Anf homogeninio tipo liuminescencija. Kam naudojami antibranduoliniai antikūnai? Bendra informacija apie tyrimą

Priklauso stambiųjų kolagenozių grupei, kuriai būdingas difuzinis jungiamojo audinio ir kraujagyslių pažeidimas. Ankstyva šios patologijos diagnostika yra rimta problema, nes SRV gali prasidėti po kitų ligų „kauke“. Kadangi SRV yra autoimuninė liga, jos klinikinių apraiškų mechanizmas, remiantis šiuolaikinėmis koncepcijomis, paaiškinamas iš šių pozicijų:

• cirkuliuojantys imuniniai kompleksai (CIC), apimantys antinuklearinius antikūnus, nusėdę į mikrocirkuliacijos grandį, sukelia vaskulopatijos ir audinių pažeidimo vystymąsi;
• autoantikūnai prieš kraujo ląsteles sukelia leuko-, limfotrombopeniją ir anemiją;
• antifosfolipidiniai antikūnai sukelia antifosfolipidinio sindromo (APS) vystymąsi.

Šiuolaikiniai imunologinės laboratorinės diagnostikos metodai leidžia identifikuoti visus SRV patogenezės komponentus ir taip nepaprastai, beveik 100% tikslumu patikrinti ligos diagnozę. Tuo pačiu metu bet kokių analizės pokyčių buvimas leidžia juos interpretuoti tik atsižvelgiant į individualų klinikinį vaizdą.

Pažymėtina, kad senasis SRV diagnostikos metodas pagal LE ląstelių buvimą kraujyje neatlaikė laiko išbandymo, pasižymėjo itin mažu jautrumu ir specifiškumu, todėl jo buvo atsisakyta. LE ląstelės net neįtrauktos į SLE kriterijus.

Pagrindiniai SLE požymiai yra:

Indikacijos skirti kraujo tyrimą sisteminės raudonosios vilkligės žymenims

• odos vilkligė;
• medicininė vilkligė;
• trombocitopeninė purpura;
• eritrodermija;
• sunkus kepenų pažeidimas;
• CREST sindromas;
• polimiozitas;
• dermatomiozitas;
• lėtinis jaunatvinis artritas;
• autoimuninis hepatitas;
• sklerozuojantis cholangitas;
• polineuropatija;
• mielitas;

Kaip vyksta procedūra?

Kraujo mėginiai imami iš kubitinės venos ryte tuščiu skrandžiu.

Pasiruošimas analizei

Lupus antikoaguliantas

Lupus antikoaguliantas (LA) yra vienas iš svarbių atrankinių ir patvirtinamų APS diagnozavimo tyrimų. VA susidaro organizme dėl autoimuninių procesų vystymosi po infekcinių poveikių ir slopina protrombino pavertimo trombinu reakciją kraujyje. Kai šie antikūnai aptinkami kraujyje pailginus krešėjimo testus, jie apibrėžiami kaip „vilkligės antikoaguliantas“.

Teigiamas rezultatas:

• navikai;

antinuklearinis faktorius

Antinuklearinis faktorius HEp-2 ląstelių linijoje (ANF HEp-2, titrai; ANA IF, titrai). Teigiamas ANF rezultatas stebimas daugiau nei 90% pacientų, sergančių SRV ir šios ligos odos formomis, sklerodermija, mišria jungiamojo audinio liga, Sjögreno sindromu. ANF ​​nustatymo rezultatas yra titras, kuris yra galutinio serumo praskiedimo, išlaikančio reikšmingą šerdies fluorescenciją, vertė. Kuo didesnis frakcijos vardiklis, tuo didesnis serumo praskiedimas, tuo daugiau antikūnų paciento serume. Šio testo jautrumas SRV yra 95%.

Aukšti titrai ANF (1/640 ir daugiau):

• didelė sisteminės reumatinės ligos tikimybė;
• didelė autoimuninių kepenų ligų rizika;
• ANF ​​titrų padidėjimas dinamikoje rodo sisteminės ligos paūmėjimą;
• sergant SLE, titras koreliuoja su ligos sunkumu ir mažėja, kai gydymas veiksmingas.

Žemi ANF titrai (iki 1/160):

• 1-2% sveikų asmenų;
• sisteminėmis ligomis sergančių pacientų artimiesiems;
• daugybe autoimuninių, infekcinių ir onkologinių ligų.

Antikūnai prieš nukleosomas

Nukleosominiai antikūnai (NKA) yra vieni pirmųjų, kurie organizme susidaro vystantis SRV. NCA titrai koreliuoja su ligos aktyvumu. Šių autoantikūnų specifiškumas SRV diagnozei yra didesnis nei 95 proc.

