Jei iš viso at. Išsami informacija apie fermentų imunologinį tyrimą, kas tai yra ir jo aiškinimas

Žmogaus imunodeficito viruso infekcija yra rimta diagnozė. Klaidos diagnozuojant gali sukelti pražūtingų pasekmių. ŽIV ELISA analizė yra prieinamiausias tyrimo metodas, tačiau jis ne visais atvejais yra informatyvus.

ELISA – fermentinis imunologinis tyrimas. ELISA metodo uždavinys – aptikti imunodeficito viruso antikūnus biologinėje medžiagoje. Naudojant šį metodą, galima sekti ne pačių virusų buvimą skystyje, o tik antikūnus, pagamintus reaguojant į jų buvimą. ELISA plačiai naudojama lytiškai plintančių ligų diagnostikai. Tai padeda nustatyti lytiniu keliu plintančias ligas.

Yra keletas ELISA tipų: tiesioginis variantas, netiesioginis variantas, sumuštinių metodas. Bet kokiu atveju metodas pagrįstas antikūnų, kurie yra svetimkūnio įsiskverbimo rodiklis, buvimo nustatymu. Norint atskleisti šias „žymes“, biologinis komponentas apdorojamas fermentais.

ELISA nustato antikūnus 96 - 98% tikslumu, paklaida yra nereikšminga. Tai yra 2–4%.

ELISA – ŽIV diagnozavimo metodas

ŽIV ELISA analizė yra pirmasis diagnozės etapas. Imunodeficito viruso antigenai yra baltymai p24, p15, p17, p31 ir glikoproteinai gp 41, gp55, gp66, gp120, gp160.

Norint nustatyti viruso baltymą, dalis kraujo paimama iš venos. ELISA kraujo tyrimui siunčiamas mėginys apdorojamas fermentiniais imunologiniais reagentais. Serumas išskiriamas iš kraujo. Jei tyrimo metu jie randami, vadinasi, virusas jau yra kraujyje.

Kraujas duodamas griežtai tuščiu skrandžiu. Likus 2 dienoms iki analizės, nerekomenduojama valgyti riebaus maisto ir gerti alkoholio. Per 14 dienų turite nutraukti antivirusinių vaistų vartojimą.

Metodo privalumai:

• santykinai maža kaina;
• didelis reagentų stabilumas;
• didelis jautrumas;
• trumpas pristatymo laikas;
• minimali žmogiškojo faktoriaus įtaka.

Šiuolaikinės ELISA testų sistemos gaminamos pagal pasaulinius standartus. Tai pagerina metodo tikslumą.

ELISA ne visada duoda patikimų rezultatų. Virusui patekus į kraują, prasideda latentinė (paslėpta) vystymosi stadija. Laikotarpis, kol virusai pradeda daugintis ir dar nesusiformavo antikūnai, vadinamas „seronegatyvaus lango laiku“. Šiame etape nėra prasmės atlikti ELISA. Jei įvyko infekcija, rezultatas bus . Kaip greitai virusas aptinka save, priklauso nuo to, kiek pavojingų ląstelių pateko į organizmą. Esant neapsaugotiems lytiniams santykiams ar perpylus užkrėstą kraują, šis laikotarpis bus minimalus.

Siekiant didelio ŽIV ELISA patikimumo, tyrimas atliekamas tris kartus. Žmogaus imunodeficito viruso ELISA tyrimo terminai:

• 6 savaites po galimo kontakto,
• per 3 mėnesius,
• po šešių mėnesių.

4-osios kartos ELISA tyrimas dėl ŽIV yra informatyviausias metodas ankstyvosiose infekcijos stadijose. Jis gali būti atliktas praėjus 1 mėnesiui po tariamos infekcijos. Bandymas yra brangus, palyginti su 3 kartos analogu. Todėl valstybinėse gydymo įstaigose jis naudojamas kaip papildomas diagnostikos metodas. 3 tyrimas atliekamas nemokamai.Jei remiantis jo rezultatais neįmanoma vienareikšmiško atsakymo, pacientas siunčiamas IV kartos ELISA.

Svarbu! Iš karto po užsikrėtimo žmogus tampa užkrečiamas. Jis pavojingas kitiems, net kai dar nežino apie savo diagnozę!

Jei ELISA metu aptinkami antikūnai prieš ŽIV antigenus, būtini papildomi tyrimai. Tai priklauso šiems. Šio metodo patikimumas yra 80%. PGR pagalba tiriamas kraujas, sperma, makšties išskyros. Biologinis skystis suskaidomas medicininiame reaktoriuje, po to apdorojamas fermentais. Dėl to gaunami duomenys apie ŽIV ląstelių koncentraciją skystoje terpėje. Dėl didelės paklaidos (20%), esant teigiamam rezultatui, papildomai atliekamas imunoblotingas.

Kitas diagnostikos žingsnis yra Combo testas (arba imuninis blotingas). Tai labai jautrus tyrimas (98 % pasitikėjimas) ir turėtų būti atliktas, jei ELISA rezultatai yra neaiškūs po 6 mėnesių.

