Bakteriološka laboratorija. Uređaj i pravila rada u bakteriološkoj laboratoriji Struktura bakteriološke laboratorije

Za mikrobiološke
istraživanja u bolnicama i klinikama ili
postoje nezavisno od njih
bakterioloških laboratorija.
Primaju za istraživanja razna
materijal dobijen od bolesnih ljudi
(sputum, urin, gnoj, izmet, krv, kičma
tečnost itd.).
Pored toga, postoje i sanitarne i bakteriološke laboratorije u kojima
voda je podvrgnuta bakteriološkoj kontroli,
vazduh i hranu.
2

Predmeti proučavanja u bakteriološkim laboratorijama su:

Objekti proučavanja u
bakteriološke laboratorije su:
1. Iscjedak iz tijela: urin, izmet, sputum, gnoj i
također krv, patološki i kadaverični materijal.
2. Objekti okoline: voda, zrak, tlo, ispiranje
od inventara, stočne hrane, tehnoloških sirovina
dobijene klanjem domaćih životinja.
3. Prehrambeni proizvodi, uzorci mesa i mesnih prerađevina,
mlijeko i mliječni proizvodi koje je potrebno davati
ocjenjivanje prikladnosti za prehrambene svrhe.
3

namjeravao

bakteriološka laboratorija
namjeravao
– za proučavanje materijala koji sadrže
uzročnici bakterijskih infekcija,
– utvrđivanje sanitarnih i mikrobioloških pokazatelja,
– kontrola stanja i napetosti
specifični imunitet i drugo
mikrobiološka istraživanja.
4

bakteriološka laboratorija

Specifičnost mikrobiološkog rada zahtijeva da prostorija dodijeljena laboratoriji bude izolirana:
- iz dnevnih soba,
- prehrambeni blokovi i
– ostale neosnovne industrijske prostorije.
Bakteriološka laboratorija treba da se nalazi u
prostorije izolovane od drugih laboratorija sa
neophodnu opremu i nameštaj.
Laboratorija mora imati:
- poseban ulaz,
- ormar i
- tuš.
5

bakteriološka laboratorija

Bakteriološka laboratorija uključuje:
- prostorija za prijem i evidentiranje materijala;
– laboratorijske prostorije za bakteriološke
istraživačke i pomoćne prostorije;
- autoklaviranje ili sterilizacija („čisti“,
"prljavo") za dezinfekciju otpada
materijal i kontaminirano posuđe;
– pranje, opremljeno za pranje posuđa;
– bakteriološka kuhinja – za kuvanje,
izlivanje, sterilizacija i skladištenje medija za kulturu;
– vivarij za držanje pokusnih životinja;
- materijal za skladištenje rezervnih reagensa,
posuđe, oprema i oprema za domaćinstvo.
6

bakteriološka laboratorija

Navedene pomoćne prostorije kao
uključene su nezavisne strukturne jedinice
u sastavu velikih bakterioloških
laboratorije.
u malim laboratorijama
bakteriološka kuhinja i
soba za sterilizaciju je spojena u jednu
soba;
- posebna ostava
nema eksperimentalnih životinja.
7

bakteriološka laboratorija

Mikrobiološke sobe
laboratorije prema stepenu opasnosti za
osoblje je podijeljeno u 2 zone:
I. "Zarazna" zona - soba ili grupa
laboratorijske prostorije gdje
manipulacija patogenim biološkim
agenti i njihovo skladište, osoblje je obučeno
odgovarajuću vrstu zaštitne odjeće.
II. "Čista" zona - prostori u kojima se ne obavljaju
rad sa biološkim materijalom, osoblje je obučeno
u ličnoj odeći.
8

