Kas yra hemagliutinacijos reakcija? Hemagliutinacijos slopinimo reakcija virusologijoje

HEMAGLUTINACIJA

hemagliutinacija(iš graikų háima kraujas ir lot. agglutinatio klijavimas), eritrocitų klijavimas ir nusodinimas veikiant bakterijoms, virusams, toksinams ir kt., galinčių adsorbuotis eritrocitų paviršiuje, taip pat hemagliutininai. Vieno gyvūno eritrocitus gali agliutinuoti kito gyvūno serumas, nes jame yra normalių izohemagliutininų (antikūnų). Reakcijos pagalba G. diegti . Fenomenas G. naudojami mikrobiologiniuose ir imunologiniuose tyrimuose.

Atskirkite tiesioginį arba aktyvųjį ir netiesioginį arba pasyvųjį, G. Tiesiai G. dėl tiesioginio bakterinių ir virusinių agentų poveikio eritrocitams. Tuo pačiu metu hemagliutininai sąveikauja su mukoproteazės prigimties receptoriais, esančiais eritrocitų paviršiuje su mucinazės fermento pagalba, sukeldami antigeno adsorbciją. Dėl to eritrocitų suspensija (pavyzdžiui, vištiena) sudaro plačias nuosėdas skėčio pavidalu su nelygiais kraštais. Ši reakcija nėra specifinė, vyksta nedalyvaujant imuniniam serumui. tiesioginis G. naudojami serologiniuose tyrimuose, ypač nustatant slopinimo reakcijoje naudojamo antigeno darbinį praskiedimą G., kuris pagrįstas antigeno hemagliutinuojamojo poveikio uždelsimu imuniniam specifiniam serumui. tiesioginis G. taip pat naudojamas apytiksliai kai kurių virusinių ligų (arklių gripo, paukščių maro, Niukaslio ligos, ančių gripo) diagnostikai. netiesioginis G.(RNHA) pagrįsta įjautrintų eritrocitų (adsorbuojant ant jų esantį antigeną) gebėjimu agliutinuotis su homologiniais imuninio serumo antikūnais. Dėl didelio jautrumo ir specifiškumo netiesioginis G. jis naudojamas diagnozuoti daugelį virusinių, bakterinių ir ricketsinių ligų. Yra keletas netiesioginių modifikacijų G. antikūnų slopinimo, uždelsimo, neutralizavimo reakcijos ir kt. RNHA ir jos modifikacijų pagalba tiek antikūnai gyvūnų ir žmonių kraujo serume (naudojant žinomu antigenu įjautrintus eritrocitus), tiek antigenai (naudojant tam tikrais įjautrintus eritrocitus) antikūnų) galima aptikti . Reakcijai naudojami nuplauti skirtingų gyvūnų rūšių eritrocitai (dažniausiai avių ir vištų eritrocitai). Eritrocitų gebėjimas adsorbuoti baltyminio pobūdžio didelius molekulinius antigenus padidėja po jų apdorojimo taninu. Kad pailgėtų eritrocitų galiojimo laikas, jie konservuojami formalinu. Diagnostinės medžiagos, gautos iš formalizuotų eritrocitų, gali išlaikyti savo aktyvumą ilgą laiką. Esant jau paruoštoms eritrocitų diagnostikoms, reakcijos formulavimas labai supaprastėja. Veterinarinėje praktikoje RNGA naudojamas diagnozuoti kai kurias (daugiausia virusines) gyvūnų ligas – klasikinį paukščių marą, Niukaslio ligą, karvių raupus, arklių gripą, kiaulių ir ančių gripą, pulorozę – paukščių vidurių šiltinę ir kt. Taip pat žr.

Literatūra:
Veterinarijos laboratoriniai tyrimai, M., 1971;
Mikrobiologinių ir virusologinių tyrimų metodų vadovas, red. M. O. Birgeris 2 leidimas, M., 1973 m.

Veterinarijos enciklopedinis žodynas. - M.: "Tarybų enciklopedija". Vyriausiasis redaktorius V.P. Šiškovas. 1981 .

Sinonimai:

Pažiūrėkite, kas yra „HEMAGLIUTINACIJA“ kituose žodynuose:

hemagliutinacija- hemagliutinacija... Rašybos žodynas

hemagliutinacija- susigrūdimas, sujungimas Rusų sinonimų žodynas. hemagliutinacija daiktavardis, sinonimų skaičius: 2 agliutinacija (3) … Sinonimų žodynas

HEMAGLUTINACIJA- (iš hemo... ir lot. agglutinatio bonding) skystyje suspenduotų eritrocitų surišimas ir nusodinimas veikiant įvairiems veiksniams, pavyzdžiui, antikūnams, bakterijoms ar virusams. Hemagliutinacijos testas naudojamas diagnozuoti ...... Didysis enciklopedinis žodynas

Hemagliutinacija- eritrocitų klijavimo į plika akimi matomus agregatus procesas. G. priežastis: 1) At prie eritrocitų ir heterofilinio Ag; 2) Ab į Ag, svetimas eritrocitams, adsorbuotas jų paviršiuje (žr. Hemagliutinacijos pasyvioji reakcija); 3)... Mikrobiologijos žodynas

HEMAGLUTINACIJA- HEMAGLUTINACIJA, eritrocitų agliutinacija (sulipimas) sumaišius su homologiniais serumais. Jei žmogaus eritrocitai pakeičiami to paties žmogaus serumu, purtant gaunama vienoda suspensija. Jei vieno žmogaus raudonieji kraujo kūneliai ...... Didžioji medicinos enciklopedija

hemagliutinacija- Reiškinys, kuriuo grindžiamas antikūnų nustatymo metodas, pagrįstas jų eritrocitų agliutinacija dėl prisijungimo prie pačių eritrocitų antigenų arba kitų antigenų, dirbtinai prijungtų prie eritrocitų paviršiaus. Techninis vertėjo vadovas- (hemas + agliutinacija) eritrocitų agliutinacija ... Didysis medicinos žodynas

Hemagliutinacija- iš graikų kalbos. haimo kraujo ir lat. agliutinacijos agliutinacija), raudonųjų kraujo kūnelių agliutinacijos ir vėlesnio nusėdimo procesas; sukelia hemagliutininai (žr. Hemagliutininai), bakterijos ir virusai, agentai, galintys adsorbuotis ant ... ... Didžioji sovietinė enciklopedija

hemagliutinacija- eritrocitų klijavimas (agliutinacija). Jis vystosi, įskaitant nesuderinamo kraujo perpylimą.

Dalyko "Imunomoduliatoriai. Infekcinių ligų imunodiagnostika" turinys:

Pailgėjusi agliutinacijos reakcija (RA). Norėdami nustatyti AT paciento kraujo serume, įdėti išplėstinė agliutinacijos reakcija (RA). Norėdami tai padaryti, į kraujo serumo skiedimų seriją pridedama diagnostinė medžiaga - nužudytų mikroorganizmų ar dalelių suspensija su adsorbuotu Ag. Maksimalus praskiedimas agliutinacija Ag, vadinamas kraujo serumo titru.

Agliutinacijos reakcijos atmainos (RA) nustatyti AT - kraujo lašo tyrimas dėl tuliaremijos (uždedant diagnostiką ant kraujo lašo ir matomų balkšvų agliutinatų) ir Haddlesono reakcijai dėl bruceliozės (ant lašo užlašant gencijono violetine dažytą diagnostiką). kraujo serumo).

Apytikslė agliutinacijos reakcija (RA)

Norint nustatyti izoliuotus mikroorganizmus, apytikslis RA dedamas ant stiklelių. Norėdami tai padaryti, į standartinio diagnostinio antiserumo lašą (skiedžiant 1:10, 1:20) įlašinama patogeno kultūra. Jei rezultatas yra teigiamas, jie pateikia išsamią reakciją su didėjančiu antiserumo skiedimu.

reakcija laikomas teigiamu, jei agliutinacija stebima praskiedus, artimus diagnostinio serumo titrui.

OAS. Somatinis O-Ag jie yra termiškai stabilūs ir atlaiko virimą 2 val.. Sąveikaujant su AT susidaro smulkiagrūdžiai agregatai.

N-Ag. H-Ag (flagellate) termolabūs ir greitai sunaikinami 100 °C temperatūroje, taip pat veikiant etanoliui. Reakcijoje su H-antiserumu po 2 valandų inkubacijos susidaro birūs dideli dribsniai (susidaro bakterijoms sulipus su žvyneliais).

Vi Ar vidurių šiltinės bakterijos yra gana termostabilios (atlaiko 60-62 °C temperatūrą 2 valandas); inkubuojant su Vi-antiserumu susidaro smulkiagrūdis agliutinatas.

Tiesioginės hemagliutinacijos reakcijos

Paprasčiausias iš jų reakcijos - agliutinacija eritrocitai, arba hemagliutinacija, naudojama kraujo grupėms nustatyti AB0 sistemoje. Norėdami nustatyti agliutinacija(arba jo nebuvimas) naudojami standartiniai antiserumai su anti-A ir anti-B agliutininu. Reakcija vadinama tiesiogine, nes tirti antigenai yra natūralūs eritrocitų komponentai.

Bendrinama su tiesioginė hemagliutinacija mechanizmai turi virusinę hemagliutinaciją. Daugelis virusų sugeba spontaniškai agliutinuoti paukščių ir žinduolių eritrocitus, o jų pridėjimas prie eritrocitų suspensijos sukelia iš jų agregatų susidarymą.

