lange gelagert. Häufiger werden für diesen Zweck Erythrozyten von Schafen, Menschen, Hühnern usw. verwendet;
- Behandlung fixierter Erythrozyten mit Tanninlösung. Dadurch erwerben Erythrozyten die Eigenschaft, Proteine (Viren und Antikörper) irreversibel an ihrer Oberfläche zu adsorbieren;
- Sensibilisierung tanisierter Erythrozyten durch Viren oder Antikörper.
Es sollte beachtet werden, dass die Methoden zur Herstellung von Erythrozyten-Diagnostika für virale Infektionen unterschiedlich sind.
Die Technik zum Einrichten von RNHA zum Nachweis und zur Bestimmung des Antikörpertiters ist wie folgt:
- zu aufeinanderfolgenden 2-fachen Serumverdünnungen gleiche Dosen antigensensibilisierter Erythrozyten zugeben;
- die Mischung wird 2–3 Stunden bei Raumtemperatur oder 16–18 Stunden bei 4°C belassen;
- die Ergebnisse berücksichtigen.
Enthält das Serum Antikörper gegen das Virus, mit dem Erythrozyten sensibilisiert wurden, wird eine Hämagglutination beobachtet, die in Kreuzen ausgewertet wird.
Der Serum-Antikörpertiter wird als die höchste Serumverdünnung angenommen, die bei mindestens zwei Kreuzen noch Hämagglutination liefert.
RNGA wird von allen relevanten Kontrollen begleitet. Normalerweise setzen sie die Reaktion durch die Mikromethode.
RNHA ermöglicht die Lösung der folgenden diagnostischen Aufgaben:
- Nachweis von Antikörpern und Bestimmung ihres Titers im Blutserum unter Verwendung eines bekannten Erythrozyten-Antigen-Diagnostikums;
- Erkennen und Identifizieren eines unbekannten Virus unter Verwendung eines bekannten Erythrozyten-Antikörper-Diagnostikums.
Vorteile von RNGA: hohe Empfindlichkeit, einfache Einstelltechnik und schnelle Reaktion.
Es ist jedoch wichtig zu beachten, dass es große Schwierigkeiten bei der Herstellung stabiler Erythrozyten-Diagnostika gibt (große Abhängigkeit von der Reinheit der verwendeten Komponenten, die Notwendigkeit, die Art der Fixierung, Tanisierung und Sensibilisierung der Erythrozyten für jeden Virustyp auszuwählen). .
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Es verwendet Erythrozyten oder neutrale synthetische Materialien (z. B. Latexpartikel), an deren Oberfläche Antigene (Bakterien, Viren, Gewebe) oder Antikörper adsorbiert werden.
Ihre Agglutination tritt auf, wenn die entsprechenden Seren oder Antigene hinzugefügt werden. Mit Antigenen sensibilisierte Erythrozyten werden als antigenes Erythrozyten-Diagnostikum bezeichnet und zum Nachweis und zur Titration von Antikörpern verwendet. Durch Antikörper sensibilisierte Erythrozyten. werden als Immunglobulin-Erythrozyten-Diagnostika bezeichnet und dienen zum Nachweis von Antigenen.
Die passive Hämagglutinationsreaktion dient zur Diagnose von Krankheiten, die durch Bakterien (Typhus und Paratyphus, Ruhr, Brucellose, Pest, Cholera usw.), Protozoen (Malaria) und Viren (Influenza, Adenovirus-Infektionen, virale Hepatitis B, Masern, durch Zecken übertragene Krankheiten) verursacht werden Enzephalitis, hämorrhagisches Krimfieber usw.) sowie zur Bestimmung bestimmter Hormone, um die Überempfindlichkeit des Patienten gegenüber Medikamenten und Hormonen wie Penicillin und Insulin zu erkennen.
Die Reaktion der passiven Hämagglutination (RPHA).
Der passive Hämagglutinationstest ist eine sensitive Methode der serologischen Diagnostik und wird sowohl zur Früh- und Retrospektivdiagnostik als auch zur Bestimmung des immunologischen Zustands geimpfter Personen eingesetzt. Bei Patienten mit Tularämie werden Antikörper meist am Ende der 1. oder 2. Krankheitswoche nachgewiesen, nach 1-1,5 Monaten erreichen die TPHA-Titer ihre Maximalwerte (1:100.000-1:20.000, seltener höher), danach sinken sie auf das Niveau 1:100-1:200 und bleiben lange bestehen.
