Ifa total at. Detalji o enzimskom imunoeseju, šta je to i njegovo tumačenje

Infekcija virusom ljudske imunodeficijencije ozbiljna je dijagnoza. Pogreške u dijagnozi mogu dovesti do katastrofalnih posljedica. ELISA analiza na HIV je najpristupačnija metoda istraživanja, ali nije informativna u svim slučajevima.

ELISA - enzimski imunotest. Zadatak ELISA metode je otkrivanje antitijela na virus imunodeficijencije u biološkom materijalu. Koristeći metodu, moguće je pratiti prisutnost u tekućini ne samih virusa, već samo antitijela proizvedenih kao odgovor na njihovu prisutnost. ELISA se široko koristi u dijagnostici spolno prenosivih bolesti. Pomaže u prepoznavanju spolno prenosivih bolesti.

Postoji nekoliko tipova ELISA: direktna varijanta, indirektna varijanta, sendvič metoda. U svakom slučaju, tehnika se zasniva na određivanju prisustva antitela, koja služe kao indikator prodiranja stranog agensa. Da bi se otkrili ovi "žigovi", biološka komponenta se tretira enzimima.

ELISA detektuje antitela sa tačnošću od 96 - 98%, greška je zanemarljiva. To je 2 - 4%.

ELISA - metoda za dijagnosticiranje HIV-a

ELISA analiza na HIV je prva faza dijagnoze. Antigeni virusa imunodeficijencije su proteini p24, p15, p17, p31 i glikoproteini gp 41, gp55, gp66, gp120, gp160.

Da bi se otkrio virusni protein, dio krvi se uzima iz vene. Uzorak poslan na ELISA testiranje krvi tretira se reagensima za enzimski imunotest. Serum se izoluje iz krvi. Ako se tokom studije pronađu, virus je već prisutan u krvi.

Krv se daje striktno na prazan želudac. 2 dana prije analize ne preporučuje se jesti masnu hranu i piti alkohol. Trebalo bi da prestanete da uzimate antivirusne lekove u roku od 14 dana.

Prednosti metode:

• relativno niska cijena;
• visoka stabilnost reagensa;
• visoka osjetljivost;
• kratko vrijeme isporuke;
• minimalan uticaj ljudskog faktora.

Savremeni test sistemi za ELISA se proizvode po svetskim standardima. Ovo poboljšava tačnost metode.

ELISA ne daje uvijek pouzdane rezultate. Nakon što virus uđe u krv, počinje latentna (skrivena) faza razvoja. Period dok virusi ne počnu da se množe, a antitijela se još nisu formirala naziva se „seronegativni prozor“. U ovoj fazi je besmisleno raditi ELISA. Ako je došlo do infekcije, rezultat će biti . Koliko će se virus brzo otkriti zavisi od toga koliko je opasnih ćelija ušlo u organizam. Kod nezaštićenog odnosa ili transfuzije zaražene krvi ovaj period će biti minimalan.

Za visoku pouzdanost ELISA za HIV, studija se provodi tri puta. Rokovi za ELISA test na virus humane imunodeficijencije:

• 6 sedmica nakon vjerovatnog kontakta,
• za 3 mjeseca,
• šest meseci kasnije.

ELISA 4. generacije za HIV je najinformativnija metoda u ranim fazama infekcije. Može se provesti već 1 mjesec nakon navodne infekcije. Test je skup u poređenju sa kolegom treće generacije. Stoga se u javnim zdravstvenim ustanovama koristi kao dodatna dijagnostička metoda. Besplatan je test 3. Ukoliko na osnovu njegovih rezultata nije moguće dati nedvosmislen odgovor, pacijent se šalje na ELISA 4. generacije.

Bitan! Neposredno nakon infekcije, osoba postaje zarazna. Opasan je za druge, čak i kada još ne zna za svoju dijagnozu!

Ako se tokom ELISA-e otkriju antitela na antigene HIV-a, neophodne su dodatne studije. Spada u ove. Pouzdanost ove metode je 80%. Uz pomoć PCR-a, ispituje se krv, sperma i vaginalni iscjedak. Biološka tečnost se cijepa u medicinskom reaktoru, a zatim se podvrgava enzimskom tretmanu. Kao rezultat, dobijaju se podaci o koncentraciji HIV ćelija u tečnom mediju. Zbog velike greške (20%), uz pozitivan rezultat, dodatno se radi imunoblotiranje.

Sljedeći dijagnostički korak je Combo test (ili imunološki bloting). Ovo je visoko osjetljiva studija (98% pouzdanosti) i treba je uraditi ako rezultati ELISA nisu uvjerljivi nakon 6 mjeseci.