RTGA principas susideda iš to, kad mėgintuvėlyje sumaišomi vienodi tūriai kraujo serumo ir viruso suspensijos, o po ekspozicijos nustatoma, ar virusas išsaugomas mišinyje, pridedant eritrocitų suspensijos. Eritrocitų agliutinacija rodo buvimą, o hemagliutinacijos nebuvimas – viruso nebuvimą mišinyje. Viruso išnykimas iš viruso + serumo mišinio laikomas serumo ir viruso antikūnų sąveikos požymiu.

Tačiau antikūnai sąveikauja su antigenais griežtai apibrėžtais kiekybiniais santykiais. Todėl, norint, kad tam tikras viruso kiekis netektų hemagliutinacijos gebėjimo, reikalingas tam tikras antikūnų minimumas, o kadangi vienas iš RTHA komponentų visada nežinomas, būtina reakciją sudėti į keletą mėgintuvėlių. su skirtingomis antikūnų dozėmis ir tomis pačiomis viruso dozėmis arba atvirkščiai. Tai pasiekiama naudojant skirtingus serumo skiedimus ir tą patį viruso praskiedimą, arba skirtingus viruso skiedimus ir tą patį serumo praskiedimą.

RTGA leidžia išspręsti šias užduotis: nustatyti antikūnų prieš hemagliutinuojantį virusą titrą serume; nustatyti nežinomą hemagliutinuojantį virusą iš žinomų serumų; nustatyti dviejų virusų antigeninio ryšio laipsnį.

RTGA privalumai: technikos paprastumas, greitis, sterilus darbas nereikalingas, konkretumas, maža kaina. Trūkumas: RTGA galima tik su hemagliutinuojančiais virusais.

Antikūnų titravimo principas RTGA susideda iš šių dalių:

- paruošti vienodais tūriais (dažniausiai 0,25 arba 0,2 ml) tiriamojo serumo nuoseklius (dažniausiai 2 kartus) skiedimus;

– į kiekvieną praskiedimą pridedamas toks pat homologinio viruso tūris, kurio titras yra 4 HAU;

– mišiniai tam tikrą laiką laikomi tam tikroje temperatūroje (Niukaslio ligos virusui 40-60 min. kambario temperatūroje);

– į visus mišinius įpilama vienodo tūrio 1 % nuplautų eritrocitų suspensijos;

- po ekspozicijos hemagliutinacija kiekviename mišinyje vertinama kryžminimo būdu.

Reakcija apima serumo, viruso ir eritrocitų kontrolę.

Didžiausias serumo praskiedimas, kuris vis dar visiškai slopina hemagliutinaciją, laikomas antikūnų titro šiame serume rodikliu.

Naudojimas hemadsorbcijos reakcijos virusologijoje.

RGAd. Hemadsorbciją – eritrocitų ryšį su viruso paveiktų ląstelių paviršiumi – pirmą kartą atrado Vogelis ir Shchelokovas (1957) ant audinių kultūros, užkrėstos gripo virusu. Šis reiškinys pagrįstas viruso receptorių, esančių paveiktos ląstelės paviršiuje, afinitetu su eritrocitų receptoriais, o tai lemia jų tarpusavio ryšį, panašų į hemagliutinacijos reakciją. Šios reakcijos pranašumas yra tas, kad ji tampa teigiama net prieš atsirandant ryškiems citopatiniams pokyčiams užkrėstose ląstelėse.

RGAd metodika susideda iš toliau nurodytų dalykų. 3–4 dieną po ląstelių užsikrėtimo paimami du mėgintuvėliai su ta pačia ląstelių kultūra, iš kurių vienas užkrėstas viruso turinčia medžiaga, o antrasis – kontrolinis mėgintuvėlis. Kultūrinis skystis nupilamas iš abiejų mėgintuvėlių ir į abu mėgintuvėlius įlašinama po 2–3 lašus 0,5 % nuplautų eritrocitų suspensijos. Abu mėgintuvėliai paliekami 5-10 minučių, kad eritrocitai atsidurtų ląstelių paviršiuje (statomi horizontaliai ant stalo), o po to šiek tiek nuplaunami fiziologiniu tirpalu ir tiriami mikroskopu (mažu padidinimu). Kontroliniame mėgintuvėlyje eritrocitai visiškai pašalinami fiziologiniu tirpalu, o dalis likusių plūduriuoja kartu su skysčiu. Jei eritrocitai infekuotame mėgintuvėlyje nepašalinami fiziologiniu tirpalu ir neplūduriuoja, o yra prisitvirtinę prie ląstelių paviršiaus, RHAd turėtų būti laikomas teigiamu.

Priklausomai nuo viruso ir ląstelių tipo, raudonųjų kraujo kūnelių išsidėstymas gali būti trejopas:

- eritrocitai adsorbuojami tik ląstelės sluoksnio periferijoje „karolių“ (afrikinio kiaulių maro viruso) pavidalu;

- eritrocitai išsidėstę ant ląstelių sluoksnio židiniais arba sankaupomis (gripo virusas);

- eritrocitai yra difuziškai išsidėstę ląstelių sluoksnyje (paragripo virusas).

Kiekvienas virusas gali adsorbuoti tam tikrų gyvūnų rūšių raudonuosius kraujo kūnelius.

Serologinė virusinių ligų diagnozė padidinus antikūnų titrą suporuotuose kraujo serumuose.

Hemagliutinacijos reakcija (RGA) ir hemagliutinacijos slopinimo reakcija (HITA), reakcijų mechanizmas, komponentai ir taikymas.

Hemagliutinacijos reakcijos pagrindas yra eritrocitų agliutinacijos reiškinys, atsirandantis veikiant įvairiems veiksniams. Atskirkite tiesioginę ir netiesioginę hemagliutinaciją.

Pirmiausia eritrocitai nuplaunami izotoniniu natrio chlorido tirpalu, po to, jei reikia (naudojant baltyminio pobūdžio antigenus), apdorojami 1:20 000 tanino tirpalu ir įjautrinami tirpiais antigenais. Išplovus buferiniu izotoniniu natrio chlorido tirpalu, eritrocitų antigenas yra paruoštas naudoti.

Tiriamasis serumas skiedžiamas izotoniniu natrio chlorido tirpalu mėgintuvėliuose arba specialiose plastikinėse plokštelėse su skylutėmis, po to į kiekvieną serumo skiedimą pridedama eritrocitų diagnostinė medžiaga. Į netiesioginės hemagliutinacijos reakcijos rezultatus atsižvelgiama pagal vamzdelio apačioje susidariusių eritrocitų nuosėdų pobūdį. Teigiamas laikomas reakcijos rezultatas, kai eritrocitai tolygiai padengia visą mėgintuvėlio dugną. Esant neigiamai reakcijai, raudonieji kraujo kūneliai mažo disko arba „mygtuko“ pavidalu yra mėgintuvėlio dugno centre.

Pagrindiniai RP komponentai:

A) tirpus antigenas

B) Specifiniai antikūnai (serumas)

(RTGA) – tai viruso nustatymo arba antivirusinių antikūnų nustatymo paciento kraujo serume metodas, pagrįstas eritrocitų agliutinacijos nebuvimu viruso turinčiu vaistu, kai yra jam atsparus kraujo serumas.
yra pagrįstas virusų antigenų blokavimu, slopinimu imuninio serumo antikūnais, dėl kurių virusai praranda gebėjimą agliutinuoti raudonuosius kraujo kūnelius.

RTHA naudojama diagnozuoti daugybę virusinių ligų, kurių sukėlėjai (gripas, tymai, raudonukė, erkinis encefalitas ir kt.) gali agliutinuoti įvairių gyvūnų eritrocitus.
Mechanizmas. Viruso tipas nustatomas atliekant hemagliutinacijos slopinimo testą (HITA) su tipui būdingų serumų rinkiniu. Į reakcijos rezultatus atsižvelgiama į tai, kad nėra hemagliutinacijos. Viruso A potipiai su antigenais H0N1, H1N1, H2N2, H3N2 ir kt.

RTGA galima diferencijuoti su homologinio tipo specifinių serumų rinkiniu.

Pagrinde hemagliutinacijos reakcijos slypi eritrocitų agliutinacijos reiškinys, kuris atsiranda įvairių veiksnių įtakoje.

Atskirkite tiesioginę ir netiesioginę hemagliutinaciją.
Tiesioginės hemagliutinacijos reakcijos metu eritrocitai sulimpa, kai ant jų adsorbuojami tam tikri antigenai, pavyzdžiui, virusai.
Serologiniuose tyrimuose naudojama tiesioginė hemagliutinacijos slopinimo reakcija, kai iš paciento išskirtas virusas neutralizuojamas specifiniu imuniniu serumu, o vėliau sujungiamas su raudonaisiais kraujo kūneliais.

Hemagliutinacijos nebuvimas rodo viruso ir naudojamo imuninio serumo atitikimą.

Netiesioginė hemagliutinacijos reakcija (pasyvi hemagliutinacija) stebima, kai iš anksto įvairiais antigenais apdoroti (įjautrinti) eritrocitai papildomi imuniniu serumu arba paciento serumu, turinčiu atitinkamų antikūnų.

