Bakteriologinė laboratorija. Prietaisas ir darbo bakteriologinėje laboratorijoje taisyklės Bakteriologijos laboratorijos struktūra

Dėl mikrobiologinių
tyrimai ligoninėse ir klinikose arba
egzistuoja nepriklausomai nuo jų
bakteriologinės laboratorijos.
Jie gauna įvairius tyrimus
medžiaga, gauta iš sergančių žmonių
(skrepliai, šlapimas, pūliai, išmatos, kraujas, stuburo
skystis ir pan.).
Be to, yra ir sanitarinės bei bakteriologinės laboratorijos, kuriose
vanduo yra bakteriologiškai kontroliuojamas,
oras ir maistas.
2

Bakteriologinėse laboratorijose tiriami šie objektai:

Studijų objektai
Bakteriologinės laboratorijos yra:
1. Išskyros iš organizmo: šlapimas, išmatos, skrepliai, pūliai ir
taip pat kraujas, patologinė ir lavoninė medžiaga.
2. Aplinkos objektai: vanduo, oras, gruntas, nuoplovos
iš inventorinių prekių, pašarų, technologinių žaliavų
gautas skerdžiant ūkio gyvulius.
3. Maisto produktai, mėsos ir mėsos produktų pavyzdžiai,
pienas ir pieno produktai, kuriuos reikia duoti
tinkamumo maistui įvertinimas.
3

skirta

bakteriologinė laboratorija
skirta
– medžiagų, kurių sudėtyje yra, tyrimui
bakterinių infekcijų patogenai,
– nustatyti sanitarinius ir mikrobiologinius rodiklius,
– valstybės ir įtampos kontrolė
specifinis imunitetas ir kt
mikrobiologiniai tyrimai.
4

bakteriologinė laboratorija

Mikrobiologinio darbo specifika reikalauja, kad laboratorijai skirta patalpa būtų izoliuota:
- iš gyvenamųjų kambarių,
- maisto blokeliai ir
– kitos nepagrindinės gamybinės patalpos.
Bakteriologinė laboratorija turėtų būti įsikūrusi
patalpos izoliuotos nuo kitų laboratorijų su
reikalinga įranga ir baldai.
Laboratorijoje turi būti:
- Atskiras įėjimas,
- spinta ir
- dušas.
5

bakteriologinė laboratorija

Bakteriologinė laboratorija apima:
- patalpa medžiagai priimti ir registruoti;
– laboratorinės patalpos bakteriologiniams
tyrimų ir ūkinės patalpos;
- autoklavas arba sterilizavimas ("švarus",
„nešvarus“) atliekoms dezinfekuoti
medžiagos ir užteršti indai;
– plovimas, įrengtas indams plauti;
– bakteriologinė virtuvė – maisto ruošimui,
auginimo terpės išsiliejimas, sterilizavimas ir saugojimas;
– vivariumas eksperimentiniams gyvūnams laikyti;
- medžiaga atsarginiams reagentams laikyti,
indai, įranga ir buitinė technika.
6

bakteriologinė laboratorija

Išvardytos pagalbinės patalpos kaip
įtraukiami savarankiški struktūriniai vienetai
sudėtyje yra didelių bakteriologinių
laboratorijos.
mažose laboratorijose
bakteriologinė virtuvė ir
sterilizavimo patalpa sujungta į vieną
kambarys;
- specialus sandėliukas
eksperimentinių gyvūnų nėra.
7

bakteriologinė laboratorija

Mikrobiologinės patalpos
laboratorijos pagal pavojingumo laipsnį
personalas skirstomas į 2 zonas:
I. „Užkrečiama“ zona – patalpa arba grupė
laboratorijos patalpos, kuriose
manipuliavimas patogeniniais biologiniais
agentai ir jų sandėliavimas, darbuotojai apsirengę
atitinkamo tipo apsauginius drabužius.
II. "Švari" zona - patalpos, kuriose jie nevykdo
darbas su biologine medžiaga, personalas aprengtas
asmeniniais drabužiais.
8

Laboratorinės patalpos

Po laboratorinėmis patalpomis, kuriose jie gamina
visi bakteriologiniai tyrimai
šviesiausi, erdviausi kambariai.
Sienos šiose patalpose iki 170 cm aukščio nuo grindų
nudažyti šviesiomis spalvomis aliejiniais dažais arba
padengti plytelėmis.
Grindys išklotos relinu arba linoleumu.
Tokia apdaila leidžia naudoti valant
patalpos su dezinfekuojančiais tirpalais.
Kiekviename kambaryje turi būti kriauklė su tekančiu vandeniu ir indas su dezinfekavimo priemone.
sprendimas.
9

10. Bakteriologinė laboratorija

Reikalingos vietos apima:
Žarnyno infekcijų laboratorijos
Lašelių infekcijos laboratorijos
Sanitarinė ir bakteriologinė laboratorija
Serologinė laboratorija
Pagalbinės patalpos:
sredovarnya,
skalbimas
Sterilizacija
Registras
Sandėliai
Vonios kambarys darbuotojams
Vivarium
Kiekviena laboratorija turi turėti mikroskopą,
autoklavai, termostatai, džiovinimas ir sterilizavimas
spintos, kraujo krešėjimo aparatai, centrifugos,
laboratorinės svarstyklės, pH matuoklis, plovimo vonia
10

11. Bakteriologinė laboratorija

Viename iš kambarių įstiklinta dėžė įrengta izoliuota patalpa su vestibiuliu (prieš dėže)
darbų atlikimas aseptinėmis sąlygomis.
Dėžutėje virš darbo vietos padėjo stalą pasėliams, taburetę
įdiegti baktericidines lempas.
Prieškambaryje yra spintelė steriliems daiktams laikyti
medžiaga.
„Užkrečiamosios“ zonos patalpų langai ir durys turi būti
užantspauduotas.
Esama ištraukiamoji ventiliacija iš "infekcinės" zonos turėtų
būti izoliuoti nuo kitų vėdinimo sistemų ir
įrengti smulkūs oro filtrai.
11

12. Mikrobiologinių tyrimų patalpos

Mikrobiologinės patalpos
tyrimų įranga:
termostatai,
šaldytuvai,
centrifugos,
svarstyklės,
vandens vonios,
elektromagnetinės maišyklės.
Ant stalų padėkite būtinus
įranga.
Darbas su užkrėstomis medžiagomis
atliekama dėžutėje su išankstine dėžute.
12

13. Bakteriologinė laboratorija

Dėžutėje gauti pavyzdžiai išardomi, paruošiami ir tvirtinami
tepinėlius-atspaudus, atlikti mikroorganizmų pasėlius ant
maistinės terpės.
Todėl dėžutėje yra lentelės, ant kurių jie dedami
būtini darbui įrankiai: stelažai mėgintuvėliams,
mėgintuvėliai ir Petri lėkštelės su maistine terpe, sterilūs
naudotos pipetės, skiediniai, indai su dezinfekavimo priemonėmis
indai ir kt.
Dėžutėje dviračiuose būtina turėti sterilų
chalatai, kepurės, kaukės, taip pat persirengimo kambaryje turi būti
kambariniai batai.
Prieškambaryje galite pastatyti termostatus, šaldytuvus,
centrifugos ir kita įranga.
Dėžėse ir išankstinėse dėžėse kasdien atlikti šlapias
valymas, dezinfekavimas ir švitinimas
baktericidines lempas 30-40 minučių prieš paleidimą
darbo ir po darbo.
13

14. Autoklavas

Autoklave turite turėti du
autoklavas:
vienas autoklavas grynoms medžiagoms (skirtas
indų, maistinių medžiagų sterilizavimas,
įrankiai);
kitas užkrėstų medžiagų autoklavas
(norint neutralizuoti užkrėstus
įrankiai ir medžiagos).
14

15. Skalbimas

Skalbimas skirtas skalbimui ir
indų apdorojimas.
Skalbimo patalpoje turi būti kriauklė su
šaltas ir karštas vanduo ir viryklė.
Skalbimo mašina turi būti įrengta
valymo reikmenys ir įranga
indai
Skalbimo patalpoje yra džiovinimo spintos.
15

16. Vivarium

Vivariumas yra naudojamas kambarys
laboratoriniams gyvūnams laikyti.
Vivariume turi būti:
karantino skyrius,
patalpos eksperimentiniams ir sveikiems gyvūnams,
patalpos narvams plauti ir dezinfekuoti, inventorius ir
kombinezonai,
virimo virtuvė,
sandėliukas,
pašarai,
deginimo krosnis.
Visi vivariumo kambariai turi būti
izoliuoti vienas nuo kito.
16

17.

bakteriologinėje laboratorijoje
kambariai išdėstyti taip, kad
„nešvarūs“ ir „švarūs“ srautai nėra
kirto ir nelietė
17

18. Darbo bakteriologinėje laboratorijoje taisyklės

Laboratorijos darbuotojai turi laikytis šių reikalavimų
reglamentas:
1. Leidžiama dirbti su specialiais drabužiais – chalatu ir kepure. bokse
dirbti su steriliu chalatu, kauke, kepure, jei reikia, apsivilkti
gumines pirštines ir akinius.
Būtinai pakeiskite batus!
2. Draudžiama išeiti iš laboratorijos apsirengus ar apsirengus
viršutiniai drabužiai ant chalato.
3. Laboratorijoje draudžiama rūkyti ir valgyti maistą.
4. Visa medžiaga, patenkanti į laboratoriją analizei, turi būti privaloma
būti traktuojami kaip užsikrėtę.
Todėl išpakuodami medžiagą reikia būti atsargiems.
Talpyklas iš išorės reikia nuvalyti dezinfekuojančiu tirpalu ir padėti
sudėkite juos ant padėklų arba kiuvetėse.
18