Interpretacija rezultata ELISA

Vrijeme dešifriranja je od 24 do 48 sati. Ako je potrebno hitno dobiti informacije (potrebna je hirurška intervencija), dekodiranje se vrši za 2 sata. Pokrajinske medicinske stanice nemaju uvek potrebne reagense. Uzorak se uzima na mestu prometa, a zatim se prenosi u regionalni centar. U takvim okolnostima, rezultat se može saznati za 1-2 sedmice.

Rezultat enzimskog imunoeseja može biti pozitivan ili negativan; nema drugih opcija.

Čak i ako je rezultat bio pozitivan tokom primarne i ponovljene ELISA testa, pacijent se ne može prepoznati kao zaražen HIV-om. Moguća greška. Razlozi za lažno pozitivan rezultat:

• hronične bolesti;
• produžene zarazne bolesti;
• trudnoća.

Stoga, rezultat analize treba pojasniti dodatnim studijama.

Ako se tokom imunoblotinga na HIV (reaktivan), osoba smatra HIV-inficiranom, što znači da je zdrava.

Ćelije virusa se na kraju prilagođavaju na propisane lijekove. Za kontrolu, ELISA test se periodično ponavlja.

Ponekad imunobloting pokazuje lažno negativan rezultat. Izuzetno rijedak virus imunodeficijencije 6 mjeseci (ili više). To je moguće ako je mala količina virusnih stanica ušla u krvotok. U 0,5% od ukupnog broja slučajeva infekcija se može dijagnosticirati tek nakon godinu dana. U 99,5% u roku od šest mjeseci nakon infekcije, ELISA će dati pouzdan rezultat.

Čak i kod studija visoke preciznosti, i dalje postoji granica greške od 2%. Ne treba zaboraviti ni ljudski faktor. Kako bi se eliminirala mogućnost greške, test se može provesti u 2 različite institucije.

Kako je ELISA studija

mehanizam reakcije

Enzimski imunotest se zasniva na imunološkoj reakciji antigena s antitijelom, a vezivanje enzimske oznake na antitijela omogućava da se u obzir uzme rezultat reakcije antigen-antitijelo pojavom enzimske aktivnosti ili promjenom u U pojednostavljenom obliku, mehanizam reakcije se može predstaviti na sljedeći način:

Bodovanje

Izvođenje enzimskog imunotestiranja

Za serodijagnostiku se koriste polistirenske ploče sa 96 jažica, na čijim se ćelijskim zidovima unaprijed adsorbira antigen. Test serum se dodaje u ćeliju tablete. U ovom slučaju, antitela homologna antigenu su vezana za njega. Nevezana antitijela se uklanjaju ispiranjem. Zatim se u ćelije uvode antitela obeležena enzimima protiv humanih imunoglobulina (antitijela). Ako su detektabilna antitijela bila prisutna u test serumu, tada će u ovoj fazi djelovati kao antigeni s kojima će obilježena antitijela reagirati. Dodavanje kromogene tvari (boje) nakon pranja omogućit će da se uzme u obzir reakcija razvijanjem bojenja u stanicama. U ovom slučaju, intenzitet boje je proporcionalan količini enzima, a samim tim i količini antitela.Prilikom merenja optičke gustine (OD) tečnosti u ćeliji i upoređivanja sa kontrolnim uzorkom izračunava se koncentracija antitela. u jedinicama zapremine.Najčešće korišteni rezultati se izračunavaju u jedinicama optičke gustoće.Svaki test sistem ima svoje indikatore obračuna rezultata i indikatore norme i patologije, kojima se treba rukovoditi prilikom tumačenja rezultata.

Koje infekcije se mogu otkriti ELISA-om

U savremenoj venerologiji se uglavnom koristi za dijagnostiku sifilisa (u kombinaciji sa drugim reakcijama), HIV infekcije, virusnog hepatitisa.Ograničenog je značaja za dijagnostiku klamidijske infekcije, citomegalovirusne infekcije i drugih herpetičnih infekcija.Također je ELISA metoda koristi se za određivanje antitijela kod raznih zaraznih bolesti, nivoa hormona, autoantitijela i raznih markera raka.

Kako interpretirati rezultate ELISA

Proučavanje prisutnosti i razine antitijela različitih klasa u nekim slučajevima pomaže u određivanju faza zaraznog procesa

Nažalost, tako važna prednost ELISA kao što je kvantitativno određivanje antitijela nije od velike važnosti u praktičnom radu – tj. ne dozvoljava tačnu dijagnozu i ne utiče na dozu i vreme propisivanja lekova.

