Allgemeines Schema der bakteriologischen Diagnostik. Stadien der bakteriologischen Forschungsmethode
20. Merkmale der bakteriologischen Forschungsmethode
Kulturelle (bakteriologische) Forschungsmethode - eine Reihe von Methoden zur Isolierung und Identifizierung von Reinkulturen von Mikroorganismen (Bakterien) durch Kultivierung auf Nährmedien.
Eine Reinkultur ist eine Ansammlung von Mikroorganismen derselben Art. Meistens wird eine Reinkultur erhalten, indem eine isolierte Kolonie (die Nachkommen einer einzelnen mikrobiellen Zelle) ausgewählt und kultiviert wird.
Verfahrensschritte:
1. Materialsammlung für Forschungszwecke.
2. Isolierung der Reinkultur und ihre Identifizierung.
3. Fazit.
Materialsammlung für Forschungszwecke. Die Art des untersuchten Materials hängt vom Zweck der Studie ab (Diagnose - vom Patienten; epidemiologische Analyse - von der Umwelt, der Nahrung, dem Patienten und (oder) dem Bakterienträger).
Isolierung der Reinkultur. Beinhaltet 3 oder 4 Stufen:
1. Aussaat des Materials (nach Vormikroskopie) auf einen Becher mit dichtem Nährmedium (vorzugsweise differenzialdiagnostisch oder selektiv), um isolierte Kolonien zu erhalten. Es wird am häufigsten durch die Methode der mechanischen Trennung hergestellt. In einigen Fällen (z. B. Blut) wird das Material in einem flüssigen Anreicherungsmedium vorgeimpft, gefolgt von einer Subkultur auf einer Platte mit Agarmedium. Manchmal wird vor der Inokulation eine selektive Behandlung des Materials durchgeführt (unter Berücksichtigung der Eigenschaften des isolierten Mikroorganismus; z. B. Behandlung mit einer Säure oder Lauge, um resistente Bakterien zu isolieren). Kultiviert bei einer Temperatur von 37°C für 18-24 Stunden. Die Kultivierungszeit für verschiedene Bakterienarten kann variieren.
2(3): a) Untersuchung von Kolonien auf einer Agarplatte (kulturelle Merkmale), Auswahl der typischsten; b) Herstellung von Ausstrichen dieser Kolonien mit Färbung (nach Gram oder anderen Methoden); a) Aussortieren des Rests der untersuchten Kolonie auf dem Akkumulationsmedium und Züchten in einem Thermostat bei optimaler Temperatur.
3(4). Untersuchung der Reinheit der auf dem Akkumulationsmedium erhaltenen Kultur. Mit diesem
Der Zweck ist, einen Abstrich vorzubereiten, zu färben (normalerweise nach Gram), mikroskopisch zu untersuchen
morphologische und farbliche Homogenität (in verschiedenen Sichtfeldern).
4(5). Reine Kulturidentifikation.
Fazit. Entsprechend der Gesamtheit der Merkmale im Vergleich zu den Eigenschaften von (typischen) Bezugsstämmen wird die Art des aus dem Material isolierten Mikroorganismus angegeben.
Methodenbewertung:
Vorteile: relativ hohe Empfindlichkeit und Genauigkeit, die Fähigkeit, die Anzahl der Mikroben im Testmaterial zu bestimmen, sowie die Empfindlichkeit gegenüber Antibiotika; Einschränkungen: relativen Dauer ist das Verfahren teuer.
21. Nährmedien für Aerobier und Anaerobier. Anforderungen an Nährmedien, Einstufung.
Anforderungen:
Medien müssen nahrhaft sein
muss einen bestimmten pH-Wert haben
muss isotonisch sein, d.h. der osmotische Druck im Medium muss derselbe sein wie in der Zelle.
sollte feucht und nicht zu flüssig sein
muss ein bestimmtes Redoxpotential haben
muss steril sein
müssen vereinheitlicht werden, d.h. enthalten konstante Mengen einzelner Inhaltsstoffe.
Nährmedien können unterteilt werden:
A) Herkunft
1) natürlich - natürliche Lebensmittel (Fleisch, Milch, Kartoffeln);
2) künstlich - speziell für das Wachstum von Mikroben zubereitet: - Medien aus natürlichen Produkten (Fleischwasser, Fleisch-Pepton-Brühe (MBB), Fleisch-Pepton-Agar (MPA), - mit nicht konstanter Zusammensetzung; - synthetische Nährmedien - Lösungen von streng definierte Mengen an Salzen, Aminosäuren, stickstoffhaltigen Basen, Vitaminen in destilliertem Wasser - haben eine konstante Zusammensetzung, werden zur Anzucht von Mikroorganismen und Zellkulturen bei der Herstellung von Impfstoffen, Immunseren und Antibiotika verwendet;
B) Nach Vereinbarung:
1) Allzweck (MPB, MPA) - die meisten Mikroben wachsen darauf;
2) elektiv - fördern selektiv das Wachstum einer Art von Mikroben aus einer Mischung (z. B. Dotter-Salz-Agar für Staphylokokken);
3) Differenzialdiagnostik – ermöglicht die Unterscheidung einer Art von Mikroben durch das Erscheinungsbild der Umgebung von anderen (z. B. Endo, Levin-Medien für die Darmmikrobengruppe).
Außerdem je nach Verwendungszwecke Im Schema zur Isolierung von Reinkulturen können folgende Medien nach Einsatzzweck unterschieden werden:
1) Anreicherung - Hemmung des Wachstums von Mikroben, die mit dem Krankheitserreger assoziiert sind;
2) um isolierte Kolonien zu erhalten;
3) Akkumulation von Reinkultur;
B) Konsistenz:
1) Flüssigkeit;
2) halbflüssig (unter Zusatz von Agar-Agar in einer Konzentration von 0,5-0,7%);
3) dicht - über 1%.
Die Essenz der bakterioskopischen Methode: Nachweis von Mikroben im Testmaterial; die Untersuchung ihrer morphologischen und farblichen Eigenschaften, die Art des Ortes im bakteriologischen Abstrich im Sichtfeld.
Ausführungstechnik. Das Material des Patienten wird visuell untersucht, ein Teil wird ausgewählt, in dem der Erreger der Krankheit (Schleimklumpen, eitrige Pfropfen) mit größter Wahrscheinlichkeit nachgewiesen werden kann. Es wird auf einen Glasobjektträger aufgetragen (manchmal wird das Material in Kochsalzlösung voremulgiert, seltener zentrifugiert). Der Tropfen wird über das Glas verteilt, getrocknet und fixiert. Danach wird der Ausstrich gefärbt und das Präparat unter dem Mikroskop betrachtet. Der Ausstrich ist normalerweise Gram-gefärbt. Manchmal wird als schonendste eine der einfachen Färbemethoden verwendet, dann wird das Präparat mit einem Farbstoff gefärbt (z. B. bei der Diagnose einer Meningokokkeninfektion, Cholera).
Bei Bedarf werden spezielle, ausgefeilte Färbemethoden eingesetzt, wie die Burri-Gins-Methode zum Nachweis von Kapselorganismen oder die Ziehl-Neelsen-Methode zum Nachweis von säurefesten Bakterien. In einigen Fällen (insbesondere bei der Untersuchung der motorischen Aktivität von Mikroorganismen) werden Präparate mit „hängenden Tropfen“ und „zerkleinerten Tropfen“ hergestellt und ungefärbte Bakterien mikroskopiert.
Vorteile der bakterioskopischen Methode: einfache Ausführung, schnelle Ergebnisse, technische und wirtschaftliche Zugänglichkeit.
Nachteile der Methode: Um die Art von Mikroorganismen zu bestimmen, reicht es oft nicht aus, ihre morphologischen Eigenschaften zu bestimmen, da sie bei Vertretern verwandter Arten identisch sind. Zudem verändern sich Bakterien mit charakteristischer Morphologie, insbesondere unter Einwirkung von Antibiotika, häufig und werden unkenntlich; Schließlich kann die Konzentration von Krankheitserregern im Untersuchungsmaterial sehr gering sein und dann schwer nachweisbar sein.
In Anbetracht dessen wird die bakterioskopische Methode selten als einziger und endgültiger Weg zur Feststellung der Ätiologie der Krankheit verwendet. Häufiger wird es als Hinweis verwendet, vorläufig und bei der Diagnose einiger Infektionskrankheiten wird es überhaupt nicht bereitgestellt.
Wie versteht man Orientierung und Vorlauf? Dies gilt für den Kliniker und den Bakteriologen. Der Kliniker, der eine vorläufige Antwort (positiv oder negativ) erhält, verwendet die erhaltenen Informationen mehr oder weniger in seinen weiteren Studien, bis das endgültige Ergebnis der bakteriologischen Diagnosemethode vorliegt. Nachdem der Bakteriologe indikative Informationen über den vermuteten Erreger, seine Konzentration im verwendeten Material und das Vorhandensein einer begleitenden Mikroflora erhalten hat, bestimmt er die Methoden zur Verarbeitung des Materials und zur Isolierung der Reinkultur des Erregers und wählt Nährmedien für die anschließende Kultivierung aus.
Bakteriologische Methode
Das Wesen der Methode ist die Isolierung einer Reinkultur des Mikroben-Pathogens aus pathologischem Material, eine detaillierte Untersuchung seiner morphologischen, farblichen, kulturellen, biochemischen und serologischen Eigenschaften mit dem Ziel der anschließenden Identifizierung des Pathogens. Bei der Umsetzung der bakteriologischen Forschungsmethode werden 4 Stufen unterschieden.
A. Unter Berücksichtigung der bei der bakterioskopischen Untersuchung gewonnenen Daten werden die wirksamsten Nährmedien ausgewählt, auf denen mit größter Wahrscheinlichkeit das Wachstum einer Kultur angeblicher Mikroben - Krankheitserreger - erhalten werden kann.