Laboratorijske sobe

Ispod laboratorijskih prostorija u kojima proizvode
sve bakteriološke studije
najsvjetlije i najprostranije sobe.
Zidovi u ovim prostorijama na visini od 170 cm od poda
farbano u svijetlim bojama uljanom bojom ili
pokriti pločicama.
Pod je obložen relinom ili linoleumom.
Ova vrsta završne obrade vam omogućava da koristite prilikom čišćenja
prostorije sa dezinfekcionim rastvorima.
Svaka soba treba da ima umivaonik sa vodovodom i posudu sa dezinfekcionim sredstvom.
rješenje.
9

10. Bakteriološka laboratorija

Potrebni prostori uključuju:
Laboratorije za crijevne infekcije
Laboratorije za infekciju kapljicama
Sanitarna i bakteriološka laboratorija
Serološka laboratorija
pomoćne prostorije:
srednjovarnya,
pranje
Sterilizacija
Registry
Ostave
Kupatilo za zaposlene
Vivarijum
Svaka laboratorija mora biti opremljena mikroskopom,
autoklavi, termostati, sušenje i sterilizacija
ormari, aparati za zgrušavanje krvi, centrifuge,
laboratorijske vage, pH metar, kupka za pranje
10

11. Bakteriološka laboratorija

U jednoj od prostorija je zastakljena kutija opremljena izolovanom prostorijom sa predprostorom (preboksom) za
izvođenje radova u aseptičnim uslovima.
U boks su stavili sto za useve, stolicu, iznad radnog mesta
instalirati baktericidne lampe.
U predsoblju se nalazi ormarić za odlaganje sterilnog
materijal.
Prozori i vrata prostorija "zarazne" zone trebaju biti
zapečaćeno.
Postojeća izduvna ventilacija iz "zaraznog" područja treba
biti izolovan od drugih ventilacionih sistema i
opremljen finim filterima za vazduh.
11

12. Prostorije za mikrobiološka istraživanja

Prostorije za mikrobiološke
oprema za istraživanje:
termostati,
frižideri,
centrifuge,
vaga,
vodene kupke,
elektromagnetne mešalice.
Na stolove stavite potrebno
oprema.
Rad sa zaraženim materijalom
izvode se u kutiji sa pre-boksom.
12

13. Bakteriološka laboratorija

U kutiji se primljeni uzorci rastavljaju, pripremaju i fiksiraju
brisevi-otisci, vršiti useve mikroorganizama na
hranljive podloge.
Stoga se u kutiji nalaze stolovi na koje se postavljaju
potrebni alati za rad: stalci za epruvete,
epruvete i Petrijeve zdjelice s hranjivim podlogama, sterilne
pipete, malteri, posude sa dezinfekcionim sredstvima za upotreb
posuđe itd.
U pre-boksu u biciklima potrebno je imati sterilnu
haljine, kape, maske, kao iu svlačionici treba da budu
zatvorene cipele.
U predprostoru se mogu postaviti termostati, frižideri,
centrifuge i druga oprema.
U kutijama i pred-kutijama svakodnevno mokri
čišćenje, dezinfekcija i zračenje so
baktericidne lampe 30-40 minuta prije početka
posla i posle posla.
13

14. Autoklav

U autoklavu morate imati dva
autoklav:
jedan autoklav za čiste materijale (za
sterilizacija posuđa, hranjivih podloga,
alati);
drugi autoklav za zaražene materijale
(za neutralizaciju zaraženih
alati i materijali).
14

15. Pranje

Pranje je namijenjeno za pranje i
obrada jela.
Prostorija za pranje mora imati umivaonik
hladna i topla voda i šporet.
Mašina za pranje veša mora biti opremljena
sredstva i oprema za čišćenje
posuđe
Ormari za sušenje se nalaze u prostoriji za pranje veša.
15

16. Vivarijum

Vivarijum je prostorija koja se koristi
za držanje laboratorijskih životinja.
Vivarijum mora imati:
karantenski odjel,
sobe za pokusne i zdrave životinje,
objekti za pranje i dezinfekciju kaveza, inventar i
kombinezon,
kuhinja za kuvanje,
ostava,
stočna hrana,
spalionica.
Sve prostorije u vivariju treba da budu
izolovani jedno od drugog.
16