19. (tęsinys)

5. Esant sąlyčiui su užkrėsta medžiaga ant chalato, rankų, stalo, batų, būtina
atlikti dezinfekciją ir apie tai informuoti laboratorijos vadovą.
6. Užkrėsta medžiaga turi būti sunaikinta autoklave. įrankiai ir
taip pat po darbo dezinfekuojamas darbastalio paviršius.
7. Draudžiama iš laboratorijos išsinešti įrangą, inventorių, medžiagas be
išankstinė dezinfekcija.
8. Pipetės, stikleliai, dengiamieji stikleliai ir kiti naudoti indai,
dezinfekuojama panardinant į dezinfekavimo priemonę.
9. Darbo pabaigoje darbo vieta sutvarkoma ir kruopščiai dezinfekuojama.
Jame saugomos tolesniam darbui reikalingos mikroorganizmų kultūros
šaldytuvas.
10. Tik asmenys, kurie buvo įspėti apie potencialą
pavojų ir kurie įvykdė specialius reikalavimus (pvz., imunizacija, apsauginiai drabužiai
ir tt)
19

20. Bakteriologinė laboratorija tvarko šią dokumentaciją:

1. Kultūrų muziejinių atmainų inventorinė knyga.
2. Medžiagų judėjimo laboratorijoje žurnalas.
3. Sterilizacijos ir naikinimo registras
užkrėstos medžiagos.
4. Užkrėstų eksperimentinių gyvūnų registras.
5. Tyrimų (ekspertizės) žurnalas.

PAMOKOS TEMA: Bakteriologinė laboratorija ir darbo joje taisyklės. Mikroorganizmų klasifikacija. Bakterijų morfologija. Mikrobų tipo nustatymo metodai. bakterioskopinis metodas. Mikroskopijos technika su panardinimo sistema.

MOKYMOSI TIKSLAS: Susipažinkite su bakteriologinės laboratorijos aparatu ir darbo jame taisyklėmis. Susipažinkite su mikroorganizmų klasifikavimo principais. Ištirti bakterijų morfologines ypatybes ir mikrobų tipo nustatymo metodus. Įvaldyti bakterioskopinį tyrimo metodą ir mikroskopijos imersine sistema techniką.

PAMOKOS TIKSLAI:

1. Susipažinkite su bakteriologinės laboratorijos sandara ir darbo joje taisyklėmis.

2. Susipažinti su mikroorganizmų klasifikavimo principais.

3. Ištirti bakterijų morfologines ypatybes ir mikrobų tipo nustatymo metodus.

4. Įvaldyti mikroskopijos imersine sistema techniką.

Bakteriologinis laboratorinis prietaisas

Bakteriologinė laboratorija skirta medžiagoms, turinčioms bakterinių infekcijų sukėlėjų, tirti, sanitariniams ir mikrobiologiniams rodikliams nustatyti, specifinio imuniteto būklei ir intensyvumui kontroliuoti bei kitiems mikrobiologiniams tyrimams. Bakteriologinė laboratorija turėtų būti įrengta nuo kitų laboratorijų izoliuotose patalpose su reikalinga įranga ir baldais. Laboratorijoje turi būti atskiras įėjimas, drabužinė ir dušo kambarys. Bakteriologinėje laboratorijoje turėtų būti šios patalpos:

Patalpa medžiagoms priimti ir registruoti;

Dėžės patalpos mikrobiologiniams tyrimams;

Autoklavas;

skalbimas;

Vivarium.

Mikrobiologiniams tyrimams skirtose patalpose įrengti termostatai, šaldytuvai, centrifugos, svarstyklės, vandens vonios, elektromagnetinės maišyklės. Ant stalų padedama reikalinga įranga. Darbas su užkrėstomis medžiagomis atliekamas boksas Su išankstinis boksininkas. Prie įėjimo į dėžę turi būti kilimėlis, suvilgytas dezinfekavimo priemone. Dėžutėje gauti mėginiai išardomi, paruošiami ir fiksuojami tepinėliai-atspaudai, atliekami mikroorganizmų skiepai ant maistinių terpių. Todėl į dėžę dedami stalai, ant kurių dedami darbui reikalingi įrankiai: indai su dezinfekavimo priemonėmis panaudotiems indams, stelažai mėgintuvėliams, mėgintuvėliai ir Petri lėkštelės su maistinėmis medžiagomis, sterilios pipetės, skiediniai ir kt., dangteliai, kaukes, taip pat persirengimo kambaryje turėtų būti keičiami batai. Prieškambaryje gali būti patalpinti termostatai, šaldytuvai, centrifugos ir kita įranga. Dėžėse ir išankstinėse dėžėse kasdien 30-40 minučių prieš ir po darbo atliekamas šlapias valymas, dezinfekcija ir švitinimas baktericidinėmis lempomis.

AT autoklave būtina turėti du autoklavus: vieną autoklavą švarioms medžiagoms (stiklo indams, maistinėms terpėms, instrumentams sterilizuoti); kitas autoklavas užkrėstoms medžiagoms (užkrėstiems instrumentams ir medžiagoms išmesti).

skalbimas skirtas indams plauti. Indus, pipetes ir instrumentus, užterštus užkrėstomis medžiagomis, reikia plauti tik po sterilizacijos. Yra džiovinimo spintos.

vivarium reiškia patalpas, kuriose laikomi laboratoriniai gyvūnai. Vivariume būtina turėti karantino skyrių, patalpas eksperimentiniams ir sveikiems gyvūnams, narvų plovimo ir dezinfekavimo patalpas, inventorių ir kombinezonus, virtuvę maistui ruošti, sandėliuką, pašarus, deginimo krosnį. Visi vivariumo kambariai turi būti izoliuoti vienas nuo kito.

Bakteriologinėje laboratorijoje nustatomas infekcijos tipas, sukėlęs tam tikrą organizmo ligą. Tam kraujas, šlapimas, smegenų skystis ir kiti kūno skysčiai auginami įvairiose maistinėse terpėse. Kartais pasėliai gaminami iš odos, nosies gleivinės ir ryklės. Akių gydytojai, diagnozavę „konjunktyvitą“, taip pat dažnai siunčia pacientą bakteriologiniam tyrimui.

Jei įtariate ūminį ar lėtinį konjunktyvitą, tyrimas padeda patikslinti diagnozę ir nustatyti konjunktyvitą sukėlusių bakterijų tipą. Tyrimas prasideda tuo, kad specialiu prietaisu junginės maišelio turinys paimamas ir sėjamas į specialų sultinį, o po to į maistinę terpę. Po 24-48 valandų ant maistinės terpės išauga bakterijų kolonijos. Po specialaus dažymo jie tiriami mikroskopu ir nustatomas ant junginės gyvenančių mikroorganizmų tipas. Dažniausiai tai būna bakterijos, rečiau – kiti mikroorganizmai (grybeliai, amebos).

Siekiant išspręsti veiksmingiausio antibiotiko vartojimo klausimą, nustatomas patogeninių bakterijų jautrumas vaistinėms medžiagoms.

Pabaigoje pateiksime keletą skaičių ir dar kartą priminsime, kaip galite apsisaugoti nuo infekcijos.

Atminkite, kad žemėje, vandenyje ir ore gyvena mikroorganizmai. Su kiekvienu judesiu, mirksėjimu, kvėpavimu mes su jais kontaktuojame. Mūsų gleivinės neleidžia jiems patekti į gyvybiškai svarbius organus. Atkreipkite dėmesį į įdomius faktus, kuriuos surinko vienas iš mikrobiologijos mylėtojų.

1 g gatvės dulkių yra apie 2 milijonus mikroorganizmų, jie į orą patenka iš žemės. Daugiausia mikrobų randama viršutiniuose 50 cm dirvožemio sluoksniuose.

Vandens baseinuose yra nuo 5 iki 10 000 bakterijų 1 kv. cm, o miesto upėje - 23000 1 kv. cm.

Tačiau duomenys apie mikroorganizmų skaičių 1 kvadrate. m mus supančio oro: miško ar parko ore - nuo 100 iki 1000 mikrobų 1 kv. m, jūros ore 100 km nuo kranto - tik 0,6, 2000 m aukštyje - 3.

Visiškai kitoks vaizdas stebimas centrinėje vidutinio miesto gatvėje – 3500 mikrobų 1 kv. m, naujame name - 4500, sename - 36000, ligoninėje - 79000, nakvynės namuose - 40000.

Šie skaičiai kalba patys už save. Mikroorganizmai yra virusai, bakterijos, grybelių sporos ir pelėsiai. Be to, pačiose dulkėse pagal cheminę sudėtį, ypač miesto gatvėse, butuose, įvairiose pramonės šakose, yra cheminių ir fizinių priemaišų, kurios kenkia organizmui. Mūsų gleivinės ir oda ne visada gali susidoroti su tokiu krūviu be mūsų pagalbos. Kad nesusirgtumėte, reikia atsiminti prevencijos taisykles.