B. Das Untersuchungsmaterial wird auf eine Reihe von Nährmedien ausgesät: flüssig und fest, universell, elektiv-selektiv, differenzialdiagnostisch. Gleichzeitig wird die Aussaat auf Petrischalen mit dichten Nährmedien mit einer bakteriologischen Schleife mit einem Schlag durchgeführt, um die Möglichkeit zu gewährleisten, das Wachstum von voneinander isolierten mikrobiellen Kolonien zu erhalten (Sie können auch die Drygalsky-Methode oder eine andere verwenden Verfahren zur Trennung von Mikroorganismenkulturen).
A. Die Kultureigenschaften von auf Nährmedien gezüchteten Mikroorganismen werden untersucht; verdächtige Kolonien werden selektiert. Es sollte betont werden, dass die Auswahl verdächtiger Kolonien die wichtigste und schwierigste Arbeitsphase ist. Sie basiert in erster Linie auf der Bestimmung der charakteristischen Merkmale von Mikrobenkolonien, jedoch erlaubt dies oft keine Unterscheidung von Mikrobenkolonien einzelner Arten und es ist notwendig, zusätzlich die Morphologie von Mikroben in Abstrichen von verdächtigen Kolonien, die Wachstumseigenschaften von Mikroorganismen weiter zu untersuchen Differenzialdiagnostische Medien etc. Die Isolierung von Reinkulturen von Bakterien und deren Untersuchung kann durchgeführt werden, indem eine vorläufige Inokulation auf flüssigen Anreicherungsmedien durchgeführt wird, aber in diesem Fall wird zusätzliche Forschungszeit aufgewendet.
B. Aus verdächtigen Kolonien wird ein bakteriologischer Abstrich hergestellt, der nach Gram und mikroskopisch gefärbt wird (die Identität der Mikroorganismen mit denen, die während der mikroskopischen Untersuchung in der 1. Stufe untersucht wurden, wird festgestellt). C. Vom Rest der verdächtigen Kolonie wird die Kultur auf abgeschrägten Fleisch-Pepton-Agar übertragen (andere Nährmedien können verwendet werden, auf denen ein gutes Wachstum der isolierten Mikroorganismen erwartet wird). Ziel ist die Ansammlung einer Reinkultur des Mikrobes – des angeblichen Erregers der Krankheit, denn. In der nächsten Phase der Studie wird viel mikrobielle Masse benötigt.
Der vorgeschlagene Erreger wird auf saccharolytische Eigenschaften (Inokulation wird auf bunten Medien, Olkenitsky-, Ressel-Medien usw.), proteolytische Aktivität (Inokulation auf Gelatine, Milch nach Tukaev, Bestimmung der Bildung von Indol und Schwefelwasserstoff während des Wachstums) untersucht Fleisch-Pepton-Brühe). Die Empfindlichkeit isolierter Kulturen gegenüber Antibiotika wird untersucht (häufiger nach der Methode der Standardpapierscheiben, seltener nach der Methode der Reihenverdünnungen). Die Serotypisierung erfolgt in der Agglutinationsreaktion auf Glas mit Gruppen- und typischen Diagnostikseren; Phagentypisierung mit diagnostischen Standardbakteriophagen. In einigen Fällen werden Pathogenitätsfaktoren in Bakterien zur Identifizierung untersucht.
Die Ergebnisse der durchgeführten Forschung werden berücksichtigt. Basierend auf einem Vergleich der in Mikroorganismen identifizierten Eigenschaften (morphologisch, färberisch, kulturell, biochemisch, serologisch usw.) werden Mikroben identifiziert. Eine endgültige Antwort wird mit den Ergebnissen einer bakteriologischen Studie gegeben, die die Art des Erregers (manchmal seinen Serotyp, Biovar, Phagentyp) und seine Empfindlichkeit gegenüber Antibiotika angibt.
Um zuverlässige Ergebnisse zu erhalten, gehen der Antwort häufig biologische, allergologische oder andere Forschungsmethoden voraus.
Vorteile des bakteriologischen Diagnoseverfahrens: hohe Zuverlässigkeit der Forschungsergebnisse; die Möglichkeit, zusätzliche Daten über die Empfindlichkeit isolierter Krankheitserreger gegenüber Antibiotika zu erhalten; die Möglichkeit, epidemiologische Studien durchzuführen.
Zu den Nachteilen der Methode kann die Dauer der Studie (mindestens 4-5 Tage) sowie die Unmöglichkeit der Verwendung in Fällen umfassen, in denen Infektionen mit Krankheitserregern (z. B. Rickettsien, Chlamydien) nicht auf künstlichen Nährmedien wachsen.
biologische Methode
In einigen Fällen wird zur Optimierung der Diagnose von Infektionskrankheiten eine biologische Methode (Bioassay) verwendet, bei der Labortiere infiziert werden. In diesem Fall kann der Forscher unterschiedliche Ziele haben:
Wiedergabe des klinischen und pathoanatomischen Krankheitsbildes (z. B. bei der Diagnose von Tetanus, Leptospirose);
Isolierung in kurzer Zeit einer Reinkultur des Erregers (bei der Diagnose einer Pneumokokkeninfektion);
Bestimmung der Virulenz und Pathogenität des Erregers (bei der Tuberkulose-Diagnostik);
Bestimmung der Art und Art der Toxine (bei der Diagnose von Botulismus)
Verschiedene Tiere werden zur Diagnose von Infektionskrankheiten verwendet. Ihre Wahl wird durch die Anfälligkeit der Art für verschiedene ätiologische Agenzien bestimmt. Beispielsweise sind Mäuse anfällig für Pneumokokkeninfektionen, Anthrax, Tetanus; meerschweinchen - zu Erregern von Tuberkulose, Brucellose, Tularämie; Kaninchen - gegen Staphylokokken, Streptokokken, Botulismus. Für die Studie werden nur gesunde Tiere eines bestimmten Alters und Körpergewichts ausgewählt.
Vor dem Einbringen des Materials werden die Tiere fixiert. Kleintiere werden vom Experimentator gehalten, für Großtiere werden spezielle Geräte verwendet. Die Injektionsstelle des infizierten Materials wird mit Alkohol oder Jod behandelt. Das infizierte Material wird subkutan, kutan, intravenös, intraperitoneal, intrazerebral usw. verabreicht, abhängig von den Charakteristika der Pathogenese der untersuchten Krankheit.
Bei Skin-Methode Infektionen schneiden die Wolle vor, ritzen die Haut auf und reiben dann das Material ein.
Subkutane Methode: Die Haut der Tiere wird in einer Falte erfasst, vorzugsweise mit einer Pinzette, die Nadel wird halb eingeführt, nach der Injektion wird ein Wattestäbchen mit Alkohol aufgetragen und die Nadel entfernt.
Intramuskuläre Methode: Das Material wird in das Muskelgewebe des oberen Teils der Hintergliedmaße injiziert.
Intraperitoneale Methode: Das Tier wird auf dem Kopf gehalten, um den Darm nicht zu verletzen. Die Injektion erfolgt im Unterbauch auf der Seite der Mittellinie. Die Bauchdecke wird mit einer ruckartigen Bewegung durchstochen, die Spritze steht im rechten Winkel.
Intravenöse Methode: Mäusen, Ratten wird Material injiziert - in die Schwanzvene oder intrakardial. Das Kaninchen wird injiziert - in die Ohrvenen, die oberflächlich angeordnet und deutlich sichtbar sind (es ist besser, die äußere Vene zu punktieren). Die Injektionsstelle wird nach der Injektion mit Watte mit Alkohol abgeklemmt, damit es nicht zu Blutungen kommt. Meerschweinchen mit intrakardialer Infektion wird mit einer Nadel auf der Höhe des „Schocks“ des Herzens in den Interkostalraum injiziert. Wenn die Nadel richtig eingesetzt ist, erscheint Blut in der Spritze.
Vorbereitung von Werkzeugen und Materialien: Spritzen, Skalpelle, Nadeln werden durch Kochen sterilisiert. Material wird in die Spritze aufgezogen (etwas mehr als nötig, um einzutreten), senkrecht nach oben gedreht, die Nadel mit steriler Watte bedeckt und Luftblasen mit einem Kolben aus der Spritze gedrückt. Diese Manipulation wird über einer Desinfektionslösung durchgeführt.
Bei der Diagnose von Infektionen, die durch die Einwirkung eines Toxins (Botulinum, Anthrax) verursacht wurden, wird das Material, das vermutlich den Erreger und die Toxine enthält, in Kochsalzlösung gelegt und dann durch einen mit Talk eingeriebenen Papierfilter filtriert (es adsorbiert das Toxin gut). Empfindliche Tiere werden mit Filtertupfern infiziert. In einigen Fällen, wenn die Pathogenese der Krankheit auf die pathogenen Eigenschaften des Erregers selbst zurückzuführen ist, werden Tiere mit einer mikrobiellen Suspension infiziert.
Infizierte weiße Mäuse werden etikettiert und in spezielle Glasgefäße gegeben; sie sind mit einem Etikett versehen, das das Infektionsdatum und die Art des Mikroorganismus angibt, mit dem die Arbeit durchgeführt wurde. Auf die gleiche Weise werden Käfige mit infizierten Kaninchen oder Meerschweinchen gekennzeichnet. Die Tiere werden beobachtet. Im Todesfall werden sie sofort geöffnet.