ELISA rezultatų interpretavimas

Iššifravimo laikas yra nuo 24 iki 48 valandų. Jei reikia skubiai gauti informaciją (reikia chirurginės intervencijos), dekodavimas atliekamas per 2 valandas. Provincijos medicinos stotyse ne visada yra reikiamų reagentų. Mėginys paimamas apyvartos vietoje, tada perkeliamas į regioninį centrą. Tokiomis aplinkybėmis rezultatą galima sužinoti per 1-2 savaites.

Fermentinio imunologinio tyrimo rezultatas gali būti teigiamas arba neigiamas; kitų variantų nėra.

Net jei pirminės ir pakartotinės ELISA tyrimo rezultatas buvo teigiamas, pacientas negali būti pripažintas ŽIV infekuotu. Galima klaida. Klaidingai teigiamo rezultato priežastys:

• lėtinės ligos;
• užsitęsusios infekcinės ligos;
• nėštumas.

Todėl analizės rezultatas turėtų būti patikslintas papildomais tyrimais.

Jei ŽIV imunoblotavimo metu (reaktyvus), asmuo laikomas užsikrėtusiu ŽIV, tai reiškia, kad jis yra sveikas.

Viruso ląstelės ilgainiui prisitaiko prie paskirtų vaistų. Norint kontroliuoti, ELISA testas periodiškai kartojamas.

Kartais imunoblotas rodo klaidingai neigiamą rezultatą. Itin retas imunodeficito virusas 6 mėn (ar daugiau). Tai įmanoma, jei į kraują pateko nedidelis viruso ląstelių kiekis. 0,5% visų atvejų infekciją galima diagnozuoti tik po metų. 99,5%, per šešis mėnesius po užsikrėtimo ELISA duos patikimą rezultatą.

Net ir atliekant didelio tikslumo tyrimus, vis dar yra 2% paklaida. Neturėtume pamiršti ir žmogiškojo faktoriaus. Siekiant pašalinti klaidų galimybę, testą galima atlikti 2 skirtingose ​​institucijose.

Kaip vyksta ELISA tyrimas

reakcijos mechanizmas

Fermentinis imunologinis tyrimas yra pagrįstas antigeno imunine reakcija su antikūnu, o fermento etiketės prijungimas prie antikūnų leidžia atsižvelgti į antigeno ir antikūno reakcijos rezultatą, atsirandantį fermentinį aktyvumą arba pasikeitus Supaprastinta forma reakcijos mechanizmas gali būti pavaizduotas taip:

Taškais

Atlieka fermentų imunologinį tyrimą

Serodiagnostikai naudojamos 96 šulinėlių polistireno plokštelės, ant kurių ląstelių sienelių iš anksto adsorbuojamas antigenas. Tiriamasis serumas įpilamas į tabletės ląstelę. Šiuo atveju prie jo prijungiami antigenui homologiški antikūnai. Neprisirišę antikūnai pašalinami plaunant. Tada į ląsteles įvedami fermentu pažymėti antikūnai prieš žmogaus imunoglobulinus (antikūnai). Jei tiriamajame serume buvo aptinkamų antikūnų, šiame etape jie veiks kaip antigenai, su kuriais reaguos pažymėti antikūnai. Po plovimo pridėjus chromogeninę medžiagą (dažą), bus galima atsižvelgti į reakciją, nes ląstelėse atsiranda dažymas. Šiuo atveju spalvos intensyvumas yra proporcingas fermento kiekiui, taigi ir antikūnų kiekiui Matuojant ląstelėje esančio skysčio optinį tankį (OD) ir lyginant jį su kontroliniu mėginiu, apskaičiuojama antikūnų koncentracija. tūrio vienetais.Dažniausiai naudojami rezultatai skaičiuojami optinio tankio vienetais.Kiekviena testavimo sistema turi savo rezultatų apskaitos rodiklius bei normos ir patologijos rodiklius, kuriais reikėtų vadovautis interpretuojant rezultatus.

Kokias infekcijas galima nustatyti ELISA metodu

Daugiausia šiuolaikinėje venerologijoje naudojamas sifilio (kartu su kitomis reakcijomis), ŽIV infekcijos, virusinio hepatito diagnostikai.Ribotos reikšmės chlamidinės infekcijos, citomegalovirusinės infekcijos ir kitų herpetinių infekcijų diagnostikai ELISA metodas taip pat yra naudojamas antikūnams, esant įvairioms infekcinėms ligoms, hormonų lygiui, autoantikūnams ir įvairiems vėžio žymenims nustatyti.

Kaip interpretuoti ELISA rezultatus

Įvairių klasių antikūnų buvimo ir lygio tyrimas kai kuriais atvejais padeda nustatyti infekcinio proceso etapus.

Deja, toks svarbus ELISA privalumas kaip kiekybinis antikūnų nustatymas praktiniame darbe neturi didelės reikšmės – t.y. neleidžia tiksliai diagnozuoti ir neturi įtakos vaistų dozei bei išrašymo laikui.

