Če skupaj pri. Podrobnosti o encimskem imunskem testu, kaj je in njegova razlaga

Okužba z virusom humane imunske pomanjkljivosti je resna diagnoza. Napake pri diagnozi lahko povzročijo katastrofalne posledice. Analiza ELISA za HIV je najbolj dostopna raziskovalna metoda, vendar ni v vseh primerih informativna.

ELISA - encimski imunski test. Naloga metode ELISA je odkrivanje protiteles proti virusu imunske pomanjkljivosti v biološkem materialu. Z uporabo metode je mogoče slediti prisotnosti v tekočini ne samih virusov, temveč le protiteles, ki nastanejo kot odgovor na njihovo prisotnost. ELISA se pogosto uporablja pri diagnozi spolno prenosljivih bolezni. Pomaga pri prepoznavanju spolno prenosljivih bolezni.

Obstaja več vrst ELISA: direktna varianta, indirektna varianta, sendvič metoda. Vsekakor pa tehnika temelji na ugotavljanju prisotnosti protiteles, ki služijo kot pokazatelj prodora tujka. Za odkrivanje teh "oznak" se biološka komponenta obdela z encimi.

ELISA zazna protitelesa z natančnostjo 96 - 98%, napaka je zanemarljiva. Je 2-4%.

ELISA - metoda za diagnosticiranje HIV

Analiza ELISA za HIV je prva stopnja diagnoze. Antigeni virusa imunske pomanjkljivosti so proteini p24, p15, p17, p31 in glikoproteini gp 41, gp55, gp66, gp120, gp160.

Za odkrivanje virusnega proteina se vzame del krvi iz vene. Vzorec, poslan na testiranje krvi ELISA, se obdela z reagenti za encimski imunski test. Serum izoliramo iz krvi. Če jih med študijo najdemo, je virus že prisoten v krvi.

Kri se daje strogo na prazen želodec. 2 dni pred analizo ni priporočljivo jesti mastne hrane in piti alkohola. Protivirusna zdravila morate prenehati jemati v 14 dneh.

Prednosti metode:

• relativno nizki stroški;
• visoka stabilnost reagentov;
• visoka občutljivost;
• kratek dobavni rok;
• minimalen vpliv človeškega faktorja.

Sodobni testni sistemi za ELISA so izdelani po svetovnih standardih. To izboljša natančnost metode.

ELISA ne daje vedno zanesljivih rezultatov. Ko virus vstopi v kri, se začne latentna (skrita) stopnja razvoja. Obdobje, ko se virusi začnejo razmnoževati in se protitelesa še ne oblikujejo, se imenuje "seronegativno okno". Na tej stopnji je nesmiselno izvajati ELISA. Če je prišlo do okužbe, bo rezultat . Kako hitro se virus odkrije, je odvisno od tega, koliko nevarnih celic je vstopilo v telo. Pri nezaščitenem spolnem odnosu ali transfuziji okužene krvi bo to obdobje minimalno.

Za visoko zanesljivost ELISA za HIV se študija izvede trikrat. Roki za ELISA za virus humane imunske pomanjkljivosti:

• 6 tednov po verjetnem stiku,
• v 3 mesecih,
• šest mesecev kasneje.

ELISA 4. generacije za HIV je najbolj informativna metoda v zgodnjih fazah okužbe. Izvede se lahko že 1 mesec po domnevni okužbi. Test je drag v primerjavi s primerkom 3. generacije. Zato se v javnih zdravstvenih ustanovah uporablja kot dodatna diagnostična metoda. Brezplačno se izvaja test 3. Če na podlagi njegovih rezultatov ni mogoče dati nedvoumnega odgovora, se bolnik pošlje na test ELISA 4. generacije.

Pomembno! Takoj po okužbi postane oseba kužna. Nevaren je za druge, tudi ko še ne ve za svojo diagnozo!

Če se med ELISA odkrijejo protitelesa proti antigenom HIV, so potrebne dodatne študije. Spada med te. Zanesljivost te metode je 80%. S pomočjo PCR pregledamo kri, seme in izcedek iz nožnice. Biološka tekočina se razdeli v medicinskem reaktorju in nato obdela z encimi. Posledično se pridobijo podatki o koncentraciji celic HIV v tekočem mediju. Zaradi velike napake (20 %) se ob pozitivnem rezultatu dodatno izvede imunski bloting.

Naslednji diagnostični korak je Combo test (ali imunski bloting). To je zelo občutljiva študija (98-odstotno zaupanje) in jo je treba izvesti, če rezultati ELISA po 6 mesecih niso dokončni.

Interpretacija rezultatov ELISA

Čas dešifriranja je od 24 do 48 ur. Če je potrebno nujno pridobiti podatke (potreben je kirurški poseg), se dekodiranje izvede v 2 urah. Pokrajinske zdravstvene postaje nimajo vedno potrebnih reagentov. Vzorec se odvzame na mestu obtoka, nato se prenese v regionalni center. V takih okoliščinah je rezultat viden v 1-2 tednih.

