Tehnika Schick-reakcije za glikogen - ocena rezultatov. Alergeni in toksini za diagnostično kožno testiranje Alergeni in toksini

Alergeni in toksini

Diagnostična zdravila

Imunoglobulin proti oslovskemu kašlju, antitoksični človeški (Rusija)

Konjski serum proti davici, prečiščena koncentrirana tekočina (Rusija)

Serumi in imunoglobulini

Cepivo proti tuberkulozi BCG-M suho (za varčno primarno imunizacijo, Rusija)

Cepivo proti tuberkulozi (BCG) suho za intradermalno aplikacijo (Rusija)

Akt-Hib (Hib-wak, Južna Koreja)

Monovakcina proti oslovskemu kašlju (Rusija)

Vsebuje bakterije oslovskega kašlja, konzervans - mertiolat. Uporabljajte le po epidemioloških indikacijah v žariščih okužbe s pertusisom.

Vsebuje 10 mcg polisaharida na odmerek Haemophilus influenzae tip b, konjugiran s tetanusnim toksoidom, konzervans - trometamol. Uporablja se za cepljenje otrok od 2 mesecev starosti glede na epidemiološke indikacije.

Mycobacterium bovis BCG-1. Cepilni sev je bil pridobljen z dolgotrajnim (13 let) gojenjem govejih tuberkuloznih mikobakterij v neugodnih pogojih na krompirjevo-glicerinskem gojišču z dodatkom žolča. Uporablja se za specifično preprečevanje tuberkuloze. Cepljenje se izvaja na 5-7 dan življenja, ko je telo brez mikobakterijske okužbe. Vsi zdravi otroci, mladostniki in odrasli, mlajši od 30 let, ki negativno reagirajo na tuberkulin, so predmet ponovnega cepljenja. Mehanizem imunosti pri tuberkulozi ni popolnoma razumljen. V klinični praksi je glavno merilo za intenzivnost imunosti na cepivo prehod negativne kožne reakcije na tuberkulin v pozitivno.

Vsebuje liofilizirane v 1,2 % raztopini natrijevega glutamata žive bakterije cepilnega seva Mycobacterium bovis BCG-1. Uporablja se za varčno specifično preprečevanje tuberkuloze (primarno cepljenje) pri novorojenčkih na območjih z neugodnimi razmerami za tuberkulozo.

Vsebuje protitelesa proti eksotoksinu bacila davice. Antitoksično delovanje je izraženo v mednarodnih enotah (10.000 in 20.000 ie/ml). Uporablja se za zdravljenje bolnikov z davico. Poleg terapevtskih namenov se antidifterijski serum uporablja za določanje toksigenosti kultur bacila davice v reakciji obarjanja gela.

Vsebuje imunološko aktivno frakcijo krvne plazme darovalcev s protitelesi proti eksotoksinu mikroba oslovskega kašlja (vsaj 750 ie antitoksičnih protiteles proti oslovskemu kašlju). Uporablja se za zdravljenje oslovskega kašlja.

Vsebuje prečiščen toksin davice v 0,2 ml 1/40 DLM toksina morskega prašička. Uporablja se za intradermalne teste z namenom imunodiagnostike. Pri posameznikih se na mestu injiciranja razvije vnetna reakcija. Če kri vsebuje več kot 0,03 IE antitoksina, je test negativen. Prej se je Schickov test pogosto uporabljal za identifikacijo posameznikov, dovzetnih za davico. Trenutno je zaradi možnosti zapletov njegova uporaba omejena na stroge epidemične indikacije.

Schickova reakcija lahko pomaga pri diferencialni diagnozi med atipično davico in drugimi boleznimi s sočasnim prenašalstvom difteričnih bacilov (v primerih, ko je Schickova reakcija postavljena pred dajanje antidifterijskega seruma).

Študije v zadnjih dveh letih o diagnostični vrednosti Shikovega testa pri titracijski metodi po V. I. Ioffeju z 1/40, 1/10, 1/5 DLM toksina davice (1, 4 in 8 kožnih odmerkov) so vodile. do zaključka, da določanje stopnje imunosti pomaga pri diferencialni diagnozi.

Pri večini nosilcev toksigenih bacilov davice se določi intenzivna antitoksična imunost, ki se izraža z negativnimi reakcijami ne le na eno, temveč tudi na 4 in 8 kožnih odmerkov toksina (K. V. Blumenthal).