Koja je uloga ELISA metode u dijagnostici sifilisa

ELISA metoda u dijagnostici sifilisa prvi put je primijenjena 1975. godine. Trenutno se u Rusiji široko koristi za serološku dijagnostiku sifilisa i koristi se kao potvrdni test za sifilis. Obično se provodi studija koja otkriva tzv. nazivaju se ukupna antitela na antigene treponema pallidum (IgM i IgG), mada je u nekim slučajevima moguće odrediti samo "rana" antitela M klase. ELISA za sifilis postaje pozitivna nakon 3 nedelje od trenutka infekcije i ostaje pozitivna prilično dugo dugo čak i nakon tretmana (ponekad doživotno).Stoga, kao test koji potvrđuje izlječenje sifilisa, ELISA se ne koristi.U većini slučajeva se provodi samo kvalitativno određivanje ELISA-tj. samo pozitivan ili negativan rezultat, iako je moguća i kvantifikacija.

ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA - engleski) ušla je u život praktične medicine negde drugde 60-ih godina prošlog veka. Njegov početni zadatak bilo je histološko istraživanje u naučne svrhe, koje je bilo ograničeno na pretragu i identifikaciju antigenske strukture ćelija živog organizma.

ELISA metoda se zasniva na interakciji specifičnih (AT) i srodnih antigena (AG) sa formiranjem kompleksa antigen-antitijelo, što se detektuje pomoću enzima. Ova činjenica navela je naučnike na ideju da se metoda može koristiti u dijagnostičke svrhe za identifikaciju specifičnih imunoglobulina različitih klasa uključenih u imunološki odgovor na određenu infekciju. I to je bio iskorak u kliničkoj laboratorijskoj dijagnostici!

Metoda se počela aktivno koristiti tek početkom 80-ih, a zatim uglavnom u specijaliziranim institucijama. Prvi ELISA analizatori isporučeni su u centre i stanice za transfuziju krvi, infektivne i venerične bolnice, budući da se strašna SIDA, rođena na afričkom kontinentu, pojavila kod nas na horizontu i odmah se pridružila „starim“ infekcijama, zahtijevala je hitne mjere za dijagnosticiranje i u potrazi za terapijskim lijekovima koji utiču na njega.

Opseg ELISA metode

Mogućnosti enzimskog imunoeseja su zaista velike. Sada je teško zamisliti kako se može bez takvih studija, koje se koriste doslovno u svim granama medicine. Čini se da ELISA može učiniti u onkologiji? Ispostavilo se da može. I mnogo. Sposobnost analize da se pronađu markeri karakteristični za određene vrste malignih neoplazmi je u osnovi ranog otkrivanja tumora, kada zbog male veličine još nije otkriven na drugi način.

Moderna klinička laboratorijska dijagnostika (CDL), pored tumorskih markera, ima značajan arsenal panela za ELISA test i pomoću njih dijagnostikuje različita patološka stanja (infektivni procesi, hormonski poremećaji) i prati farmaceutske lijekove kako bi se utvrdilo njihovo djelovanje na pacijentovo stanje. tijelo i, usput rečeno, ne samo ljudsko. Trenutno se u veterinarskoj službi široko koristi enzimski imunotest, jer su i "naša manja braća" podložna mnogim bolestima od kojih ponekad i jako pate.

Na ovaj način, ELISA, zbog svoje osjetljivosti i specifičnosti, može odrediti iz uzorka krvi uzetog iz vene:

• Hormonski status (hormoni štitnjače i nadbubrežne žlijezde, polni hormoni);
• Prisutnost virusne i bakterijske infekcije (HIV, B i C, klamidija, sifilis, i, kao i mnoge druge bolesti uzrokovane patogenim mikroorganizmima);
• Tragovi vitalne aktivnosti mikroorganizama koji su pokrenuli infektivni proces, koji je uspješno završio i prešao u fazu formiranja imunološkog odgovora na ovaj patogen. Takvi tragovi, odnosno antitijela, u mnogim slučajevima ostaju doživotno cirkulirati u krvi, što čovjeka štiti od ponovne infekcije.

Šta je suština IF-a?

Metoda enzimskog imunoeseja omogućava određivanje ne samo prisutnosti samog patogena (kvalitativne analize), već i njegovog kvantitativnog sadržaja u krvnom serumu pacijenta.

Virusna ili bakterijska doza značajno utječe na tok infektivnog procesa i njegov ishod, stoga kvantitativna analiza igra važnu ulogu u dijagnostici i liječenju bolesti u različitim oblicima i fazama.

Međutim, poznavajući enzimske imunosorbentne testove kao ELISA metodu, ne razmišljamo ni o tome kako ona uspijeva pokriti tako širok spektar mikroorganizama koji nastanjuju našu planetu, od kojih mnogi predstavljaju direktnu prijetnju zdravlju i životu ljudi i životinje. Činjenica je da ELISA ima mnogo opcija (nekonkurentnih i kompetitivnih – direktnih i indirektnih), od kojih svaka rješava svoj problem i, na taj način, omogućava ciljanu pretragu.