Vor dem Sezieren von weißen Mäusen werden die Tiere vorläufig mit Ätherdämpfen eingeschläfert. Mäuse werden kurz in eine Desinfektionslösung getaucht und dann mit dem Bauch nach oben an den Pfoten in einer Küvette fixiert. Das Vorhandensein oder Fehlen äußerer pathologischer Veränderungen wird festgestellt. Der Hautschnitt erfolgt längs vom Schambein zum Unterkiefer und quer zu den Extremitäten. Veränderungen im Hautgewebe und der Zustand der Lymphknoten werden notiert. Von letzterem Abstriche machen. Zur Untersuchung der Brusthöhle wird das Brustbein entfernt, indem die Rippen auf beiden Seiten mit einer Schere eingeschnitten werden. Nach einer äußeren Untersuchung werden Teile des Herzens abgetrennt und in das BCH eingesetzt. Die Aussaat erfolgt direkt auf den MPA-Abstrichen - Abdrücken von Herz, Lunge.
Die Bauchhöhle wird geöffnet, während einer äußeren Untersuchung wird der Zustand der inneren Organe notiert (Größe, Farbe, Konsistenz, Vorhandensein von eitrigen Herden). Machen Sie Leber-, Milz- und Abstrichabdrücke.
Die Arbeit wird mit sterilen Instrumenten durchgeführt, nach jeder Organentnahme werden Pinzette und Schere in ein Glas Alkohol getaucht und verbrannt.
Nach der Autopsie werden die Leiche und die Küvette, in der die Autopsie durchgeführt wurde, einen Tag lang mit Desinfektionsmittel übergossen.
Die Kulturen werden für 24 Stunden (oder mehr, falls erforderlich) bei inkubiert
t 37 über C. Dann werden sie untersucht, eine Reinkultur des Erregers isoliert und seine Identifizierung mit der bakteriologischen Methode durchgeführt.
Vorteile der Methode: Zuverlässigkeit der erzielten Ergebnisse, keine Notwendigkeit für komplexe Geräte.
Mängel: Hohe Kosten, begrenzter Nutzen, Infektionsrisiko.
Ähnliche Informationen.
TOR:
1. Studienmethoden zur Isolierung reiner Bakterienkulturen
2. Beherrschen Sie die bakteriologische Methode zur Diagnose von Infektionskrankheiten.
THEORETISCHE REFERENZ
Bakteriologische Methode ist die wichtigste Methode zur Diagnose von Infektionskrankheiten. Seine Essenz ist die Bestimmung der Art des Infektionserregers, daher kann auf der Grundlage der Ergebnisse der bakteriologischen Methode eine ätiologische (endgültige) Diagnose gestellt werden. Der Hauptnachteil der Methode ist die Dauer der Studie - von 3 bis 5 Tagen und in einigen Fällen sogar noch mehr.
Der Erfolg der bakteriologischen Methode hängt maßgeblich von der Vorstufe ab, einschließlich der Probenahme des Untersuchungsmaterials und seines Transports sowie der Gestaltung einer Überweisung an ein bakteriologisches Labor. Dabei sind einige Regeln zu beachten.
1. Zaun des Untersuchungsmaterials muss vor Beginn der Antibiotikatherapie oder 8-10 Stunden nach der letzten Gabe des Antibiotikums erfolgen. Um eine Kontamination der Probe mit Mikroflora der Umgebung zu vermeiden, ist es notwendig, die strengste Asepsis einzuhalten. Verwenden Sie dazu steriles Material: a) Wattestäbchen zur Entnahme von Material aus der Wunde, aus den Schleimhäuten (Augen, Rachen, Nase); b) eine Drahtschlaufe zum Entnehmen von Material aus Vagina, Anus; c) eine Spritze zur Entnahme von Blut, Eiter; d) sterile Schalen zum direkten Sammeln von Urin, Auswurf, Kot hinein.
2. Transport Das erhaltene Material sollte so schnell wie möglich (2-3 Stunden) in speziellen Fahrrädern oder Federmäppchen produziert werden.
3. Richtung als Begleitdokument dem klinischen Muster beigefügt. Es enthält die grundlegenden Informationen, die für die Durchführung einer mikrobiologischen Studie erforderlich sind:
Nachname, Vorname, Vatersname, Alter des Patienten;
Vorgeschlagene Diagnose der Krankheit;
Vorherige antimikrobielle Therapie;
Die Art des Materials;
Datum und Uhrzeit der Materialentnahme;
Zweck der Studie;
Der Name der medizinischen Einrichtung, die Nummer der Abteilung, der Station;
Unterschrift des Arztes.
Die bakteriologische Methode wird in zwei Stufen durchgeführt (Abb. 2.1.):
1. Isolierung einer Reinkultur des Erregers (1-2 Tage);
2. Identifizierung der Reinkultur (1-3 Tage).
Im ersten Schritt wird das Untersuchungsmaterial auf einen festen oder flüssigen Nährboden ausgesät, kulturelle Eigenschaften beurteilt, verdächtige Kolonien selektiert und auf Schrägagar gescreent. Die Identifizierungsphase umfasst eine obligatorische Untersuchung der Morphologie, der biochemischen Eigenschaften und der antigenen Struktur der isolierten Reinkultur sowie zusätzliche Untersuchungen zur Bestimmung der Antibiotikaempfindlichkeit, der Phagenempfindlichkeit, der Phagentypisierung, der Pathogenität und der persistenten Eigenschaften.
VORBEREITUNGSFRAGEN:
1. Regeln für die Entnahme und den Transport des Untersuchungsmaterials zur bakteriologischen Untersuchung.
2. Regeln für die Ausstellung einer Überweisung zur bakteriologischen Untersuchung.
3. Verfahren zur Isolierung von Reinkulturen von Mikroorganismen.
4. Bakteriologische Diagnosemethode. Ziel. Stufen. diagnostischer Wert.
UNABHÄNGIGER ARBEITSPLAN:
1. Studieren Sie die Tabellen „Methoden zur Isolierung von Reinkulturen von Bakterien“ und „Isolierung und Identifizierung von Reinkulturen“.
2. Isolieren Sie eine Reinkultur aus einem Bakteriengemisch und führen Sie deren Identifizierung durch - Beherrschen Sie die bakteriologische Diagnosemethode (Arbeit 1)
4.2. BIOLOGISCHE UND MIKROBIOLOGISCHE FAKTOREN
Bakteriologische Diagnose von Typhus und Paratyphus A, B und C
Datum der Einführung: ab dem Zeitpunkt der Genehmigung
1. ENTWICKELT: FGUN St. Petersburg NIIEM ihnen. Pasteur von Rospotrebnadzor (L.A. Kaftyreva, Z.N. Matveeva, G.F. Trifonova); GOUVPO "St. Petersburg State Medical Academy benannt nach I.I. Mechnikov" der Bundesagentur für Gesundheit und soziale Entwicklung (A.G. Boytsov).
3. GENEHMIGT vom Leiter des Föderalen Dienstes für die Überwachung des Schutzes der Verbraucherrechte und des menschlichen Wohlergehens, Oberster Staatsgesundheitsarzt der Russischen Föderation, G. G. Onishchenko, 29. Dezember 2007, 0100/13745-07-34
4. EINFÜHRUNG ab dem Zeitpunkt der Genehmigung.
5. ZUM ERSTEN MAL EINGEFÜHRT.
1 Einsatzgebiet
1 Einsatzgebiet
1.1. Die Leitlinien legen die Grundprinzipien und Merkmale der bakteriologischen Diagnostik von Typhus und Paratyphus A, B und C fest; enthält moderne Informationen über die biologischen Eigenschaften von Krankheitserregern, Resistenzen gegen antibakterielle Medikamente, Nährmedien für ihre Isolierung und Unterscheidungsmerkmale von Typhus- und Paratyphuserregern von anderen serologischen Varianten von Salmonellen.
2. Abkürzungsverzeichnis
ABP - antibakterielles Medikament
BCA - Wismutsulfit-Agar
MPU - medizinische und präventive Einrichtung
MIC - minimale Hemmkonzentration
P - Zwischenstufe
U - stabil
H - empfindlich
RIF - Immunfluoreszenzreaktion
CNS - zentrales Nervensystem
In Tabellen:
"+" - positive Reaktion am ersten Tag;
"-" - negative Reaktion für 4-20 Tage;
"(+)" - verzögerte positive Reaktion für 2-20 Tage;
d - verschiedene enzymatische Reaktionen.
Eine Differenzierung in enzymatische Varianten ist möglich.
3. Allgemeine Bestimmungen
3.1. Typhus und Paratyphus A, B und C sind anthroponotische Darminfektionen, die durch Salmonella Typhi, Salmonella Paratyphi A, Salmonella Paratyphi B und Salmonella Paratyphi C verursacht werden. selten - Paratyphus C.
3.2. Die Erkrankungen sind gekennzeichnet durch ulzerative Läsionen des lymphatischen Systems des Dünndarms, Bakteriämie, Fieber, zyklischen klinischen Verlauf mit schwerer Intoxikation, rötlicher Hautausschlag auf der Körperhaut, Hepato- und Splenomegalie. Verstopfung ist häufiger als Durchfall. Ulzerationen der Peyer-Plaques des Ileums führen in etwa 1 % der Fälle zu Darmblutungen und Darmperforationen mit den ungünstigsten Folgen für den Patienten.
3.3. Die Diagnose von Typhus und Paratyphus A, B und C erfolgt anhand klinischer Krankheitszeichen unter Berücksichtigung der epidemiologischen Anamnese und der Daten einer umfassenden Laboruntersuchung, die klassische bakteriologische und serologische Methoden umfasst. Bakteriologische Diagnostik ist von vorrangiger Bedeutung, weil In diesem Fall ist es möglich, die umfassendsten Informationen über die biologischen Eigenschaften des Erregers zu erhalten, einschließlich seiner Empfindlichkeit gegenüber antibakteriellen Arzneimitteln.
