Diagnoza aidsa z imunoblotom za HIV. Praktična uporaba mehanizma verižne reakcije s polimerazo (PCR).

Imunski blot (imunoblot, Western blot, Western blot)- združuje encimski imunosorbentni test (ELISA) s predhodnim elektroforetskim prenosom virusnih antigenov na nitrocelulozni trak (trak).

V tem lepem znanstvenem imenu se "blot" najverjetneje prevede kot "blot", "western" kot "western" pa odraža smer porazdelitve te "blot" na papirju od leve proti desni, to je na geografskem zemljevidu, to ustreza smeri od zahoda proti vzhodu. ". Bistvo metode "imunskega blota" je, da se encimsko vezana imunosorbentna reakcija ne izvaja z mešanico antigenov, temveč z antigeni HIV, ki so predhodno razdeljeni z imunoforezo v frakcije, ki se nahajajo glede na molekulsko maso na površini nitrocelulozne membrane. . Posledično so glavni proteini HIV, nosilci antigenskih determinant, razporejeni po površini v obliki ločenih pasov, ki se pojavijo med encimskim imunskim testom.

Imunoblot vključuje več stopenj:

Priprava traku. Virus imunske pomanjkljivosti (HIV), ki je predhodno prečiščen in uničen na sestavne dele, podvržemo elektroforezi, medtem ko antigene, ki sestavljajo HIV, ločimo po molekulski masi. Nato se z blotiranjem (analogno iztiskanju odvečnega črnila na "blotterju") antigeni prenesejo na trak iz nitroceluloze, ki zdaj vsebuje spekter antigenskih trakov, značilnih za HIV, očem nevidnih.

Vzorčna študija. Testni material (serum, krvna plazma bolnika itd.) se nanese na nitrocelulozni trak, in če so v vzorcu specifična protitelesa, se vežejo na strogo ustrezne (komplementarne) antigenske trakove. Kot rezultat kasnejših manipulacij se rezultat te interakcije vizualizira – postane viden.

Razlaga rezultata. Prisotnost pasov na določenih območjih nitrocelulozne plošče potrjuje prisotnost protiteles proti strogo določenim antigenom HIV v preučevanem serumu.

    Proga A - Pozitivna kontrola

    Proga B - Šibka pozitivna kontrola

    Proga C - negativna kontrola

    Trak D – pozitiven vzorec (zaznana prisotnost protiteles proti HIV-1)

Trenutno je imunski blot (imunoblot) glavna metoda za potrditev prisotnosti virusno specifičnih protiteles v testnem serumu. V nekaterih primerih okužbe s HIV se pred serokonverzijo specifična protitelesa učinkoviteje odkrijejo z imunoblotingom kot z ELISA. Študija imunskega blotinga je pokazala, da so protitelesa proti gp 41 najpogosteje odkrita v serumih bolnikov z aidsom, odkrivanje p24 pri osebah, pregledanih v profilaktične namene, pa zahteva dodatne študije na prisotnost okužbe s HIV. Sistemi imunskega blot testa, ki temeljijo na gensko spremenjenih rekombinantnih proteinih, so se izkazali za bolj specifične od običajnih sistemov, ki temeljijo na prečiščenem virusnem lizatu. Pri uporabi rekombinantnega antigena se ne oblikuje razpršen, ampak jasno definiran ozek pas antigena, ki je lahko dostopen za obračunavanje in vrednotenje.

Serum oseb, okuženih s HIV-1, odkrije protitelesa proti naslednjim glavnim proteinom in glikoproteinom - proteini strukturne ovojnice (env) - gp160, gp120, gp41; jedra (gag) - p17, p24, p55, kot tudi virusni encimi (pol) - p31, p51, p66. Za HIV-2 so značilna protitelesa proti env - gp140, gp105, gp36; gag - p16, p25, p56; pol-p68.

Med laboratorijskimi metodami, ki so potrebne za ugotavljanje specifičnosti reakcije, ima največjo prepoznavnost dokazovanje protiteles proti ovojnim proteinom HIV-1 - gp41, gp120, gp160 in HIV-2 - gp36, gp105, gp140.