Rezultat encimskega imunskega testa je lahko pozitiven ali negativen; drugih možnosti ni.

Tudi če je bil rezultat med primarnim in ponovnim testom ELISA pozitiven, bolnika ni mogoče prepoznati kot okuženega s HIV. Možna napaka. Vzroki za lažno pozitiven rezultat:

• kronične bolezni;
• dolgotrajne nalezljive bolezni;
• nosečnost.

Zato je treba rezultat analize pojasniti z dodatnimi študijami.

Če se med imunoblotingom za HIV (reaktivno) oseba šteje za okuženo s HIV, kar pomeni, da je zdrava.

Celice virusa se sčasoma prilagodijo predpisanim zdravilom. Za nadzor se test ELISA občasno ponavlja.

Včasih imunobloting pokaže lažno negativen rezultat. Izjemno redek virus imunske pomanjkljivosti 6 mesecev (ali več). To je mogoče, če je majhna količina virusnih celic vstopila v krvni obtok. V 0,5% vseh primerov lahko okužbo diagnosticiramo šele po enem letu. V 99,5 % šestih mesecih po okužbi bo test ELISA dal zanesljiv rezultat.

Tudi pri visoko natančnih študijah še vedno obstaja 2-odstotna stopnja napake. Ne smemo pozabiti na človeški faktor. Da bi odpravili možnost napake, se lahko test izvaja v 2 različnih ustanovah.

Kako poteka študija ELISA

reakcijski mehanizem

Encimski imunski test temelji na imunski reakciji antigena s protitelesom, pritrditev encimske oznake na protitelesa pa omogoča upoštevanje rezultata reakcije antigen-protitelo s pojavom encimske aktivnosti ali s spremembo V poenostavljeni obliki lahko reakcijski mehanizem predstavimo na naslednji način:

Točkovanje

Izvajanje encimskega imunskega testa

Za serodiagnozo se uporabljajo polistirenske plošče s 96 jamicami, na katerih celičnih stenah je antigen vnaprej adsorbiran. Testni serum se doda celici tablete. V tem primeru so nanj pritrjena protitelesa, homologna antigenu. Nepritrjena protitelesa odstranimo s spiranjem. Nato se v celice vnesejo z encimi označena protitelesa proti človeškim imunoglobulinom (protitelesa). Če so bila v testnem serumu prisotna zaznavna protitelesa, bodo na tej stopnji delovala kot antigeni, s katerimi bodo reagirala označena protitelesa. Dodatek kromogene snovi (barvila) po pranju bo omogočil upoštevanje reakcije z razvojem obarvanja v celicah. V tem primeru je intenzivnost barve sorazmerna s količino encima in s tem količino protiteles.Pri merjenju optične gostote (OD) tekočine v celici in primerjavi s kontrolnim vzorcem izračunamo koncentracijo protiteles. v prostorninskih enotah.Najpogosteje uporabljeni rezultati so izračunani v enotah optične gostote.Vsak testni sistem ima svoje kazalnike za obračunavanje rezultatov in kazalce norme in patologije, ki jih je treba upoštevati pri interpretaciji rezultatov.

Katere okužbe lahko odkrije ELISA

V sodobni venerologiji se uporablja predvsem za diagnozo sifilisa (v kombinaciji z drugimi reakcijami), okužbe s HIV, virusnega hepatitisa.Omejen pomen ima za diagnozo klamidijske okužbe, okužbe s citomegalovirusom in drugih herpetičnih okužb.Metoda ELISA je tudi uporablja se za določanje protiteles pri različnih nalezljivih boleznih, ravni hormonov, avtoprotiteles in raznih markerjev raka.

Kako razlagati rezultate ELISA

Študija prisotnosti in ravni protiteles različnih razredov v nekaterih primerih pomaga določiti stopnje nalezljivega procesa.

Na žalost tako pomembna prednost ELISA, kot je kvantitativno določanje protiteles, v praktičnem delu ni velikega pomena - tj. ne omogoča natančne diagnoze in ne vpliva na odmerjanje in čas predpisovanja zdravil.

Kakšna je vloga metode ELISA pri diagnostiki sifilisa

Metoda ELISA pri diagnozi sifilisa je bila prvič uporabljena leta 1975. Trenutno se v Rusiji pogosto uporablja za serološko diagnozo sifilisa in se uporablja kot potrditveni test za sifilis. Običajno se izvede študija, ki odkrije tako- imenujemo skupna protitelesa proti antigenom treponema pallidum (IgM in IgG), čeprav je v nekaterih primerih mogoče določiti le "zgodnja" protitelesa razreda M. ELISA za sifilis postane pozitiven po 3 tednih od trenutka okužbe in ostane pozitiven precej dolgo časa tudi po zdravljenju (včasih celo življenje).Zato se kot test, ki potrjuje ozdravitev sifilisa, ELISA ne uporablja.V večini primerov se izvaja le kvalitativna določitev ELISA - t.j. samo pozitiven ali negativen rezultat, čeprav je možna tudi kvantifikacija.