BAKTERIOLOGIJOS LABORATORIJA- mokslinė ir praktinė institucija, atliekanti bakteriologinius, imunologinius ir kitus mikrobiologinius tyrimus. Atsižvelgiant į mikrobiologijos apskritai ir bakteriologijos, kaip vienos iš jos šakų, diferenciaciją, yra bakteriologinės laboratorijos, atliekančios įvairias užduotis ir funkcijas. Ligoninių klinikinėse ir diagnostinėse bakteriologinėse laboratorijose atliekami tyrimai, būtini infekcinės ligos diagnozei nustatyti ar patikslinti, kontroliuojant gydymo efektyvumą.

Bakteriologinių laboratorijų specializaciją ligoninėse lemia ligoninės profilis (ūminės infekcinės ligos, vaikų infekcinės ligos, venerinės ligos, tuberkuliozė ir kt.). Sanitarinių ir epidemiologinių stočių bakteriologinės laboratorijos, kaip ir klinikinės laboratorijos, atlieka diagnostinį darbą, aptarnauja ligonines, kurios neturi savo laboratorijų, atlieka profilaktinius gyventojų tyrimus ir sanitarinius bei bakteriologinius maisto ir vandens tyrimus.

Be medicininių, veikia platus veterinarinių bakteriologinių laboratorijų tinklas, atliekančių diagnostinius ir profilaktinius gyvūnų infekcinių ligų tyrimus (žr. Veterinarijos laboratorija). Labai specializuotos yra kontrolės funkcijas atliekančios bakteriologinės laboratorijos, tokios kaip bakteriologinės laboratorijos vandentiekiuose, kontrolės laboratorijos įmonėse, gaminančiose vakcinas, serumus ir kitus bakterinius preparatus. Dezinfekcijos patalpose organizuojamos specialios bakteriologinės laboratorijos. Jų užduotis – bakteriologinė dezinfekcijos kokybės kontrolė. Kartu su medicininio ir veterinarinio profilio bakteriologinėmis laboratorijomis veikia specializuotos bakteriologinės laboratorijos, aptarnaujančios maisto pramonės (vyno gamyklų, kepyklų, alaus daryklų ir kitų įmonių), žemės ūkio ir kt. atitinkamų mokslinių tyrimų institutų struktūroje numatytos įvairaus profilio bakteriologinės laboratorijos, skirtos įvairioms tyrimų problemoms spręsti. Bakteriologinės laboratorijos gali būti stacionarios ir mobilios. Pastarieji naudojami sanitarinei ir antiepideminei karinių dalinių priežiūrai, taip pat ekspedicinėmis, lauko sąlygomis (žr. Laboratorija, karinio lauko sąlygomis). Be mobiliųjų, kariai turi ir stacionarias laboratorijas. Bakteriologijos laboratorijose atliekamų tyrimų specifika lemia laboratorijų struktūrą ir darbo jose režimą.

Pagrindinis reikalavimas bakteriologinėms laboratorijoms ir kylantis iš jos darbo specifikos – sudaryti sąlygas, kurios užtikrintų tyrimų atlikimą steriliausiomis sąlygomis ir garantuotų personalui bei kitiems asmenims nuo galimos infekcijos. Bakteriologinės laboratorijos struktūrą sudaro: pati laboratorija ir keletas papildomų padalinių. Gydykite juos: sredovovarnya, plovimu, paruošimu, sterilizavimu ir vivarium (žr.). Išvardinti padaliniai, kaip savarankiški struktūriniai padaliniai, yra didelių bakteriologinių laboratorijų dalis. Mažose bakteriologinėse laboratorijose nėra vivarijų ir specialios paruošiamosios patalpos, o terpės ir sterilizavimo patalpas galima sujungti į vieną patalpą.

Prietaisas ir įranga

Ryžiai. 5. Stiklinės mentelės. 6 pav. Mentele iš platininės vielos.

Bakteriologinių laboratorijų patalpos turi būti pakankamai šviesios ir erdvios. Sienos turi būti nudažytos aliejiniais dažais, grindyse neturi būti įtrūkimų. Laboratorijos langai turi būti orientuoti į šiaurę arba šiaurės vakarus. Orientuojant į pietus langai pakabinti baltomis užuolaidomis. Bakteriologinėje laboratorijoje turėtų būti praustuvas arba praustuvas, virš kurio lentynoje padėtas buteliukas su tirpalu rankų dezinfekcijai. Bakteriologo darbastalis, jei įmanoma, pastatomas 1 m atstumu nuo lango ir uždengiamas linoleumu arba stiklu. Ant stalo dedamas dujinis degiklis (nesant dujinio degiklio, alkoholio degiklis). Privaloma darbo vietos įranga – pipetės indelis su dezinfekuojančiu tirpalu (3 % karbolio rūgšties tirpalas), užsandarinamas porcelianinis arba stiklinis indas vatai, bakterijų kilpos laikiklis, bakterijų etalonų rinkinys, mėgintuvėlių stovai, emaliuotos kiuvetės, pincetai, žirklės. ir skalpelis, švarios stiklinės skaidrės su skylutėmis ir be jų, taip pat dengiamieji stikleliai. Dažniausiai naudojami 26 x 76 mm dydžio ir 1 - 1,2 mm storio skaidres, 18 x 18 arba 20 x 20 mm dengiamosios plokštelės. Bakteriologinėje laboratorijoje turi būti metaliniai padėklai Petri lėkštelėms nešti, cinkuoti kibirai ar rezervuarai užkrėstiems lėkšteliams ar įrangai išpilti. Mikroskopai laikomi dėkle arba po stikliniu dangteliu. Darbalaukis neturėtų būti perkrautas nereikalingais daiktais. Paprastai bakteriologinėje laboratorijoje yra įrengtas papildomas mažas staliukas fiksuotų preparatų dažymui. Ant tokios lentelės dedamas: reikalingų dažų ir reagentų rinkinys blokelyje su pipetėmis ir guminėmis skardinėmis (1 pav.), emaliuota kiuvetė arba kristalizatorius su stovu preparatams, vieliniai pincetai arba Cornet pincetai (2 pav.) tvirtinimo stikleliai, filtravimo popieriaus lapai skysčiui pašalinti iš išplautų preparatų, poveržlė (3 pav.) arba vandens butelis. Bakteriologinė laboratorija aprūpinta įvairiais tyrimams reikalingais įrankiais. Be įprastų cheminių indų (cilindrų, kolbų, stiklinių, matavimo pipečių ir kt.), reikalingi specialūs indai, skirti bakteriologinėms ir imunologinėms analizėms: 1) stiklinės Petri lėkštelės, naudojamos bakterijoms auginti tankiose terpėse ir izoliuotoms bakterijų kolonijoms gauti; 2) bakterijų kilimėliai (4 pav.) - plokšti buteliai (22 x 17 x 5 cm dydžio), kurie naudojami daugybei bakterijų auginti; 3) Roux vamzdeliai su susiaurėjimu bakterijoms auginti ant bulvių seklumos; 4) 90 mm ilgio ir 9-10 mm vidinio skersmens Wasserman mėgintuvėliai, skirti komplemento fiksavimo ir agliutinacijos reakcijai nustatyti; 5) 90 mm ilgio ir 3-5 mm skersmens nusodinimo vamzdeliai nusodinimo reakcijai nustatyti; 6) bakterijų mėgintuvėliai, naudojami bakterijoms auginti ant kietų ir skystų maistinių medžiagų; 7) Pasteur pipetės, naudojamos skystoms medžiagoms sėti, skysčiams skiesti lašintuvu, dažyti ir kt. ; 8) Mohro pipetės arba pipetės su sferiniu išsiplėtimu vidurinėje dalyje, skirtos užkrėstai skystai medžiagai pasėti, taip pat automatinės pipetės arba pipetės su guminėmis kriaušėmis, išskyrus medžiagos išsiurbimą per burną. Kultūrų auginimui skystose maistinėse terpėse, maistinių terpių, reagentų ir kt. laikymui ir išpilstymui naudojami įprasti laboratoriniai stikliniai indai. Bakteriologinėje laboratorijoje naudojami stikliniai indai turi būti iš anksto išplauti, tam dažniausiai verdami 1-2 % druskos rūgšties tirpale. Bakteriologinių indų, kuriuose auginami mikrobai, dezinfekcija turėtų būti atliekama tik esant aukštai temperatūrai, nenaudojant jokių dezinfekavimo priemonių, nes pastarųjų buvimas net ir pėdsakų pavidalu gali dar labiau slopinti mikrobų vystymąsi. Mikroorganizmų inokuliacija bakteriologinėje laboratorijoje atliekama naudojant bakteriologines kilpas, stiklines arba platinines menteles (5 ir 6 pav.). Bakterijų auginimas vykdomas oro termostate (žr.), o didelėse bakteriologinėse laboratorijose – specialiose termostatinėse patalpose.

Jei reikia tikslios temperatūros kontrolės ir santykinai trumpalaikio bakterijų auginimo arba nustatant imunologines reakcijas, patogu naudoti vandens ultratermostatus. Kiekvienoje bakteriologinėje laboratorijoje, kurioje jie tiria anaerobus, turi būti įrengtas anaerobinis balionas (žr.), eksikatoriai ir vakuuminiai siurbliai orui pašalinti. Pastarieji taip pat naudojami filtravimui. Norint pasiekti geriausias aseptines sąlygas, reikalingas pasėliams, kultūrų išskyrimui ar subkultūrai, bakteriologinėse laboratorijose įrengiamos specialios glazūruotos dėžės su išankstinėmis dėžėmis. Dėžutėje yra dujinis degiklis, indas su dezinfekuojančiu tirpalu ir, jei įmanoma, baktericidinė uvio lempa. Jei nėra stacionarios dėžutės, kai atliekate kai kuriuos darbus, kuriems reikalingas didelis aseptikos laipsnis, galite naudoti nešiojamą stalinį dėžutę (žr. Dėžutės, mikrobiologinės).