Analizės rezultatų interpretacija

Didelis antikūnų prieš nukleosomas kiekis (teigiamas):

• medicininė vilkligė;
• aktyvus SRV, kartu su nefritu.

• maža SRV tikimybė;
• maža inkstų pažeidimo rizika sergant SRV.

IgG klasės antikūnai prieš dvigrandę DNR

IgG klasės antikūnų prieš dvigrandę DNR (anti-dsDNA IgG; anti-dsDNA IgG) buvimas yra labai specifinis SRV, mažesniu mastu – sergant kitomis difuzinėmis jungiamojo audinio ligomis ar vaistų sukelta SRV. SRV testo jautrumas yra 85%. Kiekybinis anti-dsDNR IgG antikūnų nustatymas labiausiai tinka SRV sergančių pacientų būklei, prognozei ir gydymo kontrolei, nes tai koreliuoja su jo aktyvumu ir glomerulonefrito sunkumu.

Analizės rezultato iššifravimas

Pasikelti lygi:

• infekcija, kurią sukelia Epstein-Barr virusas;

Žemyn lygiu:

• norma.

Antikūnai prieš kardiolipino IgG

Antikardiolipino IgG antikūnai (aCL IgG) yra vienas iš autoimuninių antifosfolipidinių antikūnų tipų, dalyvaujančių antifosfolipidinio sindromo patogenezėje. Jų buvimas kraujyje pasireiškia nuo fosfolipidų priklausomų koagulogramos tyrimų (protrombino, APTT), kurie vadinami „vilkligės antikoaguliantu“, pailgėjimu.

Analizės rezultatų interpretacija

• medicininė vilkligė;
• hepatitas C;
• boreliozė;
• ŽIV infekcija.

Antikūnai prieš kardiolipino IgM

Antikūnai prieš kardiolipino IgM (aCL IgM), aptikti, rodo didelę SRV išsivystymo riziką; aCL IgM nustatoma 20-50% pacientų, sergančių sistemine raudonąja vilklige, ir 3-20% pacientų, sergančių kitomis sisteminėmis reumatinėmis ligomis.

Interpretacija

Teigiamas (aptikta antikūnų):

• hepatitas C;
• boreliozė;
• ŽIV infekcija;
• sisteminės jungiamojo audinio ligos.

Normos

Medicinoje yra specifinių sąlygų, kai apsauginės ląstelės pradeda atakuoti savo organizmą – autoimuninės ligos. Dauguma šių ligų pasireiškia lėtine forma ir yra potencialiai pavojingos, nes gali sukelti rimtų tam tikrų organų ir sistemų veikimo sutrikimų. Tai dažnai sukelia negalią ir rimtų pasekmių.

Šiuolaikinės medicinos galimybės yra didžiulės, o visus šiuos pokyčius galima nustatyti ankstyvoje stadijoje ir laiku pradėti gydymą. Vienas iš labiausiai paplitusių testų, naudojamų šioms ligoms diagnozuoti, yra antinuklearinių antikūnų testas arba sutrumpintai AHA.

ANA analizė yra informatyviausias būdas diagnozuoti bet kokius įtariamus autoimuninius sutrikimus, daugiausia jungiamojo audinio ligas. Tačiau taip pat yra antikūnų piktybiniuose procesuose, infekcinėse ir kt.

ANA analizė yra informatyviausias diagnostikos metodas įtariamiems autoimuniniams sutrikimams

Didžiausias antikūnų jautrumas tokioms ligoms:

1. Sisteminė raudonoji vilkligė.
2. Reumatoidinis artritas.
3. Sjögreno liga.

Šių ląstelių taip pat galima rasti maždaug trečdalyje lėtiniu hepatitu sergančių pacientų.

Įvairūs veiksniai turi įtakos našumo padidėjimui. Visų pirma, maliarija, leukemija, infekcinė mononukleozė ir daug daugiau.

Kartu su ANA aptikimu tyrimo metu, svarbu įvertinti ir tokių imunoglobulinų, kaip IgA, IgM, IgG, lygį. Šių komponentų aptikimas pacientų kraujyje gali rodyti didelę reumatinių patologijų ir kolagenozių atsiradimo tikimybę.

Jei ryšys tarp antikūnų kiekio ir simptomų nenustatytas, pats ANA buvimas kraujyje rodo teisingos gydymo taktikos pasirinkimą. Ilgalaikis didelių kreditų išsaugojimas byloja apie nuviliančią padėtį.Šių titrų sumažėjimas rodo patologijos remisiją, daug rečiau apie gresiančią mirtį.