ELISA (enzimsko-imunski test, ELISA - angl.) je v praktično medicino vstopil nekje drugje v 60. letih prejšnjega stoletja. Njegova prvotna naloga je bila histološka raziskava v znanstvene namene, ki je bila omejena na iskanje in identifikacijo antigenske strukture celic živega organizma.

Metoda ELISA temelji na interakciji specifičnih (AT) in sorodnih antigenov (AG) s tvorbo kompleksa antigen-protitelo, ki se odkrije z encimom. To dejstvo je znanstvenike privedlo do ideje, da se metoda lahko uporablja v diagnostične namene za identifikacijo specifičnih imunoglobulinov različnih razredov, ki sodelujejo pri imunskem odzivu na določeno okužbo. In to je bil preboj v klinični laboratorijski diagnostiki!

Metoda se je začela aktivno uporabljati šele v zgodnjih 80. letih, in to predvsem v specializiranih ustanovah. Prvi analizatorji ELISA so bili dobavljeni v centre in postaje za transfuzijo krvi, infekcijske in venerične bolnišnice, saj se je grozoviti aids, rojen na afriški celini, pojavil na obzorju pri nas in se takoj pridružil "starim" okužbam, zahteval takojšnje ukrepe za diagnosticiranje in iskanje terapevtskih zdravil, ki vplivajo nanj.

Področje uporabe metode ELISA

Možnosti encimskega imunskega testa so resnično široke. Zdaj si je težko predstavljati, kako bi lahko brez takšnih študij, ki se uporabljajo dobesedno v vseh vejah medicine. Zdi se, da lahko ELISA naredi v onkologiji? Izkazalo se je, da lahko. In veliko. Sposobnost analize, da najde označevalce, značilne za določene vrste malignih novotvorb, je osnova za zgodnje odkrivanje tumorja, ko ga zaradi majhnosti še ne odkrijejo na drug način.

Sodobna klinično laboratorijska diagnostika (CDL) ima poleg tumorskih označevalcev precejšen arzenal panelov za ELISA in jih uporablja za diagnosticiranje različnih patoloških stanj (infekcijskih procesov, hormonskih motenj) in spremljanje farmacevtskih zdravil z namenom ugotavljanja njihovega učinka na bolnikovo stanje. telo in, mimogrede, ne samo človek. Trenutno se encimski imunski test pogosto uporablja v veterinarski službi, saj so tudi "naši manjši bratje" dovzetni za številne bolezni, zaradi katerih včasih zelo trpijo.

V to smer, ELISA lahko zaradi svoje občutljivosti in specifičnosti iz vzorca krvi iz vene določi:

• Hormonsko stanje (ščitnični in nadledvični hormoni, spolni hormoni);
• Prisotnost virusne in bakterijske okužbe (HIV, B in C, klamidija, sifilis in, ter številne druge bolezni, ki jih povzročajo patogeni mikroorganizmi);
• Sledi vitalne aktivnosti mikroorganizmov, ki so sprožili infekcijski proces, ki se je uspešno končal in prešel v fazo oblikovanja imunskega odziva na tega patogena. Takšne sledi, torej protitelesa, v mnogih primerih ostanejo v krvi krožiti vse življenje, kar človeka varuje pred ponovno okužbo.

Kaj je bistvo IF?

Metoda encimskega imunskega testa omogoča ugotavljanje ne le prisotnosti samega patogena (kvalitativna analiza), temveč tudi njegovo kvantitativno vsebnost v krvnem serumu pacienta.

Virusna ali bakterijska doza pomembno vpliva na potek infekcijskega procesa in njegov izid, zato ima kvantitativna analiza pomembno vlogo pri diagnostiki in zdravljenju bolezni v različnih oblikah in fazah.

Vendar pa ob poznavanju encimskih imunskih testov kot metode ELISA sploh ne pomislimo, kako uspe z njo zajeti tako širok spekter mikroorganizmov, ki živijo na našem planetu, od katerih mnogi neposredno ogrožajo zdravje in življenje ljudi in živali. Dejstvo je, da ima ELISA veliko možnosti (nekonkurenčne in konkurenčne – neposredne in posredne), od katerih vsaka rešuje svoj problem in tako omogoča ciljno iskanje.