Ryžiai. 7. Automatinis kolonijų skaitiklis su televizoriaus valdymo įtaisu: 1 - Petri lėkštelė su išaugintomis kolonijomis; 2 - elektroninė rezultatų suvestinė su skaičiais, rodančiais kolonijų skaičių Petri lėkštelėje; 3 - televizoriaus ekranas, skirtas stebėti padidintą kolonijų, auginamų Petri lėkštelėje, vaizdą.

Bakterijų kultūros, gydomieji ir diagnostiniai serumai, fagai ir kiti biologiniai substratai (serumai, peptono tirpalai ir kt.) laikomi šaldytuve. Bakterijų kultūros turėtų būti laikomos sandariuose mėgintuvėliuose arba ampulėse, kuriems bakteriologinės laboratorijos turi turėti litavimo degiklį arba paprastą pūtiklį. Privalomas bet kurios bakteriologinės laboratorijos priedas yra mikroskopas (žr.). Daugumai tyrimų naudojamas MBI-3 mikroskopas ir šviestuvai. Mokslinės bakteriologinės laboratorijos taip pat aprūpintos fazinio kontrasto, liuminescenciniais ir elektroniniais mikroskopais. Petri lėkštelėse užaugintų bakterijų kolonijų kiekiui nustatyti naudojami skirtingų sistemų skaitikliai. Vienas iš tokių skaitiklių – automatinis skaitiklis su nuskaitymo įrenginiu ir televizoriaus valdymo įrenginiu, galinčiu suskaičiuoti iki 500 puodelių per valandą (7 pav.). Svarbūs bakteriologinių laboratorijų įrangos elementai yra kratymo aparatai, naudojami tais atvejais, kai reikia užtikrinti medžiagos maišymą ir kratymą tam tikrą laiką (kraujo defibrinacija, medžiagos homogenizacija ir kt.). Tankioms dalelėms (mikrobinėms ląstelėms, audinių ląstelėms, tiriamos medžiagos suspensijai) nusodinti naudojamos centrifugos (žr.). Daugumai tyrimų dažniausiai naudojamos centrifugos, besisukančios 3000 – 3500 aps./min. greičiu. Jei nėra elektrinių centrifugų, naudojamos rankinės centrifugos.

Bakteriologinių laboratorijų veikla labai priklauso nuo pagrindinio reikalavimo – darbo aseptinėmis sąlygomis su steriliais daiktais (įrankiais, maistinių medžiagų terpėmis, indais) laikymosi. Todėl bakteriologinių laboratorijų įrangoje didelę vietą užima sterilizavimo įranga (žr.). Kiekvienoje bakteriologinėje laboratorijoje yra autoklavas (žr.), Kocho aparatas, Pastero krosnis (žr. Pastero krosnis), aparatas išrūgų koaguliacijai. Sterilizavimui virinant naudojami įprasti sterilizatoriai (žr.), šildomi iš elektros tinklo ar kitais būdais.

Skystų substratų, besikeičiančių temperatūros įtakoje, sterilizavimui naudokite bakterinius filtrus (žr.). Sudrėkintų daiktų (indų, įrankių) džiovinimas po sterilizacijos garais ar slėgiu atliekamas džiovinimo spintelėse (žr.). Bakteriologinių laboratorijų įranga, reikalinga dažniausiai naudojamoms maistinėms terpėms paruošti, be nurodytos įrangos, apima terpių pylimo įrenginius, reagentų rinkinius ir indus tam tikroms cheminėms analizėms (amino azoto, triptofano, chloridų nustatymui) atlikti. ir kt.), taip pat prietaisai ir reagentai, skirti terpės pH nustatyti; universalus indikatorius, indikatoriai ir Michaelis komparatorius arba potenciometras.

Darbas su gyvūnais bakteriologinėse laboratorijose atliekamas specialioje patalpoje – vivariume. Faktinėse bakteriologinėse laboratorijose eksperimentai su gyvūnais neleidžiami. Norint atlikti pagrindinius darbus su gyvūnais (kraujo paėmimas, biologinių mėginių nustatymas, diagnostinės reakcijos ir kt.), reikia turėti: svarstykles pelėms, kiaulėms ir triušiams sverti, mašinas ar prietaisus jiems fiksuoti (8 pav.), rinkinį švirkštai, numeriai gyvūnams ženklinti (ar dažikliai), depiliatoriai.

Bakteriologinio darbo specifika lemia ypač aukštus reikalavimus bakteriologinių laboratorijų patalpų švarai. Ypač svarbus yra oro grynumas, dulkių nebuvimas. Bakteriologinių laboratorijų patalpas geriau valyti darbo dienos pabaigoje arba likus kelioms valandoms iki darbo pradžios, nes valymo metu į orą pakilusios dulkės padidina jose mikrobų kiekį ir apsunkina darbo sterilumą. . Išvalius patalpas prieš darbą tikslinga jas 0,5-1 val. apšvitinti baktericidinėmis lempomis. Siekiant išvengti laboratorinės infekcijos ir infekcijos plitimo galimybės dirbant bakteriologinėse laboratorijose, reikia laikytis šių pagrindinių taisyklių: 1) visi laboratorijoje esantys asmenys privalo dėvėti chalatus; 2) per daug kalbėti ir vaikščioti negalima; 3) kiekvienas darbuotojas privalo naudotis tik jam paskirta darbo vieta; 4) bakteriologinėje laboratorijoje draudžiama valgyti ir rūkyti; 5) dirbant su infekcine medžiaga, būtina naudoti įrankius (pincetus, adatas, kabliukus) ir jokiu būdu neliesti jos rankomis; visas inventorius, turėjęs sąlytį su infekcine medžiaga, yra sterilizuojamas arba sunaikinamas; 6) siurbiant skystą medžiagą, rekomenduojama naudoti gumines lemputes; pipetes reikia uždaryti medvilniniais kamščiais; 7) užkrėstų skysčių perpylimas iš indo į indą atliekamas per dėklą arba kristalizatorių, pripildytą dezinfekuojančiu skysčiu; 8) visi darbai, susiję su sėjimu, persėjimu, kultūrų išskyrimu ir preparatų ruošimu iš užkrėstos medžiagos, atliekami degiklyje, deginant mėgintuvėlių, kilpų, mentelių ir kt. kraštus; 9) mėgintuvėliuose, kolbose, buteliukuose ir kt., kuriuose darbo metu dedama užkrėsta medžiaga, nedelsiant paženklinami medžiagos pobūdis, kultūros pavadinimas ir numeris bei data; 10) jei infekcinė medžiaga pateko ant aplinkinių objektų, būtina nedelsiant atlikti kruopščią dezinfekciją: šią vietą užpilti dezinfekuojančiu tirpalu, o vėliau, jei įmanoma, sudeginti tamponu su deginančiu spiritu; 11) darbo metu užkrėsti daiktai ir medžiagos tą pačią dieną registruojami, surenkami į rezervuarus ar kibirus, uždaromi, užplombuojami ir sterilizuojami; 12) kultūros, jei reikia, laikomos agaro kolonėlėse po aliejumi sandariuose mėgintuvėliuose su etiketėmis; 13) visų pasėlių, taip pat darbo metu užsikrėtusių gyvūnų registravimas ir apskaita vedama specialios formos žurnale.

Įvadas

Kaip ir bet kurio kito mokslo bendroji dalis, bendroji bakteriologija nagrinėja ne konkrečius klausimus (tarkime, atskirų bakterijų rūšių identifikavimą), o problemas apskritai; jos metodika apima pagrindines procedūras, kurios plačiai naudojamos įvairiuose laboratoriniuose tyrimuose. Šis tyrimo vadovas nėra skirtas jokiai mikroorganizmų grupei identifikuoti. Tai yra šių publikacijų - apie privačią ir sanitarinę mikrobiologiją - užduotis. Tačiau jame pateikti metodai gali būti naudingi bet kurioje srityje, kurioje turi būti kovojama su bakterijomis, ir gali būti naudojami sprendžiant praktines problemas, įskaitant bakterijų išskyrimą ir tipizavimą.

Bakteriologija tapo mokslu tik po to, kai buvo sukurti unikalūs metodai, kurie ir toliau daro įtaką ir įsiskverbia į vėliau atsirandančias mokslo sritis, tokias kaip virusologija, imunologija ir molekulinė biologija. R. Kocho sukurta grynųjų kultūrų panaudojimo technika ir L. Pasteuro pradėtos imunologinės reakcijos bei cheminė analizė neprarado savo reikšmės ir dabar.