Koks yra ELISA metodo vaidmuo diagnozuojant sifilį

ELISA metodas sifilio diagnozei pirmą kartą panaudotas 1975 metais.Šiuo metu Rusijoje jis plačiai taikomas serologinei sifilio diagnostikai ir naudojamas kaip patvirtinantis sifilio tyrimas.Paprastai atliekamas tyrimas, kurio metu nustatoma sifilio diagnozė. vadinami totaliniais antikūnais prieš treponema pallidum antigenus (IgM ir IgG), nors kai kuriais atvejais galima nustatyti tik „ankstyvuosius“ M klasės antikūnus. ELISA tyrimas dėl sifilio tampa teigiamas po 3 savaičių nuo užsikrėtimo momento ir išlieka teigiamas gana ilgai ilgą laiką net ir po gydymo (kartais visą gyvenimą).Todėl kaip sifilio išgijimą patvirtinantis testas ELISA nenaudojamas.Daugeliu atvejų atliekamas tik kokybinis ELISA nustatymas - t.y. tik teigiamas arba neigiamas rezultatas, nors galimas ir kiekybinis įvertinimas.

ELISA (enzyme linked immunosorbent assay, ELISA – angl.) į praktinės medicinos gyvenimą įžengė kažkur kitur praėjusio amžiaus 60-aisiais. Pradinė jo užduotis buvo histologiniai tyrimai mokslo tikslais, kurie apsiribojo gyvo organizmo ląstelių antigeninės struktūros paieška ir identifikavimu.

ELISA metodas pagrįstas specifinių (AT) ir susijusių antigenų (AG) sąveika su antigeno-antikūno komplekso susidarymu, kuris nustatomas naudojant fermentą. Šis faktas paskatino mokslininkus suprasti, kad šis metodas gali būti naudojamas diagnostikos tikslais, siekiant nustatyti specifinius įvairių klasių imunoglobulinus, susijusius su imuniniu atsaku į tam tikrą infekciją. Ir tai buvo proveržis klinikinėje laboratorinėje diagnostikoje!

Metodas buvo pradėtas aktyviai naudoti tik devintojo dešimtmečio pradžioje, o vėliau daugiausia specializuotose įstaigose. Pirmieji ELISA analizatoriai buvo pristatyti kraujo perpylimo centrams ir stotims, infekcinėms ir venerinėms ligoninėms, nes kartu su mumis horizonte pasirodė Afrikos žemyne ​​gimęs didžiulis AIDS ir iškart prisijungė prie „senųjų“ infekcijų, todėl reikėjo skubių priemonių diagnozuoti ir ieško jį veikiančių terapinių vaistų.

ELISA metodo taikymo sritis

Fermentinio imunologinio tyrimo galimybės yra tikrai plačios. Dabar sunku įsivaizduoti, kaip apsieiti be tokių studijų, kurios pažodžiui naudojamos visose medicinos šakose. Atrodo, kad ELISA gali padaryti onkologijoje? Pasirodo, gali. Ir daug. Analizės gebėjimas rasti žymenis, būdingus tam tikroms piktybinių navikų rūšims, yra pagrindas anksti aptikti naviką, kai dėl mažo dydžio jis dar nėra aptiktas kitu būdu.

Šiuolaikinė klinikinė laboratorinė diagnostika (CDL), be navikų žymenų, turi nemažą ELISA panelių arsenalą ir naudoja jomis diagnozuojant įvairias patologines sąlygas (infekcinius procesus, hormoninius sutrikimus) ir stebint farmacinius vaistus, siekiant nustatyti jų poveikį paciento organizmui. kūno ir, beje, ne tik žmogaus. Šiuo metu veterinarinėje tarnyboje plačiai taikomas fermentinis imunologinis tyrimas, nes „mūsų mažesnieji broliai“ taip pat yra imlūs daugeliui ligų, nuo kurių kartais labai kenčia.

Taigi, ELISA dėl savo jautrumo ir specifiškumo iš kraujo mėginio, paimto iš venos, gali nustatyti:

• Hormoninė būklė (skydliaukės ir antinksčių hormonai, lytiniai hormonai);
• Virusinės ir bakterinės infekcijos buvimas (ŽIV, B ir C, chlamidijos, sifilis ir daugelis kitų ligų, kurias sukelia patogeniniai mikroorganizmai);
• Mikroorganizmų gyvybinės veiklos pėdsakai, kurie inicijavo infekcinį procesą, kuris baigėsi sėkmingai ir perėjo į imuninio atsako į šį sukėlėją formavimosi stadiją. Tokie pėdsakai, tai yra antikūnai, daugeliu atvejų lieka cirkuliuoti kraujyje visą gyvenimą, o tai apsaugo žmogų nuo pakartotinio užsikrėtimo.

Kokia IF esmė?

Fermentinio imunologinio tyrimo metodas leidžia nustatyti ne tik paties patogeno buvimą (kokybinė analizė), bet ir kiekybinį jo kiekį paciento kraujo serume.

Viruso ar bakterijų dozė reikšmingai įtakoja infekcinio proceso eigą ir jo baigtį, todėl kiekybinė analizė vaidina svarbų vaidmenį diagnozuojant ir gydant įvairių formų ir stadijų ligas.

Tačiau žinant su fermentais susietus imunosorbentus tyrimus kaip ELISA metodą, net nesusimąstome, kaip jis sugeba aprėpti tokį platų mūsų planetoje gyvenančių mikroorganizmų spektrą, kurių daugelis kelia tiesioginę grėsmę žmonių sveikatai ir gyvybei. gyvūnai. Faktas yra tas, kad ELISA turi daugybę galimybių (nekonkurencinių ir konkurencinių – tiesioginių ir netiesioginių), kurių kiekviena išsprendžia savo problemą ir leidžia atlikti tikslinę paiešką.