Za odkrivanje imunoglobulinov enega ali drugega razreda se uporablja tradicionalna polistirenska plošča (tableta) s 96 jamicami, v vdolbinicah katere so koncentrirani adsorbirani rekombinantni proteini v trdni fazi. Protitelesa ali antigeni, ki so prišli v jamico s krvnim serumom, najdejo "znan" predmet in z njim tvorijo kompleks (AG - AT), ki se bo, fiksiran z encimskim konjugatom, pokazal kot sprememba barve jamice. pri branju rezultatov.

Encimski imunski test se izvaja na testnih sistemih določene specifičnosti, izdelanih v posebnih laboratorijih in opremljenih z vsemi potrebnimi reakcijskimi komponentami. Študije se lahko izvajajo z uporabo podložk ("podložk") in bralnih spektrofotometrov, kjer je vključenih največ ročnega dela. Na popolnoma avtomatskih strojih, ki laboratorijskega pomočnika osvobodijo monotonega vkapanja, pranja in drugih rutinskih opravil, je seveda hitreje in bolj priročno delati, vendar si vsi laboratoriji ne morejo privoščiti takšnega razkošja in še naprej delati na staromoden način - na polavtomatskih napravah.

Interpretacija rezultatov ELISA je v pristojnosti zdravnika laboratorijske diagnostike, pri čemer je nujno treba upoštevati lastnost skoraj vseh imunokemijskih reakcij, da dajejo lažno pozitivne ali lažno negativne odgovore.

Video: sodobni encimski imunski test

Rezultati ELISA na primeru sifilisa

ELISA je primeren za odkrivanje vseh oblik, poleg tega pa se uporablja v presejalnih študijah. Za analizo se uporabi venska kri bolnika, odvzeta na prazen želodec. Pri delu se uporabljajo plošče z določeno specifičnostjo (AT razredi A, M, G) ali totalna protitelesa.

Glede na to, da se protitelesa pri sifilisu proizvajajo v določenem zaporedju, lahko ELISA zlahka odgovori na vprašanje, kdaj je prišlo do okužbe in na kateri stopnji je proces, dekodiranje dobljenih rezultatov pa je mogoče predstaviti v naslednji obliki:

• IgM kažejo na trajanje infekcijskega procesa (lahko se pojavijo med poslabšanjem kroničnih vnetnih bolezni);
• IgA navajajo, da se je okužba zgodila pred več kot mesecem dni;
• IgG kažejo, da je okužba v polnem razmahu ali pred kratkim zdravljena, kar zlahka ugotovimo pri zbiranju anamneze.

Pri testiranju na sifilis ostanejo negativne vdolbinice (in negativna kontrola) brezbarvne, medtem ko bodo pozitivne (kot pozitivna kontrola) svetlo rumene barve zaradi spremembe barve kromogena, dodanega med testom. Intenzivnost barve pa se ne ujema vedno s kontrolo, se pravi, da je lahko nekoliko bolj bleda ali rahlo rumenkasta. To so dvomljivi rezultati, ki jih je praviloma treba ponovno pregledati z obveznim upoštevanjem kvantitativnih kazalcev, pridobljenih na spektrofotometru, vendar je na splošno barva neposredno sorazmerna s številom imunskih kompleksov (antigenov in protiteles, povezanih drug drugemu).

Najbolj vznemirljiv encimski imunski test - ELISA za HIV

Analiza je morda bolj kot druge zanimiva za širok krog prebivalstva, saj še ni mogoče z gotovostjo trditi, da so številni družbeni problemi (prostitucija, odvisnost od drog itd.) izginili. Na žalost HIV ne prizadene le teh delov človeške družbe, okužite se lahko v različnih okoliščinah, ki niso povezane s spolno promiskuiteto ali uporabo drog. Če pa obstaja potreba po testu na HIV, se ne smete bati, da bodo vsi okoli izvedeli za obisk takega laboratorija. Zdaj so okuženi z virusom HIV zaščiteni z zakonom in tisti, ki dvomijo, se lahko obrnejo na anonimne pisarne, kjer lahko rešijo težavo brez strahu pred javnostjo in obsojanjem.

Encimski imunski test za diagnosticiranje okužbe s HIV je ena izmed primarnih standardnih študij, ki pa zahteva posebne pogoje, saj je tema zelo občutljiva.

ELISA za HIV je smiselno opraviti po spolnem stiku, transfuziji krvi, drugih medicinskih posegih, ki vključujejo okužbo, in ob koncu inkubacijske dobe (»seronegativno okno«), vendar je treba upoštevati, da je to časovno obdobje ni konstanten. Lahko se konča v 14-30 dneh ali pa traja do šest mesecev, zato se za povprečno vrednost šteje interval od 45 do 90 dni. Krv za HIV se daruje na enak način kot za druge okužbe - iz vene na prazen želodec. Rezultati bodo pripravljeni glede na kopičenje materiala v laboratoriju in njegovo obremenjenost (od 2 do 10 dni), čeprav večina laboratorijev poda odgovor še isti ali naslednji dan.

