Šta je reakcija hemaglutinacije? Reakcija inhibicije hemaglutinacije u virologiji
HEMAGLUTINACIJA
hemaglutinacija(od grč. háima krv i lat. agglutinatio lepljenje), lepljenje i taloženje eritrocita pod uticajem bakterija, virusa, toksina i dr., sposobnih da se adsorbuju na površini eritrocita, kao i hemaglutinina. Eritrociti jedne životinje mogu biti aglutinirani serumom druge zbog prisustva normalnih izohemaglutinina (antitijela) u njima. Uz pomoć reakcije G. instalirati. Fenomen G. koristi se u mikrobiološkim i imunološkim studijama.
Razlikovati direktno, ili aktivno, i indirektno ili pasivno, G. Pravo G. zbog direktnog djelovanja bakterijskih i virusnih agenasa na eritrocite. Istovremeno, hemaglutinini, koristeći enzim mucinazu, stupaju u interakciju s receptorima mukoproteazne prirode koji se nalaze na površini eritrocita, uzrokujući adsorpciju antigena. Kao rezultat toga, suspenzija eritrocita (na primjer, piletina) formira širok talog u obliku kišobrana s neravnim rubovima. Ova reakcija nije specifična, odvija se bez sudjelovanja imunološkog seruma. direktno G. koristi se u serološkim studijama, posebno u određivanju radnog razblaženja antigena koji se koristi u reakciji inhibicije G., koji se zasniva na odlaganju hemaglutinirajućeg djelovanja antigena imunološko specifičnog seruma. direktno G. koristi se i za približnu dijagnozu nekih virusnih bolesti (influenca konja, ptičja kuga, Newcastle bolest, pačja gripa). indirektno G.(RNGA) se zasniva na sposobnosti senzibiliziranih eritrocita (adsorpcijom antigena na njima) da aglutiniraju sa homolognim antitijelima imunog seruma. Zbog visoke osjetljivosti i specifičnosti indirektnih G. koristi se za dijagnosticiranje mnogih virusnih, bakterijskih i rikecioznih bolesti. Postoji nekoliko modifikacija indirektnog G. reakcije inhibicije, odgode, neutralizacije antitijela itd. Uz pomoć RNHA i njegovih modifikacija, antitijela u krvnom serumu životinja i ljudi (pri korištenju eritrocita senzibiliziranih poznatim antigenom) i antigena (kada se koriste eritrociti senzibilizirani određenim antitijela) mogu se otkriti. Za reakciju se koriste isprani eritrociti različitih životinjskih vrsta (najčešće eritrociti ovaca i piletina). Sposobnost eritrocita da adsorbiraju velike molekularne antigene proteinske prirode povećava se nakon njihovog tretmana taninom. Da bi se produžio rok trajanja eritrocita, oni se konzerviraju formalinom. Dijagnostikumi dobiveni iz formaliziranih eritrocita mogu zadržati svoju aktivnost dugo vremena. U prisustvu gotovih dijagnostikuma eritrocita, formulacija reakcije je znatno pojednostavljena. U veterinarskoj praksi RNGA se koristi za dijagnosticiranje nekih (uglavnom virusnih) životinjskih bolesti - klasične kuge živine, Newcastleske bolesti, kravljih boginja, konjske gripe, svinjske i pačje gripe, puloroze - ptičjeg tifusa itd. Vidi također,.
književnost:
Laboratorijska istraživanja u veterinarskoj medicini, M., 1971;
Priručnik o mikrobiološkim i virološkim metodama istraživanja, ur. M. O. Birger 2. izdanje, M., 1973.
Veterinarski enciklopedijski rječnik. - M.: "Sovjetska enciklopedija". Glavni urednik V.P. Shishkov. 1981 .
Sinonimi:Pogledajte šta je "HEMAGLUTINACIJA" u drugim rječnicima:
hemaglutinacija- hemaglutinacija... Pravopisni rječnik
hemaglutinacija- gužva, agluacija Rječnik ruskih sinonima. hemaglutinacija imenica, broj sinonima: 2 aglutinacija (3) … Rečnik sinonima
HEMAGLUTINACIJA- (od hemo... i lat. agglutinatio veza) vezivanje i taloženje eritrocita suspendovanih u tečnosti pod uticajem različitih agenasa, na primer, antitela, bakterija ili virusa. Test hemaglutinacije se koristi za dijagnozu ... ... Veliki enciklopedijski rječnik
Hemaglutinacija- proces lijepljenja eritrocita u agregate vidljive golim okom. G. uzrok: 1) At do eritrocita i heterofilnog Ag; 2) Ab do Ag, strano za eritrocite, adsorbovano na njihovoj površini (vidi pasivna reakcija hemaglutinacije); 3) ... Mikrobiološki rječnik
HEMAGLUTINACIJA- HEMAGLUTINACIJA, aglutinacija (skupljanje) eritrocita kada se pomiješaju sa homolognim serumima. Ako se ljudski eritrociti zamijene serumom iste osobe, onda će se mućkanjem dobiti uniformna suspenzija. Ako crvena krvna zrnca jedne osobe ... ... Velika medicinska enciklopedija
hemaglutinacija- Fenomen koji leži u osnovi metode za određivanje antitela, zasnovan na njihovoj aglutinaciji eritrocita kao rezultat vezivanja ili za antigene samih eritrocita, ili za druge antigene veštački pričvršćene za površinu eritrocita. ... Priručnik tehničkog prevodioca- (hem + aglutinacija) aglutinacija eritrocita... Veliki medicinski rječnik
Hemaglutinacija- sa grčkog. haima krv i lat. agglutinatio aglutination), proces aglutinacije i naknadne sedimentacije crvenih krvnih zrnaca; uzrokovane hemaglutininima (vidi. Hemaglutinini), bakterijama i virusima, agensima koji se mogu adsorbirati na ... ... Velika sovjetska enciklopedija
hemaglutinacija- lijepljenje (aglutinacija) eritrocita. Razvija se, uključujući i transfuziju nekompatibilne krvi.
Produžena reakcija aglutinacije (RA). Za određivanje AT u pacijentovom krvnom serumu staviti produžena reakcija aglutinacije (RA). Da bi se to postiglo, nizu razrjeđenja krvnog seruma dodaje se dijagnostikum - suspenzija ubijenih mikroorganizama ili čestica s adsorbiranim Ag. Maksimalno davanje razblaženja aglutinacija Ag, nazvan titar krvnog seruma.
Vrste reakcija aglutinacije (RA) za otkrivanje AT - test kapi krvi na tularemiju (sa primjenom dijagnostikuma na kap krvi i pojavom vidljivih bjelkastih aglutinata) i Huddlesonove reakcije na brucelozu (sa dijagnostikumom obojenim gentian violetom nanesenim na kap krvnog seruma).
Približna reakcija aglutinacije (RA)
Za identifikaciju izolovanih mikroorganizama, približni RA se stavlja na staklena stakalca. Da bi se to postiglo, kultura patogena se dodaje kapi standardnog dijagnostičkog antiseruma (u razrjeđenju 1:10, 1:20). Ako je rezultat pozitivan, daju detaljnu reakciju sa povećanjem razrjeđenja antiseruma.
reakcija smatra se pozitivnim ako se primijeti aglutinacija u razrjeđenjima koja su blizu titra dijagnostičkog seruma.
OAS. Somatski O-Ag termički su stabilni i podnose ključanje 2 h. U interakciji sa AT formiraju sitnozrnate agregate.
N-Ag. H-Ag (flagellate) termolabilan i brzo se uništava na 100 °C, kao i pod dejstvom etanola. U reakcijama s H-antiserumom, nakon 2 sata inkubacije, formiraju se labave velike pahuljice (nastale od bakterija koje se lijepe sa flagelama).
Vi Ar bakterija tifusa je relativno termostabilna (izdrži temperaturu od 60-62 ° C 2 sata); kada se inkubira sa Vi-antiserumom, formira se sitnozrnasti aglutinat.
Direktne reakcije hemaglutinacije
Najjednostavniji od ovih reakcije - aglutinacija eritrociti, ili hemaglutinacija, koji se koriste za određivanje krvnih grupa u sistemu AB0. Za utvrđivanje aglutinacija(ili njegovog odsustva) koriste se standardni antiserumi sa anti-A i anti-B aglutininima. Reakcija se naziva direktnom, jer su proučavani antigeni prirodne komponente eritrocita.
Podijeljeno sa direktna hemaglutinacija mehanizam ima virusnu hemaglutinaciju. Mnogi virusi mogu spontano aglutinirati eritrocite ptica i sisara; njihov dodatak suspenziji eritrocita uzrokuje stvaranje agregata iz njih.