Auch bei den Geimpften werden ständig Antikörper nachgewiesen, jedoch in niedrigeren Titern, nicht über 1:2000-1:5000 1-1,5 Monate nach der Impfung bleiben sie mehrere Jahre auf einem niedrigen Niveau von 1:20-1:80.
Das Tularämie-Erythrozyten-Diagnostikum (antigen) dient als Antigen für die Einstellung von RPHA.
Das Medikament sind formalinisierte Widder-Erythrozyten, die mit Tularämie-Antigen sensibilisiert sind und in flüssiger und trockener Form erhältlich sind. Flüssigpräparat - eine 10% ige Suspension von Erythrozyten in einer Formalinlösung mit 10% Konzentration. Trockenes lyophilisiertes Präparat - vakuumgetrocknete 10%ige Suspension von Erythrozyten ohne Konservierungsmittel. Vor dem Gebrauch wird es gemäß den Anweisungen auf dem Etikett verdünnt. Beim Ansetzen der Reaktion in Polystyrolplatten werden beide Präparationen in einer Konzentration von 2,5 % und beim Ansetzen der Reaktion in Mikrovolumina in einer Konzentration von 0,5 % verwendet.
RPGA-Einstellungstechnik.
Die Testseren werden mit Kochsalzlösung 1:5 (1:10) verdünnt und 30 Minuten auf 56 Grad C erhitzt.
Hämagglutinationsreaktion (RHA) und
Danach werden die Seren zur Entfernung von heterogenen Antikörpern gegen Widder-Erythrozyten mit einer 50%igen Suspension formalisierter Widder-Erythrozyten behandelt. Dazu werden Erythrozyten in einer Menge von 2 Tropfen (0,05 ml) pro 1 ml Serum zugegeben und durch Schütteln gut vermischt.
Das Serum wird bis zur vollständigen Sedimentation der Erythrozyten belassen oder nach einer Stunde bei Raumtemperatur zentrifugiert, wonach es für die Forschung bereit ist.
Die Verdünnungsflüssigkeit wird in einem Volumen von 0,5 ml in mehrere Vertiefungen einer Polystyrolplatte gegossen.
Bei einer Voruntersuchung von Seren ist es ratsam, diese zu testen, indem die Reaktion in einer kurzen Reihe der Platte (6 Löcher) aufgestellt wird. Beim Nachweis von Antikörpern in einer kurzen Serie von Seren werden die Seren in einer langen Serie von Verdünnungen (12 Vertiefungen) erneut untersucht.
Nach dem Verschütten der Verdünnungsflüssigkeit werden 0,5 ml der Testseren in einer Verdünnung von 1:5 in die erste Vertiefung jeder Reihe (kurz oder lang) gegeben. Dann wird das Serum in den gleichen Volumina mit zweifachen Verdünnungen titriert. So werden Serumverdünnungen in einer kurzen Reihe von 1:10 bis 1:320 und in einer langen Reihe von 1:10 bis 1:20480 erhalten. Nach Titration der Seren wird ein Tropfen (0,05 ml) einer 2,5 %igen Arbeitssuspension sensibilisierter Erythrozyten in jede Vertiefung gegeben.
Der Inhalt der Platten wird gründlich geschüttelt, bis eine homogene Suspension erhalten wird. Die Platten werden bei Raumtemperatur auf einer stationären Oberfläche des Tisches belassen. Die vorläufige Registrierung der Reaktion erfolgt nach 2-3 Stunden, die endgültige Bestimmung des Titers erfolgt nach vollständiger Sedimentation der Erythrozyten in den Vertiefungen. Die folgenden Kontrollen werden für die Reaktion bereitgestellt: 1) Testserum in einer Verdünnung von 1:10 in einem Volumen von 0,5 ml + 1 Tropfen einer 2,5%igen Suspension nicht sensibilisierter Erythrozyten; 2) eine Verdünnungsflüssigkeit in einem Volumen von 0,5 ml + 1 Tropfen einer 2,5%igen Suspension nicht sensibilisierter Erythrozyten; 3) Verdünnungsflüssigkeit in einem Volumen von 0,5 ml + 1 Tropfen einer 2,5% igen Suspension sensibilisierter Erythrozyten.