Tuo pačiu metu šiuos antikūnus galima aptikti tam tikram procentui sveikų asmenų, o ANF titrai gali viršyti įprastą diapazoną.

Indikacijos tyrimui

Imunologas ir bet kuris sertifikuotas specialistas, priklausomai nuo pažeidimo srities, turi teisę interpretuoti rezultatus.

Šio tyrimo indikacijos yra šios:

1. Sisteminių ligų, taip pat autoimuninių sutrikimų be akivaizdžių simptomų nustatymas.
2. Sisteminės raudonosios vilkligės nustatymas ir išsamus jos tyrimas, gydymo strategijos parinkimas.
3. Narkotikų vilkligės identifikavimas.
4. Tam tikrų klinikinių apraiškų buvimas, pvz., užsitęsęs karščiavimas be aiškios priežasties, sąnarių trapumas ir jų skausmas, odos bėrimas, raumenų skausmai ir didelis nuovargis.
5. Simptominių mišrių ligų pasireiškimo požymiai: odos ir vidaus organų ligos, traukuliai, temperatūros padidėjimas.
6. Vaistų skyrimas dizopiramidas, hidralazinas ir kt.

Tyrimo tipai

vilkligės ruožas

Yra du būdai, kaip nustatyti antikūnus kraujyje. Pirmasis metodas vadinamas netiesiogine imunofluorescencine mikroskopija. Jei yra antikūnų, jie prisijungs prie specifinių branduolinių antigenų. Naudojami elementai, šviečiantys atskiru šviesos spektru. Mikroskopu tampa įmanoma nustatyti liuminescencijos tipą.

Sužinokite daugiau apie tai, kas yra miofascialinis sindromas ir kaip jis gydomas.

Šis metodas pripažintas geriausiu nustatant antinuklearinių antikūnų vertę. Taip pat technika gavo antrą pavadinimą - vilkligės tyrimo juostelės.
Antrasis diagnostikos metodas yra fermentinis imunologinis tyrimas. Jo prasmė slypi tame, kad antikūnai kraujyje patenka į ryšį su antigenu ir dėl to tirpalas keičia savo atspalvį.

Svarbu pabrėžti kad teigiamas patikrinimas negali būti vienintelė diagnozės priežastis.

Reikalingas papildomas tyrimas, kurio pagalba galima nustatyti ligą ankstyvoje stadijoje. Neigiamos patikros atveju galima daryti prielaidą, kad visiškai nėra sutrikimų. Tačiau tai visiškai neatmeta paciento autoimuninės ligos buvimo.

Kraujas duodamas antinukleariniam faktoriui kartu su kitais tyrimais. Tačiau galutiniam rezultatui įtakos turi tam tikrų vaistų vartojimas ir lėtinių bei ūminių patologijų buvimas pacientui. Specialistas padės išanalizuoti visus šiuos dalykus, tada nustatys teisingą diagnozę ir patars, kaip elgtis toliau.

Kaip pasiruošti tyrimui

Analizės medžiaga yra veninis kraujas.

Paruošimo ypatybės:

1. Medžiaga imama tuščiu skrandžiu. Po paskutinio valgio turi praeiti ne mažiau kaip 8 valandos. Leidžiama gerti aukštos kokybės filtruotą vandenį be dujų.
2. Likus dviem valandoms iki kraujo paėmimo neįtraukiamas rūkymas ir nikotino produktų naudojimas.
3. Likus kelioms dienoms iki operacijos nevartoti alkoholinių ir energetinių gėrimų, draudžiama dirbti sunkų fizinį darbą.
4. Per dvi savaites turėtų būti visiškai vengti vartoti vaistus ypač hormonai, antibiotikai ir kiti vaistai.
5. Norint patvirtinti tyrimą, svarbu kartoti patikrinimą po dviejų savaičių.

Analizės medžiaga yra veninis kraujas

Rezultatų tikėkitės per 48 valandas po procedūros. Duomenis avariniu būdu galima gauti per 3 valandas.

Rezultatų interpretacija

Kokybinio tyrimo metu galima gauti šiuos rezultatus:

• žemiau 0,9 - neigiamas, normalus;
• vertės nuo 0,9 iki 1,1 - abejotinos;
• virš 1,1 – teigiamas.

Pacientai dažnai užduoda klausimą: ar antinuklearinis faktorius 1:160 yra normalus, ar ne? Viskas, kas viršija šį rodiklį, neatitinka normos.