3.4. Der Einsatz antimikrobieller Medikamente zur ätiotropen Therapie von Typhus und Paratyphus ermöglichte es einerseits, die Sterblichkeit von 10–20 % auf weniger als 1 % zu senken, und andererseits die Labordiagnostik zu erschweren, weil häufig erfolgt die Materialentnahme für Laboruntersuchungen nach Beginn einer Antibiotikatherapie. Diese Tatsache macht es notwendig, die Frage der Auswahl des Forschungsmaterials, der Aufnahme des zu untersuchenden Materials und der Forschungstechniken sorgfältiger anzugehen.
3.5. Ein modernes Merkmal der Epidemiologie von Typhus ist ein starker Anstieg der Häufigkeit des Imports (Tragens) von Infektionen aus für diese Krankheit endemischen Gebieten, Ländern des nahen und fernen Auslands sowie der Infektion russischer Einwohner bei der Abreise in diese Länder und im Prozess der Migration innerhalb des Landes. Ein weiteres Merkmal ist das Vorhandensein eines großen Kontingents mit hohem epidemiologischem Risiko in Form von Personen ohne festen Wohnsitz, unter denen ein hohes Auftreten von Typhus verzeichnet wird.
3.6. Diese Richtlinien wurden erstellt, um die Methoden der bakteriologischen Diagnose von Typhus und Paratyphus A, B und C sowie die korrekte Interpretation der Ergebnisse einer Laboruntersuchung unter Berücksichtigung der modernen Gegebenheiten der Klinik zu vereinheitlichen, Behandlung und die epidemiologische Situation in bestimmten Gebieten.
4. Indikationen für die bakteriologische Diagnostik
Eine Indikation zur bakteriologischen Untersuchung von biologischem Material auf das Vorhandensein von Erregern von Typhus und Paratyphus A, B und C ist die Untersuchungsbedürftigkeit:
4.1) Patienten mit Verdacht auf Typhus sowie mit Fieber unbekannter Ätiologie, das 5 oder mehr Tage anhält;
4.2) Personen, die Kontakt zu Patienten mit Typhus und Paratyphus A, B, C hatten;
4.3) Angestellte bestimmter Berufe, Branchen und Organisationen bei Zulassung zur Arbeit und nach epidemiologischen Indikationen;
4.4) Personen vor der Aufnahme in Krankenhäuser und spezialisierte Sanatorien nach klinischen und epidemiologischen Indikationen;
4.5) Personen bei Anmeldung zur stationären Behandlung in Krankenhäusern (Abteilungen) mit psychoneurologischem (psychosomatischem) Profil, Pflegeheimen, Internaten für Personen mit chronischen psychischen Erkrankungen und ZNS-Läsionen und anderen Arten von geschlossenen Einrichtungen mit rund um die Uhr bleibe;
4.6) Patienten mit Typhus und Paratyphus nach dem Verschwinden der klinischen Symptome der Krankheit vor der Entlassung aus dem Krankenhaus;
4.7) Personen, die während der Apothekenbeobachtung an Typhus und Paratyphus erkrankt sind;
4.8) chronische Bakterienträger, die bei Mitarbeitern bestimmter Berufe, Branchen und Organisationen bei Wiedereinstellung in diesen Unternehmen und Einrichtungen identifiziert wurden;
4.9) Schnittmaterial bei Verdacht auf Typhus und Paratyphus.
5. Logistik des Verfahrens
5.1. Standardprüf- und Hilfsgeräte, Messgeräte für mikrobiologische Laboratorien.
5.2. Nährmedien, diagnostische Seren und chemische Reagenzien zur Kultivierung, Isolierung, Identifizierung und Bestimmung der Empfindlichkeit gegenüber antibakteriellen Arzneimitteln von Erregern von Typhus und Paratyphus A, B und C.
5.3. Für die Labordiagnostik von Typhus- und Paratyphuserkrankungen und den Nachweis von Bakterienträgern sollten Nährmedien und Reagenzien verwendet werden, die für die Verwendung auf dem Territorium der Russischen Föderation gemäß dem festgelegten Verfahren zugelassen sind.
6. Labordiagnostik von Typhus und Paratyphus
6.1. Das Prinzip der bakteriologischen Methode basiert auf dem Nachweis lebender Mikroorganismen in verschiedenen biologischen Substraten (Blut, Urin, Kot, Galle, Knochenmark, Roseola) je nach Stadium der Erkrankung. Dazu wird eine bestimmte Menge an biologischem Material auf spezielle Nährböden ausgesät, gefolgt von einer Inkubation in einem Thermostat und Identifizierung der gewachsenen Kolonien von Mikroorganismen, die für S. Typhi, S. Paratyphi A, S. Paratyphi B und S. Paratyphi charakteristisch sind C, nach kulturellen und enzymatischen Eigenschaften und antigenen Eigenschaften.
6.2. Nur eine bakteriologische Untersuchung kann eine genaue ätiologische Diagnose und Kontrolle der Freisetzung des Erregers aus dem Körper liefern. Im Hinblick auf die Differentialdiagnose von Typhus und Paratyphus ist die einzige Methode eine Laboruntersuchung von biologischem Material mit der Isolierung des Erregers und seiner Identifizierung auf der Ebene einer serologischen Variante, tk. der klinische Verlauf des infektiösen Prozesses erlaubt es nicht immer, zwischen diesen nosologischen Formen zu unterscheiden.
7. Bakteriologische Untersuchung
7.1. Die Isolierung der Erreger von Typhus und Paratyphus A, B und C erfolgt nach dem gleichen Schema der bakteriologischen Untersuchung von Biomaterialien.
7.2. Das Verfahren zur Materialsammlung für Laboruntersuchungen auf Typhus- und Paratyphuserkrankungen wird durch SP 3.1.1.2137-06 festgelegt.
7.3. Die Technik zum Sammeln und Transportieren von Biomaterialien zu mikrobiologischen Labors ist in MU 4.2.2039-05 beschrieben.
7.4. Das Material für die bakteriologische Untersuchung zum Zwecke der Diagnose von Typhus und Paratyphus sind:
Blut;
Exkremente;
Urin;
Krankheitserreger können auch isoliert werden aus:
Roseol;
Knochenmark;
Muttermilch.
Das Material für die bakteriologische Forschung zur Identifizierung von Bakterienträgern gemäß SP 3.1.1.2137-06 sind:
Exkremente;
Urin;
Galle (Zwölffingerdarminhalt).
7.5. Die Untersuchung von Schnittmaterial wird durchgeführt, um die Diagnose zu klären.
7.6. Die Sammlung von biologischem Material für Laboruntersuchungen wird vor Beginn der ätiotropen Behandlung durchgeführt: durch einen medizinischen Mitarbeiter, der eine Typhus-Paratyphus-Infektion vermutet; bei Gruppen- und Ausbruchsmorbidität - von Spezialisten der Rospotrebnadzor-Institutionen und Personal medizinischer Einrichtungen. Von stationären Patienten wird Material zur bakteriologischen Untersuchung in der Notaufnahme des Krankenhauses entnommen.
7.7. Von Personen, die mit Patienten oder Trägern (Kontaktpersonen) kommuniziert haben, wird die Sammlung von Material durch medizinisches Personal von Gesundheitseinrichtungen und anderen Organisationen und Institutionen an dem Ort durchgeführt, an dem Patienten identifiziert werden.
7.8. Biomaterial für die Laborforschung wird von einer speziellen Richtung begleitet. Die Anlieferung des Materials durch die Probanden selbst ist nicht gestattet. Ist eine rechtzeitige Anlieferung des Materials nicht möglich, werden Konservierungsmittel und Transportmittel eingesetzt (Tabelle 1).
8. Bakteriologischer Bluttest
Eine Indikation für eine Blutuntersuchung ist der Verdacht auf typhus-paratyphusartige Erkrankungen oder einen fieberhaften Zustand unbekannter Ursache (Fieber of unknown origin), der seit 5 oder mehr Tagen besteht (SP 3.1.1.2137-06).
Das Verhältnis Blut - Nährmedium sollte 1:10-1:60 betragen. Die Anzahl der unabhängig entnommenen Blutproben und der Zeitpunkt ihrer Entnahme werden vom behandelnden Arzt gemäß MU 4.2.2039-05 für Fieber unbekannter Herkunft oder gemäß MU 04-723/3 des Gesundheitsministeriums der UdSSR ( 1984) bei Verdacht auf Typhus-Paratyphus-Erkrankungen. Bei Patienten, die antibakterielle Medikamente erhalten, sollten Proben unmittelbar vor der Einführung (Empfang) der nächsten Dosis des Medikaments entnommen werden.
Bei Fieber ist es optimal, Blut vor dem Hintergrund einer Erhöhung der Körpertemperatur zu entnehmen (aber nicht auf dem Höhepunkt der Temperatur!). Die Aussaat auf Nährmedien erfolgt direkt am Patientenbett.
Bei Verdacht auf Typhus-Paratyphus-Erkrankungen kann Rapoport-Medium, 20 %ige Gallenbrühe, Fleisch-Pepton-Brühe mit Zusatz von 1 % Glucose (in 100-ml-Fläschchen) zur Blutkultur verwendet werden. Zuvor verwendete Blutkulturen in sterilem destilliertem (Leitungs-)Wasser. Es ist jedoch vorzuziehen, spezielle Blutkulturmedien zu verwenden.
Die auf dem Höhepunkt des Fiebers gesäte Blutmenge kann 10 ml betragen, zu einem späteren Zeitpunkt - bis zu 20 ml (bei Kindern - bis zu 5 ml).