Pri nekaterih bolnikih z davico, pri katerih je bilo pred dajanjem seruma mogoče določiti stanje imunosti s Schickovo reakcijo, se je slednji izkazal za pozitivnega na en kožni odmerek.

Torej, če z dvomljivo klinično sliko in odkrivanjem toksigenih bacilov davice Schickov test v običajnem okolju (1/40 DLM toksina) daje pozitiven rezultat, je domneva o davici bolj razumna.

Aglutinacijska reakcija lahko pomaga tudi pri diferencialni diagnozi, saj pri davici pride do rednega povečanja protiteles v krvi do 2. - 3. tedna od začetka bolezni, medtem ko po mnenju avtorjev sočasno prenašanje ne daje opazno povečanje protiteles v navedenih obdobjih.

Na koncu je treba povedati, da mora biti zavrnitev diagnoze davice, kadar se odkrijejo bacili davice, v vseh primerih dovolj utemeljena s prepričljivimi kliničnimi podatki.

Glede na to, da pri diferencialni diagnozi v takih primerih pogosto nastanejo velike težave, zlasti za okrožnega zdravnika, je priporočljivo, da se ti bolniki napotijo ​​na diagnostične oddelke. V odsotnosti diagnostičnih postelj se diagnoza davice lahko opravi le po posvetovanju z izkušenim zdravnikom.

"Davica pri otrocih", M.E. Sukhareva, K.V. Blumenthal

Odkrivanje BL v tipični klinični sliki folikularne angine, ko gnojni folikli, kot zrna prosa, sijejo izpod sluznice tonzil, je mogoče zlahka obravnavati kot sočasni prevoz, ker so otoki davičnih napadov vedno ki se nahajajo na površini sluznice. Kronični tonzilitis pogosto spremlja bolj ali manj dolgotrajno prenašanje bacila davice, zato je pogosto treba razlikovati med atipično davico ...

Za izkušenega zdravnika ni težko diagnosticirati glivičnega tonzilitisa (ki ga povzroča leptotrix) s sočasnim prenašanjem bacilov davice, saj klinična manifestacija mikoze žrela v bistvu ni podobna procesu davice; vendar očitno isti vzroki, najpogosteje kronična poškodba nazofarinksa, hkrati prispevajo k dolgotrajni vegetaciji glive in prenašanju bacila davice. Težja diferencialna diagnoza ...

Luda P., stara 8 let, je bila sprejeta v bolnišnico. I. V. Rusakova 9. septembra 1960 z diagnozo "davica žrela?". Deklica je ustrezno cepljena proti davici, pogosto trpi za vnetjem mandljev. Zbolela je 5. septembra, temperatura 37,5°, glavobol, zmerno vneto grlo. 6. - 7. septembra je bila temperatura med 38 - 39 °, slabo počutje, bolečina v grlu je vztrajala ....

Odkrivanje bacila davice v setvi iz žrela ali nosu s tipično klinično sliko gripe ali krupa s katarjem zgornjih dihalnih poti ne more biti odločilen argument v prid difterične etiologije krupa. V takih primerih je potrebna identifikacija izoliranih mikrobov, vendar je prenos BL v grlu ali nosu povsem možen, ki spremlja krup brez davice. Tukaj je izvleček iz zgodovine ...

Borya B., star 8 let, je bil sprejet na oddelek za difterijo v bolnišnici. I. V. Rusakova 27. septembra 1960 z diagnozo "davica žrela?". Fant je ustrezno cepljen proti davici. Ponovno bolan s tonzilitisom. Zbolel 24. IX, temperatura 39,5°, mrzlica, vneto grlo. 25. IX otroka je pregledal zdravnik: temperatura je ostala visoka, opažena je bila svetla hiperemija žrela, rumenkasta, ohlapna, a precej obsežna ...

Citokemične metode zasledovati identifikacijo kemičnih in encimskih snovi v celicah z uporabo barvnih reakcij za to. Citokemični pripravki ohranjajo celično strukturo, kar omogoča identifikacijo celic in znotrajcelično lokalizacijo preiskovane spojine. Zato se v hematologiji daje prednost ne biokemičnim, napornim, ki uničujejo celično strukturo zelo heterogene celične populacije, temveč citokemičnim metodam.

Citokemija dokazal, da med morfološko enakimi celicami obstajajo pomembne kemične in encimske razlike.