17.

u bakteriološkoj laboratoriji
prostorije su raspoređene na način da
"prljavi" i "čisti" tokovi nisu
prešao i nije dodirnuo
17

18. Pravila za rad u bakteriološkoj laboratoriji

Osoblje laboratorije mora poštovati sledeće
pravila:
1. Dozvoljen je rad u posebnoj odjeći – kućnom ogrtaču i šeširu. u boksu
raditi u sterilnoj haljini, maski, kapu, staviti po potrebi
gumene rukavice i zaštitne naočare.
Obavezno promijenite cipele!
2. Zabranjeno je napuštanje laboratorije u kaputima ili obuci
vanjska odjeća na bade mantilu.
3. U laboratoriji je zabranjeno pušiti i jesti hranu.
4. Sav materijal koji ulazi u laboratoriju na analizu mora
tretirati kao zaražene.
Stoga morate biti oprezni prilikom raspakivanja materijala.
Kontejnere treba obrisati sa spoljne strane dezinfekcionim rastvorom i postaviti
ih na tacnama ili u kivetama.
18

19. (nastavak)

5. U slučaju kontakta sa zaraženim materijalom na kućnom ogrtaču, rukama, stolu, obući, potrebno je
izvršiti dezinfekciju i o tome obavijestiti rukovodioca laboratorije.
6. Zaraženi materijal se mora uništiti autoklavom. alati, i
također se površina radne površine nakon rada dezinficira.
7. Zabranjeno je iznošenje opreme, inventara, materijala iz laboratorije bez
prethodna dezinfekcija.
8. Pipete, staklena stakalca, pokrovne stakalce i drugi korišteni pribor,
dezinfikuje se potapanjem u dezinfekciono sredstvo.
9. Po završetku rada radno mesto se sređuje i temeljno dezinfikuje.
U njoj se čuvaju kulture mikroorganizama neophodne za dalji rad
frižider.
10. Samo osobe koje su upozorene na potencijal
opasnosti i koji su ispunili posebne zahtjeve (na primjer, imunizacija, zaštitna odjeća
itd.)
19

20. Bakteriološka laboratorija vodi sljedeću dokumentaciju:

1. Knjiga inventara muzejskih sojeva kultura.
2. Dnevnik kretanja materijala u laboratoriji.
3. Registar sterilizacije i uništenja
inficirani materijal.
4. Registar zaraženih eksperimentalnih životinja.
5. Istraživački časopis (ekspertiza).

TEMA ČASA: Bakteriološka laboratorija i pravila rada u njoj. Klasifikacija mikroorganizama. Morfologija bakterija. Metode za određivanje vrste mikroba. bakterioskopska metoda. Tehnika mikroskopije sa imersionim sistemom.

CILJ UČENJA: Upoznajte se sa uređajem bakteriološke laboratorije i pravilima rada u njoj. Upoznajte se sa principima klasifikacije mikroorganizama. Proučiti morfološke karakteristike bakterija i metode za određivanje vrste mikroba. Ovladati bakterioskopskom metodom istraživanja i tehnikom mikroskopije sa imerzionim sistemom.

CILJEVI LEKCIJE:

1. Upoznajte se sa strukturom bakteriološke laboratorije i pravilima rada u njoj.

2. Upoznati se sa principima klasifikacije mikroorganizama.

3. Proučiti morfološke karakteristike bakterija i metode za određivanje vrste mikroba.

4. Savladati tehniku ​​mikroskopije sa imersion sistemom.

Bakteriološki laboratorijski uređaj

Bakteriološka laboratorija je namijenjena za proučavanje materijala koji sadrže uzročnike bakterijskih infekcija, određivanje sanitarnih i mikrobioloških pokazatelja, kontrolu stanja i intenziteta specifičnog imuniteta i druga mikrobiološka ispitivanja. Bakteriološka laboratorija treba biti smještena u prostorijama izolovanim od drugih laboratorija sa potrebnom opremom i namještajem. Laboratorija treba da ima poseban ulaz, garderobu i tuš kabinu. Bakteriološka laboratorija treba da ima sledeće prostorije:

Prostorija za prijem i registraciju materijala;

Prostorije u kutijama za mikrobiološka istraživanja;

Autoklav;

pranje;

Vivarijum.

