Az AIDS diagnosztizálása HIV immunblottal. Polimeráz láncreakció (PCR) Az immunblot mechanizmus gyakorlati alkalmazása

Immunblot (immunblot, Western blot, Western blot)- egyesíti az enzimhez kötött immunszorbens vizsgálatot (ELISA) a vírusantigének előzetes elektroforetikus átvitelével egy nitrocellulóz csíkra (csíkra).

Ebben a gyönyörű tudományos névben a „blot” valószínűleg „blot”-nak fordítja, a „western” pedig „western” ennek a „foltnak” az eloszlásának irányát tükrözi a papíron balról jobbra, vagyis egy földrajzi térképen. ez megfelel a nyugatról keletre irányuló iránynak." Az "immunblot" módszer lényege, hogy az enzimhez kötött immunszorbens reakciót nem antigének keverékével, hanem HIV antigénekkel hajtják végre, amelyeket előzőleg immunoforézissel szétosztottak a molekulatömeg szerint a nitrocellulóz membrán felületén elhelyezkedő frakciókra. . Ennek eredményeként a HIV fő fehérjéi, az antigén-determinánsok hordozói külön sávok formájában oszlanak el a felszínen, amelyek az enzim immunoassay során jelennek meg.

Az immunblot több szakaszból áll:

Csík előkészítése. Az előzőleg megtisztított és alkotóelemeire bontott immunhiányos vírust (HIV) elektroforézisnek vetik alá, míg a HIV-t alkotó antigéneket molekulatömeg alapján választják el. Ezután blottolással (hasonlóan a felesleges tinta "blotter"-en történő kipréseléséhez) az antigéneket egy nitrocellulóz csíkra visszük át, amely immár a HIV-re jellemző, szem számára láthatatlan antigén sávok spektrumát tartalmazza.

Minta vizsgálat. A vizsgálati anyagot (szérum, beteg vérplazmája stb.) a nitrocellulóz csíkra visszük fel, és ha a mintában specifikus antitestek vannak, akkor azok a szigorúan megfelelő (komplementer) antigén sávokhoz kötődnek. A későbbi manipulációk eredményeként ennek az interakciónak az eredménye vizualizálódik - láthatóvá válik.

Az eredmény értelmezése. A sávok jelenléte a nitrocellulóz lemez bizonyos területein megerősíti a szigorúan meghatározott HIV antigének elleni antitestek jelenlétét a vizsgált szérumban.

A sáv – Pozitív vezérlés

B sáv – Gyenge pozitív kontroll

C sáv – Negatív kontroll

D csík – Pozitív minta (HIV-1 elleni antitesteket észleltek)

Jelenleg az immunblot (immunoblot) a fő módszer a vírusspecifikus antitestek vizsgálati szérumban való jelenlétének megerősítésére. A HIV-fertőzés egyes esetekben a szerokonverziót megelőzően a specifikus antitesteket hatékonyabban lehet kimutatni immunoblottal, mint ELISA-val. Egy immunblot vizsgálat kimutatta, hogy a gp 41 elleni antitesteket leggyakrabban AIDS-betegek szérumában mutatják ki, és a p24 kimutatása a profilaktikus célból vizsgált személyeknél további vizsgálatokat igényel a HIV-fertőzés jelenlétére vonatkozóan. A genetikailag módosított rekombináns fehérjéken alapuló immunblot tesztrendszerek specifikusabbnak bizonyultak, mint a tisztított víruslizátumon alapuló hagyományos rendszerek. Rekombináns antigén alkalmazásakor nem egy diffúz, hanem egy jól körülhatárolható keskeny antigénsáv képződik, amely könnyen hozzáférhető elszámoláshoz és értékeléshez.

A HIV-1-vel fertőzött személyek széruma a következő főbb fehérjék és glikoproteinek ellenanyagokat mutat ki - strukturális burokfehérjék (env) - gp160, gp120, gp41; magok (gag) - p17, p24, p55, valamint vírusenzimek (pol) - p31, p51, p66. A HIV-2 esetében az env elleni antitestek jellemzőek - gp140, gp105, gp36; gag - p16, p25, p56; pol-p68.