Alle Kontrollen sollten eine eindeutig negative Reaktion ergeben.
Abrechnung und Auswertung von RPGA. Die Reaktion wird nach folgendem Schema ausgewertet:
1) eine stark positive Reaktion (++++) - Erythrozyten fallen in einer gleichmäßigen Schicht in Form eines "Regenschirms" auf den Boden der Vertiefung, der häufig überbackene Kanten aufweist;
2) positive Reaktion (+++) - Erythrozyten bedecken mindestens 2/3 des Lochbodens;
3) schwach positive Reaktion (++) - das Agglutinat ist klein und befindet sich genau in der Mitte des Lochs;
4) zweifelhafte Reaktion (+) - es gibt getrennte Agglutinatkörner um das Erythrozytensediment genau in der Mitte des Lochs;
5) negativ (-) - am Boden des Lochs setzen sich Erythrozyten in Form eines "Knopfes" oder eines kleinen Rings mit glatten, scharf definierten Kanten ab.
Der Serumtiter wird entsprechend der letzten Serumverdünnung berücksichtigt, die eine sehr deutliche Reaktion ergab (mindestens drei Pluspunkte).
Eine Verdünnung von 1:100 und darüber wird als diagnostischer Titer betrachtet, jedoch muss, wie im Fall von RA, sein Anstieg überwacht werden.
TPHA bei Tularämie ist ziemlich spezifisch und weist einige Kreuzreaktionen nur mit Brucellose-Seren nach. Eine Differenzialdiagnose ist durch die Höhe der Titer in TPHA möglich, die bei einem homologen Antigen viel höher sind.
Technik zur Einstellung von RPHA in Mikrovolumina.
RPHA kann in Mikrovolumina unter Verwendung eines Mikrotiters vom Takachi-Typ (oder Rundboden-Mikrotiterplatten mit Mikropipetten) durchgeführt werden, wodurch das Material in Volumina von 25 &mgr;l und 50 &mgr;l titriert werden kann. Die Technik des Reaktionsaufbaus, die Abfolge aller Arbeitsschritte ist die gleiche wie bei der Untersuchung in Polystyrolplatten. Es sollte jedoch beachtet werden, dass die Empfindlichkeit der Mikromethode normalerweise pro Verdünnung (d.h.
2 mal) niedriger als die Makromethode.
Um die Reaktion in einem Mikrotiter unter Verwendung einer Pipette-Tropfer einzustellen, wird Verdünnungsflüssigkeit in einem Volumen von 50 &mgr;l in jede Vertiefung eingeführt. Anschließend wird mit Titratoren mit 50 µl Kopf das Testserum durch Eintauchen des Kopfes entnommen.
Sicherstellen, dass die Flüssigkeit den Titrierkopf gefüllt hat. Der Titrator mit Serum wird in die erste Vertiefung überführt und in vertikaler Position gehalten und mehrere Drehbewegungen in beide Richtungen ausgeführt. Dann wird der Titrator in die nächste Vertiefung überführt und die Manipulation wiederholt. Es kann gleichzeitig in mehreren Reihen titriert werden. Nach Titration der gesamten Reihe wird der Titrator mit destilliertem Wasser (im Wechsel von 2 Portionen) durch Rotationsbewegungen gewaschen, Wasser mit einem Tupfer vom Kopf entfernt und auf einer Brennerflamme verbrannt.
Nach der Titration werden 25 μl Erythrozyten-Diagnostikum in die Vertiefungen gegeben.
Die Konzentration des Diagnostikums für RPHA in Mikrovolumina sollte 0,5 % betragen (d. h. eine 2,5 %ige Erythrozytensuspension wird zusätzlich 5-fach verdünnt). Nach Zugabe der Erythrozyten sollten die Platten leicht geschüttelt werden, bis eine homogene Suspension entsteht. Ergebnisse können bereits nach 1-1,5 Stunden aufgezeichnet werden, was ein wesentlicher Vorteil von RPHA in einem Mikrotiter ist.
Außerdem benötigt dieses Verfahren eine kleine Menge aller Bestandteile der Reaktion und der Testseren.