Prostorije za mikrobiološka istraživanja opremljene su termostatima, frižiderima, centrifugama, vagama, vodenim kupatilima i elektromagnetnim mešalicama. Potrebna oprema je postavljena na stolove. Rad sa zaraženim materijalom se obavlja u boks With pre-bokser. Na ulazu u boks treba da stoji prostirka natopljena dezinfekcionim sredstvom. U kutiji se rastavljaju primljeni uzorci, pripremaju se i fiksiraju razmazi-otisci, vrši se inokulacija mikroorganizama na hranjivim podlogama. Zbog toga se u kutiju postavljaju stolovi na koje se stavljaju alati neophodni za rad: posude sa dezinfekcionim sredstvima za korišćeno posuđe, stalci za epruvete, epruvete i Petrijeve posude sa hranljivim podlogama, sterilne pipete, malteri i dr., poklopci, maske, a u svlačionici treba da budu i zamjenjive cipele. U pretprostoru se mogu smjestiti termostati, frižideri, centrifuge i druga oprema. U kutijama i predboksovima svakodnevno se obavljaju mokro čišćenje, dezinfekcija i zračenje baktericidnim lampama 30-40 minuta prije i poslije rada.

IN autoklavirano potrebno je imati dva autoklava: jedan autoklav za čiste materijale (za sterilizaciju staklenog posuđa, hranljivih podloga, instrumenata); drugi autoklav za zaražene materijale (za odlaganje zaraženih instrumenata i materijala).

pranje dizajniran za pranje posuđa. Posuđe, pipete i instrumente kontaminirane inficiranim materijalom treba prati tek nakon sterilizacije. Poseduje ormane za sušenje.

vivarijum odnosi se na prostorije koje se koriste za držanje laboratorijskih životinja. U vivarijumu je potrebno imati karantenski odjel, prostorije za ogledne i zdrave životinje, prostorije za pranje i dezinfekciju kaveza, inventara i kombinezona, kuhinju za pripremu hrane, ostavu, stočnu hranu, spalionicu. Sve prostorije vivarijuma treba da budu izolovane jedna od druge.

U bakteriološkoj laboratoriji utvrđuje se vrsta infekcije koja je izazvala određenu bolest tijela. Za to se krv, urin, cerebrospinalna tekućina i druge tjelesne tekućine uzgajaju na različitim hranjivim podlogama. Ponekad se usjevi prave od kože, nosne sluznice i ždrijela. Očni ljekari, nakon dijagnosticiranja "konjunktivitisa", često upućuju pacijenta na bakteriološki pregled.

Ako sumnjate na akutni ili kronični konjuktivitis, studija pomaže razjasniti dijagnozu i odrediti vrstu bakterije koja je izazvala konjuktivitis. Studija počinje činjenicom da se uz pomoć posebnog uređaja sadržaj konjunktivne vrećice uzima i sije na posebnu juhu, a zatim na hranjivi medij. Nakon 24-48 sati na hranljivoj podlozi rastu kolonije bakterija. Nakon specijalnog bojenja, pregledavaju se pod mikroskopom i utvrđuje se vrsta mikroorganizama koji žive na konjunktivi. To su najčešće bakterije, rjeđe - drugi mikroorganizmi (gljive, amebe).

Da bi se odlučilo o upotrebi najefikasnijeg antibiotika, utvrđuje se osjetljivost patogenih bakterija na ljekovite tvari.