A reakció specifitásának megállapításához szükséges laboratóriumi módszerek közül a HIV-1 burokfehérjék - gp41, gp120, gp160, valamint HIV-2 - gp36, gp105, gp140 ellenanyagainak kimutatása a legismertebb.

A WHO akkor tekinti pozitívnak a szérumot, ha bármelyik két HIV-glikoprotein elleni antitestet immunblot-vizsgálattal kimutatják. Ezen ajánlások szerint, ha a burokfehérjék közül csak az egyik (rp 160, rp 120, rp 41) reakció lép fel más fehérjékkel kombinálva vagy anélkül, hogy reakcióba lépne más fehérjékkel, az eredmény kétségesnek minősül, és egy második teszt elvégzése javasolt egy készlet segítségével. egy másik sorozattól vagy másik cégtől. Ha ezt követően is kétséges az eredmény, 6 hónapig tartó megfigyelés javasolt (3 hónap utáni kutatás).

A p24 antigénnel végzett pozitív reakció jelenléte szerokonverziós periódusra utalhat, mivel e fehérje elleni antitestek néha először jelennek meg. Ebben az esetben a klinikai és epidemiológiai adatoktól függően javasolt a vizsgálat megismétlése legalább 2 héttel később vett szérummintával, és pontosan ez az eset, amikor HIV fertőzésben páros szérum szükséges.

A gag és pol fehérjékkel végzett pozitív reakciók env fehérjékkel való reakció nélkül a korai szerokonverzió stádiumát tükrözhetik, és HIV-2 fertőzést vagy nem specifikus reakciót is jelezhetnek. Azokat a személyeket, akiknél ilyen eredmények születtek a HIV-2-teszt után, 3 hónap elteltével (6 hónapon belül) újra megvizsgálják.

A HIV-fertőzés időben történő diagnosztizálása rendkívül fontos intézkedéssé válik, mivel a korábbi kezelés nagymértékben meghatározhatja a betegség további fejlődését és meghosszabbíthatja a beteg életét. Az elmúlt években jelentős előrelépés történt e szörnyű betegség felderítésében: a régi tesztrendszereket fejlettebbekre cserélik, a vizsgálati módszerek hozzáférhetőbbé válnak, pontosságuk jelentősen megnő.

Ebben a cikkben a HIV-fertőzés diagnosztizálásának modern módszereiről fogunk beszélni, amelyeket hasznos tudni a probléma időben történő kezeléséhez és a beteg normális életminőségének fenntartásához.

A HIV diagnosztizálásának módszerei

Oroszországban a HIV-fertőzés diagnosztizálására szabványos eljárást végeznek, amely két szintből áll:

ELISA tesztrendszer (szűrőelemzés);
immunblot (IB).

Más diagnosztikai módszerek is használhatók:

expressz tesztek.

ELISA tesztrendszerek

A diagnózis első szakaszában a HIV-fertőzés kimutatására szűrőtesztet (ELISA) alkalmaznak, amely laboratóriumokban létrehozott HIV-fehérjéken alapul, amelyek a szervezetben a fertőzésre válaszul termelődő specifikus antitesteket rögzítik. A tesztrendszer reagenseivel (enzimeivel) való kölcsönhatás után az indikátor színe megváltozik. Ezenkívül ezeket a színváltozásokat speciális berendezéssel dolgozzák fel, amely meghatározza az elvégzett elemzés eredményét.

Az ilyen ELISA-tesztek a HIV-fertőzés bejutását követő néhány héten belül képesek eredményt mutatni. Ez az elemzés nem határozza meg a vírus jelenlétét, hanem kimutatja az ellenanyag termelését. Előfordul, hogy az emberi szervezetben a HIV-ellenes antitestek termelése a fertőzés után 2 héttel kezdődik, de a legtöbb embernél később, 3-6 hét elteltével termelődnek.