RTGA princip sastoji se u tome da se u epruveti pomiješaju jednake količine krvnog seruma i virusne suspenzije, a nakon izlaganja se dodatkom suspenzije eritrocita utvrđuje da li je virus sačuvan u smjesi. Aglutinacija eritrocita ukazuje na prisustvo, a odsustvo hemaglutinacije ukazuje na odsustvo virusa u smjesi. Nestanak virusa iz mješavine virus + serum smatra se znakom interakcije seruma i antitijela na virus.
Ali antitijela stupaju u interakciju s antigenima u strogo definiranim kvantitativnim omjerima. Dakle, da bi određena količina virusa bila lišena hemaglutinirajuće sposobnosti, potreban je određeni minimum antitijela, a kako je jedna od komponenti RTHA uvijek nepoznata, potrebno je reakciju staviti u niz epruveta. s različitim dozama antitijela i istim dozama virusa, ili obrnuto. To se postiže uzimanjem različitih razrjeđenja seruma i istog razrjeđenja virusa ili različitih razrjeđenja virusa i istog razrjeđenja seruma.
RTGA omogućava rješavanje sljedećih zadataka: određivanje titra antitijela na hemaglutinirajući virus u serumu; identificirati nepoznati hemaglutinirajući virus iz poznatih seruma; utvrditi stepen antigenske veze dva virusa.
Prednosti RTGA: jednostavnost tehnike, brzina, sterilan rad nije potreban, specifičnost, niska cijena. Nedostatak: RTGA je moguć samo kod hemaglutinirajućih virusa.
Princip titracije antitela u RTGA sastoji se od sljedećeg:
- pripremiti seriju uzastopnih (obično 2 puta) razblaženja test seruma u jednakim količinama (obično 0,25 ili 0,2 ml);
– svakom razblaženju dodati iste količine homolognog virusa u titru od 4 HAU;
– smjese se drže određeno vrijeme na određenoj temperaturi (za virus Newcastle bolesti 40-60 minuta na sobnoj temperaturi);
– svim smešama se dodaju jednake količine 1% suspenzije ispranih eritrocita;
- nakon izlaganja, hemaglutinacija u svakoj smjesi se procjenjuje u križevima.
Reakcija uključuje kontrolu seruma, virusa i eritrocita.
To najveće razrjeđenje seruma, koje još uvijek potpuno inhibira hemaglutinaciju, uzima se kao pokazatelj titra antitijela u ovom serumu.
Upotreba u virologiji reakcije hemadsorpcije.
RGad. Hemadsorpciju - vezu eritrocita s površinom ćelija zahvaćenih virusom - prvi su otkrili Vogel i Shchelokov (1957) na kulturi tkiva inficiranoj virusom gripe. Ovaj fenomen se zasniva na afinitetu virusnih receptora koji se nalaze na površini zahvaćene ćelije sa receptorima eritrocita, što dovodi do njihovog međusobnog povezivanja sličnog reakciji hemaglutinacije. Prednost ove reakcije je što postaje pozitivna i prije pojave izrazitih citopatskih promjena u inficiranim stanicama.
RGAd metodologija sastoji se od sljedećeg. Trećeg do četvrtog dana nakon infekcije ćelije uzimaju se dvije epruvete sa istom ćelijskom kulturom, od kojih je jedna inficirana materijalom koji sadrži virus, a druga je kontrolna epruveta. Tečnost kulture se iscedi iz obe epruvete i u obe epruvete se doda 2-3 kapi 0,5% suspenzije ispranih eritrocita. Obje epruvete se ostave 5-10 minuta tako da se eritrociti nađu na površini ćelija (postavljene vodoravno na sto), a zatim se lagano isperu fiziološkim rastvorom i pregledaju pod mikroskopom (malo uvećanje). U kontrolnoj epruveti eritrociti se potpuno uklanjaju fiziološkom otopinom, a dio preostalih pluta s tekućinom. Ako se eritrociti u inficiranoj epruveti ne uklone fiziološkom otopinom i ne plutaju, već su pričvršćeni za površinu stanica, RHAd treba smatrati pozitivnim.
Ovisno o virusu i vrsti stanica, raspored crvenih krvnih stanica može biti trostruk:
- eritrociti se adsorbiraju samo na periferiji ćelijskog sloja u obliku "ogrlice" (virus afričke svinjske kuge);
- eritrociti se nalaze na ćelijskom sloju u žarištu ili klasterima (virus influence);
- eritrociti su difuzno locirani na ćelijskom sloju (virus parainfluence).
Svaki virus je u stanju da adsorbuje crvena krvna zrnca određenih životinjskih vrsta.
Serološka dijagnoza virusnih bolesti povećanjem titra antitijela u parnim krvnim serumima.
Reakcija hemaglutinacije (RGA) i reakcija inhibicije hemaglutinacije (HITA), mehanizam, komponente i primjena reakcija.
Osnova reakcije hemaglutinacije je fenomen aglutinacije eritrocita, koji nastaje pod uticajem različitih faktora. Razlikovati direktnu i indirektnu hemaglutinaciju.
Prvo se eritrociti isperu izotoničnom otopinom natrijevog klorida, zatim se, ako je potrebno (kada se koriste antigeni proteinske prirode), tretiraju otopinom tanina 1:20 000 i senzibiliziraju topivim antigenima. Nakon ispiranja puferiranom izotoničnom otopinom natrijum hlorida, antigen eritrocita je spreman za upotrebu.
Test serumi se razblažuju izotoničnom otopinom natrijum hlorida u epruvetama ili posebnim plastičnim pločama sa rupama, a zatim se svakom razblaženju seruma dodaje eritrocitni dijagnostikum. Rezultati reakcije indirektne hemaglutinacije uzimaju se u obzir prirodom sedimenta eritrocita formiranog na dnu epruvete. Rezultat reakcije se smatra pozitivnim, pri čemu eritrociti ravnomjerno pokrivaju cijelo dno epruvete. Uz negativnu reakciju, crvena krvna zrnca u obliku malog diska ili "dugma" nalaze se u središtu dna epruvete.
Glavne komponente RP-a:
A) rastvorljivi antigen
B) Specifična antitela (serum)
(RTGA) je metoda za identifikaciju virusa ili detekciju antivirusnih antitijela u krvnom serumu pacijenta, zasnovana na fenomenu odsustva aglutinacije eritrocita lijekom koji sadrži virus u prisustvu krvnog seruma koji je na njega imun.
na osnovu blokade, supresije antigena virusa antitijelima imunološkog seruma, uslijed čega virusi gube sposobnost aglutinacije crvenih krvnih stanica.
RTHA se koristi za dijagnostiku mnogih virusnih bolesti čiji uzročnici (gripa, ospice, rubeola, krpeljni encefalitis itd.) mogu aglutinirati eritrocite raznih životinja.
Mehanizam. Tipizacija virusa se vrši testom inhibicije hemaglutinacije (HITA) sa setom seruma specifičnih za tip. Rezultati reakcije se uzimaju u obzir odsustvom hemaglutinacije. Podtipovi virusa A sa antigenima H0N1, H1N1, H2N2, H3N2 itd.
mogu se razlikovati u RTGA sa setom homolognih seruma specifičnih za tip.
U srži reakcije hemaglutinacije leži u fenomenu aglutinacije eritrocita, koji nastaje pod uticajem različitih faktora.
Razlikovati direktnu i indirektnu hemaglutinaciju.
U reakciji direktne hemaglutinacije, eritrociti se lijepe zajedno kada se određeni antigeni, kao što su virusi, adsorbiraju na njih.
U serološkim studijama koristi se direktna reakcija inhibicije hemaglutinacije, kada se virus izoliran od pacijenta neutralizira specifičnim imunološkim serumom, a zatim kombinira s crvenim krvnim stanicama.
Odsustvo hemaglutinacije ukazuje na podudarnost virusa i korištenog imunološkog seruma.
Reakcija indirektne hemaglutinacije (pasivna hemaglutinacija) se opaža kada se eritrociti prethodno tretirani (senzibilizirani) različitim antigenima dopune imunološkim serumom ili serumom pacijenta koji ima odgovarajuća antitijela.
Postoji specifično vezivanje eritrocita, njihova pasivna hemaglutinacija.
Reakcija indirektne, ili pasivne, hemaglutinacije je superiorna po osjetljivosti i specifičnosti u odnosu na druge serološke metode, a koristi se u dijagnostici infekcija uzrokovanih bakterijama, rikecijama i protozoama.