Bendrosios bakteriologijos metodika šiame leidime atsispindi tokia konstrukcija, kuri būdinga standartiniams šios disciplinos vadovėliams. Tačiau, skirtingai nuo universitetų laboratorinių seminarų apie mikrobiologijos kursą, kai kuriuose skyriuose jis pateikiamas išsamiau ir yra skirtas tik informaciniams tikslams. Šioje struktūroje atsižvelgiama į bakteriologų ir veterinarijos sanitarijos specialistų rengimo ir specializacijos ypatumus. Dažnai medžiaga pateikiama savavališkai, todėl kai kurie metodai minimi kelis kartus, dėl noro pademonstruoti savo santykius.

bakteriologinė laboratorija

Bakteriologinės laboratorijos kaip struktūriniai padaliniai organizuojamos kaip regioninių, rajoninių, tarprajoninių veterinarijos laboratorijų dalis, taip pat zoninių veterinarijos laboratorijų struktūroje. Jie taip pat organizuojami sanitarinės ir epidemiologinės priežiūros centruose, infekcinių ligų ligoninėse, bendrosiose ligoninėse, kai kuriose specializuotose ligoninėse (pvz., tuberkuliozės, reumatologijos, dermatovenerologijos), poliklinikose. Bakteriologinės laboratorijos yra specializuotų tyrimų institucijų dalis. Mėsos tinkamumo maistui įvertinimui pagal ESS patvirtinti ar nustatyti nuolat naudojamos bakteriologinės laboratorijos.

Bakteriologinėse laboratorijose tiriami šie objektai:

1. Išskyros iš organizmo: šlapimas, išmatos, skrepliai, pūliai, taip pat kraujas, patologinės ir lavoninės medžiagos.

2. Išorinės aplinkos objektai: vanduo, oras, dirvožemis, nuoplovos iš inventoriaus daiktų, pašarai, technologinės žaliavos, gautos skerdžiant ūkio gyvulius.

3. Maisto produktai, mėsos ir mėsos produktų, pieno ir pieno produktų pavyzdžiai, kurių tinkamumas maistui turi būti įvertintas.

Bakteriologinės laboratorijos patalpos ir darbo vietos įranga

Mikrobiologinio darbo specifika reikalauja, kad laboratorijai skirta patalpa būtų izoliuota nuo gyvenamųjų patalpų, maisto blokų ir kitų nepagrindinių gamybinių patalpų.

Bakteriologinėje laboratorijoje yra: bakteriologinių tyrimų laboratorijos ir ūkinės patalpos; autoklavas arba sterilizavimas atliekų ir užterštų indų nukenksminimui; plovimas, įrengtas indams plauti; bakteriologinė virtuvė - maistinių medžiagų paruošimui, išpilstymui, sterilizavimui ir saugojimui; Vivariumas eksperimentiniams gyvūnams laikyti; atsarginių reagentų, indų, įrangos ir buitinės įrangos laikymo medžiaga.

Išvardintos ūkinės patalpos, kaip savarankiški struktūriniai vienetai, yra didelių bakteriologinių laboratorijų dalis. Mažose laboratorijose bakteriologinė virtuvė ir sterilizacinė virtuvė yra sujungtos į vieną patalpą; nėra specialios patalpos eksperimentiniams gyvūnams laikyti.

Pagal pavojaus personalui laipsnį mikrobiologinių laboratorijų patalpos skirstomos į 2 zonas:

I. „Užkrečiama“ zona – patalpa ar patalpų grupė laboratorijoje, kurioje tvarkomi ir laikomi patogeniniai biologiniai veiksniai, personalas aprengtas atitinkamo tipo apsauginiais drabužiais.

II. „Švari“ zona – patalpos, kuriose nedirbama su biologine medžiaga, personalas apsirengęs asmeniniais drabužiais.

Po laboratorinėmis patalpomis, kuriose atliekami visi bakteriologiniai tyrimai, skiriamos šviesiausios, erdviausios patalpos. Sienos šiuose kambariuose 170 cm aukštyje nuo grindų nudažytos šviesiomis spalvomis aliejiniais dažais arba išklotos plytelėmis. Grindys išklotos relinu arba linoleumu. Tokia apdaila leidžia valant patalpą naudoti dezinfekuojančius tirpalus.

Kiekviename kambaryje turi būti kriauklė su vandentiekiu ir lentyna dezinfekcinio tirpalo buteliukui.

Viename iš kambarių įrengta įstiklinta dėžė - izoliuota patalpa su vestibiuliu (prieš dėže) darbams atlikti aseptinėmis sąlygomis. Dėžutėje jie padėjo stalą pasėliams, taburetę, virš darbo vietos sumontuotos baktericidinės lempos. Prieškambaryje yra spintelė sterilioms medžiagoms laikyti. „Infekcinės“ zonos patalpų langai ir durys turi būti sandarūs. Esama ištraukiamoji ventiliacija iš „infekcinės“ zonos turi būti izoliuota nuo kitų vėdinimo sistemų ir aprūpinta smulkiais oro filtrais.

Laboratorijos patalpoje įrengti laboratorinio tipo stalai, spintos ir lentynos darbui reikalingai įrangai, indams, dažams ir reagentams laikyti.

Darbui labai svarbus teisingas bakteriologo ir laboranto darbo vietos organizavimas. Prie langų sumontuoti laboratoriniai stalai. Dedant juos reikia stengtis, kad šviesa kristų darbuotojo priekyje arba į šoną, geriausia į kairę pusę, bet jokiu būdu ne iš užpakalio. Pageidautina, kad analizės, ypač mikroskopijos, patalpose būtų langai, orientuoti į šiaurę arba šiaurės vakarus, nes darbui reikalinga net išsklaidyta šviesa. Stalų paviršiaus apšvietimas darbui turi būti 500 liuksų. Dezinfekcijos patogumui laboratorinių stalų paviršius padengiamas plastiku arba apmuštas geležimi. Kiekvienam laboratorijos darbuotojui paskiriama atskira 150x60 cm išmatavimų darbo vieta.

Visose darbo vietose įrengti kasdieniniam bakteriologiniam darbui reikalingi daiktai, kurių sąrašas pateiktas 1 lentelėje.

1 lentelė.

Reikalingi daiktai bakteriologiniam darbui

Daikto pavadinimas	Apytikslis kiekis
1. Dažų ir reagentų rinkinys dažymui
2. Skaidrės	25-50
3. Uždenkite stiklus	25-50
4. Akiniai su skylutėmis	5-10
5. Mėgintuvėlių stovas
6. Bakterinė kilpa
7. Stiklinės mentelės
8. Metalinės mentelės
9. Medvilnės indelis
10. Pipetės graduotos 1, 2, 5, 10 ml	25 kiekvieno tomo
11. Pasteur pipetės	25-50
12. Pincetas, žirklės, skalpelis	Iki 1
13. Indai su dezinfekuojančiais tirpalais
14. Mikroskopas su apšvietimu
15. Didinamasis stiklas 5 '
16. Sviestinis indas su panardinamuoju aliejumi
17. Filtravimo popierius	3-5 lapai
18. Indelis dezinfekcinio tirpalo pipetėms
19. Alkoholio arba dujų degiklis
20. Dažymo preparatų įrengimas
21. Smėlio laikrodis 1 ar 2 min	Iki 1
22. Kriaušė su guminiu vamzdeliu
23. Pieštukas ant stiklo
24. Stiklainis spiritu suvilgytų tamponų
25. Būtini sterilūs indai	-

Dezinfekcija

Dezinfekcija – tai mikroorganizmų naikinimas aplinkos objektuose.

Mikrobiologijos laboratorijose dezinfekavimo priemonės taikomos labai plačiai. Bakteriologinių laboratorijų darbuotojai, baigdami darbus su infekcine medžiaga, atlieka profilaktinę rankų ir darbo vietos dezinfekciją.

Panaudotos patologinės medžiagos (išmatos, šlapimas, skrepliai, įvairių rūšių skysčiai, kraujas) prieš išmetant į kanalizaciją yra dezinfekuojamos.

Graduuotos ir Pasteur pipetės, stiklinės mentelės ir metaliniai instrumentai, užterštos patologine medžiaga ar mikrobų kultūra, iš karto po jų panaudojimo nuleidžiami į stiklinius indelius su dezinfekuojančiu tirpalu, esančiu ant stalo kiekvienoje darbo vietoje.

Darbe naudojami stikleliai ir dengiamieji stikleliai taip pat privalomai dezinfekuojami, nes net fiksuotame ir nudažytame tepinėlyje kartais lieka gyvybingų mikroorganizmų, kurie gali būti laboratorinės taršos šaltiniu. Tik tie indai, kuriuose buvo auginami mikroorganizmai, neapdorojami dezinfekavimo priemonėmis. Jis sulankstomas į metalines talpyklas arba biksus, užplombuojamas ir perduodamas autoklave.

Dezinfekcinės priemonės parinkimas, jos tirpalo koncentracija, dezinfekcinės priemonės kiekio ir dezinfekuojamos medžiagos santykis bei dezinfekcijos laikotarpio trukmė nustatomi atsižvelgiant į konkrečias sąlygas, visų pirma atsižvelgiant į dezinfekuotų mikrobų stabilumas, numatomas užterštumo laipsnis, medžiagos, kurioje jie yra, sudėtis ir konsistencija.

Rankų dezinfekcija po darbo su infekcine medžiaga ir jai patekus ant odos. Pasibaigus darbui su infekcine medžiaga, rankos profilaktiškai dezinfekuojamos. Medvilninis tamponas arba marlės audinys suvilgomas 1% chloramino tirpalu, pirmiausia nuvaloma kairė, o paskui dešinė ranka tokia seka: plaštakos nugarėlė, delno paviršius, tarppirščiai, nagų guoliukai. Taigi pirmiausia yra apdorojamos mažiausiai užterštos vietos, o tada jos pereina į labiausiai užterštos odos vietas. 2 minutes valykite rankas dviem tamponais iš eilės. Kai rankos užterštos patogeninio mikrobo ar patologinės medžiagos pasėliu, pirmiausia užterštos odos vietos dezinfekuojamos. Šiuo tikslu jie 3-5 minutes uždengiami vata, sudrėkinta 1% chloramino tirpale, tada vata metama į rezervuarą arba kibirą su atliekomis, o rankos apdorojamos antruoju tamponu. kaip ir profilaktinės dezinfekcijos metu. Po apdorojimo chloraminu rankos nuplaunamos šiltu vandeniu ir muilu. Dirbant su bakterijomis, kurios formuoja sporas, rankos apdorojamos 1% aktyvintu chloraminu. Jei infekcinės medžiagos patenka ant rankų, dezinfekavimo priemonės ekspozicija padidinama iki 5 minučių.