Az ELISA-teszteknek négy generációja létezik, különböző érzékenységgel. Az utóbbi években egyre gyakrabban alkalmazzák a III. és IV. generációs tesztrendszereket, amelyek szintetikus peptideken vagy rekombináns fehérjéken alapulnak, és nagyobb specificitással és pontossággal rendelkeznek. Használhatók a HIV-fertőzés diagnosztizálására, a HIV-prevalencia nyomon követésére és a biztonság garantálására az adományozott vér tesztelésekor. A III és IV generációs ELISA tesztrendszerek pontossága 93-99% (érzékenyebbek a Nyugat-Európában gyártott tesztek - 99%).

Az ELISA teszt elvégzéséhez 5 ml vért veszünk a páciens vénájából. Az utolsó étkezés és az elemzés között legalább 8 órának kell eltelnie (általában reggel, éhgyomorra kell elvégezni). Az ilyen tesztet legkorábban az állítólagos fertőzés után 3 héttel ajánlott elvégezni (például új szexuális partnerrel való védekezés nélküli közösülés után).

Az ELISA teszt eredményei 2-10 nap elteltével érhetők el:

negatív eredmény: HIV-fertőzés hiányát jelzi, és nem igényel szakemberhez való utalást;
hamis negatív eredmény: megfigyelhető a fertőzés korai szakaszában (legfeljebb 3 hétig), az AIDS késői szakaszában súlyos immunszuppresszióval és nem megfelelő vér-előkészítéssel;
hamis pozitív eredmény: egyes betegségeknél és nem megfelelő vérkészítés esetén is megfigyelhető;
pozitív eredmény: HIV-fertőzést jelez, IB-t igényel és a beteg beutalóját AIDS-központ szakemberéhez.

Miért adhat hamis pozitív eredményt az ELISA teszt?

Az ELISA HIV-teszt hamis pozitív eredménye figyelhető meg nem megfelelő vérfeldolgozás esetén, vagy olyan betegeknél, akiknél a következő állapotok és betegségek:

myeloma multiplex;
az Epstein-Barr vírus által kiváltott fertőző betegségek;
állapot után ;
autoimmun betegség;
a terhesség hátterében;
vakcinázás utáni állapot.

A fent leírt okok miatt a vérben olyan nem specifikus, keresztreagáló antitestek lehetnek jelen, amelyek termelődését nem HIV-fertőzés váltotta ki.

Az utóbbi években jelentősen csökkent a hamis pozitív eredmények gyakorisága a III és IV generációs tesztrendszerek alkalmazása miatt, amelyek érzékenyebb peptidet és rekombináns fehérjéket tartalmaznak (ezeket in vitro géntechnológiával állítják elő). Az ilyen ELISA tesztek alkalmazása után a hamis pozitív eredmények gyakorisága jelentősen csökkent, és körülbelül 0,02-0,5%.

A hamis pozitív eredmény nem jelenti azt, hogy egy személy HIV-fertőzött. Ilyen esetekben a WHO újabb ELISA-tesztet javasol (kötelező IV generáció).

A páciens vérét egy referencia- vagy döntőlaboratóriumba küldik „repeat” jelzéssel, és IV generációs ELISA tesztrendszerrel tesztelik. Ha az új elemzés eredménye negatív, akkor az első eredményt hibásnak (hamis pozitívnak) ismeri fel, és az IB-t nem hajtják végre. Ha az eredmény pozitív vagy kétséges a második teszt során, a betegnek 4-6 héten belül IB-n kell átesnie a HIV-fertőzés megerősítésére vagy cáfolatára.

immunblot

A HIV-fertőzés végleges diagnózisát csak pozitív immunblot (IB) eredmény megszerzése után lehet felállítani. Ennek megvalósításához nitrocellulóz csíkot használnak, amelyen vírusfehérjéket alkalmaznak.

Az IB vérmintavétele vénából történik. Ezután speciális kezelésen esik át, és a szérumában lévő fehérjéket töltésük és molekulatömegük szerint speciális gélben választják el (a manipulációt speciális berendezésen, elektromos tér hatására végzik). A vérszérum gélre nitrocellulóz csíkot helyeznek, és egy speciális kamrában blottolást („blotolást”) végeznek. A csíkot feldolgozzák, és ha a felhasznált anyagok HIV-ellenes antitesteket tartalmaznak, az IB antigén sávokhoz kötődnek, és vonalként jelennek meg.