Tyrimo rezultatų aiškinimas turi informaciją gydančiam gydytojui ir nėra diagnozė. Šiame skyriuje pateikta informacija neturėtų būti naudojama savidiagnostikai ar savęs gydymui. Tikslią diagnozę nustato gydytojas, naudodamasis tiek šio tyrimo rezultatais, tiek reikiama informacija iš kitų šaltinių: istorijos, kitų tyrimų rezultatų ir kt.

Matavimo vienetai: titras.

Rezultatų interpretacija

ANF ​​nustatymo rezultatas yra titras, kuris yra galutinio serumo praskiedimo, išlaikančio reikšmingą šerdies fluorescenciją, vertė. Kuo didesnis frakcijos vardiklis, tuo didesnis serumo praskiedimas, tuo daugiau antikūnų paciento serume. Dideli serumo praskiedimo titrai atspindi didelį autoantikūnų afinitetą ir koncentraciją.

Nustačius aukštus titrus (1/640 ir daugiau), tai rodo didelę sisteminės reumatinės ligos arba autoimuninės kepenų ligos tikimybę ir reikalauja kruopštaus klinikinio, laboratorinio ir instrumentinio tyrimo. Padidėjusių antinuklearinio faktoriaus titrų nebuvimas žymiai sumažina sisteminių autoimuninių ligų tikimybę.

Esant žemiems titrams (iki 1/160), antinuklearinis faktorius gali būti stebimas 1-2% sveikų asmenų ir pacientų, sergančių sisteminėmis ligomis, giminaičių. Teigiamų titrų dažnis populiacijoje šiek tiek didėja su amžiumi. Žemi antinuklearinių antikūnų titrai gali atsirasti sergant daugeliu autoimuninių, infekcinių ir onkologinių ligų. Didelių antinuklearinių antikūnų titrų nebuvimas žymiai sumažina sisteminio reumatinio proceso tikimybę ir gali būti naudojamas diagnozei atmesti, o ne patvirtinti.

ANF ​​titrų padidėjimas dinamikoje rodo sisteminės ligos paūmėjimą, todėl sergant SRV titras koreliuoja su proceso sunkumu ir mažėja gydant efektyviu būdu.

Be serumo titro, esant teigiamam analizės rezultatui, aprašomas branduolio liuminescencijos tipas. Jį sukelia daugybė antikūnų, kurie savo taikinius randa ląstelės viduje. Aprašyta daugiau nei 20 liuminescencijos tipų, tačiau 8 iš jų naudojami klinikinėje praktikoje:

Pamatinės vertės:< 1:160

Kartais galima apibūdinti 2 švytėjimo tipus, kuriuose vienas maskuoja kitą mažais kreditais. Nustačius teigiamą ANF rezultatą, reikia pabandyti nustatyti antigeninius antibranduolinių antikūnų taikinius, naudojant antikūnų prieš dvigrandę DNR (Nr. 126) ir antikūnų prieš nukleosomas (Nr. 956) nustatymo testus, antinuklearinių antikūnų imunoblotą. (Nr. 827), antikūnų imunoblotas sergant sklerodermija (Nr. 826), antikūnų imunoblotas sergant polimiozitu (Nr. 939) ir antikūnų prieš kardiolipiną nustatymas (Nr. 967-969, 997).

antinuklearinis faktorius

antinuklearinis faktorius- laboratorinė analizė, skirta nustatyti įvairių tipų specifinius imunoglobulinus ląstelės branduolio struktūroms. ANF ​​indeksas didėja sergant sisteminėmis jungiamojo audinio ligomis. Tyrimas atliekamas jų diagnostikos, diferencijavimo, gydymo kontrolės, paūmėjimų nustatymo tikslais. Jis skiriamas esant klinikiniams ir laboratoriniams sisteminės raudonosios vilkligės, sklerodermijos, Sharpo sindromo, Sjogreno sindromo, reumatoidinio artrito, uždegiminės miopatijos požymiams. Veninio kraujo serumas tiriamas RNIF metodu. Normalus rodiklis yra titras ne didesnis kaip 1:160. Testo duomenų paruošimo laikas – 8 darbo dienos.

Reumatinių ligų pagrindas – autoimuninė reakcija prieš ląstelės branduolio struktūras – baltymų ir nukleorūgščių kompleksus. Antigenai susidaro per užprogramuotą epiteliocitų ir limfocitų mirtį. Ultravioletiniai spinduliai, infekcijos sukėlėjai, vaistai pagreitina ląstelių sunaikinimą, lėtina apoptozinių kūnų pasišalinimą, provokuoja autoimuninių procesų vystymąsi. Antikūnai prieš branduolio struktūras yra įvairių tipų, tiriant antibranduolinį faktorių išskiriami apie aštuonis. Tyrimo privalumas yra didelis jo specifiškumas – aptinkami antikūnai, kurių negalima išgryninti ELISA tyrimui. Tačiau dalis imuninių kompleksų RNIF metu ekstrahuojami į plazmą, todėl yra klaidingai neigiamo rezultato tikimybė.