Kaj lahko pričakujemo od rezultatov HIV?

ELISA za okužbo s HIV zazna protitelesa proti dvema vrstama virusa: HIV-1 (pogostejši v Rusiji ter drugih evropskih in azijskih državah) in HIV-2 (pogostejši v zahodni Afriki).

Naloga testa HIV ELISA je iskanje protiteles razreda G, ki se odkrijejo na vseh testnih sistemih, vendar v poznejšem obdobju, ter protiteles razreda A in M, odkritih na rekombinantnih testnih kompletih nove generacije, ki omogočajo najzgodnejše odkrivanje protiteles. faze (inkubacijska doba je seronegativno okno). Od testa ELISA lahko pričakujemo naslednje odgovore:

1. Primarni pozitiven rezultat: kri se ponovno preveri na testnem sistemu iste vrste, vendar, če je mogoče, druge serije in s strani druge osebe (laboratorija);
2. Ponavljajoče (+) vključuje nov odvzem krvi pacientu s študijo, ki je podobna primarni analizi;
3. Naslednji pozitivni rezultat je predmet referenčne analize, ki uporablja visoko specifične testne komplete (2-3 kosi);
4. Pozitiven rezultat v obeh (ali treh) sistemih se pošlje na imunobloting (isti ELISA, vendar izveden individualno na testnih kompletih s posebno visoko specifičnostjo).

Zaključek o okužbi z virusom HIV se naredi le na podlagi imunoblotinga. Pogovor z okuženo osebo poteka v popolni zaupnosti. Razkritje zdravniške skrivnosti v Rusiji, pa tudi v drugih državah, je kazensko kaznovano.

Analize za klamidijo in citomegalovirus z encimskim imunskim testom so prav tako pridobile posebno priljubljenost, saj vam omogočajo, da določite čas okužbe, stopnjo bolezni in učinkovitost terapevtskih ukrepov.

Med uvajanjem je možno opazovati tudi pojav protiteles različnih razredov. v različnih fazah patološkega stanja, ki ga povzroča povzročitelj okužbe:

• IgM lahko odkrijemo že sedem dni po okužbi;
• IgA kažejo, da okužba živi v telesu več kot mesec dni;
• IgG potrdi diagnozo klamidije, pomaga spremljati zdravljenje in ugotavljati njegovo učinkovitost. Treba je opozoriti, da protitelesa razreda G ostanejo in krožijo v telesu ne glede na trajanje bolezni, zato je za pravilno razlago analize treba upoštevati referenčne vrednosti ​​(norme), ki jih način, so za vsak CDL različni: ob upoštevanju znamke testnega sistema in specifičnosti reagentov, vključenih v komplet. Vrednosti norme se vnesejo v obrazec poleg rezultata ELISA.

Kar se tiče, tukaj je malo drugače: protitelesa razreda M se pojavijo v približno mesecu in pol, to pomeni, da pozitiven rezultat (IgM +) postane v fazi primarne okužbe ali med reaktivacijo latentne okužbe in ostane tako od 4 mesecev do šest mesecev.

Prisotnost protiteles razreda G je značilna za nastanek primarne akutne okužbe ali ponovne okužbe. Analiza navaja, da je virus prisoten, vendar ne daje podatkov o stopnji infekcijskega procesa. Medtem pa določanje norme titra IgG povzroča tudi težave, saj je v celoti odvisno od imunskega statusa določene osebe, ki pa se ugotavlja z odkrivanjem imunoglobulinov razreda G. Glede na to obnašanje protiteles pri diagnozi CMVI potrebno je oceniti sposobnost protiteles razreda G za interakcijo s CMV, da bi ga kasneje "nevtralizirali" (avidnost AT). V začetni fazi bolezni se IgG zelo slabo veže na antigene virusa (nizka avidnost) in šele nato začnejo kazati aktivnost, zato lahko govorimo o povečanju avidnosti protiteles.

O prednostih encimskega imunskega testa lahko govorimo dolgo časa, saj je ta metoda uspela rešiti številne diagnostične težave samo z uporabo venske krvi. Ni potrebe po dolgem čakanju, skrbeh in težavah z odvzemom materiala za raziskavo. Poleg tega se testni sistemi za ELISA še naprej izboljšujejo in dan, ko bo test dal 100-odstotno zanesljivost rezultata, ni daleč.

Video: izobraževalni film Moskovske državne medicinske univerze. Sechenov o osnovah ELISA

Metoda encimskega imunskega testa je sodobna metoda laboratorijskega testiranja krvi za prisotnost protiteles proti virusom in antigenov proti patogenom v njej. Ta metoda je sposobna ne le ugotoviti etiologijo, ampak tudi določiti stopnjo bolezni. Rezultati analize imajo kvalitativni in kvantitativni indikator.