Az IB akkor tekinthető pozitívnak, ha:

az amerikai CDC-kritériumok szerint - két vagy három sor van a gp41, p24, gp120 / gp160 csíkon;
az amerikai FDA kritériumai szerint - a csíkon két p24, p31 és egy gp41 vagy gp120 / gp160 vonal található.

Az esetek 99,9%-ában a pozitív IB eredmény HIV-fertőzést jelez.

Vonalak hiányában az IB negatív.

A gp160, gp120 és gp41 vonalak azonosításakor az IB kétséges. Ilyen eredmény akkor észlelhető, ha:

onkológiai betegségek;
terhesség;
gyakori vérátömlesztés.

Ilyen esetekben javasolt egy második vizsgálat elvégzése egy másik cég készletének felhasználásával. Ha további IB után az eredmény kétséges marad, akkor hat hónapig tartó követés szükséges (3 havonta IB).

polimeráz láncreakció

A PCR teszt képes kimutatni a vírus RNS-ét. Érzékenysége meglehetősen magas, és lehetővé teszi a HIV-fertőzés kimutatását már a fertőzés után 10 nappal. Egyes esetekben a PCR téves pozitív eredményt adhat, mivel nagy érzékenysége más fertőzések ellenanyagaira is reagálhat.

Ez a diagnosztikai technika drága, speciális felszerelést és magasan képzett szakembereket igényel. Ezek az okok nem teszik lehetővé a populáció tömeges tesztelése során.

A PCR-t a következő esetekben alkalmazzák:

a HIV kimutatására olyan újszülötteknél, akik HIV-fertőzött anyától születtek;
HIV kimutatására "ablakidőszakban" vagy kétes IB esetén;
a HIV koncentrációjának szabályozása a vérben;
donorvér vizsgálatához.

Csak a PCR-teszttel nem diagnosztizálják a HIV-t, hanem kiegészítő diagnosztikai módszerként a viták megoldására.

Expressz módszerek

A HIV-diagnosztika egyik újítása a gyorstesztek lettek, amelyek eredménye 10-15 perc alatt értékelhető. A leghatékonyabb és legpontosabb eredményeket a kapilláris áramlás elvén alapuló immunkromatográfiás tesztek adják. Ezek speciális csíkok, amelyekre vért vagy más vizsgálati folyadékot (nyál, vizelet) visznek fel. HIV-ellenes antitestek jelenlétében 10-15 perc elteltével színes és kontrollcsík jelenik meg a teszten - pozitív eredmény. Ha az eredmény negatív, csak a kontrollvonal jelenik meg.

Az ELISA tesztekhez hasonlóan a gyorstesztek eredményeit IB analízissel kell megerősíteni. Csak ezt követően lehet diagnosztizálni a HIV-fertőzést.

Vannak expressz készletek otthoni teszteléshez. Az OraSure Technologies1 (USA) teszt az FDA által jóváhagyott, vény nélkül kapható, és a HIV kimutatására használható. A vizsgálat után, pozitív eredmény esetén, a betegnek ajánlott egy speciális központban végzett vizsgálat a diagnózis megerősítésére.

A fennmaradó, otthoni használatra szánt teszteket az FDA még nem hagyta jóvá, és eredményeik nagyon megkérdőjelezhetőek lehetnek.

Annak ellenére, hogy a gyorstesztek pontossága gyengébb, mint az IV-generációs ELISA-tesztek, széles körben használják a populáció további tesztelésére.

HIV-fertőzés vizsgálatát bármely poliklinikán, a Központi Regionális Kórházban vagy az AIDS-re szakosodott központokban végezheti. Oroszország területén teljesen bizalmasan vagy névtelenül tartják őket. Minden beteg orvosi vagy pszichológiai tanácsot kaphat az elemzés előtt vagy után. A HIV-tesztekért csak a kereskedelmi egészségügyi intézményekben kell fizetni, az állami klinikákon és kórházakban pedig ingyenesen végzik el.