Bei Fieber unbekannter Ursache, das länger als 5 Tage anhält, sollten in der Regel mehrere Blutproben untersucht werden. Die Blutentnahme aus einer Vene erfolgt gemäß MU 4.2.2039-05. Dies ist notwendig, um eine echte Bakteriämie von einer versehentlichen Blutkontamination während der Venenpunktion zu unterscheiden (die Wahrscheinlichkeit einer Probenkontamination aufgrund einer versehentlichen Punktion der Talg- oder Schweißdrüse beträgt 3 %). In diesem Fall werden zwei Medien für die Blutkultur verwendet: 1) Medium für Aerobier und fakultative Anaerobier und 2) Medium für obligate Anaerobier (z. B. "Doppel"-Medium + Thioglykol-Medium gemäß der Anordnung des Gesundheitsministeriums der UdSSR). vom 12.04.85 N 535) oder ein Universalmedium für Aerobier und Anaerobier.
Verwenden Sie vorzugsweise industriell hergestellte Medien, die für den Einsatz in Russland zugelassen sind.
Die Pflanzen werden 10 Tage lang bei 37 °C inkubiert, wobei täglich beobachtet wird. In diesem Fall werden die Fläschchen mit dem "doppelten" Medium gekippt, wodurch der dichte Teil des Mediums gewaschen wird.
Wenn am 10. Tag keine Wachstumszeichen vorhanden sind, wird eine negative Antwort erteilt.
Bei Anzeichen von Wachstum (Trübung, Rötung des Rapoport-Mediums, Auftreten sichtbarer Kolonien auf dem dichten Teil des "doppelten" Mediums) erfolgt die Aussaat parallel auf einem Polykohlenhydratmedium und einem dichten Medium in Petrischalen ( Blutagar bei Fieber unbekannter Ursache und Endomedium bei Verdacht auf Typhus-Paratyphus-Erkrankungen).
Die direkte Inokulation auf Polykohlenhydratmedien wird durchgeführt, um die Untersuchungszeit zu verkürzen, basierend auf der Annahme, dass bei der Inokulation von Blut mit hoher Wahrscheinlichkeit das Wachstum der Pathogen-Monokultur beobachtet wird. Paralleles Ausplattieren auf Endo-Medium oder Blutagar ist notwendig, um diese Annahme zu kontrollieren und eine Reinkultur durch Teilung einzelner Kolonien zu isolieren.
Wenn auf diesen Medien Monokulturwachstum beobachtet wird, können die biochemischen Eigenschaften des Polykohlenhydratmediums berücksichtigt werden. Um die Reinheit der Kultur zu kontrollieren, ist es notwendig, eine Mikroskopie eines Abstrichs von einem mit Gram gefärbten Polykohlenhydratmedium durchzuführen. In diesem Stadium ist es auch möglich, mit den entsprechenden agglutinierenden O- und H-Salmonellen-Seren eine Agglutinationsreaktion auf Glas anzusetzen und eine vorläufige Antwort zu geben.
Das Schema der bakteriologischen Untersuchung des Blutes von Patienten mit Verdacht auf Typhus und Paratyphus ist in Abb. 1 dargestellt.
Abb.1. Schema der bakteriologischen Untersuchung von Blut von Patienten mit Verdacht auf Typhus und Paratyphus
Abb.1. Schema der bakteriologischen Untersuchung von Blut von Patienten mit Verdacht auf Typhus und Paratyphus
Das Schema der bakteriologischen Untersuchung des Blutes von Patienten mit Fieber unbekannter Ursache ist in Abb. 2 dargestellt.
Abb.2. Schema der bakteriologischen Untersuchung von Blut von Patienten mit Fieber unbekannter Herkunft
Abb.2. Schema der bakteriologischen Untersuchung von Blut von Patienten mit Fieber unbekannter Herkunft
Der Ablauf der weiteren Identifizierung der Kultur anhand kulturmorphologischer, enzymatischer Eigenschaften und serologischer Merkmale wird in den entsprechenden Abschnitten weiter beschrieben.
9. Bakteriologische Untersuchung von Kot
Stuhlproben werden unmittelbar nach dem Stuhlgang aus einem desinfizierten und gründlich gewaschenen Gefäß entnommen, auf dessen Boden ein dickes sauberes Blatt Papier gelegt wurde. Das Material wird mit einem Löffelspatel gesammelt, der im Deckel eines sterilen Behälters montiert ist. In Ermangelung eines Behälters mit Spatel wird jedes sterile Instrument (steriler Holzspatel, Drahtschlaufe, Löffel usw.) zur Entnahme des Materials verwendet. Bei pathologischen Verunreinigungen müssen Bereiche ausgewählt werden, die Schleim, Eiter und Flocken enthalten, aber frei von Blut sind. Flüssige Stuhlproben werden mit einer sterilen Pasteurpipette aus Kunststoff mit geschlossenem Reservoir entnommen.
Das Volumen des entnommenen Materials muss mindestens 2 g betragen.Das optimale Material ist es, das Material im Falle eines dekorierten Stuhls in der Menge einer Walnuss zu nehmen; Bei losen Stühlen sollte die Schicht im Behälter mindestens 1,5-2,0 cm betragen.Das in einen sterilen Behälter gefüllte Material wird innerhalb von 2 Stunden an das Labor geliefert.
Kann das Material nicht innerhalb von 2 Stunden im Labor angeliefert werden, wird es in einem Konservierungsmittel (Transportsystem mit Medium) gesammelt. Das Volumen des Materials darf das Volumen des Mediums nicht überschreiten.
Der Stuhl muss im Medium sorgfältig homogenisiert werden. Proben können vor Studienbeginn tagsüber im Kühlschrank (4-6 °C) gelagert werden.
Transportmedien und Konservierungsmittel, die zur Isolierung von Erregern von Typhus und Paratyphus A, B und C sowie anderen Erregern akuter Darminfektionen verwendet werden, sind in Tabelle 1 aufgeführt.
Tabelle 1
Transportmedien und Konservierungsmittel, die am häufigsten für den Transport von Fäkalien verwendet werden
|
Umgebungsname |
Bietet Konservierung |
|
Mittwoch Carrie Blair |
alle enterischen Pathogene, einschließlich Campylobacter |
|
Mittwoch Ames |
alle Enterobakterien |
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Mittwoch Steward |
Salmonellen und Shigellen |
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Glycerin-Mischung |
alle Enterobakterien außer Yersinien; bevorzugt für Shigella |
|
Phosphatpuffermischung |
alle Enterobakterien |
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Borat-Pufferlösung |
alle Enterobakterien |
|
Kochsalzlösung |
alle Enterobakterien, einschließlich Campylobacter |
Stuhlproben, die mittels Rektalabstrich direkt aus dem Enddarm entnommen werden, dienen primär der Objektivierung der Diagnose (MU 4.2.2039-05). Das Material wird von Sanitätern entnommen. Zum Transportsystem gehört in der Regel eine spezielle Sonde zur Abstrichentnahme. Es ist wichtig zu beachten, dass das Eindringen von Transportmedien auf die Rektumschleimhaut nicht akzeptabel ist! Daher sollte der Rektalabstrich erst nach der Materialentnahme in das Transportmedium getaucht werden. Der Patient wird gebeten, sich auf die Seite zu legen, die Hüften zum Bauch gezogen und das Gesäß mit den Handflächen auseinandergezogen. Die Tupfersonde wird 4-5 cm tief in den Anus eingeführt und durch sanftes Drehen um die Achse wird Material aus den Anuskrypten entnommen. Entfernen Sie vorsichtig die Tupfersonde und tauchen Sie sie in das Transportmedium ein. Der Transport eines Tampons ohne Medium ist nicht erlaubt.
Im Labor erfolgt die Inokulation von Stuhlproben direkt auf dichten differenzialdiagnostischen Nährmedien und parallel dazu auf dem Anreicherungsmedium.
Das Schema der bakteriologischen Untersuchung von Fäkalien ist in Abb. 3 dargestellt.
Abb. 3. Schema der bakteriologischen Untersuchung von Kot
Abb. 3. Schema der bakteriologischen Untersuchung von Kot
Aus nativem Kot wird eine Suspension in einer 0,9%igen Natriumchloridlösung in einem Verhältnis von 1:5–1:10 hergestellt, die 30 Minuten stehen gelassen wird, damit sich große Partikel absetzen können. Danach wird ein Tropfen des Überstands in Schalen mit dichtem Nährmedium und 1 ml der Suspension in das Anreicherungsmedium (Material-Medium-Verhältnis sollte 1:5 sein) inokuliert.
Der in einem Konservierungsmittel (Transportmedium) an das Labor gelieferte Kot muss vor der Inokulation sorgfältig im Medium homogenisiert werden, wonach das Material direkt auf feste Medien und Anreicherungsmedium im gleichen Verhältnis wie nativer Kot inokuliert wird.
Stuhlproben, die mit einem Rektalabstrich entnommen wurden, werden ähnlich untersucht wie Stuhlproben, die mit einem Konservierungsmittel verabreicht wurden. Es sollte beachtet werden, dass ein Rektalabstrich im Vergleich zu nativem Stuhl weniger Mikroorganismen enthält, daher sollte die Inokulumdosis erhöht werden.
Der maximale Nachweis von S. Typhi, S. Paratyphi A, S. Paratyphi B und S. Paratyphi C im Stuhl wird mit Anreicherungsmedien erreicht, obwohl bei Patienten in der akuten Phase der Krankheit der Erreger oft durch direkte Inokulation isoliert wird. Die Beimpfung auf Anreicherungsmedien parallel zur Direktbeimpfung ist obligatorisch!
Alle Inokulationen werden bei 37 °C auf differenzialdiagnostischen Medien für 18-24 Stunden, auf Bismut-Sulfitagar für 24-48 Stunden inkubiert Nach 24 Stunden erfolgt die Aussaat von Anreicherungsmedien auf Festmedien (Wismut-Sulfitagar oder Endo Mittel). Für diese Pathogene charakteristische Kolonien, die auf dichten Medien gezüchtet wurden, werden auf einem Polykohlenhydrat-Medium herausgesiebt.