U zaključku ćemo dati nekoliko brojeva i još jednom vas podsjetiti kako se možete zaštititi od infekcije.

Zapamtite da su zemlja, voda i vazduh nastanjeni mikroorganizmima. Svakim pokretom, treptajem, dahom, u kontaktu smo sa njima. Naše sluzokože ne dozvoljavaju im da uđu u vitalne organe. Obratite pažnju na zanimljive činjenice koje je prikupio jedan od zaljubljenika u mikrobiologiju.

1 g ulične prašine sadrži oko 2 miliona mikroorganizama, oni ulaze u vazduh sa zemlje. Najveći broj mikroba nalazi se u gornjih 50 cm tla.

Vodeni bazeni sadrže od 5 do 10.000 bakterija po 1 kvadratu. cm, a u gradskoj rijeci - 23000 u 1 sq. cm.

Ali podaci o broju mikroorganizama u 1 kvadratu. m zraka koji nas okružuje: u zraku u šumi ili parku - od 100 do 1000 mikroba po 1 kvadratu. m, u morskom zraku 100 km od obale - samo 0,6, na nadmorskoj visini od 2000 m - 3.

Potpuno drugačija slika uočava se na centralnoj ulici prosječnog grada - 3500 mikroba na 1 kvadrat. m, u novoj kući - 4500, u staroj - 36 000, u bolnici - 79 000, u hostelu - 40 000.

Ove brojke govore same za sebe. Mikroorganizmi uključuju viruse, bakterije, spore gljivica i plijesni. Osim toga, sama prašina po hemijskom sastavu, posebno na gradskim ulicama, u stanovima, u raznim industrijama, sadrži hemijske i fizičke nečistoće koje su štetne za organizam. Naše sluznice i koža ne mogu se uvijek nositi s takvim opterećenjem bez naše pomoći. Da se ne biste razboljeli, morate zapamtiti pravila prevencije.

BAKTERIOLOŠKI LABORATORIJ- naučna i praktična ustanova koja obavlja bakteriološka, ​​imunološka i druga mikrobiološka istraživanja. U skladu sa diferencijacijom mikrobiologije uopšte i bakteriologije kao jedne od njenih grana, postoje bakteriološke laboratorije sa različitim zadacima i funkcijama. Kliničko-dijagnostičke bakteriološke laboratorije u bolnicama provode istraživanja neophodna za utvrđivanje ili razjašnjavanje dijagnoze zarazne bolesti, kontrolišući efikasnost liječenja.

Specijalizacija bakterioloških laboratorija u bolnicama određena je profilom bolnice (akutne zarazne bolesti, dječje zarazne bolesti, venerične bolesti, tuberkuloza i dr.). Bakteriološke laboratorije pri sanitarno-epidemiološkim stanicama, kao i kliničke laboratorije, bave se dijagnostičkim radom, opslužuju bolnice koje nemaju svoje laboratorije, sprovode preventivne preglede stanovništva i sanitarno-bakteriološke preglede prehrambenih proizvoda i vode.

Pored medicinskih, postoji i široka mreža veterinarskih bakterioloških laboratorija koje obavljaju dijagnostičke i preventivne studije zaraznih bolesti kod životinja (vidi Veterinarski laboratorij). Visoko specijalizovane su bakteriološke laboratorije koje obavljaju kontrolne funkcije, kao što su bakteriološke laboratorije na vodovodima, kontrolne laboratorije u preduzećima koja proizvode vakcine, serume i druge bakterijske preparate. U prostorijama za dezinfekciju organizovane su posebne bakteriološke laboratorije. Njihov zadatak je bakteriološka kontrola kvaliteta dezinfekcije. Uz bakteriološke laboratorije medicinskog i veterinarskog profila, postoje i specijalizovane bakteriološke laboratorije za potrebe prehrambene industrije (vinare, pekare, pivare i druga preduzeća), poljoprivrede itd. Za razliku od gore navedenih bakterioloških laboratorija, koje rješavaju praktične probleme, U strukturi odgovarajućih istraživačkih instituta predviđene su bakteriološke laboratorije različitih profila, dizajnirane za rješavanje različitih istraživačkih problema. Bakteriološke laboratorije mogu biti stacionarne i mobilne. Potonji se koriste za sanitarno i protivepidemijsko održavanje vojnih jedinica, kao i u ekspedicijskim, terenskim uslovima (vidi Laboratorija, u vojno-poljskim uslovima). Pored mobilnih, trupe imaju i stacionarne laboratorije. Specifičnosti istraživanja koja se sprovode u bakteriološkim laboratorijama određuju strukturu laboratorija i način rada u njima.