Ha többet szeretne megtudni arról, hogyan kaphat el HIV-fertőzést, és milyen mítoszok léteznek a fertőzés lehetőségeivel kapcsolatban, olvassa el

Mi az - immunoblot? Ez egy általános módszer az emberi vírusfertőzések laboratóriumi diagnosztizálására. Ez az egyik legpontosabb és legmegbízhatóbb módszer a HIV jelenlétének kimutatására. Megbízhatóságában még a cáfolhatatlannak és véglegesnek ítélt immunblot eredményeit is felülmúlja.

Általános információ

Immunoblot - mi ez? A HIV-fertőzés egy személyben történő felismerése érdekében laboratóriumi vérszérum-vizsgálatot kell végezni az antitestek jelenlétére. A Western blot technikát Western blotnak is nevezik. Kiegészítő szakértői módszerként alkalmazzák a humán vírusfertőzések kimutatására. Meg kell erősíteni az ELISA-t - egy laboratóriumi vizsgálatot, amely lehetővé teszi a HIV-antitestek jelenlétének meghatározását a vérben. A pozitív ELISA-analízist immunoblottal újraellenőrzik. Ez a legérzékenyebb, legösszetettebb és legdrágább.

célja

Mi az - immunoblot? Ez a módszer a vérszérum laboratóriumi vizsgálatára a vírus elleni antitestek jelenlétére vonatkozóan. A vizsgálat során a szakember előre szétválasztja a vírus fehérjéit a gélben, és átviszi egy nitrocellulóz membránra. Az immunblot eljárás célja a HIV különböző szakaszokban történő meghatározása. Az első szakaszban a megtisztított vírust alkotórészeiből elektroforézisnek vetik alá, és az összetételét alkotó antigéneket molekulatömeg alapján elválasztják.

Élő sejtben szaporodik, beágyazva genetikai információit. Ebben a szakaszban egy személy a HIV-vírus hordozójává válik, ha megfertőződött. A betegség sajátossága, hogy hosszú ideig nem nyilvánulhat meg. A vírus elpusztítja a limfocitákat, így az emberi immunitás csökken, és a szervezet nem képes ellenállni a fertőzéseknek. Ha a HIV-t szakszerűen és időben kezelik, a beteg érett öregkort fog megélni. A terápia hiánya elkerülhetetlenül halálhoz vezet. A fertőzés pillanatától, de kezelés nélkül, a maximális élettartam nem haladja meg a tíz évet.

Sajátosságok

Az immunblot-elemzés megbízható módszer, amely lehetővé teszi az első és második típusú HIV-antigénekkel szembeni antitestek jelenlétének meghatározását. Ha egy személy fertőzött, akkor két héten belül antitestek jelennek meg, amelyeket jóval később lehet kimutatni. A HIV sajátossága, hogy az antitestek száma gyorsan növekszik, és a beteg vérében marad. Még ha jelen vannak is, a betegség két vagy több évig nem jelentkezik. Az ELISA módszer nem mindig határozza meg pontosan a betegség jelenlétét, ezért az enzim immunoassay pozitív eredmény esetén az eredmények megerősítése immunblot és PCR segítségével szükséges.

Az előjegyzés indikációi

Mi ez az "immunblot", már kiderült, de kinek írják fel ezt a vizsgálatot? Az immunblot módszerrel kapcsolatos tesztek elvégzésének oka az ELISA pozitív eredménye. A műtétre kerülő betegeknél enzim-immunoassay-n kell átesni. Ezenkívül elemzést kell készíteni a terhességet tervező nőkről, valamint mindenkiről, aki szexuálisan szokatlan. Ha az ELISA eredménye kétséges, rendelje hozzá az immunoblot-vizsgálatot HIV-fertőzött betegekhez. A következő riasztó tünetek okozhatják az orvoshoz fordulást:

éles fogyás;
gyengeség, munkaképesség elvesztése;
bélbetegség (hasmenés), amely három hétig tart;
a test kiszáradása;
láz;
duzzadt nyirokcsomók a testben;
candidiasis, tuberkulózis, tüdőgyulladás, toxoplazmózis kialakulása, herpesz súlyosbodása.