Die Reaktion wird wie folgt erklärt:
1) "+" - vollständige Hämagglutination, bei der Erythrozyten in einer gleichmäßigen Schicht in Form eines "Regenschirms" auf den Boden der Vertiefung fallen und mindestens 2/3 des Bodens einnehmen;
2) "+ -" - partielle Hämagglutination, bei der Erythrozyten in Form eines losen Rings kleiner Größe auf den Boden fallen;
3) "-" - das Fehlen einer Hämagglutination, wenn die Erythrozyten in Form eines kleinen Knopfes oder Rings mit glatter Kante auf den Boden fallen.
Die Spezifität eines bei TPHA erhaltenen positiven Ergebnisses kann mit einer Dreikomponentenreaktion getestet werden - der Reaktion der Hemmung der passiven Hämagglutination (RPHA).
RTPGA-Einstellungstechnik.
Diese Reaktion soll die Spezifität eines positiven RPHA-Ergebnisses bestätigen, wenn Zweifel bestehen oder es von besonderem epidemiologischem Interesse ist. Der Reaktionsmechanismus besteht in der spezifischen Hemmung der Hämagglutination, wenn dem Testserum eine Suspension abgetöteter Tularämie-Bakterien zugesetzt wird. Bei der Reaktion wirken drei Komponenten zusammen: Das Testserum, das spezifische Tularämie-Antigen und das antigene Erythrozyten-Diagnostikum RTPGA werden üblicherweise in einer Reihe von 7-8 Vertiefungen platziert.
Es empfiehlt sich parallel zum RTPGA ein zweites RPHA zu installieren. 0,25 ml Verdünnungsflüssigkeit werden in zwei Reihen von Vertiefungen gegossen, dann wird das Testserum in einem Volumen von 0,25 ml in die ersten Vertiefungen beider Reihen gegeben und titriert Es werden zwei identische Reihen von Serumverdünnungen erhalten. Geben Sie 0,25 ml Verdünnungsflüssigkeit in alle Vertiefungen der zweiten Reihe und 0,25 ml Suspension von Tularämiebakterien in die Vertiefungen der ersten Reihe.
Tularemia Diagnosticum wird verwendet (enthält 25 Milliarden Tularämie-Bakterien pro 1 ml), zuvor 50-fach verdünnt.
Eine solche Suspension enthält 500 Millionen Bakterien in 1 ml oder 125 Millionen in einem Volumen von 0,25 ml. Nach Zugabe des Antigens wird die Platte 1 Stunde bei Raumtemperatur belassen, danach wird ein Tropfen (0,05 ml) Erythrozyten-Diagnostikum in alle Vertiefungen beider Reihen gegeben, die Platte wird geschüttelt und auf einer ebenen Fläche des Tisches belassen.
Die Abrechnung erfolgt in 2-3 Stunden.
Abrechnung und Auswertung von RTPGA. Wenn das Testserum spezifische Tularämie-Antikörper enthält, werden diese durch das zugesetzte Antigen neutralisiert und es findet keine Hämagglutination in der ersten Vertiefungsreihe statt, oder bei einem hohen Serumtiter wird eine Hämagglutination in weniger (2-4) Vertiefungen als in beobachtet die Reihe mit TPHA. In diesem Fall wird die Spezifität der Ergebnisse bestätigt.
Wenn Hämagglutination in beiden Reihen festgestellt wird, d.h. die Ergebnisse von RTHA und RPHA stimmen überein, dies weist auf das Fehlen von Tularämie-Antikörpern im Testserum hin. In diesem Fall gilt das primäre Ergebnis der RPHA als unspezifisch.
Technik zum Einstellen von RTPGA in Mikrovolumina. RTHA sowie RPHA können in Mikrovolumina unter Verwendung eines Mikrotiters vom Takachi-Typ durchgeführt werden.
Dazu werden 0,25 μl Verdünnungsflüssigkeit in die Vertiefungen der Mikrotiterplatten in zwei Reihen zu je 7-8 Vertiefungen gegeben. Dann werden mit Hilfe eines Titrators 0,25 µl des Testserums in beide Reihen eingeritzt und titriert. Danach werden 25 &mgr;l Tularämie-Antigen (deren Konzentration 500 Millionen Tularämie-Bakterien in 1 ml beträgt) in jede Vertiefung in der ersten Reihe und 25 &mgr;l Verdünnungsflüssigkeit in der zweiten Reihe gegeben.