Vyksta specifinis eritrocitų jungimasis, jų pasyvi hemagliutinacija.

Netiesioginės, arba pasyviosios, hemagliutinacijos reakcija yra pranašesnė už kitus serologinius metodus jautrumu ir specifiškumu, ji naudojama bakterijų, riketsijų ir pirmuonių sukeltų infekcijų diagnostikai.

Netiesioginės hemagliutinacijos reakcijos nustatymo metodas susideda iš kelių etapų.

Pirmiausia eritrocitai nuplaunami izotoniniu natrio chlorido tirpalu, po to, jei reikia (naudojant baltyminio pobūdžio antigenus), apdorojami 1:20 000 tanino tirpalu ir įjautrinami tirpiais antigenais.

Išplovus buferiniu izotoniniu natrio chlorido tirpalu, eritrocitų antigenas yra paruoštas naudoti. Tiriamasis serumas skiedžiamas izotoniniu natrio chlorido tirpalu mėgintuvėliuose arba specialiose plastikinėse plokštelėse su skylutėmis, po to į kiekvieną serumo skiedimą pridedama eritrocitų diagnostinė medžiaga.

Į netiesioginės hemagliutinacijos reakcijos rezultatus atsižvelgiama pagal vamzdelio apačioje susidariusių eritrocitų nuosėdų pobūdį. Teigiamas laikomas reakcijos rezultatas, kai eritrocitai tolygiai padengia visą mėgintuvėlio dugną. Esant neigiamai reakcijai, eritrocitai mažo disko arba „mygtuko“ pavidalu yra mėgintuvėlio dugno centre.

Hemagliutinacijos slopinimo reakcija- serologinė reakcija, pagrįsta antikūnų gebėjimu užkirsti kelią eritrocitų agliutinacijai dėl hemagliutinuojančių virusų tipų (adenovirusų, arbovirusų, kai kurių enterovirusų, gripo ir paragripo virusų, tymų, reovirusų).

Specifiniai antivirusiniai antikūnai sąveikauja su šių virusų virionų hemagliutininų paviršiaus molekulėmis ir blokuoja jų prisijungimą prie papildomų eritrocitų membranos molekulių.

Pastaruoju metu reakcija buvo plačiai naudojama klinikinės virusologijos laboratorijose, siekiant nustatyti specifinių antikūnų prieš tam tikrus virusus titrus, taip pat serologiniam virusų izoliatų identifikavimui ir tipavimui iš pacientų klinikinės medžiagos.

Naudojimas yra šiek tiek ribotas, nes žmonių kraujo serume yra nespecifinių virusų inhibitorių, taip pat natūralių antikūnų - agliutininų.

Neutralizacijos reakcija – hemagliutinacijos slopinimo reakcija (RTGA).

RTGA taikoma:
-virusų serotipams nustatyti;
- infekcijų serodiagnostikai.
Yra du nustatymo būdai:
- lašinimo ant stiklo metodas (apytikslė reakcija), naudojamas virusų seroskopijai;
- naudojami mėgintuvėliuose.

Mechanizmas.

Kai kurie virusai (pavyzdžiui, gripas) turi hemagliutinino, kuris, priklausomai nuo viruso tipo, sukelia įvairių gyvūnų eritrocitų agliutinaciją.

Serume esant antikūnams – antihemagliutininams, stebimas virusų aktyvumo slopinimas.
RTGA.
Tikslas: A gripo viruso serotipų nustatymas

Komponentai:
1. Tiriama medžiaga yra viščiuko embriono alantojo skystis,
2. Diagnostiniai antigripo tipo specifiniai serumai,
3. 5% vištienos eritrocitų suspensija.
4.

Druskos tirpalas.

Reakcija lašinama ant stiklo. Ant stiklinės užlašinamas 1 lašas diagnostinių serumų ir tiriamosios medžiagos, sumaišoma, po to įlašinamas 1 lašas eritrocitų suspensijos. Esant teigiamai reakcijai, pastebimas vienalytis paraudimas, o esant neigiamai - raudoni dribsniai (hemagliutinacija).

Ankstesnis31323334353637383940414243444546Kitas

gripo virusų ypatybės. Gripo epidemiologija ir diagnostika. RTGA naudojimas gripo viruso serotipams nustatyti. Preparatai specifinei profilaktikai ir gydymui.

Gripas arba gripas – ūmi infekcinė liga, kuriai būdingi viršutinių kvėpavimo takų gleivinės pažeidimai, karščiavimas, bendras apsinuodijimas, sutrikusi širdies ir kraujagyslių bei nervų sistemų veikla.

Gripui būdinga tendencija plisti epidemijai ir pandemijai dėl didelio patogeno užkrečiamumo ir kintamumo.

patogenų ypatybės. Ligos sukėlėjai – gripo virusai priklauso šeimai. Orthomyxoviridae, Influenzavirus A, B ir Influenzavirus C gentys. Gripo virusai yra RNR virusai. A tipo gripo virusą 1933 metais išskyrė W. Smith, K. Andrews, P. Laidlaw. 1940 metais T.

Hemagliutinacijos metodo taikymas virusologijoje.

Francis ir R. Medzhill išskyrė B tipo gripo virusus, 1949 metais R. Taylor - C tipą. Rusijoje pirmuosius gripo virusus 1936 metais išskyrė A. A. Smorodincevas ir priskyrė A tipui. Morfologija. Gripo virusai yra rutulio formos (rutulio formos) - 80 - 120 nm, rečiau jie yra siūlinės formos. Jie susideda iš: 1) šerdies - spiralinio tipo simetrijos nukleokapsidės (viengrandė linijinė "-" -RNR grandinė + baltymo kapsidė); 2) bazinė membrana – išorinė lipoproteininė membrana – superkapsidas.

Membranos paviršiuje yra 2 tipų glikoproteinai (spyglių ir gaurelių pavidalu): 1) hemagliutininas – skatina prisirišimą prie ląstelės receptorių; 2) neuraminidazė – skatina viruso išsiskyrimą iš ląstelės. Auginimas. Auginimui naudojami viščiukų embrionai, pirminės tripsinizuotos ląstelių kultūros ir kartais laboratoriniai gyvūnai.

Patogiausias modelis – 10-12 dienų amžiaus vištų embrionai. Tai leidžia gauti didelius kiekius viruso, kuris yra būtinas gaminant vakcinas ir bakterinius preparatus.

Infekcija atliekama alontoinėje ertmėje, ant choriono-allontoinės membranos, amniono ertmėje, amnione. Viruso buvimas vištienos embrione nustatomas atliekant hemagliutinacijos testą. Antigeninė struktūra. Virusai turi vidinį antigeną – S ir paviršinius antigenus: HA-hemagliutininą ir NA-neuraminidazę. S-antigenas – grupei būdingas, bendras visam tipui, pagal šį antigeną gripo virusai skirstomi į A, B ir C tipus. Tai komplementą fiksuojantis, stabilus (nekitantis) antigenas.

HA ir NA antigenai yra specifiniai antigenai. HA antigenas sukelia virusą neutralizuojančių antikūnų susidarymą ir eritrocitų agliutinaciją.

NA antigenas sukelia antikūnų, kurie iš dalies neutralizuoja virusus, susidarymą.

B tipo virusas yra mažiau kintantis, o C tipas yra labai stabilus.

toksiškos savybės. Toksinis viruso poveikis organizmui (galvos skausmas, raumenų skausmas, karščiavimas, katariniai reiškiniai) atsiranda dėl viruso baltymų (pačios viruso dalelės). Šis veiksmas yra griežtai specifinis ir jį neutralizuoja tik atitinkamo tipo ar potipio imuninis serumas arba sergančiųjų serumas. pasipriešinimas. Gripo virusai jautrūs UV spinduliams, dezinfekcinėms medžiagoms (formalinui, alkoholiui, fenoliui, chloraminui) ir riebalų tirpikliams.

Skystoje terpėje jie miršta 50–60 ° C temperatūroje keletą minučių. Kambario temperatūroje ore virusai išlieka užkrečiami kelias valandas. Jie ilgą laiką laikomi džiovinti, o užšaldyti (-70 ° C) jie ne tik ilgai išlieka, bet ir nepraranda savo virulentiškumo.

gyvūnų jautrumas. Natūraliomis sąlygomis A tipo virusai užkrečia žmones ir gyvūnus (serga arkliai ir kiaulės), o B ir C tipai – tik žmones. Tarp laboratorinių gyvūnų virusams jautrios baltosios pelės, afrikiniai šeškai, sirų žiurkėnai ir beždžionės.

Gyvūnų liga pasižymi plaučių pažeidimu, karščiavimu ir gali baigtis gyvūnų mirtimi. Ligos epidemiologija. Infekcijos šaltinis – sergantis žmogus, turintis kliniškai ryškią ar besimptomę formą. Sergantis žmogus virusą į aplinką išskiria kosėdamas, kalbėdamas, čiaudindamas seilių, gleivių, skreplių lašais jau inkubaciniu laikotarpiu.

Pacientas užsikrečia likus 24 valandoms iki pagrindinių simptomų atsiradimo ir kelia epidemijos pavojų per 48 valandas po jų išnykimo.