WHO meni, da so serumi pozitivni, če z imunoblotingom odkrijemo protitelesa proti katerim koli glikoproteinom HIV. V skladu s temi priporočili, če pride do reakcije samo z enim od proteinov ovojnice (rp 160, rp 120, rp 41) v kombinaciji ali brez reakcije z drugimi proteini, se rezultat šteje za dvomljiv in se priporoča drugi test z uporabo kompleta iz druge serije ali drugega podjetja. Če po tem rezultat ostane dvomljiv, je priporočljivo opazovanje 6 mesecev (raziskava po 3 mesecih).

Prisotnost pozitivne reakcije z antigenom p24 lahko kaže na obdobje serokonverzije, saj se protitelesa proti temu proteinu včasih pojavijo najprej. V tem primeru je glede na klinične in epidemiološke podatke priporočljivo ponoviti študijo z vzorcem seruma, odvzetim vsaj 2 tedna kasneje, in to je ravno v primeru, ko so pri okužbi s HIV potrebni parni serumi.

Pozitivne reakcije z beljakovinami gag in pol brez prisotnosti reakcije z beljakovinami env lahko odražajo stopnjo zgodnje serokonverzije in lahko kažejo tudi na okužbo s HIV-2 ali nespecifično reakcijo. Osebe s takšnimi rezultati po testiranju na HIV-2 se ponovno pregledajo po 3 mesecih (v 6 mesecih).

Pravočasna diagnoza okužbe s HIV postane izjemno pomemben ukrep, saj zgodnejše zdravljenje lahko v veliki meri vpliva na nadaljnji razvoj bolezni in podaljša življenje bolnika. V zadnjih letih je prišlo do pomembnega napredka na področju odkrivanja te strašne bolezni: stare testne sisteme nadomeščajo naprednejši, metode preiskav postajajo dostopnejše, njihova natančnost pa se znatno poveča.

V tem članku bomo govorili o sodobnih metodah za diagnosticiranje okužbe s HIV, ki jih je koristno poznati za pravočasno zdravljenje te težave in ohranjanje normalne kakovosti življenja bolnika.

Metode za diagnosticiranje HIV

V Rusiji se za diagnozo okužbe s HIV izvaja standardni postopek, ki vključuje dve ravni:

  • testni sistem ELISA (presejalna analiza);
  • imunski bloting (IB).

Uporabljajo se lahko tudi druge diagnostične metode:

  • ekspresni testi.

testni sistemi ELISA

V prvi fazi diagnosticiranja se za odkrivanje okužbe s HIV uporablja presejalni test (ELISA), ki temelji na v laboratorijih ustvarjenih proteinih HIV, ki zajamejo specifična protitelesa, ki nastanejo v telesu kot odgovor na okužbo. Po njihovi interakciji z reagenti (encimi) testnega sistema se barva indikatorja spremeni. Nadalje se te barvne spremembe obdelajo na posebni opremi, ki določa rezultat opravljene analize.

Takšni testi ELISA lahko pokažejo rezultate v nekaj tednih po vnosu okužbe s HIV. Ta analiza ne določa prisotnosti virusa, ampak zazna proizvodnjo protiteles proti njemu. Včasih se v človeškem telesu protitelesa proti HIV začnejo proizvajati 2 tedna po okužbi, pri večini ljudi pa se proizvajajo pozneje, po 3-6 tednih.

Obstajajo štiri generacije testov ELISA z različnimi občutljivostmi. V zadnjih letih se vse pogosteje uporabljajo testni sistemi III in IV generacije, ki temeljijo na sintetičnih peptidih ali rekombinantnih proteinih in imajo večjo specifičnost in natančnost. Uporabljajo se lahko za diagnosticiranje okužbe s HIV, spremljanje razširjenosti HIV in zagotavljanje varnosti pri testiranju darovane krvi. Natančnost testnih sistemov ELISA III in IV generacije je 93-99% (bolj občutljivi so testi, ki se proizvajajo v zahodni Evropi - 99%).

Za izvedbo testa ELISA bolniku vzamemo 5 ml krvi iz vene. Med zadnjim obrokom in analizo mora miniti vsaj 8 ur (praviloma se izvaja zjutraj na prazen želodec). Takšen test je priporočljivo opraviti ne prej kot 3 tedne po domnevni okužbi (na primer po nezaščitenem spolnem odnosu z novim spolnim partnerjem).