Osnovni zahtjev za bakteriološke laboratorije i koji proizilazi iz specifičnosti njenog rada je stvaranje uslova koji osiguravaju izvođenje istraživanja u najsterilnijim uslovima i garantuju osoblju i drugima od moguće infekcije. Struktura bakteriološke laboratorije uključuje: samu laboratoriju i niz dodatnih odjeljenja. Tretirajte ih: sredovovarnya, pranje, priprema, sterilizacija i vivarij (vidi). Ovi odjeli, kao samostalne strukturne jedinice, dio su velikih bakterioloških laboratorija. U malim bakteriološkim laboratorijama nema vivarijuma i posebne pripremne prostorije, a prostorija za srednju i sterilizaciju mogu se kombinovati u jednoj prostoriji.

Uređaj i oprema

Rice. 5. Staklene lopatice. Fig.6. Lopatica od platinaste žice.

Prostorije bakterioloških laboratorija trebaju biti dovoljno svijetle i prostrane. Zidovi moraju biti ofarbani uljanom bojom, a pod ne smije imati pukotine. Prozori laboratorije trebaju biti orijentirani na sjever ili sjeverozapad. Kada su orijentirani na jug, prozori su okačeni bijelim zavjesama. Bakteriološka laboratorija treba da ima umivaonik ili umivaonik, iznad kojeg se na policu postavlja boca sa rastvorom za dezinfekciju ruku. Radna površina bakteriologa, ako je moguće, postavlja se na udaljenosti od 1 m od prozora i prekriva se linoleumom ili staklom. Na stol se postavlja plinski gorionik (u nedostatku plinskog plamenika, alkoholni gorionik). Obavezna oprema radnog mjesta je posuda za pipete s otopinom dezinficijensa (3% otopina karbonske kiseline), porculanska ili staklena posuda za vatu koja se može ponovo zatvoriti, držač bakterijske petlje, set bakterijskih standarda, stalci za epruvete, emajlirane kivete, pinceta, makaze i skalpel, čista staklena stakalca sa i bez rupica, kao i pokrovne stakalce. Obično se koriste dijapozitivi veličine 26 x 76 mm i debljine 1 - 1,2 mm, pokrovni stakalci 18 x 18 ili 20 x 20 mm. Bakteriološka laboratorija treba da bude opremljena metalnim tacnama za nošenje Petrijevih posuda, pocinkovanim kantama ili rezervoarima za odlaganje zaraženog pribora ili opreme. Mikroskop se čuva u kutiji ili ispod staklenog poklopca. Radna površina ne bi trebala biti pretrpana nepotrebnim stvarima. Obično je u bakteriološkoj laboratoriji opremljen dodatni stočić za bojenje fiksnih preparata. Na takvom stolu se postavljaju: set potrebnih boja i reagensa u bloku sa pipetama i gumenim limenkama (slika 1), emajlirana kiveta ili kristalizator sa postoljem za preparate, žičana pinceta ili kornet pinceta (sl. 2) za pločice za fiksiranje, listovi filter papira za uklanjanje tečnosti iz opranih preparata, podloška za pranje (slika 3) ili boca vode. Bakteriološka laboratorija je opremljena raznim priborom neophodnim za istraživanja. Pored uobičajenog hemijskog pribora (cilindri, tikvice, čaše, mjerne pipete i sl.), potrebno je posebno posuđe namijenjeno bakteriološkim i imunološkim analizama: 1) staklene Petrijeve zdjelice koje se koriste za uzgoj bakterija