Metoda postavljanja reakcije indirektne hemaglutinacije sastoji se od nekoliko faza.
Prvo se eritrociti isperu izotoničnom otopinom natrijevog klorida, zatim se, ako je potrebno (kada se koriste antigeni proteinske prirode), tretiraju otopinom tanina 1:20 000 i senzibiliziraju topivim antigenima.
Nakon ispiranja puferiranom izotoničnom otopinom natrijum hlorida, antigen eritrocita je spreman za upotrebu. Test serumi se razblažuju izotoničnom otopinom natrijum hlorida u epruvetama ili posebnim plastičnim pločama sa rupama, a zatim se svakom razblaženju seruma dodaje eritrocitni dijagnostikum.
Rezultati reakcije indirektne hemaglutinacije uzimaju se u obzir prirodom sedimenta eritrocita formiranog na dnu epruvete. Rezultat reakcije se smatra pozitivnim, pri čemu eritrociti ravnomjerno pokrivaju cijelo dno epruvete. Uz negativnu reakciju, eritrociti u obliku malog diska ili "dugma" nalaze se u sredini dna epruvete.
Reakcija inhibicije hemaglutinacije- serološka reakcija zasnovana na sposobnosti antitijela da spriječe aglutinaciju eritrocita hemaglutinirajućim tipovima virusa (adenovirusi, arbovirusi, neki enterovirusi, virusi gripe i parainfluence, ospice, reovirusi).
Specifična antivirusna antitijela stupaju u interakciju s površinskim molekulima hemaglutinina viriona ovih virusa i blokiraju njihovo vezivanje za komplementarne molekule membrane eritrocita.
Reakcija se u posljednje vrijeme široko koristi u kliničkim virološkim laboratorijama za određivanje titara specifičnih antitijela na određene viruse, kao i za serološku identifikaciju i tipizaciju izolata virusa iz kliničkog materijala pacijenata.
Upotreba je donekle ograničena zbog prisustva u krvnom serumu ljudi nespecifičnih inhibitora virusa, kao i prirodnih antitijela - aglutinina.
Reakcija neutralizacije - reakcija inhibicije hemaglutinacije (RTGA).
RTGA se primjenjuje:
-za serotipizaciju virusa;
- za serodijagnostiku infekcija.
Postoje dva načina postavljanja:
- metoda kapanja na staklo (približna reakcija), koja se koristi za serokopiranje virusa;
- raspoređeni u epruvetama.
Mehanizam.
Neki virusi (na primjer, gripa) imaju hemaglutinin, koji uzrokuje aglutinaciju eritrocita različitih životinja, ovisno o vrsti virusa.
U prisustvu antitijela u serumu - antihemaglutinina, uočava se inhibicija aktivnosti virusa.
RTGA.
Svrha: serotipizacija virusa influence A
Komponente:
1. Materijal koji se proučava je alantoična tečnost pilećeg embriona,
2. Dijagnostički serumi specifični za tip virusa gripe,
3. 5% suspenzija pilećih eritrocita.
4.
Saline.
Reakcija se stavlja na staklo metodom kap. Na staklo se nanese 1 kap dijagnostičkog seruma i test materijala, pomiješa se, zatim se doda 1 kap suspenzije eritrocita. Kod pozitivne reakcije uočava se homogeno crvenilo, a kod negativne reakcije pojavljuju se crvene ljuspice (hemaglutinacija).
Prethodna31323334353637383940414243444546Sljedeća
karakteristike virusa gripa. Epidemiologija i dijagnostika gripe. Upotreba RTGA za serotipizaciju virusa gripe. Preparati za specifičnu profilaksu i liječenje.
Gripa ili gripa je akutna zarazna bolest koju karakterizira oštećenje sluzokože gornjih disajnih puteva, groznica, opća intoksikacija i poremećaj kardiovaskularnog i nervnog sistema.
Gripu karakterizira sklonost epidemijskom i pandemijskom širenju zbog velike zaraznosti i varijabilnosti patogena.
karakteristike patogena. Patogeni - virusi gripa pripadaju porodici. Orthomyxoviridae, rodovi Influenzavirus A, B i Influenzavirus C. Virusi influence su RNA virusi. Virus gripa tipa A izolovali su 1933. W. Smith, K. Andrews, P. Laidlaw. Godine 1940. T.
Primjena metode hemaglutinacije u virologiji.
Francis i R. Medzhill izolovali su viruse gripe tipa B, 1949. R. Taylor - tip C. U Rusiji su prvi virusi gripa izolovani 1936. od strane A. A. Smorodinceva i svrstani u tip A. Morfologija. Virusi gripa imaju sferni oblik (kuglasti oblik) - 80 - 120 nm, rjeđe imaju filamentni oblik. Sastoje se od: 1) jezgra - nukleokapsida spiralnog tipa simetrije (jednolančani linearni "-" -lanac RNK + proteinski kapsid); 2) bazalna membrana - vanjska lipoproteinska membrana - superkapsid.
Na površini membrane nalaze se glikoproteini (u obliku šiljaka i resica) 2 tipa: 1) hemaglutinin - podstiče vezivanje za ćelijske receptore; 2) neuraminidaza - potiče oslobađanje virusa iz ćelije. Uzgoj. Za uzgoj se koriste pileći embriji, primarne tripsinizirane ćelijske kulture, a ponekad i laboratorijske životinje.
Najprikladniji model su pileći embrioni od 10-12 dana starosti. Omogućava vam da dobijete velike količine virusa, koji je neophodan u proizvodnji vakcina i bakterijskih preparata.
Infekcija se izvodi u alontoičnoj šupljini, na horion-alontoičnoj membrani, u amnionskoj šupljini, u amnionu. Prisustvo virusa u pilećem embrionu otkriva se testom hemaglutinacije. Antigenska struktura. Virusi imaju unutrašnji antigen - S i površinske antigene: HA-hemaglutinin i NA-neuraminidazu. S-antigen - grupno specifičan, zajednički za cijeli tip, prema ovom antigenu, virusi gripa se dijele na tipove A, B i C. Ovo je stabilan (nepromjenjivi) antigen koji fiksira komplement.
HA i NA antigeni su specifični antigeni. HA antigen uzrokuje stvaranje antitijela koja neutraliziraju viruse i aglutinaciju crvenih krvnih stanica.
NA antigen uzrokuje stvaranje antitijela koja djelomično neutraliziraju viruse.
Virus tipa B je manje varijabilan, dok je tip C visoko stabilan.
toksična svojstva. Toksičan učinak virusa na organizam (glavobolja, bol u mišićima, groznica, kataralni fenomeni) nastaje zbog proteina virusa (sama virusna čestica). Ovo djelovanje je strogo specifično i neutralizira se samo imunološkim serumom odgovarajućeg tipa ili podtipa ili serumom oboljelih. otpor. Virusi gripa su osjetljivi na UV zrake, sredstva za dezinfekciju (formalin, alkohol, fenol, hloramin) i rastvarače masti.
U tečnom mediju umiru na temperaturi od 50 - 60 ° C nekoliko minuta. Na sobnoj temperaturi u vazduhu virusi ostaju infektivni nekoliko sati. Dugo se čuvaju u sušenom obliku, au smrznutom stanju (-70 ° C) ne samo da ostaju dugo, već i ne gube svoju virulentnost.
osetljivost životinja. U prirodnim uslovima virusi tipa A inficiraju ljude i životinje (konji i svinje obolevaju), dok virusi tipa B i C inficiraju samo ljude. Među laboratorijskim životinjama, virusima su osjetljivi bijeli miševi, afrički tvorovi, sirijski hrčci i majmuni.
Bolest kod životinja karakterizira oštećenje pluća, groznica i može rezultirati uginućem životinja. Epidemiologija bolesti. Izvor infekcije je bolesna osoba sa klinički izraženim ili asimptomatskim oblikom. Bolesna osoba ispušta virus u okolinu pri kašljanju, razgovoru, kijanju sa kapljicama pljuvačke, sluzi, sputuma već u periodu inkubacije.
Pacijent postaje zarazan 24 sata prije pojave glavnih simptoma i predstavlja opasnost od epidemije u roku od 48 sati nakon njihovog nestanka.
Mehanizam prijenosa je aerogen. Put prenosa je vazdušni. Osjetljivost ljudi na gripu je vrlo visoka. Sve starosne grupe su bolesne, uglavnom zimi. Djeca i starije osobe su najosjetljivije. Naziv bolesti odražava karakteristike epidemiologije: francuska gripa. gripper - grab, influenca - od talijanskog. Influenza di freddo - uticaj hladnoće.