Za otkrivanje imunoglobulina jedne ili druge klase koristi se tradicionalna polistirenska ploča (tableta) sa 96 jažica, u čijim se jažicama koncentrišu adsorbirani rekombinantni proteini u čvrstoj fazi. Antitela ili antigeni koji su dospeli u jažicu sa krvnim serumom pronalaze „poznati” predmet i formiraju sa njim kompleks (AG - AT), koji će se, fiksiran konjugatom enzima, manifestovati kao promena boje jažice. prilikom čitanja rezultata.

Enzimski imunotest se izvodi na test sistemima određene specifičnosti, izrađenim u posebnim laboratorijama i opremljenim svim potrebnim reagujućim komponentama. Istraživanja se mogu izvoditi pomoću podloška („podložaka”) i spektrofotometara za očitavanje, gdje je uključen najveći broj ručnog rada. Na potpuno automatskim mašinama, oslobađajući laboratorijskog asistenta od monotonog ubacivanja, pranja i drugih rutinskih zadataka, naravno, brže je i praktičnije raditi, ali ne mogu svi laboratoriji priuštiti takav luksuz i nastaviti raditi na starinski način - na poluautomatskim uređajima.

Interpretacija rezultata ELISA-e je u nadležnosti doktora laboratorijske dijagnostike, pri čemu se nužno uzima u obzir svojstvo svojstveno gotovo svim imunohemijskim reakcijama da daju lažno pozitivne ili lažno negativne odgovore.

Video: moderni enzimski imunotest

ELISA rezultati na primjeru sifilisa

ELISA je pogodna za otkrivanje svih oblika i, osim toga, koristi se u skrining studijama. Za analizu se koristi venska krv pacijenta uzeta na prazan želudac. U radu se koriste ploče određene specifičnosti (AT klase A, M, G) ili ukupna antitijela.

S obzirom na to da se antitijela kod sifilisa proizvode određenim redoslijedom, ELISA može lako odgovoriti na pitanje kada je došlo do infekcije i u kojoj je fazi proces, a dekodiranje dobijenih rezultata može se prikazati u sljedećem obliku:

• IgM ukazuju na trajanje infektivnog procesa (mogu se pojaviti tijekom pogoršanja kroničnih upalnih bolesti);
• IgA navode da se infekcija dogodila prije više od mjesec dana;
• IgG ukazuju na to da je infekcija u punom zamahu ili da je nedavno liječena, što se lako otkrije prikupljanjem anamneze.

Prilikom testiranja na sifilis, negativne jažice (i negativna kontrola) će ostati bezbojne, dok će pozitivne (poput pozitivne kontrole) pokazati svijetlo žutu boju zbog promjene boje hromogena dodanog tokom testa. Međutim, intenzitet boje ne odgovara uvijek kontrolnom, odnosno može biti malo bljeđi ili blago žućkasti. To su sumnjivi rezultati, koji po pravilu podliježu ponovnom ispitivanju uz obavezno uzimanje u obzir kvantitativnih pokazatelja dobivenih na spektrofotometru, ali općenito, boja je direktno proporcionalna broju imunih kompleksa (povezanih antigena i antitijela jedni drugima).

Najuzbudljiviji od enzimskih imunotestova - ELISA za HIV

Analiza o, možda i više od drugih, interesuje širok spektar stanovništva, jer se još ne može sa sigurnošću reći da su mnogi društveni problemi (prostitucija, narkomanija itd.) nestali. Nažalost, HIV ne pogađa samo ove dijelove ljudskog društva, možete se zaraziti pod različitim okolnostima koje nisu povezane sa seksualnim promiskuitetom ili upotrebom droga. Ali ako postoji potreba za testiranjem na HIV, onda se ne biste trebali bojati da će svi okolo saznati za posjetu takvoj laboratoriji. Sada su osobe zaražene HIV-om zaštićene zakonom, a oni koji sumnjaju mogu se obratiti anonimnim kancelarijama gdje mogu riješiti problem bez straha od javnosti i osude.

Enzimski imunotest koji se koristi za dijagnosticiranje HIV infekcije je jedna od primarnih standardnih studija, koja, međutim, zahtijeva posebne uslove, jer je tema vrlo osjetljiva.

Ima smisla provesti ELISA za HIV nakon seksualnog kontakta, transfuzije krvi, drugih medicinskih procedura koje uključuju infekciju i na kraju perioda inkubacije („seronegativni prozor“), ali treba imati na umu da ovaj vremenski period nije konstantna. Može se završiti za 14-30 dana, a može trajati i do šest mjeseci, pa se prosječnom vrijednošću smatra interval od 45 do 90 dana. Krv se za HIV daje na isti način kao i za druge infekcije - iz vene na prazan želudac. Rezultati će biti gotovi u zavisnosti od nakupljanja materijala u laboratoriji i njenog opterećenja (od 2 do 10 dana), iako većina laboratorija daje odgovor istog dana ili sledećeg.

Šta se može očekivati ​​od rezultata HIV-a?