A páciensnek nem kell felkészülnie a vénás véradás előtt. 8-10 órával a vizsgálat előtt nem lehet enni. Nem ajánlott alkoholos és kávéitalokat inni, nehéz fizikai gyakorlatokat végezni, izgalmat átélni egy nappal a véradás előtt.

Hol kell elvégezni az elemzést?

Hol végezhetek HIV-tesztet? ELISA, immunoblot vizsgálatokat városi magánklinikákban végeznek, az eredményeket egy napon belül adják ki. Azonnali diagnózis is lehetséges. Az állami egészségügyi intézményekben az ELISA-teszteket és az immunoblot-vizsgálatot ingyenesen végzik az Orosz Föderáció jogszabályainak megfelelően. A terhes nőket, valamint a kórházi kezelésre vagy műtétre váró betegeket fertőző betegségekre kell vizsgálni.

Hogyan történik a kutatás?

Hogyan történik az ELISA? Az immunblot pozitív/negatív megerősíti vagy cáfolja az enzim immunoassay eredményeit. A kutatási eljárás meglehetősen egyszerű. A szakember vénás vérvételt végez, idővel ez legfeljebb öt percet vesz igénybe. A mintavétel után az injekció beadásának helyét fertőtleníteni kell, és gipsszel le kell zárni. A mintavétel éhgyomorra történik, így a beavatkozás után nem árt megenni egy tábla étcsokoládét vagy meginni egy édes forró italt.

Ahhoz, hogy egy állami egészségügyi intézményben ingyenes elemzésre beutalót kaphasson, fel kell keresnie egy háziorvost. Általánosságban elmondható, hogy az immunblot a mintavétel módját tekintve nem különbözik a többi vérvizsgálattól. A kutatás módszertana egyszerű. Ha egy vírus jelen van az ember vérében, a szervezet elkezd antitesteket termelni, hogy elpusztítsa azt. Minden vírusnak megvan a maga antigén fehérjekészlete. Ezen antitestek kimutatása a Western blotting technika alapja.

Ár

Mennyibe kerül az elemzés? A HIV immunblot nem vonatkozik az olcsó kutatásokra. Átlagosan egy enzim immunoassay szűrővizsgálat ára 500-900 rubel. Az immunoblot egy ellenőrző vizsgálat, amelynek költsége három-ötezer rubel. A bonyolultabb módszerek sokkal drágábbak. Például körülbelül 12 000 rubelt kell fizetnie érte.

Az eredmény értelmezése

A HIV-fertőzés diagnosztizálásának leggyakoribb módszerei az enzim immunoassay és az immunoblot. Ezeket az immunhiányos vírus elleni szérum antitestek meghatározására használják. A fertőzés jelenlétét általában két vizsgálattal igazolják: szűréssel és megerősítővel. A vizsgálat eredményeinek értelmezését orvosnak kell elvégeznie, ő is diagnosztizálja és előírja a kezelést. Ha az immunblot pozitív, ez azt jelenti, hogy vírus van jelen az emberi szervezetben.

A pozitív eredmény nem lehet ok az önkezelésre, mivel minden betegnek saját képe lehet a betegségről. A kvalitatív elemzés magában foglalja a szűrést és az ellenőrzést. Ha a betegnek nincs vírusa, akkor az eredmény „negatív” lesz. A szűrési módszerrel történő kimutatás esetén további ellenőrző vizsgálatot kell végezni. Az immunblot olyan elemzés, amely megerősíti vagy cáfolja a szűrést. Ha a tesztcsíkon bizonyos területeken (a fehérje lokalizációjának helyein) sötétedés jelenik meg, HIV-diagnózis történik. Ha az eredmények kétségesek, a vizsgálatokat három hónapon belül el kell végezni.

Megelőzheti az immunhiányos vírus fertőzését, ha betart bizonyos szabályokat: kerülje az alkalmi szexet, használjon óvszert a kontaktusok során, ne szedjen kábítószert. Ha a betegséget terhes nőnél észlelik, fontos, hogy szigorúan kövesse a kezelőorvos ajánlásait, ne felejtse el megvizsgálni a vírus jelenlétét.

hipotenzió, tachycardia, légszomj, cianózis. A betegség súlyos esetekben vérzés, hányás vérkeverékkel lehetséges. A máj és a lép megnagyobbodik. Megjegyzés: oliguria. A hőmérséklet állandóan magas marad 3-10 napig. A perifériás vérben - neutrofil leukocitózis a képlet balra tolásával. A pestis leírt általános megnyilvánulásai mellett a betegség egyes klinikai formáira jellemző elváltozások is kialakulnak.