Transmisijos mechanizmas yra aerogeninis. Perdavimo kelias yra oru. Žmonių jautrumas gripui yra labai didelis. Serga visos amžiaus grupės, daugiausia žiemą. Vaikai ir pagyvenę žmonės yra labiausiai jautrūs. Ligos pavadinimas atspindi epidemiologijos ypatumus: gripas iš prancūzų kalbos. griebtuvas – grab, gripas – iš italų kalbos. Influenza di freddo – šalčio įtaka.

Iš visų ūminių kvėpavimo takų ligų gripas yra pati masiškiausia ir sunkiausia liga. Gripo pandemijos ir epidemijos apima iki 30–50% ir daugiau pasaulio gyventojų, darydamos didžiulę žalą šalių sveikatai ir ekonomikai. Pirmieji gripo epidemijų aprašymai datuojami XII-XIV a. Pandemijų ir didelių epidemijų atsiradimą sukelia A tipo gripo virusas, kuris atsiranda dėl didelio viruso kintamumo ir yra susijęs su naujo potipio atsiradimu dėl antigenų kaitos.

Tarp pandemijų epidemijos protrūkiai įvyksta kas 1,5–2 metus, o tai susiję su antigeniniu virusų dreifu. 1918 metais Ispanijos gripo pandemiją (susirgo 1,5 mlrd. žmonių, mirė 20 mln. žmonių) sukėlė A1 gripo virusas. Iš pradžių užregistruota Ispanijoje, ši pandemija apėmė beveik visus Žemės gyventojus; liga pasižymėjo išskirtinai sunkia hemoragine pneumonija, kurios mirtingumas buvo rekordinis (iki 1 proc. visų atvejų).

1957 metais „Azijos“ pandemiją (susirgo 2 mlrd. žmonių) sukėlė naujas potipis – A2 potipis. 1968 metais „Honkongo“ pandemiją (susirgo 1 mlrd. žmonių) sukėlė naujai atsiradęs potipis – A3 potipis. Paprastai naujas viruso variantas išstumia iš žmonių populiacijos anksčiau cirkuliavusią atmainą.

Tačiau 1977 m., po 20 metų pertraukos, A1 tipas netikėtai „grįžo“, o tai sukėlė didelę epidemiją. Vadinasi, represuoti gripo viruso variantai išlieka ir tam tikrais laiko tarpais vėl gali sukelti epidemiją. B tipo virusas sukelia vietines epidemijas, o C tipas nesukelia epidemijų. Ligos patogenezė ir klinika. Įėjimo vartai yra viršutiniai kvėpavimo takai. Virusas įsiskverbia į gleivinės epitelio ląsteles ir jose dauginasi.

Viruso poveikis epitelio ląstelėms sukelia jų nekrozę ir epitelio deskvamaciją (atmetimą), ko pasekoje gleivinė tampa pralaidi virusams ir bakterijoms. Jie prasiskverbia į kraują ir pasklinda po visą kūną.“ Viremiją lydi daugybiniai kapiliarų endotelio pažeidimai, padidėja jų pralaidumas.

Sunkiais atvejais yra dideli kraujavimai plaučiuose, miokarde, parenchiminiuose organuose. Pažeistų ląstelių irimo produktai bei virusiniai baltymai toksiškai veikia įvairius organus ir organų sistemas. Viruso toksinai stipriai slopina centrinę nervų sistemą, ir nors procesas netrunka ilgai (3-5 dienas), sergantis žmogus ilgai išlieka nusilpęs ir prie nusilpusio organizmo prisijungia bet kokia antrinė infekcija ir atsiranda komplikacijų: gripo pneumonija. , ūminė plaučių edema, inkstų, širdies, bronchų pažeidimas.

Dažna gripo komplikacija yra bakterinė pneumonija (B grupės streptokokai). Per Ispanijos gripo pandemiją žmonės mirė daugiausia nuo antrinės bakterinės pneumonijos.

Gripo patogenezėje svarbi ne tik intoksikacija, bet ir alergija, taip pat imunokompetentingų ląstelių funkcinių savybių pažeidimas, kai išsivysto imunodeficitas. Inkubacinis laikotarpis yra kelios valandos - 1-3 dienos. Būdinga ūminė pradžia, karščiavimas iki 37,5–38 ° C, bendra intoksikacija, pasireiškianti negalavimu, galvos skausmu, akių obuolių skausmu, įvairaus sunkumo kvėpavimo takų uždegiminiais procesais (rinitas, laringitas, tracheitas, faringitas).

Karščiuojanti būsena su gripu be komplikacijų trunka 5-6 dienas. Imunitetas. Susirgus susiformuoja tipui ir padermei būdingas imunitetas, kurį užtikrina specifiniai ir nespecifiniai ląsteliniai bei humoraliniai veiksniai. Didelę reikšmę turi Ig A antikūnai.Nesiformuoja kryžminis imunitetas, persirgus A1 tipo gripu galima susirgti A2 tipo gripu ir kt. Po imuniteto tipo viruso - 1-2 metai, po B tipo viruso - 3-5 metai.

Pasyvus natūralus imunitetas – vaikams iki 8 – 11 mėn. Dėl didelio viruso antigeninio kintamumo atsigavimas nesukelia nuolatinio imuniteto pakartotinei infekcijai.

Laboratorinė diagnostika. Tiriama medžiaga: tepinėliai-atspaudai iš nosies gleivinės, išskyros iš nosiaryklės, plaučių gabaliukai, smegenys mirtinų baigčių atveju.

Diagnostikos metodai: 1) citorinoskopijos metodas - virusui būdingų intraląstelinių intarpų nustatymas - mikroskopu nudažius pioktaninu, ciliarinio epitelio ląstelėse matomi ryškiai raudoni gripo viruso intarpai; 2) virusologinis metodas - gripo viruso išskyrimas iš žmogaus organizmo, užkrečiant viščiukų embrionus skalavimu iš paciento nosiaryklės; viruso indikacija (buvimas) atliekama naudojant RGA (gripo virusai agliutinuoja žmonių ir įvairių gyvūnų eritrocitus), viruso identifikavimas atliekamas etapais: tipas nustatomas RSC, nustatomas hemagliutinino potipis. RTGA, o neuraminidazės potipis nustatomas fermento aktyvumo slopinimo reakcijoje; 3) serologinis metodas - specifinių antikūnų titro padidėjimo (4 kartus) nustatymas paciento kraujo serume naudojant RSK, RTGA, PH ląstelių kultūroje, gelio nusodinimo reakcija, ELISA; 4) biologinis metodas – pelių intranazalinė infekcija – medžiagos įvedimas į plaučius taikant eterio anesteziją; pelės miršta po 2–3 dienų nuo plaučių uždegimo; 5) ekspresinė diagnostika – viruso antigeno nustatymas naudojant RIF.

Gydymas ir profilaktika.

Profilaktikai ir gydymui pirmosiomis ligos dienomis vartojamas žmogaus leukocitų interferonas (intranazaliai). Terapiniais tikslais naudojami antivirusiniai vaistai - rimantadinas (A tipo gripas), adaprominas, virazolas ir imunomoduliuojantys vaistai - dibazolas, prodigiosanas, levomizolis.

Sergant sunkiu gripu, ypač vaikams, naudojamas donorinis antigripinis imunoglobulinas, taip pat vaistai – ląstelių proteazių inhibitoriai (gordoksas, kontrikalas, aminokaprono rūgštis).

Speciali prevencija. Naudojami šie antivirusiniai vaistai ir imunomoduliatoriai, taip pat gyvos ir inaktyvuotos vakcinos: 1) gyvos monovakcinos, skirtos vartoti per burną - susilpnintos šiuo metu cirkuliuojančių virusų padermės (A1, A3 ir B); parodyti didžiausią imunogeniškumą; 2) viso viriono vakcinos iš virulentiškų padermių, inaktyvuotų formaldehidu arba UV spinduliais; 3) subvienetinės gripo vakcinos tik iš paviršinių antigenų – HA ir NA antigenų (turi minimalų reaktogeniškumą).

Norint gauti vakcinas, virusai auginami viščiukų embrionuose ir viščiukų embrionų ląstelių kultūroje.

Įvedus vakcinas, susidaro vietinis ir humoralinis imunitetas. Vakcinacija atliekama didžiausios epidemijos rizikos laikotarpiais. Jis labiau tinka jauniems ir seniems žmonėms. Naudojant nužudytas vakcinas reikia kasmet pakartotinai skiepytis; jų efektyvumas neviršija 60-70%.

Nes Kadangi dažnai pastebimi antigeniniai patogeno variantai, atitinkamo viruso antigenų rinkinį imunizuoti galima nustatyti tik prasidėjus protrūkiui.

Bilietas 15.

Hemagliutinacijos reakcija (RGA).

Laboratorijoje naudojamos dvi skirtingos hemagliutinacijos reakcijos.

Pirmasis RGA reiškia serologinį. Šios reakcijos metu eritrocitai agliutinuojasi sąveikaudami su atitinkamais antikūnais (hemagliutininais).

Reakcija plačiai naudojama kraujo grupėms nustatyti.

Antroji RHA nėra serologinė. Jame eritrocitų agliutinacija nesukeliama

antikūnų, bet specialių virusų suformuotų medžiagų. Pavyzdžiui, gripo virusas agliutinuoja vištų ir jūrų kiaulyčių eritrocitus, poliomielito virusas – avių eritrocitus. Ši reakcija leidžia spręsti apie konkretaus viruso buvimą tiriamojoje medžiagoje.