Od svih akutnih respiratornih bolesti, gripa je najmasovnija i najteža bolest. Pandemije i epidemije gripa pokrivaju do 30-50% ili više svjetske populacije, nanoseći ogromnu štetu zdravlju i ekonomiji zemalja. Prvi opisi epidemija gripa datiraju iz 12.-14. Pojavu pandemija i velikih epidemija uzrokuje virus gripe tipa A, što je zbog velike varijabilnosti virusa povezano s pojavom novog podtipa kao rezultat promjene antigena.
Između pandemija, epidemije se javljaju svake 1,5-2 godine, što je povezano s antigenskim driftom virusa. Godine 1918. pandemiju španske gripe (1,5 milijardi ljudi oboljelo, 20 miliona umrlo) izazvao je virus gripa A1. Primarno registrovana u Španiji, ova pandemija je zahvatila gotovo cjelokupnu populaciju Zemlje; bolest je okarakterisana razvojem izuzetno teške hemoragijske pneumonije sa rekordnom stopom mortaliteta (do 1% svih slučajeva).
Godine 1957. "azijska" pandemija (razboljelo 2 milijarde ljudi) uzrokovana je novim podtipom - podtipom A2. Godine 1968. pandemiju "Hong Konga" (1 milijarda ljudi se razboljelo) izazvao je novonastali podtip - podtip A3. U pravilu, nova varijanta virusa istiskuje raniji cirkulirajući varijetet iz ljudske populacije.
Ali 1977. godine, nakon 20 godina pauze, tip A1 se neočekivano „vratio“, što je dovelo do velike epidemije. Posljedično, potisnute varijante virusa gripe opstaju i, u određenim intervalima, mogu ponovo izazvati epidemiju. Virus tipa B izaziva lokalne epidemije, dok tip C ne izaziva epidemije. Patogeneza i klinika bolesti. Ulazna kapija su gornji respiratorni trakt. Virus prodire u epitelne ćelije sluzokože i umnožava se u njima.
Utjecaj virusa na epitelne stanice uzrokuje njihovu nekrozu i deskvamaciju (odbacivanje) epitela, uslijed čega sluznica postaje propusna za viruse i bakterije. Prodiru u krvotok i šire se po cijelom tijelu.Viremija je praćena višestrukim lezijama kapilarnog endotela sa povećanjem njihove propusnosti.
U težim slučajevima dolazi do opsežnih krvarenja u plućima, miokardu, parenhimskim organima. Produkti raspadanja oštećenih ćelija i virusni proteini imaju toksično dejstvo na različite organe i organske sisteme. Toksini virusa snažno depresiraju centralni nervni sistem, a iako proces ne traje dugo (3-5 dana), bolesna osoba dugo ostaje oslabljena i svaka sekundarna infekcija se pridruži oslabljenom tijelu i nastaju komplikacije: influenza upala pluća , akutni plućni edem, oštećenje bubrega, srca, bronhija.
Česta komplikacija gripe je bakterijska pneumonija (streptokoki grupe B). Tokom pandemije španske gripe ljudi su umirali uglavnom od sekundarne bakterijske upale pluća.
U patogenezi gripe nije važna samo intoksikacija, već i alergizacija, kao i kršenje funkcionalnih svojstava imunokompetentnih stanica s razvojem imunodeficijencije. Period inkubacije je nekoliko sati - 1-3 dana. Karakterizira ga akutni početak, povišena temperatura do 37,5 - 38 °C, opća intoksikacija, izražena u malaksalosti, glavobolji, bolovima u očnim jabučicama, upalnim procesima respiratornog trakta različite težine (rinitis, laringitis, traheitis, faringitis).
Grozničavo stanje sa gripom bez komplikacija traje 5-6 dana. Imunitet. Nakon bolesti formira se tip-specifičan i soj-specifičan imunitet, koji obezbjeđuju specifični i nespecifični ćelijski i humoralni faktori. Od velikog značaja su antitela Ig A. Unakrsni imunitet se ne razvija, nakon preležane gripe tipa A1 možete dobiti grip tipa A2 itd. Nakon virusa tipa imuniteta - 1-2 godine, nakon virusa tipa B - 3-5 godina.
Pasivni prirodni imunitet - kod dece do 8 - 11 meseci. Zbog visoke antigenske varijabilnosti virusa, oporavak ne dovodi do razvoja postojanog imuniteta na reinfekciju.
Laboratorijska dijagnostika. Materijal koji se proučava: bris-otisci iz nosne sluznice, nazofaringealni iscjedak, komadići pluća, mozak u slučaju smrtnog ishoda.
Dijagnostičke metode: 1) metoda citorhinoskopije - otkrivanje intracelularnih inkluzija specifičnih za virus - kada se boje pioktaninom pod mikroskopom, u ćelijama cilijarnog epitela vidljive su jarkocrvene inkluzije virusa gripa; 2) virološka metoda - izolacija virusa gripa iz ljudskog organizma inficiranjem pilećih embriona ispiranjem iz nazofarinksa pacijenta; indikacija (prisutnost) virusa se vrši pomoću RGA (virusi gripe aglutiniraju eritrocite ljudi i raznih životinja), identifikacija virusa se vrši u fazama: tip se utvrđuje u RSC, podtip hemaglutinina se određuje u RTGA, a podtip neuraminidaze se određuje u reakciji inhibicije aktivnosti enzima; 3) serološka metoda - otkrivanje porasta titra (4 puta) specifičnih antitela u krvnom serumu pacijenta primenom RSK, RTGA, PH u ćelijskoj kulturi, reakcija precipitacije gela, ELISA; 4) biološka metoda - intranazalna infekcija miševa - unošenje materijala u pluća pod etarskom anestezijom; miševi uginu nakon 2-3 dana kao posljedica upale pluća; 5) ekspresna dijagnostika - detekcija virusnog antigena pomoću RIF-a.
Liječenje i prevencija.
Za prevenciju i liječenje u prvim danima bolesti koristi se humani leukocitni interferon (intranazalno). U terapijske svrhe koriste se antivirusni lijekovi - rimantadin (influenca tipa A), adapromin, virazol i imunomodulatorni lijekovi - dibazol, prodigiosan, levomizol.
Kod teške gripe, posebno kod dece, koristi se donorski antiinfluenza imunoglobulin, kao i lekovi - inhibitori ćelijskih proteaza (gordox, contrical, aminokaproična kiselina).
Posebna prevencija. Koriste se sledeći antivirusni lekovi i imunomodulatori, kao i žive i inaktivisane vakcine: 1) žive monovakcine za oralnu primenu - atenuirani sojevi trenutno cirkulišućih virusa (A1, A3 i B); pokazuju najveću imunogenost; 2) vakcine sa celim virionom od virulentnih sojeva inaktiviranih formaldehidom ili UV zracima; 3) podjedinične vakcine protiv gripa samo od površinskih antigena - HA i NA antigena (imaju minimalnu reaktogenost).
Da bi se dobile vakcine, virusi se uzgajaju u pilećim embrionima i u kulturi ćelija pilećih embriona.
Uvođenjem vakcina formira se lokalni i humoralni imunitet. Vakcinacija se provodi u periodima najvećeg rizika od razvoja epidemija. Pogodniji je za mlade i starije ljude. Upotreba ubijenih vakcina zahteva godišnju revakcinaciju; njihova efikasnost ne prelazi 60-70%.
Jer Budući da se često uočavaju antigenske varijacije patogena, skup antigena odgovarajućeg virusa za imunizaciju može se odrediti tek nakon početka izbijanja.
Ulaznica 15.
Reakcija hemaglutinacije (RGA).
U laboratoriji se koriste dvije različite reakcije hemaglutinacije.
Prvi RGA se odnosi na serološki. U ovoj reakciji, eritrociti se aglutiniraju u interakciji s odgovarajućim antitijelima (hemaglutininima).
Reakcija se široko koristi za određivanje krvnih grupa.
Druga RHA nije serološka. U njemu nije uzrokovana aglutinacija eritrocita
antitijela, već posebne tvari koje stvaraju virusi. Na primjer, virus gripe aglutinira eritrocite pilića i zamoraca, virus dječje paralize aglutinira eritrocite ovaca. Ova reakcija omogućava procjenu prisutnosti određenog virusa u ispitivanom materijalu.
Reakcija se provodi u epruvetama ili na posebnim pločama s jažicama.
Materijal koji se testira na prisustvo virusa se razblaži izotoničnom otopinom od 1:10 do 1:1280; 0,5 ml svakog razblaženja se pomeša sa jednakom zapreminom 1-2% suspenzije eritrocita. U kontroli se 0,5 ml eritrocita pomiješa sa 0,5 ml izotonične otopine. Epruvete se stave u termostat na 30 minuta, a ploče ostave na sobnoj temperaturi 45 minuta.