Vienos ar kitos klasės imunoglobulinams aptikti naudojama tradicinė 96 šulinėlių polistireno plokštė (tabletė), kurios duobutėse kietoje fazėje koncentruojami adsorbuoti rekombinantiniai baltymai. Antikūnai ar antigenai, patekę į šulinėlį su kraujo serumu, randa „pažįstamą“ objektą ir sudaro su juo kompleksą (AG - AT), kuris, fiksuotas fermento konjugatu, pasireikš kaip duobutės spalvos pasikeitimas. skaitant rezultatus.

Fermentinis imunologinis tyrimas atliekamas naudojant tam tikro specifiškumo testavimo sistemas, pagamintas specialiose laboratorijose ir aprūpintas visais reikalingais reaguojančiais komponentais. Tyrimai gali būti atliekami naudojant poveržles ("poveržles") ir skaitymo spektrofotometrus, kur daugiausia dirbama rankomis. Visiškai automatinėse mašinose, išlaisvinant laborantą nuo monotoniško lašinimo, plovimo ir kitų įprastų užduočių, dirbti, žinoma, yra greičiau ir patogiau, tačiau ne visos laboratorijos gali sau leisti tokią prabangą ir toliau dirbti senamadiškai - pusiau automatiniuose įrenginiuose.

ELISA rezultatų interpretavimas priklauso laboratorinės diagnostikos gydytojo kompetencijai, tuo tarpu būtinai atsižvelgiama į beveik visoms imunocheminėms reakcijoms būdingą savybę duoti klaidingai teigiamus arba klaidingai neigiamus atsakymus.

Vaizdo įrašas: šiuolaikinis fermentų imunologinis tyrimas

ELISA rezultatai sifilio pavyzdžiu

ELISA tinka visų formų aptikimui, be to, jis naudojamas atrankos tyrimuose. Analizei naudojamas veninis paciento kraujas, paimtas tuščiu skrandžiu. Darbe naudojamos tam tikro specifiškumo plokštelės (AT klasės A, M, G) arba suminiai antikūnai.

Atsižvelgiant į tai, kad sifilio antikūnai gaminami tam tikra seka, ELISA gali lengvai atsakyti į klausimą, kada įvyko infekcija ir kokiame proceso etape, o gautų rezultatų dekodavimas gali būti pateiktas tokia forma:

• IgM nurodo infekcinio proceso trukmę (gali atsirasti paūmėjus lėtinėms uždegiminėms ligoms);
• IgA teigia, kad infekcija įvyko daugiau nei prieš mėnesį;
• IgG rodo, kad infekcija įsibėgėjo arba neseniai gydoma, o tai nesunku sužinoti renkant anamnezę.

Atliekant tyrimą dėl sifilio, neigiamos duobutės (ir neigiama kontrolė) išliks bespalvės, o teigiamos (kaip ir teigiamos kontrolės) spalva bus ryškiai geltona dėl testo metu pridėto chromogeno spalvos pasikeitimo. Tačiau spalvos intensyvumas ne visada atitinka kontrolinį, tai yra, ji gali būti šiek tiek blyškesnė arba šiek tiek gelsva. Tai abejotini rezultatai, kurie, kaip taisyklė, turi būti iš naujo tikrinami, privalomai atsižvelgiant į kiekybinius rodiklius, gautus spektrofotometru, tačiau apskritai spalva yra tiesiogiai proporcinga imuninių kompleksų (susijusių antigenų ir antikūnų) skaičiui. vienas kitam).

Labiausiai jaudinantis fermentų imunologinis tyrimas – ŽIV ELISA

Analizė, galbūt labiau nei kiti, domina platų gyventojų ratą, nes dar negalima tvirtai teigti, kad daugelis socialinių problemų (prostitucija, narkomanija ir kt.) išnyko. Deja, ŽIV paliečia ne tik šiuos visuomenės sluoksnius, užsikrėsti galima įvairiomis aplinkybėmis, nesusijusiomis su seksualiniu palaidumu ar narkotikų vartojimu. Bet jei reikia atlikti ŽIV testą, neturėtumėte bijoti, kad visi aplinkiniai sužinos apie apsilankymą tokioje laboratorijoje. Dabar ŽIV infekuotus žmones saugo įstatymai, o abejojantys gali kreiptis į anoniminius biurus, kur gali išspręsti problemą nebijodami viešumo ir pasmerkimo.

Fermentinis imunologinis tyrimas, naudojamas ŽIV infekcijai diagnozuoti, yra vienas iš pirminių standartinių tyrimų, tačiau tam reikalingos specialios sąlygos, nes tema labai jautri.

Tikslinga atlikti ŽIV ELISA tyrimą po lytinio kontakto, kraujo perpylimo, kitų medicininių procedūrų, susijusių su infekcija, ir pasibaigus inkubaciniam periodui („seronegatyvus langas“), tačiau reikia nepamiršti, kad šiuo laikotarpiu nėra pastovus. Jis gali baigtis per 14–30 dienų arba gali trukti iki šešių mėnesių, todėl vidutinė vertė laikoma intervalu nuo 45 iki 90 dienų. Dėl ŽIV kraujas dovanojamas taip pat, kaip ir nuo kitų infekcijų – iš venos tuščiu skrandžiu. Rezultatai bus paruošti priklausomai nuo medžiagos sukaupimo laboratorijoje ir jos darbo krūvio (nuo 2 iki 10 dienų), nors dauguma laboratorijų atsakymą pateikia tą pačią arba kitą dieną.