Reakcija atliekama mėgintuvėliuose arba specialiose plokštelėse su šuliniais.

Medžiaga, kuri turi būti tiriama dėl viruso, skiedžiama izotoniniu tirpalu nuo 1:10 iki 1:1280; 0,5 ml kiekvieno skiedimo sumaišoma su lygiu tūriu 1-2% eritrocitų suspensijos. Kontrolinėje 0,5 ml eritrocitų sumaišoma su 0,5 ml izotoninio tirpalo. Mėgintuvėliai 30 minučių įdedami į termostatą, o plokštelės paliekamos kambario temperatūroje 45 minutes.

Rezultatų apskaita. Esant teigiamam reakcijos rezultatui mėgintuvėlio ar šulinėlio dugne, iškrenta eritrocitų nuosėdos su šukuotais kraštais („skėtis“), dengiančios visą šulinio dugną.

Hemagliutinacijos slopinimo reakcija

Jei rezultatas yra neigiamas, eritrocitai sudaro tankias nuosėdas su lygiais kraštais ("mygtukas"). Tos pačios nuosėdos turėtų būti kontroliuojamos.

Reakcijos intensyvumas išreiškiamas „+“ ženklais. Viruso titras yra maksimalus medžiagos, kurioje vyksta agliutinacija, praskiedimas.

Hemagliutinacijos slopinimo reakcija

Tai serologinė reakcija, kurios metu specifiniai antivirusiniai antikūnai, sąveikaudami su virusu (antigenu), jį neutralizuoja ir atima galimybę agliutinuoti raudonuosius kraujo kūnelius, t.y.

e. slopina hemagliutinacijos reakciją. Ši reakcija leidžia nustatyti virusų tipą ir tipą.

Reakcijos nustatymas. 0,25 ml antivirusinio serumo sumaišoma su tokiu pat kiekiu medžiagos, kurioje yra viruso. Mišinys suplakamas ir dedamas į termostatą 30 minučių, po to įpilama 0,5 ml 1-2 % eritrocitų suspensijos.

Rezultatų apskaita. Teisingai nustačius serumo ir eritrocitų kontrolės eksperimentą, turėtų susidaryti „mygtukas“ – nėra eritrocitus agliutinuojančio faktoriaus; antigeno kontrolėje susidaro „skėtis“ – virusas sukėlė eritrocitų agliutinaciją.

Jei serumas yra homologiškas tiriamam virusui, susidaro „mygtukas“ – serumas virusą neutralizavo.

Netiesioginė hemagliutinacijos reakcija

Netiesioginės (pasyviosios) hemagliutinacijos (RIHA) reakcija pagrįsta tuo, kad eritrocitai, jei jų paviršiuje yra adsorbuojamas tirpus antigenas, sąveikaudami su antikūnais prieš adsorbuotą antigeną įgyja gebėjimą agliutinuotis.

Reakcijos nustatymas.

Serumas kaitinamas 30 minučių 56 °C temperatūroje, paeiliui skiedžiamas santykiu 1:10 - 1:1280 ir supilamas į mėgintuvėlius arba šulinėlius po 0,25 ml, kur po to įlašinami 2 lašai eritrocitų su ant jų adsorbuotais antigenais.

Valdikliai: eritrocitų suspensija su adsorbuotais antigenais su akivaizdžiai imuniniu serumu, eritrocitų suspensija su ant jų adsorbuotais antigenais su normaliu serumu; normalių eritrocitų suspensija su tiriamu serumu.

Pirmoje kontrolėje turėtų įvykti agliutinacija, antroje ir trečioje – ne.

Kontroliniai klausimai.

1. Ką rodo teigiamas RGA rezultatas tarp eritrocitų ir medžiagos, ištirtos dėl viruso buvimo?

2. Ar įvyks eritrocitų agliutinacijos reakcija, jei prie jų bus pridėtas virusas ir jį atitinkantis serumas?

Kaip vadinasi reakcija, atskleidžianti šį reiškinį?

PRAKTINIS DARBAS №12.

Komplemento surišimo reakcija.

Komplemento surišimo reakcija (RCT) pagrįsta tuo, kad specifinis antigeno-antikūno kompleksas visada adsorbuoja (suriša) komplementą ant savęs.

Ši reakcija plačiai naudojama identifikuojant antigenus ir infekcijų, ypač spirochetų (Wassermanno reakcija), riketsijų ir virusų sukeltų ligų, serodignozavimui.

PCS yra sudėtinga serologinė reakcija.

Tai apima komplementą ir dvi antigeno-antikūnų sistemas. Iš esmės tai yra dvi serologinės reakcijos.

Dešiniąją bazinę sistemą sudaro antigenas ir antikūnas (vienas žinomas, kitas ne). Prie jo pridedamas tam tikras papildo kiekis. Jei šios sistemos antigenas ir antikūnas sutampa, jie susijungs ir susies komplimentą. Gautas kompleksas yra smulkiai išsklaidytas ir nesimato.

Šio komplekso susidarymas yra žinomas antrosios hemolizinės arba indikatorinės sistemos pagalba.

Jai priklauso avių eritrocitai (antigenas) ir juos atitinkantis hemolizinis serumas (antikūnas), t.y. paruoštas imuninis kompleksas. Šioje sistemoje eritrocitų lizė gali vykti tik esant komplementui. Jei komplementas yra susietas su pirmąja sistema, tada antroje sistemoje hemolizės nebus;

nėra nemokamo papildymo. Hemolizės nebuvimas (vamzdelio turinys drumstas arba vamzdelio apačioje yra eritrocitų nuosėdų) registruojamas kaip teigiamas RSK rezultatas.

Jei pirmoje sistemoje antigenas neatitinka antikūno, tai imuninis kompleksas nesusidaro ir komplimentas liks laisvas. Likęs laisvas, komplimentas dalyvauja antroje sistemoje, sukelia hemolizę, RSK rezultatas neigiamas (vamzdelių turinys skaidrus – „lako kraujas“).

Komponentai, komplemento fiksavimo reakcijos:

Antigenas – dažniausiai lizatas, ekstraktas, haptenas,

rečiau mikroorganizmų suspensija.

2. Antikūnas – paciento serumas.

3. Komplementas – jūrų kiaulytės serumas.

Antigenas – avies eritrocitai.

5. Antikūnas – hemolizinas avies eritrocitams.

6. Izotoninis tirpalas.

Dėl to, kad RSC apima daug sudėtingų komponentų,

jie turi būti iš anksto titruojami ir paimami į reakciją tiksliais kiekiais ir vienodais tūriais: 0,5 arba 0,25 ml, rečiau 0,2, 1,25 arba 1,0 ml (didesnis tūris duoda tikslesnį rezultatą). Reakcijos komponentų titravimas atliekamas tokiu pat tūriu kaip ir eksperimentas, trūkstamas sudedamąsias dalis pakeičiant izotoniniu tirpalu.

Susijusi informacija:

Svetainės paieška:

Jis pagrįstas tuo, kad eritrocitai, ant kurių iš anksto adsorbuojami antigenai, įgyja galimybę agliutinuotis esant homologiniams serumams (antikūnams).

Šiuo atveju eritrocitai atlieka nešiotojų vaidmenį su specifiniais determinantais, kurių agliutinacija atsiranda dėl antigeno + antikūno reakcijos.

Eritrocitai, prie kurių paviršiaus tvirtai prisitvirtinę antigenai, vadinami eritrocitų antigeniniais diagnostikais arba antigenu įjautrintais eritrocitais.

Kitas RNHA tipas – antikūnai adsorbuojami eritrocitų paviršiuje ir vėliau vyksta jų agliutinacija, esant homologiniam antigenui.

Tokiu atveju tokie eritrocitai vadinami eritrocitų antikūnų diagnostiniais arba eritrocitais, įjautrintais antikūnais.

Remiantis šiais dviem pagrindiniais metodiniais metodais, buvo sukurta ir naudojama daug RNGA modifikacijų. Taigi mažos standartinės latekso dalelės naudojamos kaip nešikliai.

Hemagliutinacijos slopinimo reakcija (HITA)

Tokiu atveju reakcija vadinama latekso agliutinacijos reakcija (RLA) arba naudojamas Staphylococcus aureus - krešėjimo reakcija ir kt. Paprastai eritrocitų diagnostikos ruošiamos biologinės pramonės įmonėse, o pagrindinė RNGA patirtis jau nustatoma diagnostikos laboratorijose.

Eritrocitų diagnostikos paruošimas apima šiuos veiksmus:

• eritrocitų fiksavimas formaldehidu arba glutaro ar akrilo aldehidais.

  Tokie apdoroti eritrocitai saugomi ilgą laiką. Dažniau tam naudojami avių, žmonių, vištų eritrocitai ir kt.;

• fiksuotų eritrocitų gydymas tanino tirpalu. Dėl to eritrocitai įgyja savybę negrįžtamai adsorbuoti baltymus (virusus ir antikūnus) savo paviršiuje;
• Tanizuotų eritrocitų jautrinimas virusais arba antikūnais.

Pažymėtina, kad virusinių infekcijų eritrocitų diagnostikos ruošimo metodai yra skirtingi.

RNHA nustatymo būdas antikūnų titrui aptikti ir nustatyti yra toks:

• prie nuoseklaus 2 kartus didesnio serumo skiedimo pridedamos vienodos dozės antigenu įjautrintų eritrocitų;
• mišinys paliekamas 2-3 valandoms kambario temperatūroje arba 16-18 valandų 4 °C temperatūroje;
• atsižvelgti į rezultatus.