A bőrforma ritka (3-5%). A fertőzés bejárati kapujának helyén folt jelenik meg, majd papula, vezikula (konfliktus), savós vérzéses tartalommal töltve, körülvéve egy beszivárgott zónával, hiperémiával és ödémával. A Fliktent erős fájdalom jellemzi. Felnyitva fekélyt képez, melynek alján sötét varasodás található. A pestises fekélyt hosszú lefolyás jellemzi, lassan gyógyul, heget képezve. Ha ezt a formát vérmérgezés bonyolítja, másodlagos pustulák és fekélyek lépnek fel. Talán egy regionális bubo (bőr-bubó forma) kialakulása.

Leggyakrabban (körülbelül 80%) a bubós forma fordul elő, és viszonylag jóindulatú lefolyás jellemzi. A betegség első napjaitól kezdve éles fájdalom jelentkezik a regionális nyirokcsomók régiójában, ami megnehezíti a mozgást, és kényszerhelyzetbe hozza a beteget. Az elsődleges bubo általában magányos, a többszörös bubo kevésbé gyakori. A legtöbb esetben az inguinalis és a femorális nyirokcsomók érintettek, a hónalj és a nyaki nyirokcsomók valamivel ritkábban fordulnak elő. A bubo mérete a diótól a közepes méretű almáig változhat. Fényes jellemzők: éles fájdalom, sűrű konzisztencia, tapadás az alatta lévő szövetekhez, a kontúrok simasága a periadenitis kialakulása miatt. A bubo a betegség második napján kezd kialakulni. Fejlődése során a bőr felette kipirosodik, fényes, gyakran cianotikus lesz. Eleinte sűrű, majd felpuhul, fluktuáció jelenik meg, a kontúrok elmosódottá válnak. A betegség 10-12. napján kinyílik - fisztula, fekély keletkezik. A betegség jóindulatú lefolyásával és a modern antibiotikum-terápiával reszorpciója vagy szklerózisa figyelhető meg. A kórokozó hematogén bejutása következtében másodlagos bubók képződhetnek, amelyek később jelennek meg, kis méretűek, kevésbé fájdalmasak, és általában nem gennyesednek. Ennek a formának egy félelmetes szövődménye lehet egy másodlagos pulmonalis vagy másodlagos szeptikus forma kialakulása, amely élesen rontja a beteg állapotát, egészen a halálig.

Elsődleges tüdő a forma ritka, járványos időszakokban az esetek 5-10%-ában, és a betegség epidemiológiailag legveszélyesebb és legsúlyosabb klinikai formája. Élesen, hevesen kezdődik. A kifejezett mérgezési szindróma hátterében az első napoktól kezdve száraz köhögés, súlyos légszomj, vágó fájdalmak jelentkeznek a mellkasban. A köhögés ezután produktívvá válik, és olyan köpet képződik, amely néhány köpettől a hatalmas mennyiségig változhat, és ritkán hiányzik. A köpet először habos, üveges, átlátszó, majd véres megjelenést kölcsönöz, később tisztán véres lesz, hatalmas mennyiségű pestisbaktériumot tartalmaz. Általában ez egy folyékony konzisztencia - az egyik diagnosztikai jel. Fizikai adatok szűkösek: az ütőhang enyhe megrövidülése az érintett lebeny felett, auskultáció során, nem bőséges finom bugyborékolás, ami egyértelműen nem felel meg a beteg általános súlyos állapotának. A terminális időszakot a légszomj fokozódása, a cianózis, a stupor, a tüdőödéma és a TSS kialakulása jellemzi. Csökken a vérnyomás, a pulzus felgyorsul és fonalassá válik, a szívhangok tompulnak, a hipertermiát hipotermia váltja fel. Kezelés hiányában a betegség 2-6 napon belül halálos kimenetelű. Az antibiotikumok korai alkalmazásával a betegség lefolyása jóindulatú, alig különbözik

IMMUNOBLOT(western blot) - a vérszérum laboratóriumi vizsgálatának módszere a HIV-ellenes antitestek jelenlétére; ez egy pontosabb teszt, mint az ELISA, és az ELISA eredmények megerősítésére szolgál. ELISA - enzim immunoassay (ELISA) - laboratóriumi vizsgálat, amely lehetővé teszi a HIV-antitestek jelenlétének meghatározását a vérben; HIV antitest teszt.