Zakaj se izvaja encimski imunski test?

• krvne preiskave () za prisotnost avtoimunskih bolezni v njem;
• pregled bolnika za tumorske markerje;
• sposobnost preučevanja hormonske sestave krvi;
• iskanje antigenov za nalezljive in spolno prenosljive bolezni;
• iskanje protiteles proti virusnim okužbam.

Prednosti encimskega imunskega testa so, da zagotavlja visoko stopnjo specifičnosti rezultatov in ima visoko občutljivost (več kot 90%) na povzročitelje okužb. ELISA je cenovno dostopna diagnostična metoda, ki se izvaja v vsakem zdravstvenem centru. Tudi s to metodo lahko določite ne le bolezen, temveč tudi spremljate proces njenega razvoja s primerjavo količine beljakovin, proizvedenih v krvi v različnih intervalih.

Edina pomanjkljivost ELISA je morda ta, da ga ni mogoče uporabiti za določitev povzročitelja okužbe, temveč le za identifikacijo imunskega odziva na tega patogena.

Osnovni pojmi encimskega imunskega testa (ELISA)

Najprej se lotimo nekaj konceptov, da bi razumeli načelo izvajanja laboratorijske študije.

Imunski kompleks je kompleks protiteles in antigenov, ki so prisotni v krvi in ​​so vključeni v imunski proces.

Antigeni so snovi, ki so organskega izvora in nastanejo kot posledica določene bolezni v celicah telesa. Razlog za to je lahko avtoimunska ali onkološka bolezen. Tudi antigeni so lahko snovi različnih povzročiteljev nalezljivih bolezni.

Avidnost protiteles je merilo moči vezi med antigenom in protitelesom ter količine antigena, ki je prišla v stik s protitelesi (imunoglobulini).
To je zelo pomemben indikator, saj je z njim mogoče določiti datum okužbe osebe, kar je zelo pomembno za okužbo med gestacijsko starostjo.
Test avidnosti opravimo v laboratoriju tako, da kompleks protitelo-antigen obdelamo s sečnino, ki uniči beljakovino. V tem primeru se spojine z nizko avidnostjo uničijo, spojine z visoko avidnostjo pa ostanejo nedotaknjene. Rezultati testa avidnosti so izraženi v odstotkih.

Protitelesa (imunoglobulini) so posebne beljakovine, ki jih proizvajajo limfociti, to je imunske celice, ko bakterije, virusi ali glive (kužni povzročitelj) vstopijo v človeško telo.
Poznamo pet vrst imunoglobulinov: A, E, M, G, D. Med seboj se razlikujejo po masi, obliki, sodelovanju v infekcijskem procesu, razpolovni dobi in času nastanka od trenutka okužbe.
Največjo molekulsko maso ima IgM imunoglobulin (pentamer), ki tehta 950.000 daltonov, ostali pa imajo maso v območju od 150 - 200.000 daltonov. IgM zaradi svoje velikosti ne prehajajo skozi placentno pregrado. Imunoglobulini IgG zavzemajo večino krvnega seruma, njihov odstotek je približno 80%. In najmanjši del v serumu zasedajo protitelesa IgE - 0,003%. Imunoglobulini IgG, IgM, IgA so vključeni v infekcijski proces. Medtem ko so IgE posledica alergijskih reakcij. Proteini, kot je IgD, so vključeni v nastanek lokalne imunosti in nastajajo v bezgavkah in tonzilah.

Obstaja več vrst ELISA, med njimi direktna, indirektna, kompetitivna in blokirna metoda. Čeprav v praksi laboratorijski tehniki najpogosteje uporabljajo trdnofazni heterogeni imunski test, imenovan ELISA (encimski imunosorbentni test).

Načelo encimskega imunskega testa se kaže v reakciji protitelesa in antigena, pri kateri nastane imunski kompleks - antigen-protitelo. Takšna reakcija vodi do spremembe encimske aktivnosti oznak na površini protiteles.

Da bi to razumeli, bomo ta proces obravnavali po stopnjah.

Prva stopnja. Na tej stopnji laboratorijski pomočnik, ki izvaja študijo, položi očiščen antigen povzročitelja okužbe na površino vdolbinic tablete. Nato se povzročitelju doda pacientov krvni serum, kar izzove specifično reakcijo med protitelesom v krvi in ​​antigenom. Ta spojina je pridobljena in sodeluje v naslednji fazi poskusa.

Druga faza. Na drugi stopnji študije pride do tvorbe imunskih kompleksov, ki so reakcija med antigenom, pridobljenim na prvi stopnji, in konjugatom, to je imunoglobulinom, označenim z encimom peroksidazo. V tem primeru se doda določen kromogen. Pri reakciji v vdolbinici nastane obarvana spojina. Intenzivnost barve je v tem primeru odvisna od količine imunoglobulinov v bolnikovi krvi.