Rezultati ELISA testa so pridobljeni po 2-10 dneh:

  • negativen rezultat: kaže na odsotnost okužbe s HIV in ne zahteva napotitve k specialistu;
  • lažno negativen rezultat: lahko opazimo v zgodnjih fazah okužbe (do 3 tedne), v poznih fazah aidsa s hudo imunsko supresijo in z nepravilno pripravo krvi;
  • lažno pozitiven rezultat: opazimo ga lahko pri nekaterih boleznih in v primeru nepravilne priprave krvi;
  • pozitiven rezultat: kaže na okužbo z okužbo s HIV, zahteva IB in napotitev bolnika k specialistu v center za AIDS.

Zakaj lahko test ELISA daje lažno pozitivne rezultate?

Lažno pozitivne rezultate testa ELISA za HIV lahko opazimo z nepravilno obdelavo krvi ali pri bolnikih s takimi stanji in boleznimi:

  • multipli mielom;
  • nalezljive bolezni, ki jih povzroča virus Epstein-Barr;
  • stanje po ;
  • avtoimunske bolezni;
  • v ozadju nosečnosti;
  • stanje po cepljenju.

Zaradi zgoraj opisanih razlogov so lahko v krvi prisotna nespecifična navzkrižno reagirajoča protitelesa, katerih nastajanja ni izzvala okužba s HIV.

V zadnjih letih se je pogostost lažno pozitivnih rezultatov bistveno zmanjšala zaradi uporabe testnih sistemov III in IV generacije, ki vsebujejo občutljivejše peptide in rekombinantne proteine ​​(sintetizirani so z genskim inženiringom in vitro). Po uporabi takšnih testov ELISA se je pogostost lažno pozitivnih rezultatov znatno zmanjšala in znaša približno 0,02-0,5%.

Lažno pozitiven rezultat ne pomeni, da je oseba okužena z virusom HIV. V takšnih primerih WHO priporoča drug test ELISA (obvezna IV generacija).

Krv bolnika pošljemo v referenčni ali arbitražni laboratorij z oznako »ponovi« in jo testiramo na testnem sistemu ELISA IV generacije. Če je rezultat nove analize negativen, se prvi rezultat prepozna kot napačen (lažno pozitiven) in IB se ne izvede. Če je rezultat pri drugem testu pozitiven ali dvomljiv, mora bolnik v 4-6 tednih opraviti IB, da potrdi ali ovrže okužbo s HIV.

imunski bloting

Dokončno diagnozo okužbe s HIV je mogoče postaviti šele po pozitivnem rezultatu imunskega blotinga (IB). Za njegovo izvedbo se uporablja nitrocelulozni trak, na katerega se nanesejo virusni proteini.

Odvzem krvi za IB se izvaja iz vene. Nato je podvržen posebni obdelavi in ​​beljakovine, ki jih vsebuje serum, se ločijo v posebnem gelu glede na njihov naboj in molekulsko maso (manipulacija se izvaja na posebni opremi pod vplivom električnega polja). Nitrocelulozni trak se nanese na gel krvnega seruma in v posebni komori se izvede blotiranje (»blotiranje«). Trak je obdelan in če uporabljeni materiali vsebujejo protitelesa proti HIV, se ta vežejo na antigenske trakove na IB in se prikažejo kot črte.

IB se šteje za pozitivno, če:

  • po merilih ameriškega CDC - na traku sta dve ali tri črte gp41, p24, gp120 / gp160;
  • po merilih ameriške FDA - na traku sta dve črti p24, p31 in linija gp41 ali gp120 / gp160.

V 99,9 % primerov pozitiven rezultat IB kaže na okužbo s HIV.

Če črt ni, je IB negativen.

Pri identifikaciji linij z gp160, gp120 in gp41 je IB dvomljiv. Tak rezultat je mogoče zaznati, ko:

  • onkološke bolezni;
  • nosečnost;
  • pogoste transfuzije krvi.

V takih primerih je priporočljivo izvesti drugo študijo z uporabo kompleta drugega podjetja. Če je po dodatni IB izvid dvomljiv, je potrebno spremljanje šest mesecev (IB se izvaja vsake 3 mesece).

verižna reakcija polimeraze

PCR test lahko zazna RNA virusa. Njegova občutljivost je precej visoka in omogoča odkrivanje okužbe s HIV že 10 dni po okužbi. V nekaterih primerih lahko PCR daje lažno pozitivne rezultate, saj lahko njegova visoka občutljivost reagira tudi na protitelesa proti drugim okužbam.

Ta diagnostična tehnika je draga, zahteva posebno opremo in visoko usposobljene strokovnjake. Ti razlogi ne dovoljujejo njegove izvedbe med množičnim testiranjem prebivalstva.