A WHO ajánlása szerint a HIV-fertőzés diagnosztizálásában kiegészítő szakértői módszerként az immunblot (western blot) módszert alkalmazzák, amely az ELISA eredményeit igazolja. Ezt a módszert általában a pozitív ELISA eredmény kétszeres ellenőrzésére használják, mivel érzékenyebbnek és specifikusabbnak tartják, bár összetettebb és drágább.

Az immunoblot az enzim immunoassay-t (ELISA) kombinálja a vírusfehérjék gélben történő előzetes elektroforetikus elválasztásával és nitrocellulóz membránra való átvitelével. Az immunblot eljárás több szakaszból áll (). Először is, az előtisztított és alkotóelemeire bontott HIV-t elektroforézisnek vetik alá, miközben a vírust alkotó összes antigént molekulatömeg szerint választják el. Ezután blottolással az antigéneket a gélről egy nitrocellulóz csíkra vagy egy nejlonszűrőre visszük át, amely immár a HIV-re jellemző, szem számára láthatatlan fehérjespektrumot tartalmaz. Ezt követően a tesztanyagot (szérum, beteg vérplazmája stb.) felvisszük a csíkra, és ha specifikus antitestek vannak a mintában, akkor azok az ezeknek szigorúan megfelelő antigénfehérjék csíkjaihoz kötődnek. A későbbi manipulációk (például ELISA) eredményeként ennek a kölcsönhatásnak az eredménye láthatóvá válik – láthatóvá válik. A csíkok bizonyos területein a csíkok jelenléte megerősíti a szigorúan meghatározott HIV antigének elleni antitestek jelenlétét a vizsgált szérumban.

Az immunblot vizsgálatot leggyakrabban a HIV-fertőzés diagnózisának megerősítésére használják. A WHO akkor tekinti pozitívnak a szérumot, ha bármely két HIV-burokfehérje ellen antitestet mutatnak ki immunoblottal. Ezen ajánlások szerint, ha a burokfehérjék közül csak az egyikkel (gp160, gp120, gp41) van reakció más fehérjékkel kombinálva vagy anélkül, hogy reakcióba lépne más fehérjékkel, akkor az eredmény kétségesnek tekinthető, és egy másik vizsgálat elvégzése javasolt egy másik készlet felhasználásával. sorozatból vagy más cégtől. Ha ezt követően az eredmény kétséges marad, a vizsgálatokat 3 havonta folytatják.

Az immunoblothoz az első szakaszban a vérszérumban lévő fehérjéket molekulatömegük és töltésük szerint gélben szétválasztják elektromos tér segítségével (gélelektroforézis módszer). Ezután nitrocellulóz vagy nylon membránt viszünk fel a gélre és "nedvesítjük" (ez a blottolás). Ez egy speciális kamrában történik, amely lehetővé teszi az anyag teljes átvitelét a gélből a membránba. Ennek eredményeként a gélen lévő fehérjeelrendezés mintázata reprodukálódik a membránon (blot), amely ezután könnyen manipulálható. Kezdetben a membránt a kívánt antigén elleni antitestekkel kezelik, majd a meg nem kötött anyag lemosása után radioaktívan jelölt konjugátumot adnak hozzá, amely specifikusan kötődik az antitestekhez (mint az ELISA-ban). A kapott antigén-antitest-jelölt konjugátum komplex helyét autoradiográfiával határozzuk meg röntgenfilm segítségével. Megnyilvánulása után minden világossá válik, hogy vannak-e antigének a vérben vagy sem.