Indikacijos

Antinuklearinio faktoriaus tyrimas skirtas sisteminėms jungiamojo audinio patologijoms. Testo paskyrimo pagrindas yra:

• Reumatinės ligos simptomai. Būdingos apraiškos yra karščiavimas, nuovargis, silpnumas, svorio kritimas, raumenų ir sąnarių skausmas, odos bėrimas. Tyrimas naudojamas aptikti ir atskirti SRV, sklerodermiją, Sjögreno sindromą, Sharp sindromą, reumatoidinį artritą, uždegimines miopatijas.
• Laboratorinių tyrimų rezultatai. Įtarimas dėl reumatinės patologijos atsiranda padidėjus ESR, C reaktyvaus baltymo kiekiui ir CEC. Diagnozei patvirtinti skiriamas tyrimas.
• Reumatinių ligų diagnozė. Analizė atliekama kelis kartus per metus (dažnis nustatomas individualiai), siekiant stebėti patologijos eigą, po imunosupresantų vartojimo kurso – įvertinti terapijos efektyvumą.

Pasiruošimas analizei

Biomedžiaga antinukleariniam faktoriui nustatyti – veninis kraujas. Surinkimo procedūra atliekama ryte. Paruošimo taisyklės yra šios:

1. Paskutinį kartą valgykite ne vėliau kaip prieš 4 valandas. Gerti vandenį leidžiama bet kuriuo metu.
2. Dieną prieš procedūrą reikia atmesti alkoholį, mankštą, emocinius išgyvenimus.
3. Vaistų vartojimas turi būti aptartas su gydytoju. Kai kurie vaistai provokuoja antikūnų gamybą, vaistų sukeltos vilkligės vystymąsi. Atsižvelgiant į gliukokortikosteroidų vartojimą, galima gauti klaidingų neigiamų duomenų.
4. Po kraujo donorystės turėtų būti atliekamos instrumentinės diagnostinės procedūros, fizioterapijos seansai.
5. Paskutines 30 minučių prieš procedūrą rūkyti draudžiama.

Laboratorijoje serumas išskiriamas iš kraujo. Antinuklearinių antikūnų joje nustatymas atliekamas RNIF metodu, naudojant HEp-2 ląstelių kultūrą. Titras apskaičiuojamas pagal didžiausią biomedžiagos praskiedimą, kuriame aptinkama branduolinių struktūrų liuminescencija, imunoglobulinų tipas – pagal fluorescencijos pobūdį. Analizės terminai yra 6-8 dienos.

Normalios vertės

Paprastai antibranduolinio faktoriaus tyrimo rezultatas yra neigiamas. Titras yra ne didesnis kaip 1:160 suaugusiems ir vaikams. Aiškinant galutinę vertę, atsižvelgiama į šias pastabas:

• Žemi ANA titrai sumažina autoimuninės patologijos tikimybę, tačiau jos neatmeta. Sergant SLE, 5% atvejų rezultatas būna neigiamas, atliekamas antikūnų prieš SS antigenus tyrimas.
• Normalaus rezultato gavimas po imunosupresinio gydymo kurso patvirtina jo sėkmę.
• Neigiamas rezultatas autoimuninės patologijos simptomų fone reikalauja papildomų tyrimų (NCA, ANA pagal ELISA).

Rodiklio didinimas

Antibranduoliniai antikūnai neturi citotoksinių savybių, tačiau jiems prisijungus prie antigenų susidaro imuniniai kompleksai, kurie sukelia uždegiminius procesus kraujagyslių sienelėse. Jie pasireiškia odos, inkstų glomerulų, sąnarių membranų, pleuros pažeidimais. Išryškėja sisteminėms patologijoms būdingi simptomai. Galimos ligos nustatomos pagal liuminescencijos tipą su minimaliu serumo praskiedimu:

• Homogeniškas. Difuzinė fluorescencija rodo, kad yra antikūnų prieš ds DNR, histonus. Nustatyta sergant SRV ir vaistų sukelta vilkligė.
• Periferinis. Liuminescencijos tipą lemia chromatino vieta, ji aptinkama esant Ig prie DNR komponentų, būdingų SLE.
• granuliuotas. Antigenai yra nukleoproteinų kompleksai. Švytėjimas yra nespecifinis, būdingas daugeliui reumatinių ligų. Didelis titras ir didelių granulių fluorescencija labiausiai būdingi Sharp sindromui.
• Branduolinės. Atspindi specifinio Ig buvimą branduolio struktūrose. Aptinka sklerodermiją ir Sjögreno sindromą. Retai pastebima sergant endokrinopatijomis, odos patologijomis, organų persodinimu.
• Centromerinis. Antigenai yra chromosomų centromerai. Švytėjimas patvirtina ribotą sklerodermiją.
• citoplazminis. Išprovokuoja antikūnų prieš tRNR sintetazę (Jo-1), ribosomų, organelių buvimas. Leidžia nustatyti uždegimines miopatijas, autoimuninius kepenų pažeidimus.
• Mitochondrijų. Antigenai yra piruvato dekarboksilazės komplekso komponentai. Švytėjimas būdingas pirminei tulžies cirozei.
• taškuotas. Susijęs su antikūnų prieš nukleoproteinus cirkuliacija, susijęs su autoimuniniu kepenų pažeidimu.

Indikatoriaus sumažėjimas

Rodiklio sumažėjimas turi prognostinę reikšmę stebint sistemines jungiamojo audinio ligas. ANA lygis koreliuoja su patologinių procesų aktyvumu, todėl jų koncentracijos sumažėjimas yra remisijos, gydymo sėkmės požymis.

Žmogaus imuninė sistema yra unikalus, gerai koordinuotas mechanizmas, galintis reaguoti į bet kokį išorinį patogeninių veiksnių įvedimą ir taip apsaugoti organizmą nuo daugelio ligų. Tačiau, kaip žinote, kiekvienoje taisyklėje yra išimčių, ir šiuo atveju jos atrodo kaip imuninės sistemos atsakas į savo ląsteles, kurios vadinamos autoimuninėmis ligomis.

Sergant šiomis patologijomis, gaminami antikūnai, kurie atakuoja sveikas ląsteles, jas pažeidžia arba naikina. Dėl to pažeidžiamas atskirų audinių struktūrų ir net organų funkcionavimas. Tokios patologijos dėl jų paplitimo ir įsitraukimo į kelių organų ar sistemų procesą vadinamos sisteminėmis ligomis.

Atsiradus šiuolaikiniams laboratorinės diagnostikos metodams, vienas iš kurių yra ANF – kraujo tyrimas antibranduolinio faktoriaus paieškai, leidžiantis nustatyti antibranduolinius (antbranduolinius) antikūnus ir nustatyti patologijos priežastį. Šis rodiklis yra vienas iš sisteminių jungiamojo audinio ligų (MCTD) žymenų, priimtas kaip tokio pobūdžio tyrimų „auksinis standartas“.

Pagrindinės sampratos, apibūdinančios WCD

Kaip jau aprašyta aukščiau, šių patologijų patogenezė kyla dėl imuninės sistemos sutrikimų ir apsauginių antikūnų prieš tam tikrus savo ląstelių komponentus gamybos. Tokios ląstelės dėl savo kilmės ypatumų turi antrą pavadinimą – autoantikūnai. Imuniteto nepakankamumo metu jie liečiasi su branduoliniais baltymų junginiais, nukleino rūgštimis ir citoplazmos antigenais, dėl kurių atsiranda uždegiminių ligų simptomų, tokių kaip:

• struktūriniai audinių ir organų pokyčiai;
• ryškus nepagrįstas nuovargis;
• raumenų ir sąnarių skausmas;
• odos pažeidimas;
• svorio metimas ir kt.

Antinukleariniai antikūnai (ANA) gali susidaryti esant gana įvairioms autoimuninėms patologijoms, tačiau dažniausiai jie atsiranda sergant sistemine raudonąja vilklige (SRV).

ANF ​​reikia vartoti, jei yra užsitęsusio uždegiminio proceso požymių

Nuoroda! Remiantis statistika, daugiau nei 90% pacientų, sergančių CTD, tokių antikūnų gamyba yra nenormali. Šiuo metu ištirta apie 200 jų rūšių, kurios gavo apibendrintą pavadinimą – antibranduolinis faktorius. Jas daugiausia atstovauja G klasės imunoglobulinai, tačiau kartais randama M arba A.