PCR se uporablja v takih primerih:

  • za odkrivanje virusa HIV pri novorojenčkih, rojenih materam, okuženim s HIV;
  • za odkrivanje HIV v "okenskem obdobju" ali v primeru dvomljive IB;
  • za nadzor koncentracije HIV v krvi;
  • za študij krvi darovalcev.

Samo s PCR testom se diagnoza HIV ne postavlja, ampak se izvaja kot dodatna diagnostična metoda za reševanje sporov.


Ekspresne metode

Ena od novosti v diagnostiki HIV so postali hitri testi, katerih rezultate je mogoče oceniti v 10-15 minutah. Najbolj učinkovite in natančne rezultate dobimo z imunokromatografskimi testi po principu kapilarnega pretoka. So posebni trakovi, na katere se nanese kri ali druge testne tekočine (slina, urin). V prisotnosti protiteles proti HIV se po 10-15 minutah na testu pojavi barvni in kontrolni trak - pozitiven rezultat. Če je rezultat negativen, se prikaže le kontrolna črta.

Tako kot pri testih ELISA je treba rezultate hitrega testa potrditi z analizo IB. Šele takrat je mogoče postaviti diagnozo okužbe s HIV.

Obstajajo hitri kompleti za domače testiranje. Test OraSure Technologies1 (ZDA) je odobril FDA, na voljo je brez recepta in se lahko uporablja za odkrivanje virusa HIV. Po testu, v primeru pozitivnega rezultata, se bolniku priporoča, da opravi pregled v specializiranem centru za potrditev diagnoze.

Preostalih testov za domačo uporabo FDA še ni odobrila in so lahko njihovi rezultati zelo vprašljivi.

Kljub dejstvu, da so hitri testi po natančnosti slabši od testov ELISA IV generacije, se pogosto uporabljajo za dodatno testiranje prebivalstva.

Testiranje na okužbo s HIV lahko opravite v kateri koli polikliniki, centralni regionalni bolnišnici ali v specializiranih centrih za AIDS. Na ozemlju Rusije potekajo popolnoma zaupno ali anonimno. Vsak pacient lahko pričakuje zdravniški ali psihološki nasvet pred ali po analizi. Teste na HIV boste morali plačati samo v komercialnih zdravstvenih ustanovah, v javnih klinikah in bolnišnicah pa jih izvajajo brezplačno.

Za informacije o tem, kako se lahko okužite s HIV in kakšni miti obstajajo o možnostih okužbe, preberite

Kaj je to - imunoblot? To je običajna metoda za laboratorijsko diagnosticiranje človeških virusnih okužb. Velja za enega najbolj natančnih in zanesljivih načinov odkrivanja prisotnosti HIV. V svoji zanesljivosti presega celo rezultate imunoblota, ki veljajo za neizpodbitne in dokončne.

splošne informacije

Imunoblot - kaj je to? Da bi prepoznali okužbo s HIV pri osebi, je treba opraviti laboratorijski test krvnega seruma za prisotnost protiteles. Tehnika Western blot se imenuje tudi Western blot. Uporablja se za odkrivanje človeških virusnih okužb kot dodatna ekspertna metoda. Potrebno je potrditi ELISA - laboratorijski test, ki vam omogoča ugotavljanje prisotnosti protiteles proti HIV v krvi. Pozitivna analiza ELISA se ponovno preveri z imunoblotingom. Velja za najbolj občutljivo, zapleteno in drago.

namen

Kaj je to - imunoblot? To je tehnika laboratorijskega testiranja krvnega seruma na prisotnost protiteles proti virusu. Med študijo specialist predhodno loči beljakovine virusa v gelu in jih prenese na nitrocelulozno membrano. Postopek imunoblotinga je namenjen določanju HIV v različnih fazah. Na prvi stopnji se očiščen virus iz njegovih sestavnih delov podvrže elektroforezi, antigeni, ki sestavljajo njegovo sestavo, pa se ločijo po molekulski masi.

Razmnožuje se v živi celici in vanjo vgradi svoje genetske informacije. Na tej stopnji oseba postane nosilec virusa HIV, če je bila okužena. Posebnost bolezni je, da se morda dolgo časa ne manifestira. Virus uniči limfocite, zato se zmanjša človeška imunost in telo se ne more upreti okužbam. Če se HIV zdravi kompetentno in pravočasno, bo bolnik živel do visoke starosti. Pomanjkanje terapije neizogibno vodi v smrt. Od trenutka okužbe, vendar brez zdravljenja, največja življenjska doba ni več kot deset let.