Sterilizacija

Sterilizacija, skirtingai nei dezinfekcija, apima visų vegetatyvinių ir sporinių, patogeninių ir nepatogeninių mikroorganizmų sunaikinimą sterilizuotame objekte. Sterilizacija atliekama įvairiais būdais: garais, sausu karštu oru, virimu, filtravimu ir kt. Vieno ar kito sterilizavimo būdo pasirinkimą lemia sterilizuojamo objekto mikrofloros kokybė ir savybės.

Laboratorinės įrangos paruošimas ir sterilizavimas

Prieš sterilizavimą laboratoriniai stikliniai indai nuplaunami ir išdžiovinami. Mėgintuvėliai, buteliai, buteliai, čiužiniai ir kolbos uždaromi medvilniniais marlės kamščiais. Ant kiekvieno indo (išskyrus mėgintuvėlius) uždėkite kamščius ant popierinių dangtelių.

Guminiai, kamštiniai ir stikliniai kamščiai sterilizuojami atskirame maišelyje, pririštame prie indo kaklelio. Petri lėkštelės sterilizuojamos suvyniotos į popierių, po 1-10 vnt. Pasteur pipetės, 3-15 vnt. suvynioti į vyniojamąjį popierių. Į kiekvienos pipetės viršutinę dalį įdedamas po vatos gabalėlį, kad medžiaga nepatektų į aplinką. Vyniojant pipetes reikia labai stengtis, kad nenutrūktų sandarūs kapiliarų galai. Eksploatacijos metu pipetės iš pakuotės išimamos už viršutinio galo.

Saugi vata įkišama į viršutinę graduotų pipečių dalį, kaip ir Pasteur pipetėse, o po to suvyniojama į storą popierių, iš anksto supjaustoma 2-2,5 cm pločio ir 50-70 cm ilgio juostelėmis.Juostelė dedama ant stalo. , jos kairysis galas yra sulankstytas ir apvyniotas pipetės galiuku, tada, sukdami pipetę, apvyniokite popieriaus juostele. Kad popierius neišsiskleistų, priešingas galas susukamas arba klijuojamas. Suvyniotos pipetės tūris užrašomas ant popieriaus. Jei yra atvejų, jose sterilizuojamos graduotos pipetės.

Sterilizuokite laboratorinius stiklinius indus

a) sausoje temperatūroje 180°C ir 160°C atitinkamai 1 valandą ir 150 minučių.

b) autoklave esant 1,5 atm slėgiui. per 60 minučių, sporų mikroflorai sunaikinti - 90 minučių esant 2 atm.

Švirkštų sterilizavimas. Švirkštai sterilizuojami išmontuoti: atskirai cilindras ir stūmoklis 2% natrio bikarbonato tirpale 30 minučių. Dirbant su sporine mikroflora sterilizuojama autoklave 132±2°C (2 atm.) temperatūroje 20 min., 126±2°C (1,5 atm.) - 30 min. Sterilizuotas švirkštas surenkamas jam atvėsus, į cilindrą įkišamas stūmoklis, uždedama adata, išėmus iš jo įtvarą. Adata, cilindras ir stūmoklis paimami pincetu, kuris sterilizuojamas kartu su švirkštu.

Metalinių instrumentų sterilizavimas. Metaliniai instrumentai (žirklės, skalpeliai, pincetai ir kt.) sterilizuojami 2% natrio bikarbonato tirpale, kuris apsaugo nuo rūdžių ir aštrumo praradimo. Prieš panardinant į tirpalą, skalpelių ir žirklių ašmenis rekomenduojama apvynioti vata.

Bakterijų kilpų sterilizavimas. Bakterinės kilpos, pagamintos iš platinos arba nichromo vielos, sterilizuojamos alkoholio arba dujų degiklio liepsnoje. Šis sterilizavimo būdas vadinamas kalcinavimu arba liepsna.

Horizontalioje padėtyje esanti kilpa įvedama į apatinę, šalčiausią, degiklio liepsnos dalį, kad neaptaškytų sudegusi patogeninė medžiaga. Jai perdegus, kilpa perkeliama į vertikalią padėtį, pirmiausia apatinė, tada viršutinė laido dalis įkaitinama iki raudonumo ir sudeginamas kilpos laikiklis. Visas uždegimas trunka 5-7 s.

Paruošimas sterilizuoti ir sterilizuoti popierių, marlę ir medvilnę. Vata, marlė, filtravimo popierius sterilizuojami sauso karščio krosnyje 160 ° C temperatūroje valandą nuo temperatūros parodymo termometru arba autoklave, esant 1 atm slėgiui. per 30 minučių.

Prieš sterilizuojant popierius ir marlė supjaustomi gabalėliais, o vata suvyniojama į norimo dydžio rutuliukus ar tamponus. Po to kiekvienos rūšies medžiaga atskirai, viena ar daugiau gabalų, suvyniojama į storą popierių. Jei pakuotė sulaužyta, sterilizuotą medžiagą reikia sterilizuoti iš naujo, nes pažeidžiamas jos sterilumas.

Pirštinių ir kitų guminių gaminių sterilizavimas. Gumos gaminiai (pirštinės, vamzdeliai ir kt.), užteršti vegetatyvine mikrobų forma, sterilizuojami 30 minučių verdant 2% natrio bikarbonato tirpale arba tekančiais garais; kai užteršta sporine mikroflora, autoklave esant 1,5-2 atm slėgiui. per 30 ar 20 minučių. Prieš sterilizuojant guminės pirštinės viduje ir išorėje apibarstomos talku, kad apsaugotų nuo prilipimo. Tarp pirštinių uždedama marlė. Kiekviena pirštinių pora atskirai įvyniojama į marlę ir dedama į dviračius šioje formoje.

Patogeninių mikrobų kultūrų sterilizavimas. Mėgintuvėliai ir puodeliai su mikrobų kultūromis, kurios nereikalingos tolimesniam darbui, dedamos į metalinę talpą, dangtelis užsandarinamas ir perduodamas sterilizuoti. Patogeninių mikrobų, vegetatyvinių formų, kultūros žudomos autoklave 30 minučių, esant 1 atm slėgiui. Sterilizavimui skirtų rezervuarų pristatymą į autoklavą atlieka specialiai paskirtas asmuo, gavęs kvitą. Sterilizacijos režimas įrašomas į specialų žurnalą. Naikinant I ir II patogeniškumo grupių mikrobų kultūras, taip pat medžiagas, užkrėstas ar įtariamas užsikrėtusias šioms grupėms priskirtais patogenais, rezervuarai su atliekomis perkeliami ant metalinių padėklų aukštais kraštais, dalyvaujant lydinčiam asmeniui. dirbti su infekcine medžiaga.

Sterilizacijos rūšys

Sterilizavimas virinant. Sterilizavimas virinant atliekamas sterilizatoriuje. Į sterilizatorių pilamas distiliuotas vanduo, nes vanduo iš čiaupo formuoja nuosėdas. (Stikliniai daiktai panardinami į šaltą, metaliniai – į karštą vandenį, pridedant natrio bikarbonato). Sterilizuoti gaminiai verdami ant silpnos ugnies 30-60 min. Sterilizacijos pradžia laikomas vandens užvirimo sterilizatoriuje momentas. Virimo pabaigoje instrumentai paimami steriliu pincetu, kuris verdamas kartu su likusiais daiktais.

Sausa karščio sterilizacija. Sterilizacija sausu karščiu atliekama Pasteur krosnyje. Sterilizavimui paruošta medžiaga dedama ant lentynų, kad nesiliestų su sienomis. Spinta uždaroma ir po to įjungiamas šildymas. Sterilizavimo trukmė 150°C temperatūroje 2 val., 165°C - 1 val., 180°C - 40 min., 200°C - 10-15 min (esant 170°C popieriaus ir vatos pasukimas geltona, o aukštesnėje temperatūroje suanglėjusi). Sterilizacijos pradžia – momentas, kai temperatūra orkaitėje pasiekia norimą aukštį. Pasibaigus sterilizavimo laikotarpiui, orkaitė išjungiama, tačiau spintelės durelės neatidaromos, kol visiškai neatvės, nes į spintelę patekęs šaltas oras gali įtrūkti karštuose induose.