Obračun rezultata. S pozitivnim rezultatom reakcije na dno epruvete ili bunarčića, talog eritrocita sa zaobljenim rubovima ("kišobran") pada, prekrivajući cijelo dno jažice.
Reakcija inhibicije hemaglutinacije
Ako je rezultat negativan, eritrociti formiraju gust talog sa glatkim rubovima („dugme“). Isti talog bi trebao biti pod kontrolom.
Intenzitet reakcije se izražava znakovima "+". Titar virusa je maksimalno razrjeđenje materijala u kojem dolazi do aglutinacije.
Reakcija inhibicije hemaglutinacije
Riječ je o serološkoj reakciji u kojoj specifična antivirusna antitijela, u interakciji s virusom (antigenom), neutraliziraju ga i oduzimaju mu sposobnost aglutinacije crvenih krvnih stanica, tj.
e. inhibiraju reakciju hemaglutinacije. Ova reakcija vam omogućava da odredite vrstu i vrstu virusa.
Postavka reakcije. 0,25 ml antivirusnog seruma pomiješa se sa jednakom količinom materijala koji sadrži virus. Smjesa se promućka i stavi u termostat na 30 minuta, nakon čega se dodaje 0,5 ml 1-2% suspenzije eritrocita.
Obračun rezultata. Uz pravilnu postavku eksperimenta u kontroli seruma i eritrocita, trebalo bi da se formira „dugme“ – nema faktora koji aglutinira eritrocite; u kontroli antigena formira se "kišobran" - virus je izazvao aglutinaciju eritrocita.
Ako je serum homologan virusu koji se proučava, formira se "dugme" - serum je neutralizirao virus.
Indirektna reakcija hemaglutinacije
Reakcija indirektne (pasivne) hemaglutinacije (RIGA) temelji se na činjenici da eritrociti, ako se na njihovoj površini adsorbira rastvorljivi antigen, stiču sposobnost aglutinacije u interakciji s antitijelima na adsorbirani antigen.
Postavka reakcije.
Serum se zagrijava 30 minuta na 56°C, razrjeđuje uzastopno u omjeru 1:10 - 1:1280 i sipa se u 0,25 ml u epruvete ili jažice, gdje se dodaju 2 kapi eritrocita sa adsorbiranim antigenima na njima.
Kontrole: suspenzija eritrocita sa adsorbiranim antigenima na njima sa očigledno imunim serumom, suspenzija eritrocita sa antigenima adsorbiranim na njima sa normalnim serumom; suspenzija normalnih eritrocita sa ispitivanim serumom.
U prvoj kontroli trebalo bi doći do aglutinacije, u drugoj i trećoj ne bi trebalo.
Test pitanja.
1. Na šta ukazuje pozitivan RGA rezultat između eritrocita i materijala testiranog na prisustvo virusa?
2. Hoće li doći do reakcije aglutinacije eritrocita ako im se doda virus i odgovarajući serum?
Kako se zove reakcija koja otkriva ovaj fenomen?
PRAKTIČNI RAD №12.
Reakcija vezivanja komplementa.
Reakcija vezivanja komplementa (RCT) zasniva se na činjenici da specifični kompleks antigen-antitelo uvek adsorbuje (veže) komplement na sebe.
Ova reakcija se široko koristi u identifikaciji antigena i serodijagnostici infekcija, posebno bolesti uzrokovanih spirohetama (Wassermannova reakcija), rikecijama i virusima.
PCS je složena serološka reakcija.
Uključuje komplement i dva sistema antigen-antitijelo. U suštini, to su dvije serološke reakcije.
Desno-bazni sistem se sastoji od antigena i antitela (jednog poznatog, drugog ne). Dodata mu je određena količina komplementa. Ako se antigen i antitijelo ovog sistema poklapaju, oni će se povezati i povezati komplimentom. Dobijeni kompleks je fino raspršen i nije vidljiv.
Formiranje ovog kompleksa poznato je uz pomoć drugog hemolitičkog ili indikatorskog sistema.
Uključuje ovčje eritrocite (antigen) i njihov odgovarajući hemolitički serum (antitijela), tj. gotov imuni kompleks. U ovom sistemu do lize eritrocita može doći samo u prisustvu komplementa. Ako je komplement vezan za prvi sistem, onda neće biti hemolize u drugom sistemu;
nema slobodne dopune. Odsustvo hemolize (sadržaj epruvete je zamućen ili se na dnu epruvete nalazi sediment eritrocita) evidentira se kao pozitivan rezultat RSK.
Ako u prvom sistemu antigen ne odgovara antitelu, onda se imunološki kompleks ne formira i kompliment će ostati slobodan. Ostajući slobodan, kompliment učestvuje u drugom sistemu, izazivajući hemolizu, rezultat RSK je negativan (sadržaj epruveta je providan - "lak krv").
Komponente, reakcije fiksacije komplementa:
Antigen - obično lizat, ekstrakt, hapten,
rjeđe suspenzija mikroorganizama.
2. Antitijelo - serum pacijenta.
3. Komplement - serum zamorca.
Antigen - eritrociti ovaca.
5. Antitelo - hemolizin na eritrocite ovaca.
6. Izotonični rastvor.
Zbog činjenice da RSC uključuje veliki broj složenih komponenti,
moraju se prethodno titrirati i uzeti u reakciju u tačnim količinama iu jednakim količinama: 0,5 ili 0,25 ml, rjeđe 0,2, 1,25 ili 1,0 ml (veći volumeni daju precizniji rezultat). Titracija komponenti reakcije se provodi u istoj zapremini kao i eksperiment, zamjenjujući nedostajuće sastojke izotoničnom otopinom.
Povezane informacije:
Pretraga web stranice:
Zasniva se na činjenici da eritrociti, na kojima su antigeni prethodno adsorbirani, stiču sposobnost aglutinacije u prisustvu homolognih seruma (antitijela).
U ovom slučaju eritrociti igraju ulogu nosilaca sa specifičnim determinantama, čija aglutinacija nastaje kao rezultat reakcije antigen + antitijelo.
Eritrociti, za čiju su površinu antigeni čvrsto vezani, nazivaju se eritrocitni antigeni dijagnostikum ili eritrociti senzibilizirani antigenom.
Druga vrsta RNHA - antitijela se adsorbiraju na površini eritrocita i njihova naknadna aglutinacija se događa u prisustvu homolognog antigena.
U ovom slučaju, takvi eritrociti se nazivaju dijagnostikom eritrocitnih antitijela, ili eritrociti senzibilizirani antitijelima.
Na osnovu ova dva temeljna metodološka pristupa razvijene su i koriste se mnoge modifikacije RNGA. Dakle, male standardne čestice lateksa se koriste kao nosači.
Reakcija inhibicije hemaglutinacije (HITA)
U ovom slučaju se reakcija naziva reakcija lateks aglutinacije (RLA) ili se koristi Staphylococcus aureus - reakcija koaglutinacije itd. Obično se dijagnostikumi eritrocita pripremaju u poduzećima biološke industrije, a glavno iskustvo RNGA se već postavlja u dijagnostičkim laboratorijama.
Priprema eritrocitnih dijagnostikuma uključuje sljedeće korake:
- fiksacija eritrocita formaldehidom ili glutarnim ili akrilnim aldehidima.
Tako obrađeni eritrociti se dugo čuvaju. Češće se u tu svrhu koriste eritrociti ovaca, ljudi, pilića itd.;
- tretman fiksiranih eritrocita otopinom tanina. Kao rezultat toga, eritrociti stječu svojstvo ireverzibilnog adsorbiranja proteina (virusa i antitijela) na svojoj površini;
- senzibilizacija taniziranih eritrocita virusima ili antitijelima.
Treba napomenuti da su metode za pripremu dijagnostikuma eritrocita za virusne infekcije različite.
Tehnika za postavljanje RNHA za otkrivanje i određivanje titra antitijela je sljedeća:
- uzastopnim 2-strukim razblaženjima seruma dodati jednake doze eritrocita senzibiliziranih antigenom;
- smjesa se ostavi 2-3 sata na sobnoj temperaturi ili 16-18 sati na 4 °C;
- uzeti u obzir rezultate.
Ako serum sadrži antitijela na virus kojim su eritrociti senzibilizirani, uočava se hemaglutinacija, koja se procjenjuje u križanjima.
Titar serumskih antitijela uzima se kao najveće razrjeđenje seruma koje još uvijek osigurava hemaglutinaciju za najmanje dva ukrštanja.