Glikogen (reakcija CHIC) (PAS) - metoda Hotchkiss - Mac Minus

Schickovo načelo. Polisaharide zaznamo z reakcijo, ki oksidira alkoholne skupine, te se pretvorijo v aldehidne skupine, slednje pa identificiramo z barvno reakcijo s Schiffovim reagentom.

Reagenti za reakcijo PAS: 1. Alkoholno-formalinska fiksirna mešanica: 9 delov absolutnega etilnega alkohola + 1 del 40% formalina; ohranjati pri +4°.

2. Periodna kislina, 1% vodna raztopina. Raztopina je brezbarvna. Shranjujte v rjavi steklenici na temnem mestu pri laboratorijski temperaturi. Porumenela raztopina ni uporabna.

3. Schiffov reagent. 1 g bazičnega fuksina razredčimo v 200 ml destilirane vode pri vrelišču. Stresamo 5 minut, ohladimo na temperaturo 50 °, filtriramo in dodamo 20 ml navadne klorovodikove kisline. Ohladimo na 25°, dodamo 2 g natrijevega ali kalijevega metabisulfita, ki popolnoma zagotovita raztopino. Raztopina naj stoji en dan v temi in na hladnem (+4 °). Nato dodajte 2 g aktivnega oglja, pustite 1 minuto. in filter.
Nastali filtrat je bister in brezbarven. Dovoljen je rahlo rumenkast odtenek; če se raztopina obarva rožnato, postane neuporabna. Hraniti pri +4°C v hermetično zaprti steklenički iz rjavega stekla.

4. Zelena luč -1% vodna raztopina.

5. Diastaza: neutekočinjena človeška slina ali 0,1 % raztopina amilolitično-diastatskega encima v fiziološki raztopini.

Tehnika Schickove reakcije

1) 10-minutna fiksacija brisov z mešanico alkohola in formalina; pranje z destilirano vodo;
2) oksidacija z 1% raztopino periodne kisline, 10 min.; pranje z destilirano vodo;
3) barvanje s Schiffovim reagentom v pokriti posodi, v temnem in hladnem prostoru, 2 uri; pranje s tekočo vodo;
4) protibarvanje z 1 % zeleno svetlobo 1 minuto; izpiranje s tekočo vodo.

Nadzor je pripet razmazati podvrženi diastazni inkubaciji, 60 min. pri sobni temperaturi za selektivno odstranitev glikogena. Po pranju z destilirano vodo se obdela po običajni metodi.

Vrednotenje rezultatov reakcije PAS

Glikogen, pobarvan v škrlatno rdečo barvo, se pojavlja v obliki zrn ali raztreseno. Za nadzor reakcije se uporabljajo zreli razmazi granulocitov. Poleg glikogena CHIC pozitivno reakcijo dajejo tudi druge snovi ogljikovih hidratov, kot so mucin, mukoproteini, cerebrozidi, fibrin. Glikogen se loči od teh sestavin s predhodno obdelavo z diastazo, po kateri glikogen ni več obarvan.

AT granulociti glikogen je razpršen že na stopnji promielocitov in se začne povečevati, ko zori. V normalnih pogojih so limfociti negativni ali jih lahko 20% vsebuje več majhnih zrnc glikogena. Monociti so negativni ali imajo fino zrnatost.

Intenzivnost barvanje določeno polkvantitativno. V reakciji se CHIC odraža v obliki glikogenskega indeksa ali povprečnega reakcijskega indeksa (Astaldi). Normalni glikogenski indeks se giblje od 0,10 do 0,30. Običajno imajo samo patološki limfociti stopnjo obremenitve nad 3.

Navedena je bila kot metoda Schickove reakcije:
a) Pri diferencialni diagnozi nekaterih citoloških tipov akutne levkemije:
- Mieloblasti in promielouitis so PAS-negativni ali pridobijo šibko difuzno barvo. Auerjeva telesa dajejo pozitivno reakcijo, ki oslabi po prebavi s slino.
- Limfoblasti pri akutni levkemiji in limfosarkomu dajejo ostro PAS-pozitivno reakcijo v obliki zrn ali velikih blokov glikogena.
- Eritroblasti pri eritremiji in akutni eritrolevkemiji dajejo izrazito pozitivno razpršeno ali zrnato reakcijo, v nasprotju z normalnimi eritroblasti, ki so PAS negativni;
- Monocitoidni blasti so nedosledno šibko pozitivni, s fino zrnatostjo.

b) Za diagnostiko in spremljanje učinkovitosti zdravljenja kronične limfne levkemije: povišan nivo glikogena kaže na hudo obliko bolezni in slabo prognozo.
Rast glikogena v patoloških limfocitih, pojav, ki ni značilen za levkemijo, je razložen s povečanjem presnovne aktivnosti pri kateri koli vrsti limfoidne proliferacije.

c) Za razlikovanje Gaucherjevih celic od drugih makrofagov s kopičenjem.