Sterilizavimas garais esant slėgiui. Sterilizavimas garais slėgiu atliekamas autoklave. Autoklavas susideda iš dviejų vienas į kitą įstatytų katilų, korpuso ir dangčio. Išorinis katilas vadinamas vandens-garų kamera, vidinis – sterilizavimo kamera. Garas gaminamas garo katile. Sterilizuojama medžiaga dedama į vidinį katilą. Viršutinėje sterilizavimo virdulio dalyje yra nedidelės skylutės, pro kurias iš garų kameros patenka garai. Autoklavo dangtis hermetiškai prisukamas prie korpuso. Be išvardintų pagrindinių dalių, autoklave yra nemažai jo darbą reguliuojančių dalių: manometras, vandens matuoklio stiklas, apsauginis vožtuvas, išmetimo, oro ir kondensato čiaupai. Slėgio matuoklis naudojamas sterilizavimo kameroje sukuriamam slėgiui nustatyti. Normalus atmosferos slėgis (760 mm Hg. Art.) laikomas nuliu, todėl tuščiosios eigos autoklave manometro rodyklė yra ties nuliu. Yra tam tikras ryšys tarp manometro rodmenų ir temperatūros (2 lentelė).

2 lentelė.

Manometro rodmenų ir vandens virimo temperatūros santykis

Raudona linija matuoklio skalėje rodo didžiausią leistiną darbinį slėgį autoklave. Apsauginis vožtuvas skirtas apsaugoti nuo per didelio slėgio padidėjimo. Jis nustatomas į iš anksto nustatytą slėgį, ty slėgį, kuriam esant turi būti atlikta sterilizacija, kai manometro rodyklė išeina už linijos, autoklavo vožtuvas automatiškai atsidaro ir išleidžia garo perteklių, taip sulėtindamas tolesnį slėgio kilimą. .

Ant autoklavo šoninės sienelės yra matuoklis, rodantis vandens lygį garo katile. Ant vandens matuoklio stiklo vamzdelio dedamos dvi horizontalios linijos - apatinė ir viršutinė, atitinkamai nurodančios leistiną apatinį ir viršutinį vandens lygį vandens garų kameroje. Oro vožtuvas skirtas pašalinti orą iš sterilizavimo ir vandens-garų kamerų sterilizacijos pradžioje, nes oras, būdamas prastas šilumos laidininkas, pažeidžia sterilizavimo režimą. Autoklavo apačioje yra kondensacijos čiaupas, skirtas sterilizavimo kamerai išleisti iš kondensato, susidariusio kaitinant sterilizuotą medžiagą.

Autoklavo taisyklės. Prieš pradėdami darbą, apžiūrėkite autoklavą ir prietaisus. Autoklavuose su automatiniu garų valdymu vandens garų kameros elektrovakuuminio manometro rodyklės nustatomos pagal sterilizavimo režimą: apatinė rodyklė nustatyta į 0,1 atm. apatinis, viršutinis - 0,1 atm. virš darbinio slėgio vandens garų kamera pripildoma vandens iki viršutinės matavimo stiklo žymės. Pildymo vandeniu metu vamzdžio vožtuvas, kuriuo garai patenka į kamerą, yra atidarytas, kad iš katilo galėtų išeiti laisvas oras. Į autoklavo sterilizavimo kamerą prikraunama sterilizuojama medžiaga. Po to autoklavo dangtis (arba durelės) uždaromas, tvirtai pritvirtinamas centriniu užraktu arba varžtais; kad būtų išvengta iškraipymų, varžtai prisukami skersai (skersmuo). Tada įjunkite šildymo šaltinį (elektros srovę, garą), uždarykite vožtuvą ant vamzdžio, jungiančio garo šaltinį su sterilizavimo kamera. Prasidėjus garinimui ir susidarius slėgiui vandens-garų kameroje, atliekamas išvalymas (iš sterilizavimo katilo pašalinamas oras). Oro pašalinimo būdą lemia autoklavo konstrukcija. Iš pradžių oras išeina atskiromis porcijomis, tada atsiranda sklandi ištisinė garų srovė, rodanti, kad oras buvo visiškai pašalintas iš sterilizavimo kameros. Pašalinus orą, vožtuvas uždaromas, o sterilizavimo kameroje prasideda laipsniškas slėgio didėjimas.

Sterilizacijos pradžia yra momentas, kai manometras rodo nustatytą slėgį. Po to šildymo intensyvumas sumažinamas taip, kad slėgis autoklave išliktų tame pačiame lygyje reikiamą laiką. Pasibaigus sterilizavimo laikui, kaitinimas sustabdomas. Uždarykite vožtuvą vamzdyne, tiekiančiame garą į sterilizavimo kamerą, ir atidarykite kondensato vamzdžio vožtuvą (žemyn), kad sumažintumėte garų slėgį kameroje. Manometro adatai nukritus iki nulio, lėtai atlaisvinkite fiksavimo įtaisus ir atidarykite autoklavo dangtį.

Sterilizacijos temperatūrą ir trukmę lemia sterilizuojamos medžiagos kokybė ir mikroorganizmų, kuriais ji užkrėsta, savybės.

Temperatūros kontrolė sterilizavimo kameroje periodiškai atliekama naudojant bakteriologinius tyrimus. Biotestus gamina Centrinės epidemiologijos tarnybos bakteriologinės laboratorijos. Jei šie bandymai nepavyksta, tikrinama autoklavo techninė būklė.

Sterilizavimas garais. Sterilizacija tekančiais garais atliekama Koch tekančio garo aparate arba autoklave su atsuktu dangčiu ir atviru išleidimo čiaupu. Kocho aparatas yra metalinis tuščiaviduris cilindras su dvigubu dugnu. Tarpas tarp viršutinės ir apatinės dugno plokščių užpildomas 2/3 vandens (yra čiaupas, skirtas nuleisti po sterilizacijos likusią vandenį). Aparato dangčio centre yra skylutė termometrui ir kelios nedidelės skylutės garams išeiti. Sterilizuojama medžiaga laisvai įkeliama į aparato kamerą, kad būtų užtikrintas didžiausias jos kontaktas su garais. Sterilizacijos pradžia yra laikas nuo to momento, kai vanduo užverda ir garai patenka į sterilizavimo kamerą. Skystų garų aparate daugiausia sterilizuojamos maistinės terpės, kurių savybės kinta aukštesnėje nei 100°C temperatūroje. Sterilizavimas tekančiais garais turėtų būti kartojamas, nes vienkartinis kaitinimas 100 ° C temperatūroje neužtikrina visiškos dezinfekcijos. Šis metodas vadinamas frakciniu sterilizavimu: sterilizuota medžiaga apdorojama tekančiais garais 30 minučių kasdien 3 dienas. Intervalais tarp sterilizacijų medžiaga laikoma kambario temperatūroje, kad sporos sudygtų į vegetatyvines formas, kurios vėliau kaitinant žūsta.

Tindalizacija. Tyndall yra dalinis sterilizavimas žemesnėje nei 100°C temperatūroje, kurį pasiūlė Tyndall. Sterilizuojama medžiaga kaitinama vandens vonelėje su termostatu valandą 60-65°C temperatūroje 5 paras arba 70-80°C temperatūroje 3 paras. Pertraukomis tarp kaitinimų apdorota medžiaga laikoma 25°C temperatūroje, kad sporos sudygtų į vegetatyvines formas, kurios žūva vėlesnio kaitinimo metu. Tindalizacija naudojama maistinėms terpėms, kuriose yra baltymų, dehidratuoti.

Mechaninė sterilizacija su bakteriniais ultrafiltrais. Bakteriniai filtrai naudojami skysčiui išlaisvinti nuo jame esančių bakterijų, taip pat atskirti bakterijas nuo virusų, fagų ir egzotoksinų. Bakteriniai filtrai virusų nesulaiko, todėl ultrafiltracija negali būti laikoma sterilizacija priimta to žodžio prasme. Ultrafiltrų gamybai naudojamos smulkiai porėtos medžiagos (kaolinas, asbestas, nitroceliuliozė ir kt.), galinčios sulaikyti bakterijas.

Asbesto filtrai (Seitz filtrai) – tai 3-5 mm storio ir 35 ir 140 mm skersmens asbesto plokštės, skirtos mažiems ir dideliems skysčio kiekiams filtruoti. Mūsų šalyje asbesto filtrai gaminami dviejų klasių: „F“ (filtruojantis), sulaikančių skendinčias daleles, bet praleidžiančias bakterijas, ir „SF“ (sterilizuojantis), tankesnis, sulaikantis bakterijas. Prieš naudojimą asbesto filtrai montuojami į filtravimo aparatus ir kartu su jais sterilizuojami autoklave. Asbesto filtrai naudojami vieną kartą. Membraniniai ultrafiltrai yra pagaminti iš nitroceliuliozės ir yra balti diskai, kurių skersmuo 35 mm ir storis 0,1 mm.

Bakteriniai filtrai skiriasi porų dydžiu ir yra žymimi serijos numeriais (3 lentelė).

3 lentelė

Bakteriniai filtrai

Membraniniai filtrai prieš pat naudojimą sterilizuojami virinant. Filtrai dedami į distiliuotą vandenį, pašildytą iki 50-60°C, kad nesusisuktų, verdami ant silpnos ugnies 30 min., vandenį keičiant 2-3 kartus. Sterilizuoti filtrai iš sterilizatoriaus išimami flambiruotu ir atvėsintu pincetu lygiais antgaliais, kad nebūtų pažeisti.

Skysčiams filtruoti bakterijų filtrai montuojami specialiuose filtrų įtaisuose, ypač Seitz filtre.