Die Platten werden 1 Stunde bei Raumtemperatur belassen, wonach 25 &mgr;l antigenes Erythrozyten-Diagnostikum (0,5 % Konzentration) in alle Vertiefungen beider Reihen gegeben werden.
Die Abrechnung und Auswertung der Ergebnisse erfolgt ähnlich wie bei der Reaktion in Makrovolumina.
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Passive Hämagglutinationsreaktion) ein Verfahren zum Nachweis und zur Identifizierung von Antigenen oder Antikörpern, basierend auf dem Phänomen der in ihrer Anwesenheit auftretenden Agglutination von Erythrozyten, an deren Oberfläche zuvor die entsprechenden spezifischen oder Antigene adsorbiert wurden.
1. Kleine medizinische Enzyklopädie. - M.: Medizinische Enzyklopädie. 1991-96 2. Erste Hilfe. - M.: Große Russische Enzyklopädie. 1994 3. Enzyklopädisches Wörterbuch medizinischer Fachausdrücke. - M.: Sowjetische Enzyklopädie. - 1982-1984.
Sehen Sie in anderen Wörterbüchern, was die "Reaktion der indirekten Hämagglutination" ist:
indirekte Hämagglutinationsreaktion- RNGA-Labortest mit Erythrozytendiagnostika. [Englisch-Russisches Glossar der Grundbegriffe der Vakzinologie und Immunisierung. World Health Organization, 2009] Themen Vakzinologie, Immunisierung Synonyme RNGA EN ... ... Handbuch für technische Übersetzer
- (RNGA; synonym mit passiver Hämagglutinationsreaktion) ein Verfahren zum Nachweis und zur Identifizierung von Antigenen oder Antikörpern, basierend auf dem Phänomen der Agglutination von Erythrozyten, die in ihrer Gegenwart auftritt, auf deren Oberfläche sie zuvor adsorbiert wurden ... ... Großes medizinisches Wörterbuch
- (RPHA) siehe Reaktion der indirekten Hämagglutination ... Großes medizinisches Wörterbuch
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- (Nematodosen) Helminthiasen, die durch Nematoden der Klasse Nematoda verursacht werden. Unter anderen Helminthiasen haben N. die größte Bedeutung in der Humanpathologie, die meisten von ihnen sind Geohelminthiasen (siehe Helminthiasen); die Entwicklung ihrer Eier oder Larven ... ... Medizinische Enzyklopädie
infektiöse Nebenhodenentzündung- Reis. 1. Eine Zunahme des linken Hodens bei einem Widder mit infektiöser Nebenhodenentzündung. Reis. 1. Eine Zunahme des linken Hodens bei einem Widder mit infektiöser Nebenhodenentzündung. Epididymitis infektiöses Schaf (Epididymitis infectiosa arietum), chronisch infektiös ... ... Enzyklopädisches Wörterbuch der Veterinärmedizin
Siehe Indirekte Hämagglutinationsreaktion... Großes medizinisches Wörterbuch
Agglutinationsreaktion- Dies ist eine Immunreaktion der Wechselwirkung eines Antigens mit Antikörpern in Gegenwart von Elektrolyten, und das Antigen befindet sich in einem korpuskulären Zustand (Erythrozyten, Bakterien, Latexpartikel mit adsorbierten Antigenen). Bei der Agglutination werden korpuskuläre Antigene durch Antikörper miteinander verklebt, was sich durch die Bildung eines flockigen Niederschlags äußert. Die Bildung von Flocken erfolgt aufgrund der Tatsache, dass Antikörper zwei aktive Zentren haben und Antigene polyvalent sind, d.h. haben mehrere antigene Determinanten. Die RA dient der Identifizierung des aus dem Material des Patienten isolierten Erregers sowie dem Nachweis von Antikörpern gegen den Erreger im Blutserum des Patienten (z. B. Wright- und Huddleson-Reaktion bei Brucellose, Vidal-Reaktion bei Typhus und Paratyphus). ).