Schickova reakcija kaže na prisotnost ali odsotnost potrebne ravni antitoksina v krvi za zaščito telesa pred davico. Trenutno se ta reakcija redkeje uporablja zaradi uvedbe bolj občutljivih metod (RPHA).

Schickovo reakcijo izvajamo pri otrocih, cepljenih proti davici z opravljenim cepljenjem in vsaj enim revakcinacijo. Pri starosti 13 let in več se lahko reakcija postavi tudi z neznano anamnezo cepljenja. Stanje imunosti proti difteriji se preveri ne prej kot 6 mesecev po zadnjem revakcinaciji in ne prej kot dva meseca po akutni bolezni.

Schickova reakcija je postavljena tudi v skupine, ki so neugodne za davico, na novo prispele otroke, kadar ni podatkov o cepljenju. Otroci z negativno Schickovo reakcijo ne prejmejo dodatnih cepljenj. Dodatna cepljenja, ne glede na imunski sloj v timu, se izvajajo za otroke s pozitivnimi in dvomljivimi reakcijami.

Rezultate Schickove reakcije vpišemo v evidenčni karton preventivnega cepljenja (f. 63) z navedbo datuma postavitve in testiranja reakcije, serije toksina in inštituta, ki je toksin proizvedel.

Za postavitev Shikove reakcije se uporablja razredčen aktivni (neogrevan) davični toksin. 0,2 ml vsebuje en odmerek Shik.

Za postavitev Schickove reakcije je treba uporabiti enogramske (tuberkulinske), skrbno preverjene brizge z natančno gradacijo, ki ne dopuščajo prehajanja tekočine med stenami brizge in njenim batom.

Strogo je prepovedano izvajati Shikovo reakcijo v prostorih, kjer je na ta dan potekala revakcinacija proti tuberkulozi, kot tudi uporaba brizg, igel in drugih pripomočkov, ki se uporabljajo pri cepljenju proti tuberkulozi.

Kožo na mestu injiciranja obrišemo z vato, navlaženo s 70% etilnim alkoholom. Toksin (0,2 ml) se injicira intradermalno v srednji del dlančne površine, običajno v levo podlaket. Uvajanje se izvaja počasi z znano napetostjo, značilno za intradermalno injiciranje tekočine. Injiciranje poteka pod zelo rahlim nagibom brizge proti podlakti, skoraj vzporedno s površino kože. Rez igle mora popolnoma vstopiti v kožo in sijati skozi povrhnjico. Na mestu injiciranja se mora oblikovati belkast, dobro omejen mehurček (papula) s premerom približno 1 cm, ki ima vtis na mestu lasnih mešičkov ("limonina lupina"). Ta mehurček (papula) izgine v 10-15 minutah. Če se mehurček (papula) ne oblikuje ali prehitro izgine ob injiciranju toksina, to pomeni, da je bila injekcija opravljena nepravilno, globoko in toksin, ki je prišel pod kožo, morda ne bo povzročil reakcije. Posledično lahko dobite napačen rezultat.

Reakcija se zabeleži po 72 ali 96 urah.Rezultati se ocenijo na naslednji način:

a) Shikova reakcija je pozitivna, če se na mestu injiciranja toksina pojavi rdečina in infiltracija. Označena je stopnja reakcije: "+" - če ima rdečica premer 1 -1,5 cm, (+ +" - če je 1,5 - 3 cm, "+ + +" - če je več kot 3 cm;

b) Shikova reakcija je negativna, če na mestu injiciranja toksina ni rdečice in infiltracije;

c) Schickova reakcija je dvomljiva, če rdečina in infiltrat med vnosom toksina nista jasno izražena ali če je pri izraziti reakciji premer rdečine približno 0,5 cm (označeno z "±").

Kontraindikacije za pripravo Schickove reakcije: spazmofilija, epilepsija, pustularne bolezni, stik z bolniki z virusnim hepatitisom, bronhialna astma.