Posebnosti

Imunoblot analiza je zanesljiva metoda, ki vam omogoča ugotavljanje prisotnosti protiteles proti antigenom HIV prve in druge vrste. Če je oseba okužena, se v dveh tednih pojavijo protitelesa, ki jih lahko odkrijemo veliko kasneje. Posebnost HIV je, da se število protiteles hitro poveča in ostane v krvi bolnika. Tudi če so prisotni, se bolezen morda ne manifestira dve ali več let. Metoda ELISA ne določa vedno natančno prisotnosti bolezni, zato je potrebna potrditev rezultatov z imunoblotingom in PCR, če je encimski imunski test pozitiven.

Indikacije za imenovanje

Kaj je ta "imunoblot" je že bilo ugotovljeno, ampak komu je ta študija predpisana? Razlog za opravljanje testov za metodo imunoblotinga je pozitiven rezultat ELISA. Za bolnike, ki bodo operirani, je treba opraviti encimski imunski test. Poleg tega je treba opraviti analizo za ženske, ki načrtujejo nosečnost, pa tudi za vse, ki so spolno promiskuitetne. Bolnikom z virusom HIV dodelite imunobloting, če so rezultati ELISA dvomljivi. Naslednji zaskrbljujoči simptomi so lahko razlog za obisk zdravnika:

  • ostra izguba teže;
  • šibkost, izguba delovne sposobnosti;
  • črevesna motnja (driska), ki traja tri tedne;
  • dehidracija telesa;
  • vročina;
  • otekle bezgavke v telesu;
  • razvoj kandidiaze, tuberkuloze, pljučnice, toksoplazmoze, poslabšanja herpesa.

Pacientu se pred darovanjem venske krvi ni treba pripravljati. 8-10 ur pred študijo ne morete jesti. Dan pred krvodajalstvom ni priporočljivo piti alkoholnih in kavnih pijač, se ukvarjati s težkimi fizičnimi napori, doživljati vznemirjenja.

Kje opraviti analizo?

Kje se lahko testiram na HIV? ELISA, imunoblot študije se izvajajo v mestnih zasebnih klinikah, rezultati so izdani v enem dnevu. Možna je tudi takojšnja diagnoza. V državnih zdravstvenih ustanovah se testi ELISA in imunobloting izvajajo brezplačno v skladu z zakonodajo Ruske federacije. Nosečnice, pa tudi bolniki, ki bodo hospitalizirani ali operirani, morajo biti testirani na nalezljive bolezni.

Kako poteka raziskava?

Kako se izvaja ELISA? Imunoblot pozitiven/negativen potrdi ali ovrže rezultate encimskega imunskega testa. Postopek raziskovanja je precej preprost. Specialist opravi vzorčenje venske krvi, čas ne traja več kot pet minut. Po vzorčenju je treba mesto vboda razkužiti in zalepiti z obližem. Vzorčenje poteka na prazen želodec, zato po posegu ne škodi, če pojemo tablico temne čokolade ali popijemo sladko vročo pijačo.

Če želite dobiti napotnico za brezplačno analizo v javni zdravstveni ustanovi, morate obiskati splošnega zdravnika. Na splošno se imunoblot po načinu vzorčenja ne razlikuje od drugih krvnih preiskav. Metodologija raziskave je preprosta. Če je virus prisoten v človekovi krvi, telo začne proizvajati protitelesa, da ga uniči. Vsak virus ima svoj niz antigenskih proteinov. Odkrivanje teh protiteles je osnova Western blotting tehnike.

Cena

Koliko stane analiza? Imunoblot za HIV ne velja za poceni raziskave. V povprečju presejalni pregled z encimskim imunskim testom stane od 500 do 900 rubljev. Imunoblotting je verifikacijska študija, katere stroški so od tri do pet tisoč rubljev. Bolj zapletene metode so veliko dražje. Na primer, za to boste morali plačati približno 12.000 rubljev.

Razlaga rezultata

Najpogostejši metodi za diagnosticiranje okužbe s HIV sta encimski imunski test in imunoblot. Uporabljajo se za določanje serumskih protiteles proti virusu imunske pomanjkljivosti. Prisotnost okužbe običajno potrdimo z dvema testoma: presejalnim in potrditvenim. Interpretacijo rezultatov študije mora opraviti zdravnik, on tudi postavi diagnozo in predpiše zdravljenje. Če je imunoblot pozitiven, to pomeni, da je v človeškem telesu prisoten virus.