Der einfachste Weg, RA einzurichten, ist eine Reaktion auf Glas, dies ist eine ungefähre RA, die verwendet wird, um den vom Patienten isolierten Erreger zu bestimmen. Beim Aufsetzen der Reaktion auf einen Glasobjektträger wird ein diagnostisches Agglutinationsserum aufgetragen (in einer Verdünnung von 1:10 oder 1:20), dann wird eine Kultur des Patienten eingeführt. Die Reaktion ist positiv, wenn im Tropfen ein flockiger Niederschlag auftritt. Eine Kontrolle wird in der Nähe platziert: Anstelle von Serum wird ein Tropfen Kochsalzlösung aufgetragen. Wenn das diagnostische agglutinierende Serum nicht adsorbiert ist 1, dann wird es verdünnt (auf den Titer – die Verdünnung, bis zu der eine Agglutination erfolgen sollte), d. h. Setzen Sie expandiertes RA in Reagenzgläser mit zunehmenden Verdünnungen von agglutinierendem Serum, zu denen 2-3 Tropfen Suspension des aus dem Patienten isolierten Erregers hinzugefügt werden. Die Agglutination wird durch die Sedimentmenge und den Klärgrad der Flüssigkeit in den Reagenzgläsern berücksichtigt. Die Reaktion gilt als positiv, wenn eine Agglutination in einer Verdünnung festgestellt wird, die dem Titer des diagnostischen Serums nahe kommt. Die Reaktion wird von Kontrollen begleitet: Das mit isotonischer Natriumchloridlösung verdünnte Serum sollte transparent sein, die Suspension von Mikroben in derselben Lösung sollte gleichmäßig trübe sein, ohne Sediment.
Zur Bestimmung der Antikörper gegen den Erreger im Blutserum des Patienten wird eine expandierte RA verwendet. Beim Einbringen in Reagenzgläser wird das Blutserum des Patienten verdünnt und eine gleiche Menge Diagnosticum-Suspension (Suspension abgetöteter Keime) in die Reagenzgläser gegeben. Nach der Inkubation wird die höchste Serumverdünnung bestimmt, bei der eine Agglutination aufgetreten ist, d. h. es bildete sich ein Niederschlag (Serumtiter). Die Agglutinationsreaktion mit O-diagnosticum (durch Erhitzen abgetötete Bakterien, die ein thermostabiles O-Antigen behalten) erfolgt in diesem Fall in Form einer feinkörnigen Agglutination. Die Agglutinationsreaktion mit H-diagnosticum (durch Formalin abgetötete Bakterien, die das hitzelabile flagellare H-Antigen zurückbehalten) ist grobkörnig und verläuft schneller.
Die Reaktion der indirekten (passiven) Hämagglutination(RNGA oder RPGA) ist eine Art von RA. Diese Methode ist hochempfindlich. Mit Hilfe von RNGA können zwei Aufgaben gelöst werden: Bestimmung der Antikörper im Blutserum des Patienten, dem ein antigenes Erythrozyten-Diagnostikum zugesetzt wird, also Erythrozyten, an denen bekannte Antigene adsorbiert sind; das Vorhandensein von Antigenen im Testmaterial bestimmen. In diesem Fall wird die Reaktion manchmal als umgekehrte indirekte Hämagglutinationsreaktion (RONGA) bezeichnet. Beim Staging wird dem Untersuchungsmaterial ein Antikörper-Erythrozyten-Diagnostikum (Erythrozyten mit an ihrer Oberfläche adsorbierten Antikörpern) zugesetzt. Erythrozyten fungieren bei dieser Reaktion als Überträger und sind passiv an der Bildung von Immunaggregaten beteiligt. Bei einer positiven Reaktion bedecken passiv geklebte Erythrozyten den Boden der Vertiefung mit einer gleichmäßigen Schicht mit gezackten Rändern („Regenschirm“); In Abwesenheit einer Agglutination sammeln sich Erythrozyten in der zentralen Vertiefung des Lochs an und bilden einen kompakten "Knopf" mit scharf definierten Kanten.
Koagulationsreaktion verwendet, um pathogene Zellen (Antigene) unter Verwendung von adsorbierten Antikörpern nachzuweisen Staphylococcus aureus, Protein A enthält. Protein A hat eine Affinität für das Fc-Fragment von Immunglobulinen. Aus diesem Grund binden Antikörper indirekt über das Fc-Fragment an Staphylokokken, und Fab-Fragmente sind nach außen orientiert und können mit den entsprechenden aus Patienten isolierten Mikroben interagieren. Dabei bilden sich Flocken.