Tretja stopnja. Na tretji stopnji laboratorijski pomočniki običajno ocenijo rezultate študije. Za to se izvede fotometrija s spektrofotometrom, primerjava gostote biološkega materiala z gostoto vzorcev in matematični izračun rezultatov. Raven imunoglobulinov v krvi je odvisna od gostote jamice tablete.
V praksi se največkrat uporabljajo plošče s 96 jamicami.

Ko se meri optična gostota (skrajšano IP) krvi, se protitelesa štejejo v eno prostorninsko enoto. Rezultat se nato primerja s kontrolnim materialom.
Pomembno je vedeti, da ima vsaka raziskovalna metoda svoje kazalnike, ki upoštevajo referenčne vrednosti testa. To so kazalniki patologij in norm. Zato se morate tega spomniti v vsakem primeru. Nemogoče je interpretirati rezultate ene študije v drugi. Prav tako je nemogoče primerjati rezultate posameznih laboratorijev.

Bolezni, odkrite z ELISA diagnostiko

S pomočjo encimskega imunskega testa je mogoče zaznati prisotnost takšnih bolezni v telesu:

1) Nalezljive bolezni

2) Indikatorji stanja človeške imunosti in označevalci avtoimunskih bolezni.
3) Onkološke bolezni (kronični gonadotropin, prostata-specifični antigen, alveomucin, faktor tumorske nekroze, rako-embrionalni antigen in drugi).
4) Endokrine bolezni.
5) Kršitve reproduktivnega sistema.

Seznam ne vključuje vseh bolezni, ki jih je mogoče diagnosticirati z ELISA, ta seznam se lahko nadaljuje.

Raziskovanje

Vzorčenje materiala za raziskave z encimskim imunskim testom.

Za študije ELISA lahko bolniki vzamejo cerebrospinalno tekočino, steklovino, amnijsko tekočino, sluz iz cervikalnega kanala ali sečnice, pa tudi brise. Toda najpogostejši vzorec za raziskave je še vedno pacientova kri.

Rezultati encimskega imunskega testa so običajno narejeni v enem dnevu. Zamude ne bi smele priti, čeprav pri velikih kopičenjih serumov laboratorijski pomočniki morda preprosto nimajo časa za pravočasno izvedbo analize.

Rezultati raziskav

Pri ocenjevanju rezultatov študij, izvedenih za identifikacijo morebitnih okužb, je posebno pomembno število imunoglobulinov v krvi in ​​njihova vrsta. Od teh kazalcev je odvisna prisotnost okužbe v telesu ali njena odsotnost. Tudi s primerjavo kvantitativnih in kvalitativnih kazalcev lahko laboratorijski pomočnik določi pričakovano stopnjo razvoja bolezni, pa tudi razlikuje akutno obliko bolezni od kronične oblike. Ocenjuje se tudi prisotnost aktivnega virusa v človeškem telesu, ki se kaže v poslabšani kronični ali akutni obliki bolezni.
Približen čas, po katerem se imunoglobulini Ig pojavijo v krvi.

Dejstvo je, da so protitelesa IgM najhitreje nastajajoča. Njihovo odkrivanje se pojavi v 1-3 tednih po procesu okužbe telesa, kar je znak akutne faze okužbe s človeškim virusom.

Tudi takšna protitelesa se lahko odkrijejo v bolnikovi krvi med poslabšanjem kronične bolezni. Količina protiteles IgM traja približno 3 mesece od trenutka njihovega nastanka, nato postopoma začnejo izginjati. Čeprav obstajajo izjeme. Na primer, nekateri bolniki po končnem okrevanju ohranijo količino protiteles v krvi. Tako kroženje imunoglobulinov poteka več let po okužbi.

Pri takšnih bolnikih je treba preveriti pozitivne kazalnike prisotnosti protiteles IgM, saj so možne situacije, ko se testni sistem zmoti in daje lažno pozitiven rezultat. Takšne situacije se zelo pogosto zgodijo nosečnicam.

Kar zadeva pojav protiteles IgA, se lahko tvorijo 2 ali 4 tedne po tem, ko je bilo telo izpostavljeno okužbi. Toda protitelesa lahko odkrijemo šele po enem mesecu. Takrat njihovo število doseže optimalno število za odkrivanje.

Protitelesa IgA proizvajajo celice bezgavk, vranice in sluznice. Takšni imunoglobulini se lahko koncentrirajo na površinah sluznice organov, kjer opravljajo svojo zaščitno funkcijo in sodelujejo pri lokalni človeški imunosti.