  Jei serume yra antikūnų prieš virusą, kuriuo buvo įjautrinti eritrocitai, stebima hemagliutinacija, kuri vertinama kryžminant.

Serumo antikūnų titras laikomas didžiausiu serumo praskiedimu, kuris vis dar užtikrina hemagliutinaciją bent dviem kryžminimo būdais.

RNGA yra kartu su visais susijusiais valdikliais. Paprastai jie reaguoja į mikrometodą.

RNHA leidžia išspręsti šias diagnostikos užduotis:

• aptikti antikūnus ir nustatyti jų titrą kraujo serume, naudojant žinomą eritrocitų antigeninę diagnostiką;
• aptikti ir identifikuoti nežinomą virusą naudojant žinomą eritrocitų antikūnų diagnostiką.

RNGA privalumai: didelis jautrumas, lengva nustatymo technika ir greita reakcija.

Tačiau svarbu pažymėti, kad ruošiant stabilias eritrocitų diagnostikos medžiagas kyla didelių sunkumų (didelė priklausomybė nuo naudojamų komponentų grynumo, poreikis pasirinkti kiekvieno viruso tipo eritrocitų fiksavimo, tanizacijos ir jautrinimo būdą). .

Jei radote klaidą, pasirinkite teksto dalį ir paspauskite Ctrl + Enter.

Susisiekus su

Klasės draugai

Tam naudojami eritrocitai arba neutralios sintetinės medžiagos (pavyzdžiui, latekso dalelės), kurių paviršiuje adsorbuojami antigenai (bakterijų, virusų, audinių) arba antikūnai.

Jų agliutinacija įvyksta, kai pridedami atitinkami serumai arba antigenai. Antigenais jautrinti eritrocitai vadinami antigeniniais eritrocitų diagnostikais ir naudojami antikūnams aptikti ir titruoti. Eritrocitai, įjautrinti antikūnais. yra vadinami imunoglobulino eritrocitų diagnostika ir naudojami antigenams nustatyti.

Pasyvioji hemagliutinacijos reakcija naudojama diagnozuojant ligas, kurias sukelia bakterijos (vidurių šiltinė ir paratifas, dizenterija, bruceliozė, maras, cholera ir kt.), pirmuonys (maliarija) ir virusai (gripas, adenovirusinės infekcijos, virusinis hepatitas B, tymai, erkių platinamos ligos). encefalitas, Krymo hemoraginė karštligė ir kt.), taip pat nustatyti tam tikrus hormonus, nustatyti paciento padidėjusį jautrumą vaistams ir hormonams, tokiems kaip penicilinas ir insulinas.

Pasyviosios hemagliutinacijos (RPHA) reakcija.

Pasyvus hemagliutinacijos testas yra jautrus serologinės diagnostikos metodas, naudojamas tiek ankstyvai, tiek retrospektyviai diagnostikai, taip pat skiepytų žmonių imunologinei būklei nustatyti. Pacientams, sergantiems tuliaremija, antikūnai dažniausiai aptinkami 1-osios ar 2-osios ligos savaitės pabaigoje, po 1-1,5 mėnesio TPHA titrai pasiekia maksimalias reikšmes (1:100 000-1:20 000, rečiau didesnis). po to jie sumažėja 1:100-1:200 lygiu išlieka ilgą laiką.

Paskiepytiems antikūnai taip pat nuolat aptinkami, tačiau žemesniais titrais, neviršijančiais 1:2000-1:5000, praėjus 1-1,5 mėnesio po vakcinacijos, jie keletą metų išlieka žemame 1:20-1:80 lygyje.

Eritrocitų diagnostinė tuliaremija (antigeninė) tarnauja kaip antigenas RPHA nustatymui.

Vaistas yra formalinizuoti avino eritrocitai, įjautrinti tuliaremijos antigenu, tiekiamas skystu ir sausu pavidalu. Skystas preparatas – 10 % eritrocitų suspensija 10 % koncentracijos formalino tirpale. Sausas liofilizuotas preparatas – džiovinama vakuume 10 % eritrocitų suspensija be konservantų. Prieš naudojimą jis praskiedžiamas pagal nurodymus etiketėje. Reakcijai nustatyti polistireno plokštelėse abu preparatai naudojami 2,5% koncentracijos, o nustatant reakciją mikrotūriais - 0,5% koncentracijos.

RPGA nustatymo technika.

Tiriamasis serumas praskiedžiamas fiziologiniu tirpalu santykiu 1:5 (1:10) ir 30 minučių kaitinamas 56 °C temperatūroje.

Hemagliutinacijos reakcija (RHA) ir

Po to, siekiant pašalinti heterogeninius antikūnus prieš avino eritrocitus, serumai apdorojami 50% formalizuotų avino eritrocitų suspensija. Norėdami tai padaryti, į 1 ml serumo įlašinami 2 lašai (0,05 ml) eritrocitų ir gerai sumaišomi purtant.

Serumas paliekamas iki visiško eritrocitų nusėdimo arba po valandos centrifuguojamas kambario temperatūroje, po to paruošiamas tyrimams.

Skiedimo skystis 0,5 ml tūrio pilamas į keletą polistireno plokštelės šulinėlių.

Preliminariai tiriant serumus, patartina juos išbandyti nustatant reakciją trumpoje plokštelės eilėje (6 skylės). Jei antikūnai aptinkami trumpoje serumo serijoje, serumai pakartotinai tiriami ilgoje praskiedimų serijoje (12 šulinėlių).

Išpylus skiedimo skystį, 0,5 ml tiriamojo serumo 1:5 praskiedimu įpilama į kiekvienos eilės (trumpojo arba ilgo) pirmąjį šulinėlį. Tada tokiais pat kiekiais serumas titruojamas du kartus praskiedus. Taigi serumo skiedimai gaunami trumpomis serijomis nuo 1:10 iki 1:320, o ilgoje serijoje – nuo ​​1:10 iki 1:20480. Po serumo titravimo į kiekvieną duobutę įlašinamas vienas lašas (0,05 ml) darbinės 2,5 % jautrintų eritrocitų suspensijos.

Lėkštelių turinys kruopščiai sukratomas, kol gaunama vienalytė suspensija. Lėkštės paliekamos kambario temperatūroje ant nejudančio stalo paviršiaus. Išankstinė reakcijos registracija atliekama po 2-3 valandų, galutinis titro nustatymas atliekamas po visiško eritrocitų nusėdimo šuliniuose. Reakcijai pateikiamos šios kontrolinės medžiagos: 1) tiriamasis serumas praskiedus 1:10 0,5 ml tūryje + 1 lašas 2,5 % nejautrintų eritrocitų suspensijos; 2) skiedimo skystis 0,5 ml tūrio + 1 lašas 2,5 % neįjautrintų eritrocitų suspensijos; 3) skiedimo skystis 0,5 ml tūrio + 1 lašas 2,5% įjautrintų eritrocitų suspensijos.

Visos kontrolės priemonės turi duoti aiškiai neigiamą reakciją.

RPGA apskaita ir vertinimas. Reakcija vertinama pagal šią schemą:

1) aštriai teigiama reakcija (++++) - eritrocitai nukrenta į šulinio dugną vienodu sluoksniu "skėčio" pavidalu, kurio krašteliai dažnai yra iškirpti;

2) teigiama reakcija (+++) – eritrocitai dengia ne mažiau kaip 2/3 skylės dugno;

3) silpnai teigiama reakcija (++) - agliutinatas yra mažas ir yra pačiame skylės centre;

4) abejotina reakcija (+) - aplink eritrocitų nuosėdas pačiame skylės centre yra atskiri agliutinato grūdeliai;

5) neigiamas (-) - skylės apačioje eritrocitai nusėda "mygtuko" arba mažo žiedo su lygiais, ryškiai apibrėžtais kraštais pavidalu.

Į serumo titrą atsižvelgiama pagal paskutinį serumo praskiedimą, kuris davė labai aiškią reakciją (bent trys pliusai).

Diagnostiniu titru laikomas skiedimas 1:100 ir didesnis, tačiau, kaip ir RA atveju, būtina stebėti jo padidėjimą.

TPHA sergant tuliaremija yra gana specifinė ir kai kurias kryžmines reakcijas nustato tik su bruceliozės serumais. Diferencinė diagnozė yra įmanoma pagal TPHA titrų aukštį, kuris yra daug didesnis su homologiniu antigenu.

RPHA nustatymo mikrotūriais technika.

RPHA galima atlikti mikrotūriais, naudojant Takachi tipo mikrotitrą (arba apvalias dugnas mikrotitravimo plokšteles su mikropipetėmis), kuri leidžia titruoti medžiagą 25 µl ir 50 µl tūriais. Reakcijų nustatymo technika, visų operacijų seka yra tokia pati, kaip ir tiriant polistireno plokšteles. Tačiau reikia turėti omenyje, kad mikrometodo jautrumas paprastai yra skiedimo (t.y.

2 kartus) mažesnis nei makrometodas.

Norint nustatyti reakciją mikrotiteryje, naudojant pipetę-lašintuvą, į kiekvieną šulinėlį įpilama 50 µl skiedimo skysčio. Tada, naudojant titratorius su 50 μl galvute, panardinant galvutę į jį paimamas tiriamasis serumas.