ELISA za HIV infekciju otkriva antitela na dva tipa virusa: HIV-1 (češći u Rusiji i drugim evropskim i azijskim zemljama) i HIV-2 (češći u zapadnoj Africi).

Zadatak HIV ELISA-e je da traži antitela klase G koja se detektuju na svim test sistemima, ali u kasnijem periodu, i antitela klase A i M otkrivena na rekombinantnim test setovima nove generacije, koja omogućavaju detekciju antitela u najranijoj fazi. faze (period inkubacije je seronegativni prozor). Od ELISA testa se mogu očekivati ​​sljedeći odgovori:

1. Primarni pozitivan rezultat: krv podliježe ponovnoj provjeri na test sistemu iste vrste, ali, ako je moguće, druge serije i od strane druge osobe (laborant);
2. Ponovljeno (+) uključuje novo uzimanje uzorka krvi od pacijenta sa studijom sličnom primarnoj analizi;
3. Sljedeći pozitivan rezultat podliježe referentnoj analizi, koja koristi visoko specifične test setove (2-3 kom.);
4. Pozitivan rezultat u oba (ili tri) sistema šalje se na imunobloting (ista ELISA, ali se izvodi pojedinačno na test setovima posebno visoke specifičnosti).

Zaključak o HIV infekciji donosi se samo na osnovu imunoblotinga. Sa zaraženom osobom se vodi razgovor u potpunoj povjerljivosti. Odavanje medicinskih tajni u Rusiji, kao iu drugim zemljama, podliježe krivičnoj kazni.

Analize za klamidiju i citomegalovirus enzimskim imunološkim testom također su stekle posebnu popularnost, zbog činjenice da vam omogućavaju da odredite vrijeme infekcije, stadij bolesti i učinkovitost terapijskih mjera.

Tokom uvoda moguće je uočiti i pojavu antitijela različitih klasa. u različitim fazama patološkog stanja uzrokovanog infektivnim agensom:

• IgM se može otkriti već sedam dana nakon infekcije;
• IgA ukazuju na to da infekcija živi u tijelu više od mjesec dana;
• IgG potvrđuje dijagnozu klamidije, pomaže u praćenju liječenja i utvrđivanju njegove efikasnosti. Treba napomenuti da antitela klase G ostaju i cirkulišu u organizmu bez obzira na trajanje bolesti, pa se za pravilno tumačenje analize moraju uzeti u obzir referentne vrednosti (norme) koje do način, različiti su za svaki CDL: uzimajući u obzir marku test sistema i specifičnost reagensa uključenih u set. Vrijednosti norme se unose u obrazac pored rezultata ELISA.

Što se tiče, ovdje je malo drugačije: antitela klase M se javljaju za oko mesec i po dana, odnosno pozitivan rezultat (IgM+) postaje u fazi primarne infekcije ili tokom reaktivacije latentne infekcije i ostaje od 4 meseca do šest meseci.

Prisustvo antitijela klase G karakteristično je za početak primarne akutne infekcije ili reinfekcije. U analizi se navodi da je virus prisutan, ali ne daje informacije o stadiju zaraznog procesa. U međuvremenu, određivanje norme titra IgG takođe izaziva poteškoće, jer u potpunosti zavisi od imunološkog statusa određene osobe, koji se, međutim, utvrđuje detekcijom imunoglobulina klase G. S obzirom na ovakvo ponašanje antitela, u dijagnozi CMVI, postaje neophodno proceniti sposobnost antitela klase G da interaguju sa CMV-om, kako bi ga kasnije „neutralisali” (AT avidnost). U početnoj fazi bolesti, IgG se vrlo slabo veže za antigene virusa (niska avidnost) i tek tada počinju pokazivati ​​aktivnost, stoga možemo govoriti o povećanju avidnosti antitijela.

Dugo se može govoriti o prednostima enzimskog imunoeseja, jer je ova metoda uspjela riješiti mnoge dijagnostičke probleme koristeći samo vensku krv. Nema potrebe za dugim čekanjima, brigama i problemima oko preuzimanja materijala za istraživanje. Osim toga, test sistemi za ELISA nastavljaju da se poboljšavaju i dan kada će test dati 100% pouzdanost rezultata nije daleko.

Video: obrazovni film Moskovskog državnog medicinskog univerziteta. Sechenov o osnovama ELISA

Metoda enzimskog imunoeseja je moderna metoda laboratorijskog ispitivanja krvi na prisustvo antitijela na viruse i antigena na patogene u njoj. Ova metoda može ne samo identificirati etiologiju, već i odrediti stadij bolesti. Rezultati analize imaju kvalitativni i kvantitativni pokazatelj.

Zašto se radi enzimski imunotest?