Hämagglutinations-Hemmreaktion (HITA) wird zur Diagnose von Virusinfektionen und nur von hämagglutinierenden Viren verursachten Infektionen verwendet. Diese Viren enthalten auf ihrer Oberfläche ein Protein - Hämagglutinin, das bei Zugabe zu Erythrozytenviren für die Hämagglutinationsreaktion (RHA) verantwortlich ist. RTGA besteht darin, virale Antigene mit Antikörpern zu blockieren, wodurch die Viren ihre Fähigkeit verlieren, rote Blutkörperchen zu agglutinieren.
Coombs-Reaktion - RA zum Nachweis unvollständiger Antikörper. Bei einigen Infektionskrankheiten wie Brucellose zirkulieren im Blutserum des Patienten unvollständige Antikörper gegen den Erreger. Unvollständige Antikörper werden als blockierend bezeichnet, weil sie eine Antigenbindungsstelle haben und nicht zwei, wie vollständige Antikörper. Daher binden bei Zugabe eines antigenen Diagnostikums unvollständige Antikörper an Antigene, verkleben diese aber nicht. Um die Reaktion zu manifestieren, wird Antiglobulin-Serum (Antikörper gegen menschliche Immunglobuline) hinzugefügt, was zu einer Agglutination von Immunkomplexen (antigenes Diagnostikum + unvollständige Antikörper) führt, die in der ersten Stufe der Reaktion gebildet werden.
Die indirekte Coombs-Reaktion wird bei Patienten mit intravaskulärer Hämolyse verwendet. Bei einigen dieser Patienten werden unvollständige monovalente Anti-Rhesus-Antikörper gefunden. Sie interagieren spezifisch mit Rh-positiven Erythrozyten, verursachen aber nicht deren Agglutination. Daher wird dem System aus Anti-Rh-Antikörpern + Rh-positiven Erythrozyten Antiglobulin-Serum zugesetzt, was eine Agglutination von Erythrozyten verursacht. Unter Verwendung der Coombs-Reaktion werden pathologische Zustände im Zusammenhang mit der intravaskulären Lyse von Erythrozyten immunologischen Ursprungs diagnostiziert, beispielsweise eine hämolytische Erkrankung des Neugeborenen aufgrund eines Rhesuskonflikts.
RA zur Blutgruppenbestimmung basiert auf der Agglutination der Erythrozyten von den Abwehrstoffen des Immunserums zu den Antigenen der Blutgruppen A (II), B (III). Die Kontrolle ist Serum, das keine Antikörper enthält, d. h. Serum. Serum AB (IV) Blutgruppen und Antigene von Erythrozyten der Gruppen A (P) und B (III). Erythrozyten der Gruppe 0(I) werden als Negativkontrolle verwendet, da sie keine Antigene aufweisen.
Zur Bestimmung des Rh-Faktors werden Anti-Rh-Seren verwendet (mindestens zwei verschiedene Serien). In Gegenwart des Rh-Antigens auf der Membran der untersuchten Erythrozyten kommt es zur Agglutination dieser Zellen.
Hämadsorptionsreaktion(RGAD). Hämadsorption ist die Verbindung von Erythrozyten mit der Oberfläche virusbefallener Zellen, die auf der Beziehung der auf der Oberfläche der befallenen Zelle befindlichen Virusrezeptoren zu Erythrozytenrezeptoren beruht, was zu deren gegenseitiger Adhäsion ähnlich der Hämagglutinationsreaktion führt. Der Vorteil dieser Reaktion besteht darin, dass sie bereits vor dem Auftreten deutlicher zytopathischer Veränderungen in infizierten Zellen positiv wird.
Es gibt Unterschiede in der Art der Adsorption (diffus, fokal), der Art der sorbierten Erythrozyten (Mensch, Affe, Meerschweinchen usw.), der Temperatur, bei der die Reaktion abläuft (37 ° C, 0 ° C), dem Vorhandensein der Elution (ja, nein) . G. kann durch vorherige Inkubation der virusinfizierten Tory-Zellen mit für das Virus cospezifischem Antiserum verlangsamt werden. Die Hemmreaktion von G. dient zur Identifizierung von Viren.