Pojav protiteles IgG je mogoče izslediti s testnimi sistemi že v 4. tednu napredovanja infekcijskega procesa v telesu. Titer takšnih imunoglobulinov se lahko postopoma poveča v 2 mesecih. Po okrevanju njihov majhen titer ostane v telesu in podpira imunski sistem. Za bolezni, kot so klamidija, trihomonijaza in mikoplazmoza, je značilna nizka raven protiteles IgG v krvi, kar je razloženo s pomanjkanjem močne imunosti na takšne okužbe.

Razredi

Različice odkrivanja imunoglobulinov različnih razredov v človeški krvi.

• Odkrivanje protiteles IgM, ki se izvaja v izolaciji, kaže na primarno okužbo osebe.
• Odkrivanje protiteles razreda IgM in IgG v krvnem serumu se pojavi tudi med primarno okužbo, ki se je pojavila v zadnjih 2-3 mesecih. Ali pa je ta kombinacija lahko znak poslabšanja kronične bolezni.
• Tako takšni izvidi med nosečnostjo ne kažejo vedno na primarno okužbo.
• Zaznavanje protiteles IgG v izolaciji je lahko znak imunosti na to okužbo, čeprav lahko kaže tudi na kronično bolezen. V prisotnosti kronične oblike bolezni igra pomembno vlogo količina protiteles in njihova dinamika. Takšne študije se izvajajo v intervalih približno 2 tedna.
• Če so protitelesa IgA in IgM takoj prisotna v krvi, lahko to kaže na primarno okužbo. Odkrivanje IgA v izolaciji je tudi posledica primarne okužbe telesa.

Kadar se protitelesa IgA odkrijejo skupaj s protitelesi IgG, pomeni aktivacijo kronične oblike okužbe. Imunoglobulini se pojavijo v krvi 2 tedna po poslabšanju bolezni.
Avidnost protiteles je merilo za moč vezi med antigenom in protitelesom ter količino antigena, ki je prišla v stik s protitelesi (imunoglobulini). To je dodaten korak v diagnostiki z ELISA.

To je zelo pomemben indikator, saj je z njim mogoče določiti datum okužbe osebe, kar je zelo pomembno za okužbo med gestacijsko starostjo. Prav tako lahko ocenite vsa tveganja intrauterine okužbe otroka.

Test avidnosti opravimo v laboratoriju tako, da kompleks protitelo-antigen obdelamo s sečnino, ki uniči beljakovino. V tem primeru se spojine z nizko avidnostjo uničijo, spojine z visoko avidnostjo pa ostanejo nedotaknjene. Rezultati testa avidnosti so izraženi v odstotkih. Visoka avidnost protiteles kaže na kronično obliko bolezni ali pa je znak obstojne imunosti.

Značilnosti pojava protiteles v krvi dojenčkov

Če v krvi otrok, mlajših od enega leta ali do 1,5 leta, najdemo materinski IgG, to pomeni, da so protitelesa vstopila v otrokovo telo skozi placento med nosečnostjo. Ta simptom ne more nakazovati okužbe otroka, ampak je imunost na okužbo, ki jo prenaša mati.

Če pa v majhnem organizmu najdemo imunoglobuline razreda IgM, ki zaradi svoje teže ne morejo prodreti skozi posteljico do otroka, potem je to znak okužbe. Okužba se lahko pojavi po rojstvu ali med razvojem ploda.

Metoda kvantitativnega encimskega imunskega testa.

Rezultat diagnoze bolezni z ELISA je predstavljen v določenih merskih enotah:

1. OD - optična gostota vzorca - je nivo koncentracije protiteles v eni prostorninski enoti. Višji kot je ta indikator, več imunoglobulinov je v krvi.
2. Nekateri rezultati ELISA kažejo na prisotnost takšne enote, kot je koeficient pozitivnosti - CP. To je tudi oznaka za gostoto vzorca.
3. Enote koncentracije imunoglobulina so izražene v nanogramih, mililitrih ali ng/ml.
4. Serumski titri so izraženi na naslednji način: 1:20, 1:40, 1:100, 1:200, 1:400, 1:800, 1:1200 in podobno.
5. Titri, pri katerih se bolezen diagnosticira pri različnih okužbah, so različni.
6. Rezultati študije vsebujejo naslednje simbole: "-", "+", "?" (+, ++, +++, ++++).
7. Kvalitativna ocena pomeni prisotnost samo ene od dveh točk: pozitivne ali negativne.

Pravilna razlaga rezultatov te študije je odvisna od usposobljenosti zdravnika, saj nihče razen specialista nima pravice predpisati zdravljenja.

Strokovnjaki ocenijo količino protiteles v krvi, njihovo vrsto in koncentracijo.

Prav tako je treba zapomniti, da ni mogoče primerjati rezultatov različnih raziskovalnih metod ali rezultatov testov, pridobljenih v različnih laboratorijih. Ker za vsako diagnostično metodo obstajajo indikatorji in merske enote.

Primerjava rezultatov je dovoljena samo znotraj istega laboratorija.

Video o metodi ELISA