• pregledi krvi () na prisutnost autoimunih bolesti u njemu;
• pregled pacijenta na tumorske markere;
• sposobnost proučavanja hormonskog sastava krvi;
• traženje antigena za zarazne i venerične bolesti;
• traženje antitijela na virusne infekcije.

Prednosti enzimskog imunoeseja su u tome što garantuje visok nivo specifičnosti rezultata i ima visoku osetljivost (više od 90%) na infektivne agense. ELISA je pristupačna dijagnostička metoda koja se izvodi u svakom medicinskom centru. Također, koristeći ovu metodu, možete odrediti ne samo bolest, već i pratiti proces njenog razvoja upoređujući količinu proteina proizvedenog u krvi u različitim intervalima.

Jedini nedostatak ELISA-e je, možda, to što se ne može koristiti za određivanje uzročnika infekcije, već samo za identifikaciju imunološkog odgovora na ovaj patogen.

Osnovni pojmovi enzimskog imunoeseja (ELISA)

Prvo, hajde da se pozabavimo nekim konceptima kako bismo razumjeli princip izvođenja laboratorijske studije.

Imunološki kompleks je kompleks antitijela i antigena prisutnih u krvi i uključenih u imunološki proces.

Antigeni su tvari koje su organskog porijekla i nastaju kao posljedica određene bolesti u stanicama tijela. Razlog tome može biti autoimuna ili onkološka bolest. Također, antigeni mogu biti tvari različitih uzročnika zaraznih bolesti.

Avidnost antitela je mera jačine veze između antigena i antitela, kao i količine antigena koja je došla u kontakt sa antitelima (imunoglobulinima).
Ovo je veoma važan pokazatelj, jer se može koristiti za određivanje datuma infekcije osobe, što je veoma važno za infekciju tokom gestacijske dobi.
Test avidnosti se izvodi u laboratoriji tretiranjem kompleksa antitijelo-antigen ureom, koja uništava protein. U ovom slučaju, spojevi sa niskom avidnošću se uništavaju, dok spojevi sa visokom avidnošću ostaju netaknuti. Rezultati testa avidnosti izraženi su u procentima.

Antitijela (imunoglobulini) su poseban protein koji proizvode limfociti, odnosno imunološke stanice, kada bakterije, virusi ili gljivice (infektivni patogen) uđu u ljudsko tijelo.
Postoji pet vrsta imunoglobulina: A, E, M, G, D. Međusobno se razlikuju po masi, obliku, učešću u infektivnom procesu, poluživotu i vremenu nastanka od trenutka infekcije.
IgM imunoglobulin (pentamer) ima najveću molekularnu težinu, težak je 950.000 daltona, dok ostali imaju težinu u rasponu od 150 - 200.000 daltona. Zbog svoje veličine, IgM ne prolaze kroz placentnu barijeru. IgG imunoglobulini zauzimaju najveći dio krvnog seruma, njihov postotak je oko 80%. A najmanji dio u serumu zauzimaju IgE antitijela - 0,003%. Imunoglobulini IgG, IgM, IgA su uključeni u infektivni proces. Dok su IgE rezultat alergijskih reakcija. Proteini poput IgD su uključeni u formiranje lokalnog imuniteta i formiraju se u limfnim čvorovima i krajnicima.

Postoji nekoliko tipova ELISA-e, među njima direktna, indirektna, kompetitivna i blokirajuća metoda. Iako u praksi, laboratorijski tehničari najčešće koriste heterogeni imunoesej u čvrstoj fazi pod nazivom ELISA (enzyme linked immunosorbent assay).

Princip enzimskog imunoeseja se manifestuje u reakciji antitela i antigena, u kojoj se formira imuni kompleks - antigen-antitelo. Takva reakcija dovodi do činjenice da se mijenja enzimska aktivnost oznaka na površini antitijela.

Da bismo ovo razumjeli, razmotrit ćemo ovaj proces u fazama.

Prvi korak. U ovoj fazi, laboratorijski asistent koji provodi studiju stavlja pročišćeni antigen infektivnog agensa na površinu jažica tablete. Zatim se uzročniku dodaje pacijentov krvni serum, što izaziva specifičnu reakciju između antitijela u krvi i antigena. Ovo jedinjenje se dobija i učestvuje u sledećoj fazi eksperimenta.

Druga faza. U drugoj fazi studije dolazi do stvaranja imunoloških kompleksa, koji su reakcija između antigena dobivenog u prvoj fazi i konjugata, odnosno imunoglobulina obilježenog enzimom peroksidaze. U tom slučaju se dodaje specifičan hromogen. Reakcija proizvodi obojeno jedinjenje u bušotini. Intenzitet boje u ovom slučaju ovisi o količini imunoglobulina sadržanih u krvi pacijenta.