Antinuklearinio faktoriaus kraujo tyrimo esmė

Prieš gilinantis į ANF tyrimo atlikimo specifiką, verta paminėti, kad technika buvo išrasta ir pradėta naudoti gana seniai - praėjusio amžiaus 60-aisiais. Tačiau jis tapo plačiai paplitęs diagnostikos praktikoje tik XX amžiaus 80-ųjų pradžioje po patobulinimo. Dar 1961 metais mokslininkas Beckas kaip substratą panaudojo laboratorinių gyvūnų ląsteles, o tik 1982 metais Tanas naudojo ištisinę žmogaus ląstelių liniją HEp-2 ANF paieškai.

Nors pagrindinis šio tyrimo tikslas yra nustatyti raudonosios vilkligės diagnozę, jis vis dar laikomas universaliu kitų kolagenozių (MCTS) metodu. Pastarieji apima:

• sklerodermija;
• dermatomiozitas;
• mazginis periarteritas;
• lėtinis aktyvus hepatitas ir kt.

Vienas iš patogiausių, taigi ir dažniausiai naudojamų antibranduolinio faktoriaus nustatymo metodų pacientų kraujyje yra netiesioginė imunofluorescencija. Tyrimas atliekamas žmogaus gerklų adenokarcinomos HEp-2 persodinamos epitelioidinės linijos (turinčios tam tikrą branduolinių antigenų) ląsteles kraujo serumu, naudojant pažymėtą konjugatą (junginį) su antikūnais.

Toks pasirinkimas nebuvo atsitiktinai – HEp-2 ląstelės yra labai patogus substratas tiriant biomedžiagą. Jie turi gana didelius branduolius ir, pasodinti ant laboratorinių stiklelių, auga vienu sluoksniu. Kitos žmogaus ląstelių linijos taip pat gali būti naudojamos kaip substratas, tačiau sėkminga morfologija ir auginimas neabejotinai daro HEp-2 nepakeičiama medžiaga.

Diagnostikos metu, kai paciento serumas inkubuojamas su ląstelės substratu, esant ANA, jie derinami su atitinkamais branduolio antigenais. ANF ​​surišimo su HEp-2 vietos nustatomos naudojant konjugatą, pažymėtą fluoresceinu (dažiu). Įvykusių reakcijų rezultatams įvertinti naudojamas liuminescencinis mikroskopas, leidžiantis atskirti susidariusių raiščių pobūdį ir laipsnį.

Fluorescencinis mikroskopas laboratoriniams tyrimams ANF

Nuoroda! Žmogaus HEp-2, priešingai nei gyvūnų audinių kriosekcijos, pasižymi didesniu ląstelių dalijimosi greičiu, todėl galima aptikti antikūnus prieš antigenus, kurie ekspresuojami tik dalijimosi metu. Taip pat žmogaus substrate nėra ląstelinės matricos, o tai sumažina tiriamos liuminescencijos vizualizacijos kokybę.

Kokios antigenų grupės naudojamos tyrime?

Dekoduojant medžiagas visada reikia atsižvelgti į tai, kad ANA spektras apima gana didelę autoantikūnų grupę prieš nukleoproteinus, ribonukleoproteinus, histonus, DNR ir kitus branduolio struktūrinius vienetus. Iš to išplaukia, kad testo funkcionalumas yra skirtas aptikti antikūnus prieš branduolio ir citoplazmos komponentus, kurie iš pradžių buvo nustatyti sergant SLE.

Vėliau tyrimo diagnostikos galimybės buvo išplėstos, dėl tokių antikūnų nustatymo kitose KTD. Atrankos metoduose, skirtuose bendros ANA aptikti, paprastai naudojamas tam tikras antigenų rinkinys, kurie laikomi pagrindiniais autoimuninės CTD žymenimis.

Tai apima IgG klasės antikūnus:

• SS-A (Ro) – branduoliniai ribonukleoproteinai;
• SS-B (La) – branduoliniai baltymai;
• Scl-70, baltymas-fermentas (topoizomerazė-1);
• natūrali dvigrandė DNR;
• RNP/Sm, antigenų kompleksas;
• Jo-1, RNR sintetazės fermentas;
• CENP-B (centromeras)
• Hep-2 ląstelės;
• mitochondrijos (PDC).

AHA praktiškai nekenksmingos organizmui – nepajėgia prasiskverbti į gyvus audinius. Tačiau kai kuriais atvejais jie gali susijungti į antigeno-antikūnų kompleksus, dėl kurių sunaikinami struktūriniai audiniai. Vienas iš tokių pavyzdžių yra inkstų parenchimos pažeidimas sergant SRV. Kadangi CTD procese dalyvauja keli organai, ANA nustatymas nėra itin svarbus diagnozei, o laikomas tik tam tikrų simptomų patvirtinimu.