Ko galima tikėtis iš ŽIV rezultatų?

ŽIV infekcijos ELISA metu nustatomi antikūnai prieš dviejų tipų virusus: ŽIV-1 (dažniau Rusijoje ir kitose Europos bei Azijos šalyse) ir ŽIV-2 (dažniau Vakarų Afrikoje).

ŽIV ELISA užduotis yra ieškoti G klasės antikūnų, kurie aptinkami visose tyrimo sistemose, bet vėliau, ir A bei M klasės antikūnų, aptiktų naujos kartos rekombinantinių tyrimų rinkiniuose, kurie leidžia aptikti antikūnus anksčiausiai. etapai (inkubacinis laikotarpis yra seronegatyvus langas). Iš ELISA galima tikėtis šių atsakymų:

1. Pirminis teigiamas rezultatas: kraują pakartotinai tikrina tos pačios rūšies, bet, jei įmanoma, kitos serijos tyrimo sistema ir kitas asmuo (laborantas);
2. Pakartotinis (+) apima naują paciento kraujo mėginį, kurio tyrimas panašus į pirminę analizę;
3. Kitas teigiamas rezultatas atliekamas etaloninėje analizėje, kurioje naudojami labai specifiniai testų rinkiniai (2-3 vnt.);
4. Teigiamas rezultatas abiejose (arba trijose) sistemose siunčiamas imunoblotuoti (ta pati ELISA, bet atliekama atskirai su ypač didelio specifiškumo testų rinkiniais).

Išvada apie ŽIV infekciją daroma tik remiantis imunoblotingu. Pokalbis su užkrėstu asmeniu vyksta visiškai konfidencialiai. Už medicininių paslapčių atskleidimą Rusijoje, kaip ir kitose šalyse, gresia baudžiamoji atsakomybė.

Chlamidijų ir citomegaloviruso analizės naudojant fermentinį imuninį tyrimą taip pat įgijo ypatingą populiarumą dėl to, kad jie leidžia nustatyti užsikrėtimo laiką, ligos stadiją ir gydymo priemonių efektyvumą.

Įvado metu taip pat galima stebėti įvairių klasių antikūnų atsiradimą.įvairiose infekcinio agento sukeltos patologinės būklės fazėse:

• IgM galima nustatyti jau praėjus septynioms dienoms po užsikrėtimo;
• IgA rodo, kad infekcija organizme gyvena ilgiau nei mėnesį;
• IgG patvirtina chlamidijų diagnozę, padeda stebėti gydymą ir nustatyti jo efektyvumą. Pažymėtina, kad G klasės antikūnai organizme išlieka ir cirkuliuoja nepriklausomai nuo ligos trukmės, todėl norint teisingai interpretuoti analizę, reikia atsižvelgti į pamatines vertes (normas), kurios būdas, yra skirtingi kiekvienam CDL: atsižvelgiant į bandymo sistemos prekės ženklą ir į rinkinį įtrauktų reagentų specifiškumą. Normos reikšmės įvedamos į formą šalia ELISA rezultato.

Kalbant apie tai, čia viskas šiek tiek kitaip: M klasės antikūnai atsiranda maždaug per pusantro mėnesio, tai yra, teigiamas rezultatas (IgM +) tampa pirminės infekcijos fazėje arba latentinės infekcijos reaktyvacijos metu ir išlieka nuo 4 mėnesių iki šešių mėnesių.

G klasės antikūnų buvimas būdingas pirminės ūminės infekcijos ar pakartotinės infekcijos atsiradimui. Analizė teigia, kad virusas yra, tačiau nepateikiama informacija apie infekcinio proceso stadiją. Tuo tarpu IgG titro normos nustatymas taip pat kelia keblumų, nes tai visiškai priklauso nuo konkretaus žmogaus imuninės būklės, tačiau tai nustatoma aptikus G klasės imunoglobulinus. Atsižvelgiant į tokį antikūnų elgesį, diagnozuojant CMVI, tampa būtina įvertinti G klasės antikūnų gebėjimą sąveikauti su CMV, siekiant vėliau jį „neutralizuoti“ (AT avidiškumas). Pradinėje ligos stadijoje IgG labai silpnai jungiasi su viruso antigenais (mažas avidiškumas) ir tik tada jie pradeda rodyti aktyvumą, todėl galime kalbėti apie antikūnų avidiškumo padidėjimą.

Apie fermentinio imunologinio tyrimo privalumus galime kalbėti ilgai, nes šiuo metodu pavyko išspręsti daugybę diagnostinių problemų naudojant tik veninį kraują. Nereikia ilgai laukti, nerimauti ir problemų paimant medžiagą tyrimams. Be to, ELISA testų sistemos ir toliau tobulėja, o diena, kai testas duos 100% rezultato patikimumą, jau netoli.

Vaizdo įrašas: mokomasis Maskvos valstybinio medicinos universiteto filmas. Sechenovą apie ELISA pagrindus

Fermentinio imunologinio tyrimo metodas yra modernus laboratorinio kraujo tyrimo metodas, siekiant nustatyti antikūnus prieš virusus ir antigenus prieš patogenus. Šis metodas leidžia ne tik nustatyti etiologiją, bet ir nustatyti ligos stadiją. Analizės rezultatai turi kokybinį ir kiekybinį rodiklį.