Es sollte beachtet werden, dass die Technik des Verteilens des Materials über die Oberfläche einer Platte mit dichtem Medium das Wachstum von isolierten Kolonien eines typischen Typs sicherstellen sollte, was verwendet werden kann, um die kulturellen Eigenschaften des Mikroorganismus visuell zu beurteilen.
Wismutsulfit-Agar (BCA) ist die bevorzugte Methode zur Isolierung von S. Typhi. Typische Kolonien von S. Typhi sind schwarz und von einem schwarzen oder braunen Rand mit metallischem Glanz umgeben. S. Typhi erzeugt jedoch oft nicht die charakteristische Schwärzung der ICA, wenn starkes Wachstum auftritt, daher sollten die Platten inokuliert werden, um das Wachstum einzelner Kolonien zu ermöglichen.
Stuhlproben können auf standardmäßigen selektiven Medien für Enterobakterien inokuliert werden, die zur Verwendung in der Russischen Föderation zugelassen sind. Wismutsulfit-Agar ist jedoch die bevorzugte Methode zur Isolierung von S. tymhi. Der Ablauf der weiteren Identifizierung von Kulturen anhand enzymatischer Eigenschaften und serologischer Merkmale wird in den entsprechenden Abschnitten weiter beschrieben.
10. Bakteriologische Untersuchung des Urins
Ab den ersten Krankheitstagen bis zur Entlassung des Patienten sowie zur Identifizierung des Bakteriumträgers wird zur Diagnostik eine Urinkultur angelegt. Da die typhus- und paratyphusartige Ausscheidung des Erregers im Urin periodisch und kurzzeitig erfolgt, müssen Urinuntersuchungen im Abstand von 5-7 Tagen wiederholt werden.
Sie sollten sich strikt an die allgemeinen Regeln für das Sammeln von Urin halten, die in MU 4.2.2039-05 festgelegt sind. Unabhängig von der Gewinnungsmethode muss der Urin innerhalb von 2 Stunden im Labor angeliefert werden, im Extremfall kann der Urin über Nacht im Kühlschrank aufbewahrt werden.
Zu beachten ist, dass je nach chemischer Zusammensetzung des Urins die darin enthaltenen Bakterien während der Lagerung sowohl absterben als auch sich vermehren können.
Eine Erhöhung der Haltbarkeit des Materials kann die Interpretation des Ergebnisses extrem erschweren.
Die direkte Inokulation von Urin (oder Sediment nach Zentrifugation) wird ohne vorherige Anreicherung gemäß der Anordnung des Gesundheitsministeriums der UdSSR N 535 auf dichten differenzialdiagnostischen Medien durchgeführt, die für Salmonellen, einschließlich Typhus- und Paratyphus-Erreger, empfohlen werden. Gleichzeitig wird nativer Urin in Anreicherungsmedien doppelter Konzentration im Verhältnis 1:1 oder Urinsediment in Medien normaler Konzentration inokuliert. Die Inokulationen werden für 18-24 Stunden in einen Thermostaten bei 37 °C gegeben, und dann wird das Anreicherungsmedium auf dichte differenzialdiagnostische Medien inokuliert. Auf festen Medien gewachsene Kolonien werden durch kulturell-enzymatische und serologische Eigenschaften identifiziert.
11. Bakteriologische Untersuchung der Galle (Zwölffingerdarminhalt)
Die Galle wird in drei sterilen Reagenzgläsern oder sterilen Einwegbehältern getrennt in den Portionen A, B, C gemäß MU 4.2.2039-05 gesammelt und an das Labor geliefert.
Führen Sie eine Studie für jede Portion (A, B, C) separat durch oder bereiten Sie eine Mischung aus drei Portionen vor. Proben werden geimpft:
auf dichten differenzialdiagnostischen Medien (ICA, Endo, EMS usw.) in einer Menge von 0,5 ml;
in einem Reagenzglas (Flasche) mit Nährbrühe im Verhältnis 1:10. Es besteht keine Notwendigkeit, Galle auf Anreicherungsmedien zu inokulieren, da Die Galle selbst ist ein guter Nährboden für Erreger von Typhus und Paratyphus.
Die beimpften Medien werden mit Gallenrückständen bei 37°C inkubiert.
Nach 18–24 Stunden werden die Inokulationen auf dichten Nährmedien untersucht (die Ergebnisse des Wachstums auf ICA werden nach 24 und 48 Stunden berücksichtigt) und verdächtige Kolonien werden erneut auf einem Polykohlenhydratmedium ausgesät.
Aus der Nährbrühe werden Aussaaten auf dichten differenzialdiagnostischen Medien hergestellt.
Aus der verbleibenden Galle werden im Falle eines negativen Ergebnisses der direkten Aussaat nach 18-24 Stunden und an den Tagen 3, 5, 7 und 10 wiederholte Aussaaten auf dichtem differenzialdiagnostischem Medium durchgeführt.
Die gewachsenen Mikroorganismen werden anhand kulturmorphologischer, enzymatischer und serologischer Eigenschaften identifiziert.
12. Bakteriologische Untersuchung von Roseola-Material
Die bakteriologische Untersuchung ("Abkratzen" mit Roseola) wird in Gegenwart von wohldefinierter Roseola durchgeführt. Das Material wird aseptisch gesammelt. Dazu wird die Hautpartie oberhalb der Roseola mit 70 %igem Äthylalkohol behandelt, dann mit einem mit steriler 0,9 %iger Kochsalzlösung angefeuchteten Wattebausch abgewischt und mit einem sterilen Tupfer getrocknet.
Forschungsmaterial (Gewebeflüssigkeit) wird durch Einritzen der Haut über der Roseola mit einem Skalpell gewonnen. 1-2 Tropfen Gallenbrühe oder isotonische Kochsalzlösung werden auf die geschädigte Haut aufgetragen, mit der hervortretenden Gewebeflüssigkeit vermischt und mit einer Pasteurpipette oder einem ähnlichen sterilen Einweggerät in einem Reagenzglas mit einem der flüssigen Anreicherungsmedien (Galle Brühe, Rapoport-Medium usw.). Im Labor wird die Inokulation bei 37 °C für 18-24 Stunden gehalten, gefolgt von einer Inokulation auf dichtem differenzialdiagnostischem Medium (Endo, EMS, ICA).
13. Bakteriologische Untersuchung des Knochenmarks
Es ist bekannt, dass im Falle einer Laborbestätigung der Typhusdiagnose die bakteriologische Untersuchung des Knochenmarks am effektivsten ist (die Inokulation des Erregers beträgt 90-95%). Selbst bei Patienten mit leichten und gelöschten Formen von Typhus, die klinisch schwer zu erkennen sind, sowie vor dem Hintergrund der Einnahme antimikrobieller Medikamente ist die Inokulation von Myelokulturen signifikant höher als bei Blutkulturen.
In der Praxis wird jedoch eine bakteriologische Untersuchung des Knochenmarks sehr selten durchgeführt, nur bei besonderen klinischen Indikationen, in Ermangelung anderer Labordaten, die die Diagnose von Typhus oder Paratyphus, tk, bestätigen. Dieses invasive Verfahren ist ziemlich traumatisch. Die Probenahme von Forschungsmaterial erfolgt nur in einem Krankenhaus unter Anwesenheit eines entsprechenden Facharztes.
Material für die bakteriologische Untersuchung (Aspirat) in einer Menge von 0,50–0,75 ml wird aseptisch durch Punktion des Brustbeins (Griff oder Körper) gewonnen und in ein Reagenzglas mit einem der Anreicherungsmedien (Gallenbrühe, Rapoport-Medium usw.) inokuliert.
Wenn das Aspirat nicht sofort nach der Punktion in das Anreicherungsmedium inokuliert werden kann, wird es in einem sterilen Röhrchen gesammelt und sofort ins Labor geschickt, wo die Inokulation in das Anreicherungsmedium erfolgt. Im Labor werden die Inokulationen bei 37 °C für 18–24 Stunden inkubiert, gefolgt von der Inokulation auf dichtem differenzialdiagnostischem Medium.
Weitere Forschungen werden durchgeführt, wie bei der bakteriologischen Untersuchung von anderem biologischen Material.
14. Nährmedien und Reagenzien
Die Liste der Nährmedien zur Isolierung und Identifizierung von Erregern von Darminfektionen, insbesondere Enterobakterien, ist umfangreich und wird ständig erweitert. Die Wahl spezifischer Umgebungen wird weitgehend von den lokalen wirtschaftlichen Bedingungen und Traditionen bestimmt. Es sollte sich jedoch an einigen Grundprinzipien orientieren.
14.1. Die Beschreibung des Kulturmediums sollte darauf hinweisen, dass es nicht nur zum Nachweis von Salmonella, sondern auch für Salmonella Typhi und S. Paratyphi A, B und C verwendet werden kann.
14.2. Dehydrierte Nährmedien namhafter Hersteller sind gegenüber direkt im Labor hergestellten Medien zu bevorzugen.
14.3. Jede Charge Nährmedium im Labor muss durch Teststämme kontrolliert werden (interne Qualitätskontrolle).
14.4. Für die Labordiagnostik von Typhus- und Paratyphuserkrankungen und den Nachweis von Bakterienträgern sollten Nährmedien und Reagenzien verwendet werden, die für die Verwendung auf dem Territorium der Russischen Föderation gemäß dem festgelegten Verfahren zugelassen sind.