ANF ​​analizės galimybės, išreikštos procentais

Studijuojant rezultatus

Atlikus visas reikiamas procedūras – paėmus biomedžiagą ir jos laboratorinį paruošimą tyrimui, rezultatai įvertinami ir interpretuojami. Tai apima antikūnų titro (koncentracijos) ir liuminescencijos tipo nustatymą. Svarbus diagnozės parametras yra koncentracijos indeksas, didesnis nei 1:160. Pavyzdžiui, reumato paūmėjimo metu jis gali viršyti 1:640, o remisijos laikotarpiu sumažėja iki 1:160–1:320.

Švytėjimo tipas rodo ANA taikinius, o tai yra ypač svarbus klinikinis taškas, vadovaujantis tolesniems gydytojo veiksmams skiriant diagnostines priemones. Atsižvelgiant į branduolių švytėjimo pobūdį naudojant HEp-2, bus nustatyta daugiau nei 20 branduolio dažymo variantų, atsižvelgiant į biomedžiagoje esančių antikūnų tipus. Tarp pagrindinių yra šie švytėjimo tipai.

• Periferinis. Švytėjimas rodo anti-DNR antikūnų buvimą, o tai patvirtina SLE. Pagrindiniai periferinio tipo antigenų tipai yra histono baltymai ir DNR.
• Difuzinis (homogeniškas). Toks švytėjimas stebimas sergant SRV, kartu su inkstų struktūros pažeidimais ir panašiomis KTD, nefritu, sklerodermija, taip pat vaistų sukelta SRV. Šio tipo antigenus atstovauja dsDNR, histonatai ir nukleosomos.
• Branduolinis (branduolinis). Šis tipas būdingas sisteminei sklerodermijos formai, nustatomas esant ligoniams antikūnams – RNR polimerazė 1, PM/Scl, NOR, U3RNP.
• Citoplazminis. Šio tipo apšvietimas rodo ANA buvimą tRNR sintetazėse, būtent Jo-1, ir stebimas sergant polimiozitu.
• Granuliuotas. Jis nustatomas sergant Sjögreno sindromu, infekcine mononukleoze, mišriu CTD (Sharp sindromu, MCTD) ir vaistų sukeltu vilkligės sindromu. Šio tipo antigenai yra SS-A, SS-B, Sm, U1-RNP ir PCNA.
• Didelis granuliuotas. Jis būdingas mišriai CTD ir, daugelio mokslininkų nuomone, yra susijęs su RNP antigeno buvimu.
• Smulkios granulės. Nustatomas antikūnų, susidariusių prieš ribonukleininius baltymus – ASSP (ACCP), SS-A, SS-B ir kt., buvimas. Tokie antikūnai būdingi SRV, taip pat specifinėms jos odos formoms, reumatoidiniam artritui, sklerodermijai, polimiozitui, Sjögreno sindromui.
• Centromerinis. Šis tipas dažniausiai stebimas sergant sklerodermija. Nors viename kraujo mėginyje, ypač tiriamiesiems, sergantiems difuzine CTD, atskirtoje plazmoje galima aptikti antikūnų prieš įvairius branduolinius komponentus.
• Taškiniai intarpai branduolyje. Šis tipas dažniausiai nustatomas sergant autoimuninėmis kepenų ligomis. Su juo galima derinti keletą fluorescencinių tipų, pavyzdžiui, branduolinį ir smulkią granuliuotą, o tai atsiranda dėl antikūnų prieš Scl-70.

Nuoroda! Pastebėta, kad padidėjus plazmos biomedžiagos praskiedimui, liuminescencijos parametrai gali keistis, nes daugeliui antikūnų būdingas aktyvumo pokytis esant skirtingoms koncentracijoms.

Veiksniai, galintys iškreipti rezultatus

Tyrimo metu gautų duomenų patikimumui įtakos gali turėti tik keli veiksniai, galintys parodyti ir klaidingai teigiamą, ir klaidingai neigiamą rezultatą. Taigi neįtikimas atsakas su poslinkiu į viršų stebimas vyresniems nei 60 metų pacientams (pagal statistiką 10-37% atvejų) ir vartojant vaistus, sukeliančius vaistinę vilkligę (kai kuriuos antibiotikus, kontraceptikus, sulfonamidus, tiazidinius diuretikus).

Pastebima, kad 5-55% moterų, turinčių krūtų implantus, AHA koncentracijos lygis padidėja. Klaidingą diagnozę, kai poslinkis žemyn, gali sukelti gliukokortikoidų – prednizolono, metipredo ar deksametazono – vartojimas.