Kodėl atliekamas fermentinis imunologinis tyrimas?

• kraujo tyrimai () dėl autoimuninių ligų buvimo joje;
• paciento tyrimas dėl naviko žymenų;
• gebėjimas ištirti hormoninę kraujo sudėtį;
• infekcinių ir venerinių ligų antigenų paieška;
• ieškoti antikūnų prieš virusines infekcijas.

Fermentinio imunologinio tyrimo pranašumai yra tai, kad jis garantuoja aukštą rezultatų specifiškumo lygį ir turi didelį jautrumą (daugiau nei 90%) infekciniams sukėlėjams. ELISA yra prieinamas diagnostikos metodas, kuris atliekamas kiekviename medicinos centre. Taip pat taikant šį metodą galima ne tik nustatyti ligą, bet ir stebėti jos vystymosi procesą, lyginant kraujyje pagaminamo baltymo kiekį skirtingais intervalais.

Vienintelis ELISA trūkumas, ko gero, yra tas, kad jis negali būti naudojamas infekcijos sukėlėjui nustatyti, o tik imuniniam atsakui į šį patogeną nustatyti.

Pagrindiniai fermentų imunologinio tyrimo (ELISA) terminai

Pirmiausia panagrinėkime kai kurias sąvokas, kad suprastume laboratorinio tyrimo atlikimo principą.

Imuninis kompleksas yra antikūnų ir antigenų, esančių kraujyje ir dalyvaujančių imuniniame procese, kompleksas.

Antigenai yra organinės kilmės medžiagos, kurios susidaro dėl tam tikros ligos kūno ląstelėse. To priežastis gali būti autoimuninė ar onkologinė liga. Taip pat antigenai gali būti įvairių infekcinių ligų sukėlėjų medžiagos.

Antikūnų avidiškumas – tai antigeno ir antikūno ryšio stiprumo, taip pat su antikūnais (imunoglobulinais) kontaktavusio antigeno kiekio matas.
Tai labai svarbus rodiklis, nes pagal jį galima nustatyti žmogaus užsikrėtimo datą, o tai labai svarbu užsikrėtus nėštumo laikotarpiu.
Avidiškumo tyrimas atliekamas laboratorijoje, apdorojant antikūno-antigeno kompleksą karbamidu, kuris naikina baltymą. Šiuo atveju mažo avidiškumo junginiai sunaikinami, o didelio avidiškumo junginiai lieka nepažeisti. Avidiškumo testo rezultatai išreiškiami procentais.

Antikūnai (imunoglobulinai) yra specialus baltymas, kurį gamina limfocitai, tai yra imuninės ląstelės, kai į žmogaus organizmą patenka bakterijos, virusai ar grybeliai (infekcinis sukėlėjas).
Yra penki imunoglobulinų tipai: A, E, M, G, D. Jie skiriasi vienas nuo kito mase, forma, dalyvavimu infekciniame procese, pusinės eliminacijos periodu ir susidarymo laiku nuo užsikrėtimo momento.
IgM imunoglobulinas (pentameras) turi didžiausią molekulinę masę, jis sveria 950 000 daltonų, o likusiųjų masė yra 150–200 000 daltonų. Dėl savo dydžio IgM neprasiskverbia pro placentos barjerą. IgG imunoglobulinai užima didžiąją dalį kraujo serumo, jų procentas yra apie 80%. O mažiausią dalį serume užima IgE antikūnai – 0,003 proc. Infekciniame procese dalyvauja imunoglobulinai IgG, IgM, IgA. Nors IgE yra alerginių reakcijų rezultatas. Baltymai, tokie kaip IgD, dalyvauja formuojant vietinį imunitetą ir susidaro limfmazgiuose bei tonzilėse.

Yra keletas ELISA tipų, tarp jų tiesioginis, netiesioginis, konkurencinis ir blokuojantis metodas. Nors praktikoje laboratorijos technikai dažniausiai naudoja kietosios fazės heterogeninį imuninį tyrimą, vadinamą ELISA (enzyme linked immunosorbent assay).

Fermentinio imunologinio tyrimo principas pasireiškia antikūno ir antigeno reakcija, kurios metu susidaro imuninis kompleksas – antigenas-antikūnas. Tokia reakcija lemia tai, kad pakinta antikūnų paviršiuje esančių etikečių fermentinis aktyvumas.

Norėdami tai suprasti, mes apsvarstysime šį procesą etapais.

Pirmas lygmuo. Šiame etape tyrimą atliekantis laborantas uždeda išvalytą infekcijos sukėlėjo antigeną ant tabletės šulinėlių paviršiaus. Tada prie patogeno pridedamas paciento kraujo serumas, kuris sukelia specifinę reakciją tarp kraujyje esančio antikūno ir antigeno. Šis junginys gaunamas ir dalyvauja kitame eksperimento etape.