RNGA je praćen svim relevantnim kontrolama. Obično daju reakciju mikrometodom.
RNHA omogućava rješavanje sljedećih dijagnostičkih zadataka:
- otkriti antitijela i odrediti njihov titar u krvnom serumu pomoću poznatog eritrocitnog antigenskog dijagnostikuma;
- otkriti i identificirati nepoznati virus pomoću poznatog dijagnostikuma antitijela eritrocita.
Prednosti RNGA: visoka osjetljivost, laka tehnika podešavanja i brza reakcija.
Međutim, važno je napomenuti da postoje velike poteškoće u pripremi stabilnih dijagnostikuma eritrocita (visoka ovisnost o čistoći korištenih komponenti, potreba za odabirom načina fiksacije, tanizacije i senzibilizacije eritrocita za svaku vrstu virusa) .
Ako pronađete grešku, odaberite dio teksta i pritisnite Ctrl+Enter.
U kontaktu sa
Drugovi iz razreda
Koristi eritrocite ili neutralne sintetičke materijale (na primjer, čestice lateksa), na čijoj površini se adsorbiraju antigeni (bakterijski, virusni, tkivni) ili antitijela.
Njihova aglutinacija nastaje kada se dodaju odgovarajući serumi ili antigeni. RBC senzibilizirani antigenima nazivaju se antigenski eritrocitni dijagnostikum i koriste se za otkrivanje i titriranje antitijela. Eritrociti senzibilizirani antitijelima. nazivaju se imunoglobulinski eritrocitni dijagnostici i koriste se za otkrivanje antigena.
Reakcija pasivne hemaglutinacije koristi se za dijagnosticiranje bolesti uzrokovanih bakterijama (tifus i paratifus, dizenterija, bruceloza, kuga, kolera itd.), protozoama (malarija) i virusima (gripa, adenovirusne infekcije, virusni hepatitis B, ospice, krpeljni encefalitisa, krimske hemoragijske groznice i dr.), kao i za određivanje određenih hormona, za utvrđivanje preosjetljivosti pacijenta na lijekove i hormone, poput penicilina i inzulina.
Reakcija pasivne hemaglutinacije (RPHA).
Test pasivne hemaglutinacije je osjetljiva metoda serološke dijagnostike i koristi se za ranu i retrospektivnu dijagnozu, kao i za određivanje imunološkog stanja vakcinisanih osoba. Kod pacijenata sa tularemijom, antitijela se obično otkrivaju na kraju 1. ili 2. sedmice bolesti, nakon 1-1,5 mjeseci titar TPHA dostiže svoje maksimalne vrijednosti (1:100.000-1:20.000, rjeđe više), nakon čega se oni smanjuju na nivou 1:100-1:200 dugo traju.
Kod vakcinisanih se antitela takođe nalaze konstantno, međutim, u nižim titrima, koji ne prelaze 1:2000-1:5000 1-1,5 meseci nakon vakcinacije, ostaju nekoliko godina na niskom nivou od 1:20-1:80.
Tularemia erythrocyte diagnosticum (antigen) služi kao antigen za postavljanje RPHA.
Lijek je formalinizirani ovnski eritrociti senzibilizirani antigenom tularemije, dostupan u tekućem i suhom obliku. Tekući pripravak - 10% suspenzija eritrocita u otopini formalina 10% koncentracije. Suvi liofilizirani preparat - vakuumski osušena 10% suspenzija eritrocita bez konzervansa. Prije upotrebe razrijedi se prema uputama na etiketi. Za postavljanje reakcije u polistirenskim pločama koriste se oba preparata u koncentraciji od 2,5%, a kod postavljanja reakcije u mikrovolumenima, u koncentraciji od 0,5%.
RPGA tehnika podešavanja.
Test serumi se razblaže fiziološkim rastvorom 1:5 (1:10) i zagrevaju na 56 stepeni C 30 minuta.
Reakcija hemaglutinacije (RHA) i
Nakon toga, da bi se uklonila heterogena antitijela na ovnove eritrocite, serumi se tretiraju 50% suspenzijom formaliziranih ovnovskih eritrocita. Da bi se to postiglo, eritrociti se dodaju brzinom od 2 kapi (0,05 ml) na 1 ml seruma i temeljito promiješaju protresanjem.
Serum se ostavlja do potpune sedimentacije eritrocita, ili se centrifugira nakon jednog sata na sobnoj temperaturi, nakon čega je spreman za istraživanje.
Tečnost za razblaživanje se sipa u zapremini od 0,5 ml u više jažica polistirenske ploče.
U preliminarnoj studiji seruma, preporučljivo je testirati ih postavljanjem reakcije u kratkom redu ploče (6 rupa). U slučaju otkrivanja antitela u kratkoj seriji seruma, serumi se ponovo ispituju u dugoj seriji razblaženja (12 jažica).
Nakon prosipanja tečnosti za razblaživanje, 0,5 ml test seruma u razblaženju 1:5 dodaje se u prvu jažicu svakog reda (kratku ili dugačku). Zatim se u istim količinama serum titrira dvostrukim razblaženjima. Tako se razblaženja seruma dobijaju u kratkim serijama od 1:10 do 1:320, au dugoj seriji - od 1:10 do 1:20480. Nakon titracije seruma, u svaku jažicu se dodaje jedna kap (0,05 ml) radne 2,5% suspenzije senzibiliziranih eritrocita.
Sadržaj ploča se dobro promućka dok se ne dobije homogena suspenzija. Ploče se ostavljaju na sobnoj temperaturi na stacionarnoj površini stola. Preliminarna registracija reakcije se vrši nakon 2-3 sata, konačno određivanje titra se vrši nakon potpune sedimentacije eritrocita u jažicama. Za reakciju su obezbeđene sledeće kontrole: 1) test serum u razblaženju 1:10 u zapremini od 0,5 ml + 1 kap 2,5% suspenzije nesenzibilizovanih eritrocita; 2) tečnost za razblaživanje u zapremini od 0,5 ml + 1 kap 2,5% suspenzije nesenzibilizovanih eritrocita; 3) razblaživanje tečnosti u zapremini od 0,5 ml + 1 kap 2,5% suspenzije senzibilizovanih eritrocita.
Sve kontrole treba da daju jasno negativnu reakciju.
Računovodstvo i evaluacija RPGA. Reakcija se procjenjuje prema sljedećoj shemi:
1) oštro pozitivna reakcija (++++) - eritrociti padaju na dno jažice u jednolikom sloju u obliku "kišobrana", koji često ima zaobljene rubove;
2) pozitivna reakcija (+++) - eritrociti pokrivaju najmanje 2/3 dna rupe;
3) slabo pozitivna reakcija (++) - aglutinat je mali i nalazi se u samom centru rupe;
4) sumnjiva reakcija (+) - postoje odvojena zrna aglutinata oko sedimenta eritrocita u samom centru rupe;
5) negativan (-) - na dnu rupe, eritrociti se talože u obliku "dugma" ili malog prstena s glatkim, oštro definiranim rubovima.
Titar seruma se uzima u obzir prema posljednjem razrjeđenju seruma, koje je dalo vrlo jasnu reakciju (najmanje tri plusa).
Razrjeđenje od 1:100 i više smatra se dijagnostičkim titrom, međutim, kao iu slučaju RA, potrebno je pratiti njegovo povećanje.
TPHA kod tularemije je prilično specifičan i otkriva neke unakrsne reakcije samo sa serumima bruceloze. Diferencijalna dijagnoza je moguća po visini titara u TPHA, koji su mnogo veći kod homolognog antigena.
Tehnika postavljanja RPHA u mikrovolumenima.
RPHA se može izvesti u mikrovolumenima koristeći mikrotitar tipa Takachi (ili mikrotitarske ploče okruglog dna sa mikropipetama), što omogućava da se materijal titrira u zapreminama od 25 µl i 50 µl. Tehnika postavljanja reakcija, redoslijed svih operacija je isti kao u studiji u polistirenskim pločama. Međutim, treba imati na umu da je osjetljivost mikro metode obično po razrjeđivanju (tj.
2 puta) niže od makrometode.
Za postavljanje reakcije u mikrotitru pomoću pipete-kapaljke, u svaku jažicu se unosi tekućina za razrjeđivanje u volumenu od 50 µl. Zatim se pomoću titratora sa glavom od 50 μl uzima test serum uranjanjem glave u njega.