Įsitikinkite, kad skystis užpildė titratoriaus galvutę. Titratorius su serumu perkeliamas į pirmąjį šulinėlį ir, laikant jį vertikalioje padėtyje, atliekami keli sukimosi judesiai į abi puses. Tada titratorius perkeliamas į kitą šulinėlį ir manipuliavimas kartojamas. Titravimas gali būti atliekamas vienu metu keliomis eilėmis. Titravus visą eilę, titratorius sukamaisiais judesiais nuplaunamas distiliuotu vandeniu (pakeitus 2 porcijas), tamponu nuimamas vanduo nuo galvos ir sudeginamas ant degiklio liepsnos.

Po titravimo į duobutes įpilama 25 μl eritrocitų diagnostikos.

Diagnostinio RPHA koncentracija mikrotūriuose turi būti 0,5 % (t. y. 2,5 % eritrocitų suspensija papildomai skiedžiama 5 kartus). Pridėjus eritrocitų, plokšteles reikia švelniai sukratyti, kol susidarys vienalytė suspensija. Rezultatai gali būti registruojami jau po 1-1,5 valandos, o tai yra reikšmingas RPHA privalumas mikrotitre.

Be to, taikant šį metodą reikalingas nedidelis visų reakcijos ingredientų ir tiriamojo serumo kiekis.

Reakcija apskaičiuojama taip:

1) "+" - visiška hemagliutinacija, kai eritrocitai nukrenta į šulinio dugną vienodu sluoksniu "skėčio" pavidalu, užimančiu ne mažiau kaip 2/3 dugno;

2) "+ -" - dalinė hemagliutinacija, kai eritrocitai nukrenta į apačią mažo dydžio laisvo žiedo pavidalu;

3) "-" - hemagliutinacijos nebuvimas, kai eritrocitai nukrenta į apačią mažo mygtuko ar žiedo su lygiu kraštu pavidalu.

TPHA gauto teigiamo rezultato specifiškumą galima patikrinti naudojant trijų komponentų reakciją – pasyviosios hemagliutinacijos (RPHA) slopinimo reakciją.

RTPGA nustatymo technika.

Ši reakcija yra nustatyta siekiant patvirtinti teigiamo RPHA rezultato specifiškumą, kai kyla abejonių arba tai ypač svarbu epidemiologiškai. Reakcijos mechanizmas susideda iš specifinio hemagliutinacijos slopinimo, kai į tiriamąjį serumą pridedama nužudytų tularemijos bakterijų suspensija. Reakcijoje sąveikauja trys komponentai: tiriamasis serumas, specifinis tularemijos antigenas ir antigeninis eritrocitų diagnostinis RTPGA paprastai dedami į 7-8 šulinėlių eilę.

Patartina lygiagrečiai su RTPGA įdiegti antrą RPHA. Į dvi eiles šulinėlių pilama 0,25 ml skiedimo skysčio, po to į abiejų eilučių pirmąsias duobutes pilamas tiriamasis serumas po 0,25 ml ir titruojamas.Gaunamos dvi identiškos serumo skiedimų eilės. Į visus antros eilės šulinėlius įpilkite 0,25 ml skiedimo skysčio, o į pirmosios eilės šulinėlius – 0,25 ml tuliaremijos bakterijų suspensijos.

Naudojama Tularemia diagnosticum (kurios 1 ml yra 25 mlrd. tularemijos bakterijų), prieš tai praskiesta 50 kartų.

Tokioje suspensijoje yra 500 milijonų bakterijų 1 ml arba 125 milijonai 0,25 ml tūrio. Įdėjus antigeną, plokštelė paliekama 1 valandai kambario temperatūroje, po to į visus abiejų eilių šulinėlius įlašinama po vieną lašą (0,05 ml) eritrocitų diagnostikos, plokštelė sukratoma ir paliekama ant lygaus stalo paviršiaus.

Apskaita atliekama per 2-3 val.

RTPGA apskaita ir vertinimas. Jei tiriamajame serume yra specifinių tuliaremijos antikūnų, juos neutralizuoja pridėtas antigenas ir pirmoje šulinėlių eilėje neįvyks hemagliutinacija arba, esant aukštam serumo titrui, hemagliutinacija bus stebima mažiau (2–4) duobutėse nei eilutė su TPHA. Šiuo atveju patvirtinamas rezultatų specifiškumas.

Jei abiejose eilutėse pažymėta hemagliutinacija, t.y. RTHA ir RPHA rezultatai sutampa, tai rodo tularemijos antikūnų nebuvimą tiriamajame serume. Šiuo atveju pirminis RPHA rezultatas laikomas nespecifiniu.

RTPGA nustatymo mikrotūriais technika. RTHA, taip pat RPHA, gali būti atliekami mikrotūriais naudojant Takachi tipo mikrotitrą.

Tam į mikroplokštelių duobutes dviem eilėmis po 7-8 duobutes pilama 0,25 μl skiedimo skysčio. Tada titratoriaus pagalba įvertinama 0,25 μl tiriamojo serumo ir titruojama abiejose eilutėse. Po to į kiekvieną pirmos eilės šulinėlį įpilama po 25 μl tuliaremijos antigeno (kurio koncentracija 1 ml yra 500 mln. tuliaremijos bakterijų), o antroje eilėje – 25 μl skiedimo skysčio.

Lėkštelės paliekamos 1 valandai kambario temperatūroje, po to į visus abiejų eilučių šulinėlius įpilama 25 μl antigeninio eritrocitų diagnostikos (koncentracijos 0,5%).

Rezultatų apskaita ir vertinimas vykdomas panašiai kaip ir reakcija makrotūriais.

Paskelbimo data: 2015-02-03; Skaityta: 3176 | Puslapio autorių teisių pažeidimas

studopedia.org - Studopedia.Org - 2014-2018. (0,003 s) ...

Pasyvi hemagliutinacijos reakcija)

antigenų ar antikūnų aptikimo ir identifikavimo metodas, pagrįstas jiems esant įvykusiu eritrocitų agliutinacijos reiškiniu, ant kurių paviršiaus anksčiau buvo adsorbuotas atitinkamas specifinis arba antigenai.

1. Mažoji medicinos enciklopedija. - M.: Medicinos enciklopedija. 1991-96 2. Pirmoji pagalba. - M.: Didžioji rusų enciklopedija. 1994 3. Enciklopedinis medicinos terminų žodynas. - M.: Tarybinė enciklopedija. – 1982–1984 m.

Pažiūrėkite, kas yra „Netiesioginės hemagliutinacijos reakcija“ kituose žodynuose:

netiesioginė hemagliutinacijos reakcija- RNGA Laboratorinis tyrimas naudojant eritrocitų diagnostiką. [Anglų-rusų kalbų pagrindinių vakcinologijos ir imunizacijos terminų žodynėlis. Pasaulio sveikatos organizacija, 2009] Temos vakcinacija, imunizacija Sinonimai RNGA EN ... ... Techninis vertėjo vadovas

- (RNGA; pasyviosios hemagliutinacijos reakcijos sinonimas) antigenų ar antikūnų aptikimo ir identifikavimo metodas, pagrįstas eritrocitų agliutinacijos reiškiniu, atsirandančiu jiems dalyvaujant, ant kurio paviršiaus jie anksčiau buvo adsorbuoti ... Didysis medicinos žodynas

- (RPHA) žr. Netiesioginės hemagliutinacijos reakcija... Didysis medicinos žodynas

Šis puslapis yra žodynėlis. # A ... Vikipedija

Pagrindinės Veterinarijos enciklopediniame žodyne priimtos santrumpos- a., aa, artena, arteriae aa ana (lygiai) TSRS medicinos mokslų akademija TSRS medicinos mokslų akademija TSRS mokslų akademija TSRS mokslų akademija Bac. bacilų bakterijos. Bakterija BSSR Baltarusijos TSR c., c. amžius, amžiaus v., v. vena, venae VASKHNILO Visasąjunginis Lenino ordinas ir ... ...

Šis terminas turi kitas reikšmes, žr. Mėsėdžių maras (Kare liga) – ūmi arba poūmė užkrečiama virusinė liga, pasireiškianti karščiavimu, gleivinių kataru, odos pažeidimais, centrinės ... ... Vikipedija

- (renes) suporuotas šalinimo ir endokrininis organas, kuris per šlapinimosi funkciją reguliuoja cheminę organizmo homeostazę. ANATOMO FIZIOLOGINIS METODAS Inkstai yra retroperitoninėje erdvėje (retroperitoninėje erdvėje) ... ... Medicinos enciklopedija

I (trichineliozė; sinonimas: trichineliozė, „papūtimas“) – nematodozių grupės helmintozė, kuriai būdinga karščiavimas, mialgija, veido patinimas, odos bėrimai, kraujo eozinofilija, o sunkiais atvejais – vidaus ir centrinių organų pažeidimai. ... ... Medicinos enciklopedija

- (nematodozės) helmintozės, kurias sukelia Nematoda klasės nematodai. Tarp kitų helmintozių žmogaus patologijoje didžiausią reikšmę turi N., dauguma jų yra geohelmintozės (žr. Helmintozės); jų kiaušinėlių ar lervų vystymasis ...... Medicinos enciklopedija

infekcinis epididimitas- Ryžiai. 1. Kairiosios sėklidės padidėjimas avinui, sergančiam infekciniu epididimitu. Ryžiai. 1. Kairiosios sėklidės padidėjimas avinui, sergančiam infekciniu epididimitu. infekcinis avių epididimitas (Epididymitis infectiosa arietum), lėtinis infekcinis ... Veterinarijos enciklopedinis žodynas

Žr. Netiesioginė hemagliutinacijos reakcija... Didysis medicinos žodynas

Agliutinacijos reakcija- tai imuninė antigeno sąveikos su antikūnais reakcija esant elektrolitams, o antigenas yra korpuskulinės būsenos (eritrocitai, bakterijos, latekso dalelės su adsorbuotais antigenais). Agliutinacijos metu korpuskuliniai antigenai yra suklijuojami antikūnais, o tai pasireiškia flokuliuojančių nuosėdų susidarymu. Dribsnių susidarymas atsiranda dėl to, kad antikūnai turi du aktyvius centrus, o antigenai yra daugiavalenčiai, t.y. turi daug antigenų determinantų. RA naudojamas nustatyti patogeną, išskirtą iš paciento medžiagos, taip pat aptikti antikūnus prieš patogeną paciento kraujo serume (pavyzdžiui, Wright ir Huddleson reakcijas sergant brucelioze, Vidalio reakcija sergant vidurių šiltine ir paratifiu). ).