Pozitiven rezultat ne sme biti razlog za samozdravljenje, saj ima lahko vsak bolnik svojo sliko bolezni. Kvalitativna analiza vključuje presejanje in preverjanje. Če bolnik nima virusa, je rezultat označen kot "negativen". Ko se odkrije s presejalno metodo, se izvede dodatna verifikacijska študija. Imunoblot je analiza, ki potrdi ali ovrže presejanje. Če se na testnem traku pojavi zatemnitev na določenih območjih (mesta lokalizacije beljakovin), se postavi diagnoza HIV. Če so rezultati dvomljivi, se testi opravijo v treh mesecih.

Okužbo z virusom imunske pomanjkljivosti lahko preprečite, če upoštevate določena pravila: izogibajte se priložnostnim spolnim odnosom, med stiki uporabljajte kondom, ne jemljite drog. Če se bolezen odkrije pri nosečnici, je pomembno, da dosledno upoštevate priporočila lečečega zdravnika, ne pozabite opraviti pregledov za prisotnost virusa.

hipotenzija, tahikardija, težko dihanje, cianoza. V hudih primerih bolezni so možne krvavitve, bruhanje s primesjo krvi. Jetra in vranica sta povečani. Upoštevajte oligurijo. Temperatura ostane konstantno visoka 3-10 dni. V periferni krvi - nevtrofilna levkocitoza s premikom formule v levo. Poleg opisanih splošnih manifestacij kuge se razvijejo lezije, značilne za posamezne klinične oblike bolezni.

Kožna oblika je redka (3–5%). Na mestu vhoda okužbe se pojavi madež, nato papula, vezikula (konflikt), napolnjena s serozno hemoragično vsebino, obkrožena z infiltrirano cono s hiperemijo in edemom. Za Flikten je značilna huda bolečina. Ko se odpre, tvori razjedo s temno krasto na dnu. Za razjedo kuge je značilen dolg potek, počasi se celi in tvori brazgotino. Če je ta oblika zapletena s septikemijo, se pojavijo sekundarne pustule in razjede. Morda razvoj regionalnega bubona (kožno-bubonska oblika).

Bubonska oblika se pojavlja najpogosteje (približno 80%) in je značilna relativno benigni potek. Od prvih dni bolezni se v regiji regionalnih bezgavk pojavi ostra bolečina, ki otežuje gibanje in prisili bolnika v prisilni položaj. Primarni bubo je praviloma samoten, manj pogosto opazimo več bubonov. Največkrat so prizadete dimeljske in femoralne bezgavke, nekoliko redkeje aksilarne in vratne bezgavke. Velikosti Bubo se razlikujejo od oreha do srednje velikega jabolka. Svetle značilnosti so ostra bolečina, gosta konsistenca, adhezija na spodnjih tkivih, gladkost kontur zaradi razvoja periadenitisa. Bubo začne nastajati drugi dan bolezni. Ko se razvije, koža nad njim postane rdeča, sijoča, pogosto cianotična. Na začetku je gosta, nato se zmehča, pojavi se nihanje, konture postanejo mehke. Na 10-12 dan bolezni se odpre - fistula, nastanejo razjede. Z benignim potekom bolezni in sodobno antibiotično terapijo opazimo njegovo resorpcijo ali sklerozo. Zaradi hematogenega vnosa povzročitelja lahko nastanejo sekundarni buboni, ki se pojavijo pozneje in so majhni, manj boleči in praviloma ne gnojijo. Močan zaplet te oblike je lahko razvoj sekundarne pljučne ali sekundarne septične oblike, ki močno poslabša bolnikovo stanje, vse do smrti.