Antrasis etapas. Antrajame tyrimo etape susidaro imuniniai kompleksai, kurie yra reakcija tarp pirmajame etape gauto antigeno ir konjugato, tai yra imunoglobulino, paženklinto peroksidazės fermentu. Šiuo atveju pridedamas specifinis chromogenas. Reakcijos metu šulinyje susidaro spalvotas junginys. Spalvos intensyvumas šiuo atveju priklauso nuo imunoglobulinų kiekio paciento kraujyje.

Trečias etapas. Trečiajame etape laborantai dažniausiai įvertina tyrimo rezultatus. Tam naudojant spektrofotometrą atliekama fotometrija, lyginamas biologinės medžiagos tankis su mėginių tankiu, taip pat atliekamas matematinis rezultatų skaičiavimas. Imunoglobulinų kiekis kraujyje priklauso nuo tabletės duobutės tankio.
Praktikoje dažniausiai naudojamos 96 šulinėlių plokštelės.

Kai matuojamas optinis kraujo tankis (sutrumpintai IP), antikūnai skaičiuojami viename tūrio vienete. Tada rezultatas lyginamas su kontroline medžiaga.
Svarbu atsiminti, kad kiekvienas tyrimo metodas turi savo rodiklius, kuriuose atsižvelgiama į testo pamatines vertes. Tai yra patologijų ir normų rodikliai. Todėl kiekvienu atveju turite tai atsiminti. Neįmanoma interpretuoti vieno tyrimo rezultatų kitame. Taip pat neįmanoma palyginti atskirų laboratorijų rezultatų.

ELISA diagnostikos būdu nustatytos ligos

Naudojant fermentinį imuninį tyrimą, galima nustatyti, ar organizme yra tokių ligų:

1) Infekcinės ligos

2) Žmogaus imuniteto būklės rodikliai ir autoimuninių ligų žymenys.
3) Onkologinės ligos (lėtinis gonadotropinas, prostatos specifinis antigenas, alveomucinas, naviko nekrozės faktorius, vėžio-embrioninis antigenas ir kt.).
4) Endokrininės ligos.
5) Reprodukcinės sistemos pažeidimai.

Sąraše nėra visų ligų, kurias galima diagnozuoti ELISA metodu, šį sąrašą galima tęsti.

Tyrimas

Medžiagos mėginių ėmimas tyrimams naudojant fermentinį imuninį tyrimą.

ELISA tyrimams pacientai gali paimti smegenų skystį, stiklakūnio skystį, vaisiaus vandenis, gleives iš gimdos kaklelio kanalo ar šlaplės ir tepinėlius. Tačiau labiausiai paplitęs mėginys tyrimams vis dar yra paciento kraujas.

Fermentinio imunologinio tyrimo rezultatai paprastai gaunami per dieną. Vėluoti neturėtų, nors susikaupus dideliems serumams, laborantai gali tiesiog nespėti laiku atlikti analizės.

Tyrimo rezultatai

Vertinant bet kokių infekcijų nustatymui atliktų tyrimų rezultatus, ypač svarbus yra kraujyje randamų imunoglobulinų skaičius, jų tipas. Infekcijos buvimas organizme ar jos nebuvimas priklauso nuo šių rodiklių. Taip pat laborantas, palyginęs kiekybinius ir kokybinius rodiklius, gali nustatyti numatomą ligos vystymosi stadiją, taip pat atskirti ūminę ligos formą nuo lėtinės. Taip pat vertinamas aktyvaus viruso buvimas žmogaus organizme, kuris pasireiškia paūmėjusia lėtine ar ūmia ligos forma.
Apytikslis laikas, po kurio Ig imunoglobulinai atsiranda kraujyje.

Reikalas tas, kad IgM yra greičiausiai atsirandantys antikūnai. Jų aptikimas įvyksta per 1–3 savaites po organizmo užkrėtimo proceso, tai yra ūminės žmogaus viruso infekcijos fazės požymis.

Taip pat tokių antikūnų galima aptikti paciento kraujyje paūmėjus lėtinei ligai. IgM antikūnų kiekis išlieka apie 3 mėnesius nuo jų susidarymo momento, vėliau jie palaipsniui pradeda nykti. Nors yra išimčių. Pavyzdžiui, kai kurie pacientai po galutinio pasveikimo išlaiko antikūnų kiekį kraujyje. Taigi imunoglobulinų cirkuliacija vyksta praėjus keleriems metams po užsikrėtimo.

Tokiems pacientams būtina patikrinti teigiamus IgM antikūnų rodiklius, nes galimos situacijos, kai tyrimo sistema padaro klaidą ir duoda klaidingai teigiamą rezultatą. Tokios situacijos labai dažnai nutinka nėščioms moterims.

Kalbant apie IgA antikūnų atsiradimą, jie gali susidaryti praėjus 2 ar 4 savaitėms po to, kai organizmas pateko į infekciją. Tačiau antikūnus galima aptikti tik po mėnesio. Būtent tada jų skaičius pasiekia optimalų skaičių aptikimui.

IgA antikūnus gamina limfmazgių, blužnies ir gleivinių ląstelės. Tokie imunoglobulinai geba susikoncentruoti ant organų gleivinių paviršių, kur atlieka savo apsauginę funkciją, dalyvaudami vietiniame žmogaus imunitete.