Lengviausias būdas nustatyti RA yra reakcija ant stiklo, tai yra apytikslis RA, kuris naudojamas nustatant iš paciento išskirtą patogeną. Nustatant reakciją ant stiklelio, užtepamas diagnostinis agliutinuojantis serumas (atskiedus 1:10 arba 1:20), tada įvedamas paciento kultūra. Reakcija teigiama, jei laše atsiranda flokuliuojančių nuosėdų. Šalia dedama kontrolė: vietoj serumo užlašinamas lašas natrio chlorido tirpalo. Jeigu diagnostinis agliutinuojantis serumas yra neadsorbuotas 1, tai jis skiedžiamas (iki titro – skiedimo iki kurio turėtų įvykti agliutinacija), t.y. išplėstą RA įdėkite į mėgintuvėlius su didėjančiais agliutinuojančio serumo praskiedimais, į kuriuos įlašinami 2-3 lašai iš paciento išskirto sukėlėjo suspensijos. Į agliutinaciją atsižvelgiama pagal nuosėdų kiekį ir skysčio skaidrumo laipsnį mėgintuvėliuose. Reakcija laikoma teigiama, jei agliutinacija pastebima praskiedimu, artimu diagnostinio serumo titrui. Reakciją lydi kontrolinės medžiagos: serumas, praskiestas izotoniniu natrio chlorido tirpalu, turi būti skaidrus, mikrobų suspensija tame pačiame tirpale turi būti tolygiai drumsta, be nuosėdų.

Norint nustatyti ligos sukėlėjo antikūnus paciento kraujo serume, naudojamas išplėstas RA. Įdėjus jį į mėgintuvėlius, paciento kraujo serumas atskiedžiamas ir į mėgintuvėlius įpilama tiek pat diagnostinės suspensijos (žuvusių mikrobų suspensijos). Po inkubacijos nustatomas didžiausias serumo praskiedimas, kuriam esant įvyko agliutinacija, t.y. susidarė nuosėdos (serumo titras). Šiuo atveju agliutinacijos reakcija su O-diagnosticum (bakterijos žūsta kaitinant, išlaiko termostabilų O-antigeną) vyksta smulkiagrūdės agliutinacijos forma. Agliutinacijos reakcija su H-diagnosticum (bakterijos, naikinamos formalinu, išlaikančios karščiui labilų žiuželinį H-antigeną) yra stambiagrūdė ir vyksta greičiau.

Netiesioginės (pasyviosios) hemagliutinacijos reakcija(RNGA arba RPGA) yra RA tipas. Šis metodas yra labai jautrus. RNGA pagalba galima išspręsti dvi užduotis: nustatyti antikūnus paciento kraujo serume, prie kurio pridedama antigeninė eritrocitų diagnostinė medžiaga, tai yra eritrocitai, ant kurių adsorbuojami žinomi antigenai; nustatyti antigenų buvimą tiriamojoje medžiagoje. Šiuo atveju reakcija kartais vadinama atvirkštine netiesiogine hemagliutinacijos reakcija (RONGA). Statuojant į tiriamąją medžiagą pridedama antikūnų eritrocitų diagnostinė medžiaga (eritrocitai, kurių paviršiuje adsorbuoti antikūnai). Eritrocitai šioje reakcijoje veikia kaip nešikliai ir pasyviai dalyvauja formuojant imuninius agregatus. Esant teigiamai reakcijai, pasyviai suklijuoti eritrocitai uždengia šulinio dugną lygiu sluoksniu nupjautais kraštais („skėtis“); nesant agliutinacijos, eritrocitai kaupiasi centrinėje skylės įduboje, sudarydami kompaktišką „mygtuką“ su aiškiai apibrėžtais kraštais.

Koagliutinacijos reakcija naudojamas patogeninėms ląstelėms (antigenams) aptikti naudojant adsorbuotus antikūnus Staphylococcus aureus, turintis baltymo A. Baltymas A turi afinitetą imunoglobulinų Fc fragmentui. Dėl šios priežasties antikūnai prie stafilokoko jungiasi netiesiogiai per Fc fragmentą, o Fab fragmentai yra orientuoti į išorę ir gali sąveikauti su atitinkamais iš pacientų išskirtais mikrobais. Tokiu atveju susidaro dribsniai.

Hemagliutinacijos slopinimo reakcija (HITA) naudojami diagnozuojant virusines infekcijas ir tik hemagliutinuojančių virusų sukeltas infekcijas. Šių virusų paviršiuje yra baltymo – hemagliutinino, kuris yra atsakingas už hemagliutinacijos reakciją (RHA), kai pridedama prie eritrocitų virusų. RTGA susideda iš virusų antigenų blokavimo antikūnais, dėl kurių virusai praranda gebėjimą agliutinuoti raudonuosius kraujo kūnelius.

Kumbso reakcija - RA, skirtas nepilniems antikūnams aptikti. Sergant kai kuriomis infekcinėmis ligomis, pavyzdžiui, brucelioze, paciento kraujo serume cirkuliuoja nepilni ligos sukėlėjo antikūnai. Neužbaigti antikūnai vadinami blokuojančiais, nes jie turi vieną antigeno surišimo vietą, o ne dvi, kaip pilni antikūnai. Todėl, pridėjus antigeninį diagnostiką, nepilni antikūnai jungiasi su antigenais, bet jų nesulipina. Reakcijai pasireikšti pridedamas antiglobulino serumas (antikūnai prieš žmogaus imunoglobulinus), kuris sukels pirmajame reakcijos etape susidariusių imuninių kompleksų (antigeninių diagnostinių + nepilnų antikūnų) agliutinaciją.

Netiesioginė Kumbso reakcija naudojama pacientams, kuriems yra intravaskulinė hemolizė. Kai kuriems iš šių pacientų randami nepilni monovalentiniai antireuso antikūnai. Jie konkrečiai sąveikauja su Rh teigiamais eritrocitais, bet nesukelia jų agliutinacijos. Todėl į anti-Rh antikūnų + Rh teigiamų eritrocitų sistemą pridedamas antiglobulino serumas, kuris sukelia eritrocitų agliutinaciją. Taikant Kumbso reakciją, diagnozuojamos patologinės būklės, susijusios su imuninės kilmės eritrocitų intravaskuline lize, pavyzdžiui, naujagimio hemolizinė liga dėl rezus konflikto.

RA kraujo grupėms nustatyti pagrįstas eritrocitų agliutinacija imuninio serumo antikūnais prieš A (II), B (III) kraujo grupių antigenus. Kontrolė – serumas, kuriame nėra antikūnų, t.y. serumo AB (IV) kraujo grupės ir A (P) ir B (III) grupių eritrocitų antigenai. 0 (I) grupės eritrocitai naudojami kaip neigiama kontrolė, nes jie neturi antigenų.

Rh faktoriui nustatyti naudojami anti-Rh serumai (bent dvi skirtingos serijos). Esant Rh antigenui ant tiriamų eritrocitų membranos, įvyksta šių ląstelių agliutinacija.

Hemadsorbcijos reakcija(RGAD). Hemadsorbcija – tai eritrocitų sujungimas su viruso paveiktų ląstelių paviršiumi, pagrįstas viruso receptorių, esančių paveiktos ląstelės paviršiuje, ryšiu su eritrocitų receptoriais, dėl kurio atsiranda jų tarpusavio sukibimas, panašus į hemagliutinacijos reakciją. Šios reakcijos pranašumas yra tas, kad ji tampa teigiama net prieš atsirandant ryškiems citopatiniams pokyčiams užkrėstose ląstelėse.

Skiriasi adsorbcijos tipas (difuzinis, židininis), sorbuotų eritrocitų tipas (žmogus, beždžionės, jūrų kiaulytės ir kt.), temperatūra, kurioje vyksta reakcija (37 °C, 0 °C), buvimas. eliuavimo (taip, ne) . G. galima sulėtinti iš anksto inkubuojant virusu užkrėstas to-ry ląsteles su virusui būdingu antiserumu. G. slopinimo reakcija naudojama virusams identifikuoti.