Proverite da li je tečnost ispunila glavu titratora. Titrator sa serumom se prenosi u prvu jažicu i, držeći je u vertikalnom položaju, napravi nekoliko rotacijskih pokreta u oba smjera. Zatim se titrator prenosi u sljedeću jažicu i manipulacija se ponavlja. Titracija se može vršiti istovremeno u nekoliko redova. Nakon titracije cijelog reda, titrator se rotacijskim pokretima ispere destilovanom vodom (sa izmjenom od 2 porcije), tamponom se uklanja voda iz glave i spaljuje na plamenu plamenika.
Nakon titracije, u jažice se dodaje 25 μl dijagnostikuma eritrocita.
Koncentracija dijagnostikuma za RPHA u mikrovolumenima treba da bude 0,5% (tj. 2,5% suspenzija eritrocita se dodatno razblaži 5 puta). Nakon dodavanja eritrocita, ploče treba lagano protresti dok se ne dobije homogena suspenzija. Rezultati se mogu zabilježiti već nakon 1-1,5 sati, što je značajna prednost RPHA u mikrotitru.
Osim toga, ova metoda zahtijeva malu količinu svih sastojaka reakcije i test seruma.
Reakcija se objašnjava na sljedeći način:
1) "+" - potpuna hemaglutinacija, u kojoj eritrociti padaju na dno bunara u jednolikom sloju u obliku "kišobrana", koji zauzima najmanje 2/3 dna;
2) "+ -" - djelomična hemaglutinacija, u kojoj eritrociti padaju na dno u obliku labavog prstena male veličine;
3) "-" - odsustvo hemaglutinacije, kada eritrociti padaju na dno u obliku malog dugmeta ili prstena sa glatkim rubom.
Specifičnost pozitivnog rezultata dobijenog u TPHA može se testirati trokomponentnom reakcijom - reakcijom inhibicije pasivne hemaglutinacije (RPHA).
RTPGA tehnika podešavanja.
Ova reakcija je postavljena da potvrdi specifičnost pozitivnog rezultata RPHA kada je u sumnji ili je od posebnog epidemiološkog interesa. Mehanizam reakcije sastoji se u specifičnoj inhibiciji hemaglutinacije kada se u test serum doda suspenzija ubijenih bakterija tularemije. U reakciji interaguju tri komponente: test serum, specifični antigen tularemije i antigenski eritrocitni dijagnostikum RTPGA obično se postavljaju u red od 7-8 jažica.
Preporučljivo je instalirati drugi RPHA paralelno sa RTPGA. U dva reda jažica ulije se po 0,25 ml tečnosti za razblaživanje, zatim se test serum u zapremini od 0,25 ml doda u prve jažice oba reda i titrira. Dobiju se dva identična reda razblaženja seruma. Dodajte 0,25 ml tečnosti za razblaživanje u sve jažice drugog reda, a 0,25 ml suspenzije bakterije tularemije u jažice prvog reda.
Koristi se Tularemia diagnosticum (sadrži 25 milijardi bakterija tularemije po 1 ml), prethodno razrijeđen 50 puta.
Takva suspenzija sadrži 500 miliona bakterija u 1 ml ili 125 miliona u zapremini od 0,25 ml. Nakon dodavanja antigena, ploča se ostavi 1 sat na sobnoj temperaturi, nakon čega se u sve jažice oba reda doda po jedna kap (0,05 ml) dijagnostikuma eritrocita, ploča se protrese i ostavi na ravnoj površini stola.
Računovodstvo se vrši za 2-3 sata.
Računovodstvo i evaluacija RTPGA. Ako test serum sadrži specifična antitijela protiv tularemije, ona su neutralizirana dodatkom antigena i hemaglutinacija se neće dogoditi u prvom redu jažica, ili će, s visokim titrom seruma, hemaglutinacija biti uočena u manje (2-4) jažica nego u red sa TPHA. U ovom slučaju potvrđuje se specifičnost rezultata.
Ako je hemaglutinacija zabilježena u oba reda, tj. rezultati RTHA i RPHA se poklapaju, što ukazuje na odsustvo antitijela tularemije u test serumu. U ovom slučaju, primarni rezultat RPHA se smatra nespecifičnim.
Tehnika podešavanja RTPGA u mikrovolumenima. RTHA, kao i RPHA, mogu se izvesti u mikrovolumenima pomoću mikrotitra tipa Takachi.
Da bi se to učinilo, 0,25 μl tečnosti za razrjeđivanje dodaje se u jažice mikroploča u dva reda od po 7-8 jažica. Zatim se, uz pomoć titratora, 0,25 μl test seruma boduje i titrira u oba reda. Nakon toga se u svaku jažicu u prvom redu dodaje 25 µl antigena tularemije (čija je koncentracija 500 miliona bakterija tularemije u 1 ml), a u drugom redu 25 µl tečnosti za razblaživanje.
Ploče se ostavljaju 1 sat na sobnoj temperaturi, nakon čega se u sve jažice oba reda doda 25 μl antigenskog dijagnostikuma eritrocita (koncentracija 0,5%).
Obračun i evaluacija rezultata se provodi slično kao reakcija u makrovolumenima.
Datum objave: 2015-02-03; Pročitano: 3176 | Povreda autorskih prava stranice
studopedia.org - Studopedia.Org - 2014-2018.(0.003 s) ...
reakcija pasivne hemaglutinacije) metoda za detekciju i identifikaciju antigena ili antitela, zasnovana na fenomenu aglutinacije eritrocita koji se javlja u njihovom prisustvu, na čijoj površini su prethodno adsorbovani odgovarajući specifični ili antigeni.
1. Mala medicinska enciklopedija. - M.: Medicinska enciklopedija. 1991-96 2. Prva pomoć. - M.: Velika ruska enciklopedija. 1994 3. Enciklopedijski rječnik medicinskih pojmova. - M.: Sovjetska enciklopedija. - 1982-1984.
Pogledajte šta je "Reakcija indirektne hemaglutinacije" u drugim rječnicima:
reakcija indirektne hemaglutinacije- RNGA Laboratorijski test pomoću dijagnostikuma eritrocita. [Englesko-ruski pojmovnik osnovnih pojmova o vakcinologiji i imunizaciji. Svjetska zdravstvena organizacija, 2009] Teme vakcinologija, imunizacija Sinonimi RNGA EN ... ... Priručnik tehničkog prevodioca
- (RNGA; sinonim za reakciju pasivne hemaglutinacije) metoda za detekciju i identifikaciju antigena ili antitela, zasnovana na fenomenu aglutinacije eritrocita koja se javlja u njihovom prisustvu, na čijoj površini su prethodno bili adsorbovani... ... Veliki medicinski rječnik
- (RPHA) vidi Reakcija indirektne hemaglutinacije... Veliki medicinski rječnik
Ova stranica je pojmovnik. # A ... Wikipedia
Glavne skraćenice prihvaćene u Veterinarskom enciklopedijskom rječniku- a., aa, artena, arteriae aa ana (jednako) Akademija medicinskih nauka SSSR Akademija medicinskih nauka SSSR Akademija nauka SSSR Akademija nauka SSSR Bac. bacilus bakterija. Bakterija BSSR Bjeloruska SSR c., c. vek, vek v., vv. vena, venae VASKHNIL Svesavezni orden Lenjina i ... ...
Ovaj izraz ima druga značenja, vidi Kuga. Kuga mesojeda (Kareova bolest) je akutna ili subakutna zarazna virusna bolest, koja se manifestuje groznicom, katarom sluzokože, lezijama kože, centralnim ... ... Wikipedia
- (renes) upareni ekskretorni i endokrini organ koji kroz funkciju mokrenja reguliše hemijsku homeostazu organizma. ANATOMO FIZIOLOŠKI PREGLED Bubrezi se nalaze u retroperitonealnom prostoru (Retroperitonealni prostor) na ... ... Medicinska enciklopedija
I (trihineloza; sinonim: trihineloza, „natečenost“) je helmintoza iz grupe nematoda, koju karakteriše groznica, mijalgija, oticanje lica, osip na koži, eozinofilija u krvi, au težim slučajevima oštećenje unutrašnjih organa i centralnog ... ... Medicinska enciklopedija
- (nematodoze) helmintoze uzrokovane nematodama iz klase Nematoda. Među ostalim helmintiozama, N. su od najveće važnosti u ljudskoj patologiji, većina njih su geohelmintiaze (vidi Helmintiaze); razvoj njihovih jaja ili larvi ... ... Medicinska enciklopedija
infektivnog epididimitisa- Pirinač. 1. Povećanje lijevog testisa kod ovna sa infektivnim epididimitisom. Rice. 1. Povećanje lijevog testisa kod ovna sa infektivnim epididimitisom. epididimitis zarazne ovce (Epididymitis infectiosa arietum), kronični zarazni ... ... Veterinarski enciklopedijski rječnik
Pogledajte Indirektna reakcija hemaglutinacije... Veliki medicinski rječnik
Reakcija aglutinacije- ovo je imunološka reakcija interakcije antigena sa antitijelima u prisustvu elektrolita, a antigen je u korpuskularnom stanju (eritrociti, bakterije, čestice lateksa sa adsorbiranim antigenima). Tokom aglutinacije, korpuskularni antigeni su zalijepljeni antitijelima, što se manifestira stvaranjem flokulantnog taloga. Do stvaranja pahuljica dolazi zbog činjenice da antitijela imaju dva aktivna centra, a antigeni su polivalentni, tj. imaju više antigenskih determinanti. RA se koristi za identifikaciju patogena izolovanog iz materijala pacijenta, kao i za otkrivanje antitijela na patogen u krvnom serumu pacijenta (na primjer, Wrightove i Huddlesonove reakcije kod bruceloze, Vidalove reakcije kod trbušnog tifusa i paratifusne groznice ).