Jį sudaro 2 dalys: viršutinė, cilindro arba piltuvo formos, ir apatinė atraminė aparato dalis su vadinamuoju filtro stalu, pagamintu iš metalinio tinklelio arba švarios keraminės plokštės, ant kurios yra membrana arba asbesto filtras. yra padėtas. Atraminė aparato dalis yra piltuvo formos, kurios smailėjanti dalis yra Bunseno kolbos kaklelio guminiame kamštyje. Darbinėje būklėje viršutinė įrenginio dalis varžtais pritvirtinama prie apatinės. Prieš pradedant filtravimą, įvairių įrenginio dalių sandūros užpildomos parafinu, kad būtų užtikrintas sandarumas. Kolbos išleidimo vamzdis storasieniu guminiu vamzdžiu sujungtas su vandens čiurkšle, alyvos ar dviračio siurbliu. Po to išfiltruotas skystis pilamas į aparato cilindrą arba piltuvą ir įjungiamas siurblys, sukuriant vakuumą priėmimo inde. Dėl susidariusio slėgio skirtumo išfiltruotas skystis pro filtro poras patenka į imtuvą. Mikroorganizmai lieka ant filtro paviršiaus.

Tepinėlių ruošimas

Norint ištirti spalvotus mikroorganizmus, ant stiklelio padaromas tepinėlis, išdžiovinamas, fiksuojamas ir nudažomas.

Bandomoji medžiaga plonu sluoksniu paskirstoma ant gerai nuriebalinto stiklelio paviršiaus.

Tepinėliai ruošiami iš mikrobų pasėlių, patologinės medžiagos (skreplių, pūlių, šlapimo, kraujo ir kt.) bei iš lavonų organų.

Tepinėlių paruošimo techniką lemia tiriamos medžiagos pobūdis.

Tepinėlių ruošimas iš mikrobų kultūrų su skysta maistine terpe ir iš skystos patologinės medžiagos (šlapimo, smegenų skysčio ir kt.). Nedidelis bandomojo skysčio lašas su bakterine kilpa užlašinamas ant stiklelio, o kilpos sukamaisiais judesiais paskirstomos vienodu sluoksniu kaip cento monetos skersmens apskritimas.

Kraujo tepinėlių ruošimas. Ant stiklelio, arčiau vieno iš jo galų, užlašinamas kraujo lašas. Antrasis - poliruotas - stiklas, kuris turėtų būti siauresnis už objekto stiklą, uždedamas ant pirmojo 45 ° kampu ir pridedamas prie kraujo lašo, kol jis su juo susilies. Po to, kai kraujas pasklinda išilgai poliruoto krašto, stiklas slysta iš dešinės į kairę, tolygiai paskirstant kraują plonu sluoksniu per visą stiklo paviršių. Potėpio storis priklauso nuo kampo tarp stiklų: kuo kampas aštresnis, tuo brūkštelėjimas plonesnis. Tinkamai paruoštas tepinėlis yra šviesiai rausvos spalvos ir vienodo storio.

Storo lašo paruošimas. Pasteur pipete ant stiklelio vidurio užlašinamas kraujo lašas arba stiklas užlašinamas tiesiai ant išsikišusio kraujo lašo. Ant stiklo užteptas kraujas sutepamas bakterine kilpele taip, kad gauto tepinėlio skersmuo atitiktų cento monetos dydį. Stiklas paliekamas horizontalioje padėtyje, kol kraujas išdžius. „Tirštame laše“ esantis kraujas pasiskirsto netolygiai, suformuodamas nelygų kraštą.

Tepinėlio ruošimas iš klampios medžiagos (skreplių, pūlių). Ant stiklinio stiklelio arčiau siauro krašto nusėdę skrepliai ar pūliai uždengiami kitu stikleliu. Akiniai šiek tiek prispaudžiami vienas prie kito.

Po to laisvieji akinių galai užfiksuojami 1 ir 2 abiejų rankų pirštais ir išskleidžiami priešingomis kryptimis, kad judant abu stiklai tvirtai priglustų vienas prie kito. Tepinėliai gaunami su tolygiai paskirstyta medžiaga, užimančia didelį plotą.

Tepinėlio ruošimas iš kultūrų su tankiomis maistinėmis terpėmis. Ant švaraus, gerai nuriebalinto stiklelio vidurio užlašinamas vandens lašas, į jį įvedama bakterinė kilpa su nedideliu kiekiu tiriamos mikrobų kultūros, kad skysčio lašas šiek tiek drumstų. Po to ant kilpos esančios mikrobinės medžiagos perteklius sudeginamas liepsnoje ir pagal minėtą metodą paruošiamas tepinėlis.

Organų ir audinių tepinėlių ruošimas. Dezinfekcijos tikslais įkaitintomis pinceto šakelėmis įkaitinamas organo paviršius, šioje vietoje padaromas pjūvis, smailiomis žirklėmis iš gylio išpjaunamas nedidelis audinio gabalėlis, kuris dedamas tarp dviejų stiklelių. . Tada elkitės taip pat, kaip ruošiant tepinėlį nuo pūlių ir skreplių. Jei organo audinys yra tankus, skalpeliu daromas įbrėžimas iš pjūvio gylio. Medžiaga, gauta grandymo būdu, plonu sluoksniu paskirstoma ant stiklo paviršiaus skalpeliu arba bakterine kilpa.

Norint ištirti santykinę audinio elementų ir jame esančių mikroorganizmų padėtį, daromi tepinėliai. Norėdami tai padaryti, nedidelis audinio gabalėlis, nupjautas nuo organo vidurio, suimamas pincetu ir kelis kartus iš eilės su nupjautu paviršiumi uždedamas ant stiklelio, taip išgaunant daugybę tepinėlių-atspaudų.

Tepinėlių džiovinimas ir fiksavimas. Ant stiklelio paruoštas tepinėlis džiovinamas ore ir fiksuojamas visiškai išdžiūvus. Fiksuojant tepinėlis fiksuojamas ant stiklelio paviršiaus, todėl vėlesnio preparato dažymo metu mikrobų ląstelės nenuplaunamos. Be to, nužudytos mikrobų ląstelės nudažosi geriau nei gyvos.

Skiriamas fizinis fiksavimo metodas, pagrįstas aukštos temperatūros poveikiu mikrobų ląstelei, ir cheminiai metodai, apimantys baltymų koaguliaciją sukeliančių agentų naudojimą. Virš liepsnos neįmanoma pritvirtinti tepinėlių, kuriuose yra I-II patogeniškumo grupių patogenų.

Fizinis tvirtinimo būdas. Stiklinė stiklelė su preparatu paimama pincetu arba I ir II dešinės rankos pirštais už šonkaulių brūkštelėjimu į viršų ir sklandžiu judesiu 2-3 kartus virš viršutinės degiklio liepsnos dalies. Visas fiksavimo procesas turi trukti ne ilgiau kaip 2 s. Tvirtinimo patikimumas tikrinamas tokia paprasta technika: ant užpakalinio kairiosios rankos paviršiaus užtepamas stiklo stiklelio paviršius, kuriame nėra dėmių. Tinkamai fiksavus tepinėlį, stiklas turi būti karštas, bet nesukelti nudegimo pojūčio.

Cheminis fiksavimas. 4 lentelėje parodytos cheminės medžiagos ir junginiai taip pat naudojami tepinėlių fiksavimui.

4 lentelė

Cheminio fiksavimo medžiagos

Objektyvo stiklelis su išdžiovintu tepinėliu panardinamas į buteliuką su fiksavimo priemone ir džiovinamas ore.

Dažymo potėpiai

Tepinėlių dažymo technika. Dažymui naudojami dažų tirpalai arba dažomas popierius, kurį pasiūlė A.I. Mėlyna. Lengvas paruošimas, naudojimo paprastumas, taip pat galimybė neribotą laiką laikyti dažomąjį popierių buvo plataus jų naudojimo įvairiuose dažymo metoduose pagrindas.

Dažymo potėpiai dažomuoju popieriumi. Ant išdžiovinto ir fiksuoto preparato užlašinami keli lašai vandens, dedami spalvoti 2x2 cm dydžio popieriai, per visą dažymo laiką popierius turi išlikti drėgnas ir tvirtai priglusti prie stiklo paviršiaus. Džiovinant popierius papildomai drėkinamas vandeniu. Tepinėlio dažymo trukmė nustatoma pagal dažymo būdą. Pasibaigus dažymui, popierius atsargiai nuimamas pincetu, o tepinėlis nuplaunamas vandeniu iš čiaupo ir išdžiovinamas ore arba filtriniame popieriuje.

Tepinėlių dažymas dažų tirpalais. Ant išdžiovinto ir fiksuoto preparato pipete užtepamas toks dažų kiekis, kad padengtų visą tepinėlį. Dažant tepinėlius koncentruotais dažų tirpalais (Ziehl karboliniu fuksiniu, karboliniu gencijonu arba krištoliniu violetiniu), dažymas atliekamas per filtravimo popierių, sulaikantį dažų daleles: ant fiksuoto tepinėlio uždedama filtravimo popieriaus juostelė ir pilamas dažų tirpalas. tai.

Mikroskopiniam tyrimui paruošti tepinėliai, išdžiovinti ir fiksuoti, dažomi. Dažymas yra paprastas ir sudėtingas. Paprastas dažymas susideda iš bet kurių dažų užtepimo ant tepinėlio tam tikrą laiką. Dažniausiai paprastam dažymui naudojamas alkoholis-vanduo (1:10) Pfeiffer fuksinas, Lefflerio metileno mėlynasis ir safraninas. Eozinas, kaip rūgštinis dažiklis, naudojamas tik ląstelių citoplazmos dažymui ir fono atspalviui. Rūgštis fuksinas visiškai netinkamas bakterijoms dažyti.