Treća faza. U trećoj fazi, laboratorijski asistenti obično ocjenjuju rezultate studije. Za to se provodi fotometrija pomoću spektrofotometra, poređenje gustoće biološkog materijala s gustinom uzoraka, a također se provodi matematički proračun rezultata. Nivo imunoglobulina u krvi zavisi od gustine otvora tablete.
U praksi se najčešće koriste ploče sa 96 jažica.

Kada se mjeri optička gustoća (skraćeno IP) krvi, tada se antitijela broje u jednoj jedinici volumena. Rezultat se zatim upoređuje sa kontrolnim materijalom.
Važno je zapamtiti da svaka metoda istraživanja ima svoje indikatore, koji uzimaju u obzir referentne vrijednosti testa. To su pokazatelji patologija i normi. Stoga ovo morate zapamtiti u svakom slučaju. Nemoguće je interpretirati rezultate jedne studije u drugoj. Takođe, nemoguće je uporediti rezultate pojedinačnih laboratorija.

Bolesti otkrivene ELISA dijagnostikom

Uz pomoć enzimskog imunotestiranja moguće je otkriti prisustvo takvih bolesti u tijelu:

1) Zarazne bolesti

2) Indikatori stanja ljudskog imuniteta i markeri autoimunih bolesti.
3) Onkološke bolesti (hronični gonadotropin, prostata-specifični antigen, alveomucin, faktor nekroze tumora, kancer-embrionalni antigen i dr.).
4) Endokrine bolesti.
5) Povrede reproduktivnog sistema.

Lista ne uključuje sve bolesti koje se mogu dijagnosticirati pomoću ELISA testa, ovaj spisak se može nastaviti.

Istraživanja

Uzimanje uzoraka materijala za istraživanje enzimskim imunotestom.

Za ELISA studije pacijenti mogu uzeti cerebrospinalnu tečnost, staklastu tečnost, amnionsku tečnost, sluz iz cervikalnog kanala ili uretre, kao i briseve. Ali najčešći uzorak za istraživanje i dalje je pacijentova krv.

Rezultati imunološkog testa enzima obično se prave u roku od jednog dana. Kašnjenja ne bi trebalo da se dešavaju, iako kod velikih nakupina seruma, laboratorijski asistenti možda jednostavno nemaju vremena da urade analizu na vreme.

Rezultati istraživanja

Procjenjujući rezultate studija provedenih za identifikaciju infekcija, od posebne je važnosti broj imunoglobulina koji se nalazi u krvi, kao i njihova vrsta. Prisustvo infekcije u tijelu ili njeno odsustvo ovisi o ovim pokazateljima. Također, upoređivanjem kvantitativnih i kvalitativnih pokazatelja, laboratorijski asistent može odrediti očekivanu fazu razvoja bolesti, kao i razlikovati akutni oblik bolesti od kroničnog oblika. Procjenjuje se i prisutnost aktivnog virusa u ljudskom tijelu, koji se manifestira u pogoršanom kroničnom ili akutnom obliku bolesti.
Približno vrijeme nakon kojeg se Ig imunoglobulini pojavljuju u krvi.

Stvar je u tome što su IgM antitijela koja se najbrže pojavljuju. Njihovo otkrivanje se javlja u roku od 1 - 3 nedelje nakon procesa infekcije organizma, što je znak akutne faze infekcije ljudskim virusom.

Također, takva antitijela mogu se otkriti u krvi pacijenta tokom pogoršanja hronične bolesti. Količina IgM antitijela traje oko 3 mjeseca od trenutka njihovog formiranja, a zatim postepeno počinju nestajati. Iako postoje izuzeci. Na primjer, neki pacijenti nakon konačnog oporavka zadržavaju količinu antitijela u krvi. Dakle, cirkulacija imunoglobulina odvija se nekoliko godina nakon infekcije.

Kod ovakvih pacijenata potrebno je provjeriti pozitivne pokazatelje na prisustvo IgM antitijela, jer su moguće situacije da sistem testiranja napravi grešku i da lažno pozitivan rezultat. Ovakve situacije se vrlo često dešavaju trudnicama.

Što se tiče pojave IgA antitela, ona se mogu formirati 2 ili 4 nedelje nakon što je telo bilo izloženo infekciji. Ali antitijela se mogu otkriti tek nakon mjesec dana. Tada njihov broj dostiže optimalan broj za detekciju.

IgA antitijela proizvode ćelije limfnih čvorova, slezene i sluzokože. Takvi imunoglobulini mogu se koncentrirati na površine sluznice organa, gdje obavljaju svoju zaštitnu funkciju, sudjelujući u lokalnom ljudskom imunitetu.

Pojava IgG antitela može se pratiti testiranjem sistema već u 4. nedelji progresije infektivnog procesa u organizmu. Titar takvih imunoglobulina može se postepeno povećavati tokom 2 mjeseca. Nakon oporavka, mali titar njih ostaje u tijelu i podržava imuni sistem. Bolesti kao što su klamidija, trihomonijaza i mikoplazmoza karakterizira nizak nivo IgG antitijela u krvi, što se objašnjava nedostatkom jakog imuniteta na takve infekcije.