Najlakši način za postavljanje RA je reakcija na staklu, ovo je približni RA, koji se koristi za određivanje patogena izolovanog od pacijenta. Prilikom postavljanja reakcije na predmetno staklo, primjenjuje se dijagnostički aglutinirajući serum (u razrjeđenju 1:10 ili 1:20), zatim se unosi kultura pacijenta. Reakcija je pozitivna ako se u kapi pojavi flokulantni talog. U blizini se postavlja kontrola: umjesto seruma nanosi se kap otopine natrijum hlorida. Ako je dijagnostički aglutinirajući serum neadsorbiran 1 , tada se razrjeđuje (do titra - razrjeđenja do kojeg treba doći do aglutinacije), tj. ekspandirani RA staviti u epruvete sa sve većim razblaženjima aglutinirajućeg seruma, u koje se dodaju 2-3 kapi suspenzije patogena izolovanog od pacijenta. Aglutinacija se uzima u obzir količinom sedimenta i stepenom bistrenja tečnosti u epruvetama. Reakcija se smatra pozitivnom ako se primijeti aglutinacija u razrjeđenju bliskom titru dijagnostičkog seruma. Reakcija je praćena kontrolama: serum, razrijeđen izotoničnim rastvorom natrijum hlorida, treba da bude providan, suspenzija mikroba u istom rastvoru treba da bude jednolično zamućena, bez sedimenta.
Za određivanje antitijela na patogen u krvnom serumu pacijenta koristi se prošireni RA. Kada se stavi u epruvete, bolesnikov krvni serum se razrjeđuje i u epruvete se dodaje jednaka količina suspenzije dijagnostikuma (suspenzije ubijenih mikroba). Nakon inkubacije određuje se najveće razrjeđenje seruma pri kojem je došlo do aglutinacije, tj. formiran precipitat (titar seruma). U ovom slučaju, reakcija aglutinacije sa O-diagnosticumom (bakterije ubijene zagrijavanjem, zadržavajući termostabilan O-antigen) se javlja u obliku sitnozrnate aglutinacije. Reakcija aglutinacije sa H-diagnosticumom (bakterije ubijene formalinom, zadržavajući toplotno labilni flagelarni H-antigen) je krupno zrnasta i odvija se brže.
Reakcija indirektne (pasivne) hemaglutinacije(RNGA ili RPGA) je vrsta RA. Ova metoda je vrlo osjetljiva. Uz pomoć RNGA mogu se riješiti dva zadatka: odrediti antitijela u krvnom serumu pacijenta u koje se dodaje antigenski eritrocitni dijagnostikum, a to su eritrociti na kojima su adsorbirani poznati antigeni; utvrdi prisustvo antigena u test materijalu. U ovom slučaju, reakcija se ponekad naziva reakcija reverzne indirektne hemaglutinacije (RONGA). Prilikom stadijuma testnom materijalu se dodaje eritrocitni dijagnostikum antitijela (eritrociti sa adsorbiranim antitijelima na njihovoj površini). Eritrociti u ovoj reakciji djeluju kao nosioci i pasivno su uključeni u formiranje imunoloških agregata. Uz pozitivnu reakciju, pasivno zalijepljeni eritrociti pokrivaju dno bunara ravnomjernim slojem sa zaobljenim rubovima („kišobran“); u odsustvu aglutinacije, eritrociti se akumuliraju u središnjem udubljenju rupe, tvoreći kompaktno "dugme" s oštro definiranim rubovima.
Reakcija koaglutinacije koristi se za otkrivanje ćelija patogena (antigena) upotrebom antitijela adsorbiranih na Staphylococcus aureus, koji sadrže protein A. Protein A ima afinitet za Fc fragment imunoglobulina. Zbog toga se antitijela vezuju za stafilokok indirektno preko Fc fragmenta, a Fab fragmenti su orijentirani prema van i mogu stupiti u interakciju s odgovarajućim mikrobima izoliranim od pacijenata. U tom slučaju nastaju pahuljice.
Reakcija inhibicije hemaglutinacije (HITA) koristi se u dijagnostici virusnih infekcija, i to samo infekcija uzrokovanih hemaglutinirajućim virusima. Ovi virusi na svojoj površini sadrže protein - hemaglutinin, koji je odgovoran za reakciju hemaglutinacije (RHA) kada se doda virusima eritrocita. RTGA se sastoji u blokiranju virusnih antigena antitijelima, zbog čega virusi gube sposobnost aglutinacije crvenih krvnih stanica.
Coombsova reakcija - RA za detekciju nepotpunih antitijela. Kod nekih zaraznih bolesti, kao što je bruceloza, nepotpuna antitijela na patogen cirkuliraju u krvnom serumu pacijenta. Nepotpuna antitijela nazivaju se blokirajućim jer imaju jedno mjesto vezanja antigena, a ne dva, kao puna antitijela. Stoga, kada se doda antigenski dijagnostikum, nekompletna antitijela se vežu za antigene, ali ih ne spajaju. Za ispoljavanje reakcije dodaje se antiglobulinski serum (antitijela na humane imunoglobuline), što će dovesti do aglutinacije imunih kompleksa (antigenski dijagnostikum + nepotpuna antitijela) nastalih u prvoj fazi reakcije.
Indirektna Coombsova reakcija se koristi kod pacijenata sa intravaskularnom hemolizom. Kod nekih od ovih pacijenata pronađena su nepotpuna monovalentna anti-Rhesus antitijela. Oni specifično stupaju u interakciju s Rh-pozitivnim eritrocitima, ali ne uzrokuju njihovu aglutinaciju. Stoga se antiglobulinski serum dodaje u sistem anti-Rh antitijela + Rh-pozitivni eritrociti, što uzrokuje aglutinaciju eritrocita. Koristeći Coombsovu reakciju, dijagnosticiraju se patološka stanja povezana s intravaskularnom lizom eritrocita imunog porijekla, na primjer, hemolitička bolest novorođenčeta zbog Rhesus konflikta.
RA za određivanje krvnih grupa zasniva se na aglutinaciji eritrocita antitijelima imunog seruma na antigene krvnih grupa A (II), B (III). Kontrola je serum koji ne sadrži antitijela, tj. serumske AB (IV) krvne grupe, te antigeni eritrocita grupa A (P) i B (III). Kao negativna kontrola koriste se eritrociti grupe 0(I), jer nemaju antigene.
Za određivanje Rh faktora koriste se anti-Rh serumi (najmanje dvije različite serije). U prisustvu Rh antigena na membrani ispitivanih eritrocita dolazi do aglutinacije ovih ćelija.
Hemadsorpcijska reakcija(RGAD). Hemadsorpcija je veza eritrocita sa površinom ćelija zahvaćenih virusom, na osnovu odnosa receptora virusa koji se nalaze na površini zahvaćene ćelije sa receptorima eritrocita, što dovodi do njihovog međusobnog prianjanja sličnog reakciji hemaglutinacije. Prednost ove reakcije je što postaje pozitivna i prije pojave izrazitih citopatskih promjena u inficiranim stanicama.
Postoje razlike u vrsti adsorpcije (difuzna, žarišna), vrsti sorbiranih eritrocita (ljudi, majmuni, zamorci itd.), temperaturi na kojoj teče reakcija (37°C, 0°C), prisutnosti elucije (da, ne) . G. se može usporiti preliminarnom inkubacijom virusom inficiranih to-ry ćelija sa antiserumom kospecifičnim za virus. G.-ova reakcija inhibicije se koristi za identifikaciju virusa.