IgG antikūnų atsiradimą galima atsekti testavimo sistemomis jau 4-tą savaitę po infekcinio proceso progresavimo organizme. Tokių imunoglobulinų titras gali palaipsniui didėti per 2 mėnesius. Po pasveikimo nedidelis jų titras lieka organizme ir palaiko imuninę sistemą. Tokios ligos kaip chlamidija, trichomonozė ir mikoplazmozė pasižymi mažu IgG antikūnų kiekiu kraujyje, o tai paaiškinama stipraus imuniteto tokioms infekcijoms nebuvimu.

klases

Įvairių klasių imunoglobulinų aptikimo žmogaus kraujyje variantai.

• IgM antikūnų aptikimas, kuris atliekamas atskirai, rodo pirminę asmens infekciją.
• IgM ir IgG klasės antikūnai kraujo serume vienu metu aptinkami ir pirminės infekcijos metu, kuri įvyko per pastaruosius 2–3 mėnesius. Arba šis derinys gali būti lėtinės ligos paūmėjimo požymis.
• Taigi tokie rezultatai nėštumo metu ne visada rodo pirminę infekciją.
• IgG antikūnų aptikimas atskirai gali būti imuniteto šiai infekcijai požymis, nors tai gali rodyti ir lėtinę ligą. Esant lėtinei ligos formai svarbų vaidmenį atlieka antikūnų kiekis ir jų dinamika. Tokie tyrimai atliekami maždaug kas 2 savaites.
• Kai kraujyje iš karto atsiranda IgA ir IgM antikūnų, tai gali reikšti pirminę infekciją. IgA aptikimas atskirai taip pat yra pirminės organizmo infekcijos pasekmė.

Kai IgA antikūnai nustatomi kartu su IgG antikūnais, tai reiškia lėtinės infekcijos formos suaktyvėjimą. Imunoglobulinai kraujyje atsiranda praėjus 2 savaitėms po ligos paūmėjimo.
Antikūnų avidiškumas – tai antigeno ir antikūno ryšio stiprumo, taip pat su antikūnais (imunoglobulinais) kontaktavusio antigeno kiekio matas. Tai yra papildomas ELISA diagnostikos etapas.

Tai labai svarbus rodiklis, nes pagal jį galima nustatyti žmogaus užsikrėtimo datą, o tai labai svarbu užsikrėtus nėštumo laikotarpiu. Taip pat galite įvertinti visą vaiko intrauterinės infekcijos riziką.

Avidiškumo tyrimas atliekamas laboratorijoje, apdorojant antikūno-antigeno kompleksą karbamidu, kuris naikina baltymą. Šiuo atveju mažo avidiškumo junginiai sunaikinami, o didelio avidiškumo junginiai lieka nepažeisti. Avidiškumo testo rezultatai išreiškiami procentais. Didelis antikūnų aktyvumas rodo lėtinę ligos formą arba yra nuolatinio imuniteto požymis.

Antikūnų atsiradimo kūdikių kraujyje ypatybės

Jei motinos IgG randama jaunesnių nei vienerių metų ar iki 1,5 metų vaikų kraujyje, tai reiškia, kad antikūnai į vaiko organizmą pateko per placentą nėštumo metu. Šis simptomas negali rodyti kūdikio infekcijos, bet yra imunitetas nuo motinos perduodamai infekcijai.

Bet jei mažame organizme randami IgM klasės imunoglobulinai, kurie dėl savo svorio negali prasiskverbti pro placentą iki kūdikio, tai yra infekcijos požymis. Infekcija gali atsirasti po gimdymo arba vaisiaus vystymosi metu.

Kiekybinio fermento imunologinio tyrimo metodas.

Ligų diagnozavimo ELISA metodu rezultatas pateikiamas tam tikrais matavimo vienetais:

1. OD – mėginio optinis tankis – tai antikūnų koncentracijos lygis viename tūrio vienete. Kuo šis rodiklis didesnis, tuo daugiau imunoglobulinų yra kraujyje.
2. Kai kurie ELISA rezultatai rodo, kad yra toks vienetas kaip teigiamumo koeficientas - CP. Tai taip pat yra mėginio tankio žymėjimas.
3. Imunoglobulino koncentracijos vienetai išreiškiami nanogramais, mililitrais arba ng/ml.
4. Serumo titrai išreiškiami taip: 1:20, 1:40, 1:100, 1:200, 1:400, 1:800, 1:1200 ir panašiai.
5. Titrai, kuriems esant liga diagnozuojama dėl skirtingų infekcijų, yra skirtingi.
6. Tyrimo rezultatuose yra šie simboliai: "-", "+", "?" (+, ++, +++, ++++).
7. Kokybinis įvertinimas reiškia, kad yra tik vienas iš dviejų taškų: teigiamas arba neigiamas.

Teisingas šio tyrimo rezultatų aiškinimas priklauso nuo gydytojo kvalifikacijos, nes niekas, išskyrus specialistą, neturi teisės skirti gydymo.

Specialistai įvertina antikūnų kiekį kraujyje, jų tipą ir koncentraciją.

Taip pat reikia atminti, kad neįmanoma palyginti skirtingų tyrimo metodų rezultatų ar bandymų, gautų skirtingose ​​laboratorijose, rezultatų. Kadangi bet kuriam diagnostikos metodui yra rodikliai ir matavimo vienetai.

Rezultatus lyginti leidžiama tik toje pačioje laboratorijoje.

ELISA metodo vaizdo įrašas