Casovi

Varijante detekcije imunoglobulina različitih klasa u ljudskoj krvi.

• Otkrivanje IgM antitijela, koje se provodi u izolaciji, ukazuje na primarnu infekciju osobe.
• Detekcija u krvnom serumu istovremeno antitela klase IgM i IgG javlja se i tokom primarne infekcije koja se dogodila u poslednja 2-3 meseca. Ili ova kombinacija može biti znak egzacerbacije hronične bolesti.
• Stoga takvi rezultati tokom trudnoće ne ukazuju uvijek na primarnu infekciju.
• Otkrivanje IgG antitijela u izolaciji može biti znak imuniteta na ovu infekciju, iako može ukazivati ​​i na kroničnu bolest. U prisustvu hroničnog oblika bolesti, količina antitijela i njihova dinamika igraju važnu ulogu. Takve studije se provode u intervalima od otprilike 2 sedmice.
• Kada su IgA i IgM antitijela odmah prisutna u krvi, to može ukazivati ​​na primarnu infekciju. Otkrivanje IgA u izolaciji je također posljedica primarne infekcije organizma.

Kada se IgA antitijela otkriju zajedno sa IgG antitijelima, to znači aktivaciju kroničnog oblika infekcije. Imunoglobulini se pojavljuju u krvi 2 sedmice nakon pogoršanja bolesti.
Avidnost antitela je mera jačine veze između antigena i antitela, kao i količine antigena koja je došla u kontakt sa antitelima (imunoglobulinima). Ovo je dodatni korak u dijagnozi pomoću ELISA.

Ovo je veoma važan pokazatelj, jer se može koristiti za određivanje datuma infekcije osobe, što je veoma važno za infekciju tokom gestacijske dobi. Takođe, možete procijeniti sve rizike od intrauterine infekcije djeteta.

Test avidnosti se izvodi u laboratoriji tretiranjem kompleksa antitijelo-antigen ureom, koja uništava protein. U ovom slučaju, spojevi sa niskom avidnošću se uništavaju, dok spojevi sa visokom avidnošću ostaju netaknuti. Rezultati testa avidnosti izraženi su u procentima. Visoka avidnost antitijela ukazuje na kronični oblik bolesti, ili je znak postojanog imuniteta.

Karakteristike pojave antitijela u krvi dojenčadi

Ako se IgG majke nađe u krvi djece mlađe od godinu dana ili do 1,5 godine, to znači da su antitijela ušla u tijelo djeteta kroz placentu tokom trudnoće. Ovaj simptom ne može ukazivati ​​na infekciju bebe, ali je imunitet na infekciju koja se prenosi od majke.

Ali, ako se u malom organizmu nađu imunoglobulini klase IgM, koji zbog svoje težine ne mogu prodrijeti kroz placentu do bebe, onda je to znak infekcije. Do infekcije može doći nakon rođenja ili tokom fetalnog razvoja.

Metoda kvantitativne enzimske imunoeseje.

Rezultat dijagnoze bolesti ELISA-om prikazan je u određenim mjernim jedinicama:

1. OD - optička gustina uzorka - je nivo koncentracije antitela u jednoj jedinici zapremine. Što je ovaj pokazatelj veći, to je više imunoglobulina u krvi.
2. Neki rezultati ELISA ukazuju na postojanje takve jedinice kao što je koeficijent pozitivnosti - CP. Ovo je također oznaka za gustinu uzorka.
3. Jedinice koncentracije imunoglobulina izražavaju se u nanogramima, mililitrima ili ng/ml.
4. Titri seruma se izražavaju na sljedeći način: 1:20, 1:40, 1:100, 1:200, 1:400, 1:800, 1:1200 i slično.
5. Titri na kojima se bolest dijagnosticira za različite infekcije su različiti.
6. Rezultati istraživanja sadrže sljedeće simbole: "-", "+", "?" (+, ++, +++, ++++).
7. Kvalitativna procjena podrazumijeva postojanje samo jedne od dvije tačke: pozitivne ili negativne.

Ispravno tumačenje rezultata ove studije ovisi o kvalifikacijama liječnika, jer niko osim specijaliste nema pravo propisivati ​​liječenje.

Specijalisti procjenjuju količinu antitijela u krvi, njihovu vrstu i koncentraciju.

Također, treba imati na umu da je nemoguće uporediti rezultate različitih istraživačkih metoda, ili rezultate testova dobijenih u različitim laboratorijama. Budući da za bilo koju dijagnostičku metodu postoje indikatori i mjerne jedinice.

Poređenje rezultata je dozvoljeno samo unutar istog laboratorija.

Video ELISA metode