Primarna pljučna oblika je redka, v obdobjih epidemij v 5-10% primerov in je epidemiološko najbolj nevarna in huda klinična oblika bolezni. Začne se ostro, burno. V ozadju izrazitega sindroma zastrupitve se od prvih dni pojavijo suh kašelj, huda zasoplost, rezanje bolečin v prsih. Kašelj nato postane produktiven, proizvaja izpljunek, katerega količina se lahko razlikuje od nekaj izpljunkov do ogromnih količin, ki ga redko sploh ni. Sputum, sprva penast, steklast, prozoren, nato dobi krvav videz, kasneje postane čisto krvav, vsebuje ogromno bakterij kuge. Običajno je tekoča konsistenca - eden od diagnostičnih znakov. Fizikalni podatki so redki: rahlo skrajšanje tolkalnega zvoka nad prizadetim režnjem, med avskultacijo, redki drobni mehurčki, ki očitno ne ustrezajo splošnemu resnemu stanju bolnika. Za terminalno obdobje je značilno povečanje kratke sape, cianoza, razvoj stuporja, pljučnega edema in TSS. Krvni tlak pade, pulz se pospeši in postane nitast, srčni toni so pridušeni, hipertermijo nadomesti hipotermija. Brez zdravljenja je bolezen smrtna v 2–6 dneh. Z zgodnjo uporabo antibiotikov je potek bolezni benigen, malo drugačen

IMUNOBLOT(western blot) - metoda laboratorijskega testiranja krvnega seruma na prisotnost protiteles proti HIV; je natančnejši test kot ELISA in se uporablja za potrditev rezultatov ELISA. ELISA - encimski imunski test (ELISA) - laboratorijski test, ki vam omogoča določanje prisotnosti protiteles proti HIV v krvi; Test protiteles proti HIV.

Po priporočilu SZO se pri diagnostiki okužbe s HIV uporablja imunobloting (western blot) kot dodatna strokovna metoda, ki naj potrdi rezultate testa ELISA. Ta metoda se običajno uporablja za dvojno preverjanje pozitivnega rezultata ELISA, saj velja za bolj občutljivo in specifično, čeprav je bolj zapletena in dražja.

Imunobloting združuje encimski imunski test (ELISA) s predhodno elektroforetično ločitvijo virusnih proteinov v gelu in njihovim prenosom na nitrocelulozno membrano. Postopek imunoblota je sestavljen iz več faz (). Najprej, predhodno prečiščen in uničen na sestavne dele, je HIV izpostavljen elektroforezi, medtem ko so vsi antigeni, ki sestavljajo virus, ločeni po molekulski masi. Nato se z blotiranjem antigeni prenesejo iz gela na trak iz nitroceluloze ali najlonski filter, ki sedaj vsebuje očesu neviden spekter proteinov, ki je značilen za HIV. Nato se na trak nanese testni material (serum, plazma bolnika itd.) in če so v vzorcu specifična protitelesa, se vežejo na trakove antigenskih proteinov, ki jim strogo ustrezajo. Kot rezultat kasnejših manipulacij (kot je ELISA) je rezultat te interakcije vizualiziran – viden. Prisotnost trakov na določenih območjih traku potrjuje prisotnost protiteles proti strogo določenim antigenom HIV v preučevanem serumu.

Imunobloting se najpogosteje uporablja za potrditev diagnoze okužbe s HIV. WHO meni, da so serumi pozitivni, če se z imunoblotingom odkrijejo protitelesa proti katerim koli dvema proteinoma ovojnice HIV. V skladu s temi priporočili, če pride do reakcije samo z enim od proteinov ovojnice (gp160, gp120, gp41) v kombinaciji ali brez reakcije z drugimi proteini, se rezultat šteje za dvomljiv in se priporoča druga študija z uporabo kompleta iz drugega serije ali od drugega podjetja. Če po tem rezultat ostane dvomljiv, se študije nadaljujejo vsake 3 mesece.

Pri imunoblotingu se na prvi stopnji beljakovine v krvnem serumu ločijo v gelu glede na njihovo molekulsko maso in naboj z električnim poljem (metoda gelske elektroforeze). Nato se na gel nanese nitrocelulozna ali najlonska membrana in jo "namoči" (to je blotting). To poteka v posebni komori, ki omogoča popoln prenos materiala iz gela na membrano. Posledično se vzorec razporeditve beljakovin, ki je bil na gelu, reproducira na membrani (blot), ki jo je nato mogoče enostavno manipulirati. Sprva membrano obdelamo s protitelesi proti želenemu antigenu, po izpiranju nevezanega materiala pa dodamo radioaktivno označen konjugat, ki se specifično veže na protitelesa (kot pri ELISA). Lokacijo nastalega konjugiranega kompleksa antigen-protitelo določimo z avtoradiografijo z uporabo rentgenskega filma. Po njegovi manifestaciji postane vse jasno, ali so v krvi antigeni ali ne.