15. Methoden zur Untersuchung enzymatischer Eigenschaften
Zur Untersuchung der enzymatischen Aktivität von Mikroorganismen der Familie Enterobacteriaceae, einschließlich Typhus- und Paratyphus-Erregern, wurden derzeit verschiedene diagnostische Testsysteme aus in- und ausländischer Produktion entwickelt, hergestellt und registriert (von den einfachsten klassischen Hiss-Medien in Reagenzgläsern und Platten bis hin zu automatischen Analysatoren). Wenn Testsysteme es ermöglichen, einen Mikroorganismus bis auf Gattungsebene zu identifizieren und die Merkmale der enzymatischen Aktivität von Stämmen zu identifizieren, können sie zur Identifizierung von Erregern von Typhus und Paratyphus eingesetzt werden. Die Vorgehensweise zum Arbeiten mit Testsystemen ist in der Gebrauchsanweisung beschrieben und unbedingt einzuhalten.
16. Biologische Eigenschaften von Krankheitserregern
Die Erreger von Typhus und Paratyphus A, B und C gehören zur Familie Enterobacteriaceae, Gattung Salmonella, Enterica-Spezies, Unterart I (Enterica) und haben morphologische, kulturelle und enzymatische Eigenschaften, die für diese Unterart, Art, Gattung und Familie charakteristisch sind.
Vertreter der Gattung Salmonella Spezies enterica haben historisch eine Situation entwickelt, in der Serovare nicht wie bei anderen Bakterien durch eine antigene Formel, sondern durch die Namen von Krankheiten (Mensch oder Tier), das Land, die Stadt oder die Straße, in der sie isoliert wurden, bezeichnet wurden. usw. Es ist ein Fehler, diese Artnamen zu berücksichtigen, weil sie haben keinen taxonomischen Status. Die Namen der häufigsten Salmonella-Serovare sind jedoch so bekannt, dass es fast unmöglich ist, sie durch antigene Formeln zu ersetzen. Daher wird im modernen Kaufman-White-Schema bei der Bezeichnung von Salmonella nur enterica Unterart I anstelle der Artbezeichnung der Name des Serovars verwendet, der jedoch mit einem Großbuchstaben geschrieben wird.
Somit lauten die vollständigen Namen der Erreger von Typhus und Paratyphus wie folgt:
Salmonella enterica subsp. Enterica-Serovar Typhi;
Salmonella enterica subsp. Enterica-Serovar Paratyphi A;
Salmonella enterica subsp. Enterica-Serovar Paratyphi B;
Salmonella enterica subsp. enterica Serovar Paratyphi C
In der gängigen Praxis ist es möglich, abgekürzte Versionen der Namen zu verwenden:
Salmonella ser. Typhi oder Salmonella Typhi oder S. Typhi;
Salmonella ser. Paratyphi A oder Salmonella Paratyphi A oder S. Paratyphi A;
Salmonella ser. Paratyphi B oder Salmonella Paratyphi B oder S. Paratyphi B;
Salmonella ser. Paratyphi C oder Salmonella Paratyphi C oder S. Paratyphi C
16.1. Kulturelle und morphologische Eigenschaften
Bewegliche gramnegative Stäbchen bilden keine Sporen und Kapseln, fakultative Anaerobier wachsen gut auf gewöhnlichen Nährmedien.
Auf einem einfachen Nähragar - Kolonien leicht konvex mit glattem Rand und glatter Oberfläche, feucht mit einem Glanz von mehr als 1 mm.
Auf differenzialdiagnostischen Medien (mit Laktose als Differenzierungssubstanz) - transparent, farblos oder bläulich und manchmal rosa oder Farbe der Kolonieumgebung (Endo, Ploskirev, EMS und andere ähnliche Medien).
Auf SS-Rape mittelfarbige Kolonien mit schwarzem Zentrum.
Auf Wismut-Sulfit-Medium sind isolierte Kolonien von S. Typhi, S. Paratyphi B schwarz mit einem charakteristischen metallischen Glanz, das Medium unter der Kolonie ist schwarz gefärbt. Kolonien von S. Paratyphi A sind grünlich, hell in der Farbe des Mediums, zart.
Stämme von S. Paratyphi B (der Erreger von Paratyphus B) auf Fleisch-Pepton-Agar können entlang der Peripherie der Kolonien eine erhabene Schleimwand bilden. Der Schleimschaft entwickelt sich 2-5 Tage lang, wenn die Pflanzen bei Raumtemperatur gelagert werden. Dieses Symptom ist nicht dauerhaft und diagnostisch.
16.2. Enzymatische Eigenschaften
Die Untersuchung der enzymatischen Eigenschaften wird in Bezug auf eine Reihe von Kohlenhydraten, mehrwertigen Alkoholen, Aminosäuren und anderen organischen Verbindungen durchgeführt, die bei der Identifizierung und Untersuchung von Salmonellen und anderen Enterobakterien verwendet werden. In der Regel werden im Praxislabor mit wenigen Tests die Hauptgattungen der Familie der Darmbakterien identifiziert. Charakteristische enzymatische Eigenschaften von Salmonella, einschließlich der Erreger von Typhus und Paratyphus A, B und C, sind in Tabelle 2 dargestellt.
Tabelle 2
Enzymatische Eigenschaften von Erregern von Typhus und Paratyphus A, B, C
|
Substrat |
S. Paratyphi A |
||||
|
Glukose (Gas) |
Die bakteriologische Methode zur Untersuchung des pathologischen Materials zur Isolierung und Identifizierung von Mykobakterien umfasst 3 Methoden: bakterioskopische, kulturelle und biologische / R. V. Tkzova, 1983; I. I. Rumachik, 1987, 1993; WIE. Donchenko, 1989; Yu.Ya. Kassel, 1990; A. Kh. Naimanov, 1993; L. P. Khodun, 1997/. Der Zeitraum der bakteriologischen Untersuchung sollte 3 Monate nicht überschreiten.
Bedenkt man, dass makroskopische tuberkulöse Veränderungen in den Organen und Geweben des Rindes durch den Erreger der Rindertuberkulose verursacht werden, macht es keinen Sinn, solches Material bakteriologisch zu untersuchen. Wenn solches Material zu Forschungszwecken an das Labor geliefert wird, wird eine Kommissionsinspektion durchgeführt und ein Gesetz erstellt. Das Material wird unschädlich gemacht.
Die bakterioskopische (mikroskopische) Untersuchung des Materials besteht darin, von jedem Organ (oder Teilen eines Organs mit verdächtigen Veränderungen bei Tuberkulose) und einem zur Untersuchung gelieferten Lymphknoten 2 Abdruckabstriche zu präparieren, an der Luft zu trocknen und über einer Flamme zu fixieren Alkohollampe, Färbung nach Cyl-Nielsen und Betrachtung der gefärbten Ausstriche unter einem Mikroskop mit mindestens 50 Sichtfeldern in jedem Ausstrich. Es ist notwendig, mindestens 20 Abstriche vom Material eines Schlachtkörpers anzufertigen. Darüber hinaus werden auch Ausstriche für die Mikroskopie aus einer auf Nährmedien ausgesäten Materialsuspension hergestellt.
Die Ziehl-Neelsen-Färbung von Ausstrichen ist selektiv für den Nachweis von Mykobakterien: Vor einem blauen Hintergrund von gefärbtem Gewebe oder fremder Mikroflora sind Mykobakterien als rote, rosa oder rubinrote Stäbchen zu sehen. Ausstriche lassen sich am besten unter einem binokularen Mikroskop bei einer Vergrößerung von 1,5 (Düse) x 7 (Okular) x 90 oder 100 (Objektiv) betrachten.
Die Methode wird als Signal verwendet, da das Vorhandensein oder Fehlen von Mykobakterien in Abstrichen den Verlauf der weiteren Forschung absolut nicht beeinflusst und selbst ein positives Bakterioskopieergebnis keine rechtliche Bedeutung hat (außer bei Vögeln). Das Material muss weiter erforscht werden.
Eine Labordiagnose von Tuberkulose bei Vögeln gilt als gesichert, wenn eine Kultur von Vogelmykobakterien (von Papageien - Menschen- oder Vogelarten) aus dem Testmaterial isoliert wird, ein positives Bioassay-Ergebnis erhalten wird und auch wenn Mykobakterien in Abstrichen von pathologischem Material nachgewiesen werden während der mikroskopischen Untersuchung (Abschnitt 7.3.2 Anweisungen).
Es ist auch zu beachten, dass die Vorbereitung von Abdruckabstrichen, deren Fixierung und Betrachtung viel Zeit in Anspruch nimmt und dass Mykobakterien in ihnen sehr selten nachgewiesen werden, selbst in Abstrichen aus einer Impfmaterialsuspension. Um bei der Untersuchung von Material von Tieren, die während der Schlachtung keine Veränderungen aufwiesen, Arbeitszeit und Geld zu sparen, ist es daher ratsam, sich darauf zu beschränken, Ausstriche nur von einer auf Nährmedien ausgesäten Materialsuspension herzustellen und zu betrachten. Dies wird zu keinem Schaden bei der Diagnose von Tuberkulose führen, da die Untersuchung des Materials weiter fortgesetzt wird.
Neben der konventionellen Lichtmikroskopie kann auch die Fluoreszenzmikroskopie eingesetzt werden. Ausstriche werden auf die gleiche Weise hergestellt, fixiert und mit einer Mischung aus Fluorochromen gefärbt. Gefärbte Ausstriche werden unter einem Fluoreszenzmikroskop betrachtet. Die Methode ist empfindlicher, aber weniger spezifisch und daher insbesondere in praktischen Laboratorien nicht sehr akzeptabel.
Die kulturelle Isolierung von Mykobakterien auf Nährmedien ist eines der wichtigen Glieder in der Labordiagnostik der Tuberkulose im gegenwärtigen Stadium. Die Nährböden, auf denen das Material ausgesät wurde (für 5-10 Röhrchen gemäß Anleitung), haben jedoch in den ersten 2-3 Wochen aufgrund einer Verletzung der Sterilität während der Inokulation in der Regel eine teilweise oder vollständige Keimung des Materials. Ernten werden genau dann verworfen, wenn das Auftreten des anfänglichen Wachstums atypischer Mykobakterien am wahrscheinlichsten ist (ganz zu schweigen von der Manifestation des anfänglichen Wachstums des Erregers der Tuberkulose, der noch später Wachstum zeigt). In solchen Fällen versagt das kulturelle Verfahren zur mechanischen Isolierung von Mykobakterien auf Nährmedien. Dies ist einer der Hauptgründe für negative Ergebnisse bei der bakteriologischen Untersuchung des Materials. Nachdem das Wachstum von Mykobakterienkolonien auf Nährmedien nach der Inokulation des Materials nicht erhalten wurde und die Labortiere 3 Monate lang am Leben blieben, folgt die Standardantwort der Laboratorien: „Der Erreger der Tuberkulose ist nicht isoliert“ oder „ Die Untersuchung des Materials auf Tuberkulose ist negativ“. Basierend auf den Ergebnissen der Studien wurde der Grund für die Reaktion von Rindern auf Tuberkulin nicht ermittelt, und dies führt zu einer weiteren ungerechtfertigten Schlachtung einer erheblichen Anzahl von Tieren, die auf Tuberkulin in Betrieben reagierten, die frei von Rindertuberkulose sind, was verursacht großer wirtschaftlicher Schaden, stört den Umsatz und die Reproduktion der Herde.
Vor diesem Hintergrund muss der Kulturmethode zur Isolierung von Mykobakterien aus dem Material auf Nährmedien als dem schwächsten Glied in der bakteriologischen Tuberkulosediagnostik in den Veterinärlaboratorien des Kreises Vorrang eingeräumt werden.
Positive Ergebnisse der Kulturmethode zur Isolierung von Mykobakterien hängen hauptsächlich von zwei Umständen ab: einer Erhöhung der Zuverlässigkeit der Aussaat von Mykobakterien aus dem Material und der Einhaltung von Sterilitätsbedingungen beim Arbeiten in einer Box.
Die Erhöhung der Zuverlässigkeit der Aussaat von Mykobakterien aus dem für die Studie entnommenen Material hängt in erster Linie von seiner qualitativen Auswahl, der Behandlung vor der Aussaat und einer Erhöhung der Anzahl von Reagenzgläsern des Mediums ab, auf dem die Aussaat durchgeführt wird.
Die Hauptbedingungen, deren Einhaltung bei der Aussaat des Materials auf Nährmedien das Wachstum von Mykobakterienkolonien garantiert:
a) Material für die bakteriologische Untersuchung von geschlachteten Tieren, die während der Schlachtung keine Veränderungen aufwiesen, separat von jedem Schlachtkörper entnehmen und jede Probe (Material von jedem Tier) auf 10-20 Reagenzgläser des Mediums nach folgendem Schema inokulieren:
Lymphknoten des Kopfes (submandibulär, pharyngeal);
Bronchiale und mediastinale Lymphknoten;
mesenteriale (mesenteriale) Lymphknoten;
Andere Lymphknoten (wenn verdächtige Bereiche vorhanden sind);
Organe (auch ggf.).
Das Ergebnis ist eine Inokulation von Material von einem Tier für 30-50 Reagenzgläser des Mediums. Dadurch wird eine Erhöhung der Sicherheit der Aussaat von Mykobakterien um das 3-5-fache erreicht, da ohne Trennung der Proben (gemäß Anleitung) empfohlen wird, das Material nur auf 5-10 Reagenzgläser des Mediums aus zwei Köpfen von einem auszusäen Bauernhof.
b) Direkt während der bakteriologischen Inokulation des Materials Stücke mit gestörter morphologischer Struktur des Lymphknotens oder Organs (Hyperplasie, Verhärtung, punktförmige und gestreifte Blutungen usw.) herausschneiden. Außerdem müssen alle geänderten Bereiche ausgeschnitten werden. Wenn sich in einem Mörser viel Material nach Volumen befindet, kann er in zwei Teile geteilt werden.
c) Befolgen Sie strikt die für die Arbeit gewählte Methodik, ohne die Art der Verarbeitung und Aussaat des Materials zu verletzen.
d) Beim Homogenisieren des Materials, insbesondere der Lymphknoten, muss steriler Sand oder fein gebrochenes steriles Glas verwendet werden. Mahlen Sie das Material so weit wie möglich (bis zu einer cremigen Konsistenz), um Mykobakterien besser aus dem Testmaterial zu extrahieren
e) Fügen Sie dem homogenisierten Material in einem Mörser Kochsalzlösung in der Menge hinzu, die für die Inokulation einer Materialsuspension auf Nährmedien und für den Biotest erforderlich ist (durchschnittlich bis zu 0,5 cm3 in einem Reagenzglas und 1-2 cm3 für eine subkutane Infektion). ein Meerschweinchen). Diese Kochsalzmenge kann im Voraus berechnet werden.
f) Die Überprüfung der Ernten des Materials sollte nach 3, 5, 7, 10, 15 Tagen und dann einmal pro Woche durchgeführt werden.
g) Jede auf dem Medium gewachsene Kolonie von Mikroorganismen (typisch oder atypisch, pigmentiert oder nicht pigmentiert, schleimig oder trocken usw.) muss mit selektiver Färbung nach Ziehl-Neelsen mikroskopiert werden.
Es sollte auf den Grad des Waschens des Materials von Säure (oder Alkali) geachtet werden, die verwendet wird, um das Material vor einer Kontamination durch fremde Mikroflora zu schützen. Restsäure wird immer in der Suspension aus dem Impfmaterial vorhanden sein, aber sie sollte auf einem Minimum gehalten werden. Ein Indikator dafür ist die Wiederherstellung der ursprünglichen Farbe des Mediums am 2.-4. Tag nach der Aussaat des Materials. Wenn die Farbe des Mediums nicht wiederhergestellt wird, weist dies auf eine erhöhte Menge an Restsäure hin. Die Farbe des Mediums erhält einen bläulichen Farbton unterschiedlicher Intensität. Das Wachstum von (vermuteten) Mykobakterien verlangsamt sich in diesem Fall, oder es wird überhaupt nicht existieren, insbesondere der Erreger der Tuberkulose, da es höhere Anforderungen an das Kultivierungsregime stellt. Die Restsäuremenge wirkt auf Mykobakterien teilweise bakteriostatisch.
Um die Reagenzgläser nach der Inokulation des Materials zu verschließen, können Stopfen aus Baumwolle und Baumwollgaze verwendet werden, gefolgt von einer Füllung mit Paraffin, gummifreien und Gummistopfen mit einer ausgeschnittenen schrägen Rille, Kortikalis- und Metallstopfen (Verschlüssen).
Bei der Bestimmung der Artzugehörigkeit einer isolierten Kultur von Mykobakterien sind viele (ca. 300) verschiedene Tests bekannt: kulturmorphologisch, biologisch, biochemisch, serologisch, Resistenzbestimmung etc. In der Veterinärpraxis wird jedoch ihr Minimum verwendet (siehe Handbuch). Für Labors reicht es aus, die isolierte Kultur von Mykobakterien der folgenden Arten zu bestimmen: Rind, Mensch und Vogel, die durch einen Bioassay bestimmt wird, und atypische Mykobakterien - nach Runyon (1959) in Gruppen eingeteilt: I - photochromogen (Bildung Pigment unter Lichteinfluss), II - scotochromogen (bildet Pigment unabhängig von Lichteinwirkung - sowohl im Dunkeln als auch im Licht), III - nicht chromogen (bildet kein Pigment) oder sie werden auch nicht pigmentiert genannt (die Erreger der Vogeltuberkulose ist hier ebenfalls enthalten), IV - schnell wachsende Mykobakterien und säureresistente Saprophyten.
Zu diesem Zweck ist es sehr effektiv und wirtschaftlich gerechtfertigt, die Eigenschaften der isolierten Kultur nach einem verkürzten Schema zu untersuchen, bei dem das Hauptaugenmerk auf den Zeitpunkt des Auftretens des Primärwachstums von Kolonien, die Pigmentbildung, die Kultur- morphologische und farbliche Eigenschaften bei Ziehl-Neelsen-Färbung. Besonders aussagekräftig ist der Test auf Strangbildung in Primär- oder sogar Subkultur in Kombination mit den Ergebnissen eines Bioassays. Zur Herstellung von Ausstrichen aus gewachsenen Kolonien empfiehlt es sich, diese gleichzeitig sowohl aus Kolonien als auch aus Schwebstoff- und Kondensatresten, d.h. aus dem flüssigen Teil am Boden des Röhrchens.
Darüber hinaus hat das Laborpersonal die Möglichkeit, nicht nur Kontrollschlachtungen an Tuberkulin-reagierten Tieren durchzuführen und Materialproben für Forschungszwecke zu entnehmen, sondern auch während des Tierlebens Proben für die bakteriologische Forschung zu entnehmen (Bronchial- oder Nasenschleim, Milch, Kot, Urin, Exsudat, Blut etc.) sowie Proben von Futtermitteln, Wasser, Umweltgegenständen zur Isolierung von Mykobakterien und belegen damit indirekt die Ursache der Tuberkulinreaktion der Rinder. Bei der Aussaat von zusätzlichem Material und Proben von Umweltobjekten werden bekannte Methoden zur Konzentration von Mykobakterien verwendet: Sedimentation, Flotation, Flotations-Sedimentation und andere.
Abgekürztes Schema der Differenzierung von Mykobakterien unter Verwendung eines Bioassays