na gustim podlogama i dobijanje izolovanih bakterijskih kolonija; 2) bakterijske prostirke (sl. 4) - ravne boce (veličine 22 x 17 x 5 cm) koje se koriste za uzgoj velikog broja bakterija; 3) Roux-epruvete sa suženjem za uzgoj bakterija na plićacima krompira; 4) Wasserman epruvete dužine 90 mm i unutrašnjeg prečnika 9-10 mm za uspostavljanje reakcije fiksacije komplementa i reakcije aglutinacije; 5) precipitacione cevi dužine 90 mm i prečnika 3-5 mm za uspostavljanje reakcije taloženja; 6) bakterijske epruvete za uzgoj bakterija na čvrstim i tečnim hranljivim podlogama; 7) Pasterove pipete koje se koriste za inokulaciju tečnih materijala, razblaživanje tečnosti metodom kapi, nanošenje boja itd. ; 8) Mohrove pipete ili pipete sa sfernim proširenjem u srednjem dijelu za inokulaciju zaraženog tečnog materijala, kao i automatske pipete ili pipete sa gumenim kruškama, isključujući usisavanje materijala na usta. Za uzgoj kultura u tekućim hranjivim podlogama, skladištenje i flaširanje hranljivih podloga, reagensa itd. koristi se obično laboratorijsko stakleno posuđe. Stakleno posuđe koje se koristi u bakteriološkoj laboratoriji mora se prethodno isprati, za šta se obično prokuva u 1-2% rastvoru hlorovodonične kiseline. Dezinfekciju bakterioloških posuda u kojima se uzgajaju mikrobi treba provoditi samo uz pomoć visoke temperature bez upotrebe ikakvih dezinficijensa, jer njihovo prisustvo, čak i u obliku tragova, može dodatno inhibirati razvoj mikroba. Inokulacija mikroorganizama u bakteriološkoj laboratoriji vrši se pomoću bakterioloških petlji, staklenih ili platinastih lopatica (sl. 5 i 6). Uzgoj bakterija se vrši u zračnom termostatu (vidi), au velikim bakteriološkim laboratorijama - u posebnim termostatskim prostorijama.

Ako vam je potrebna precizna kontrola temperature i relativno kratkotrajna kultivacija bakterija ili kod postavljanja imunoloških reakcija, zgodno je koristiti vodene ultratermostate. Svaka bakteriološka laboratorija u kojoj proučavaju anaerobe mora biti opremljena anaerobnim balonom (vidi), eksikatorima i vakuum pumpama za uklanjanje zraka. Potonji se također koriste u filtriranju. Za postizanje najboljih aseptičkih uslova neophodnih za setvu, izolaciju ili subkulturu kultura, bakteriološke laboratorije su opremljene posebnim ostakljenim boksovima sa predboksovima. Kutija sadrži plinski plamenik, posudu sa rastvorom za dezinfekciju i, gde je moguće, baktericidnu uvio lampu. U nedostatku stacionarne kutije, kada obavljate neke poslove koji zahtijevaju visok stepen asepse, možete koristiti prijenosnu desktop kutiju (vidi kutije, mikrobiološke).

Rice. 7. Automatski brojač kolonija sa televizijskim kontrolnim uređajem: 1 - Petrijeva posuda sa naraslim kolonijama; 2 - elektronski semafor s brojevima koji označavaju broj kolonija u Petrijevoj posudi; 3 - TV ekran za posmatranje uvećane slike kolonija uzgojenih u Petrijevoj posudi.

Bakterijske kulture, terapeutski i dijagnostički serumi, fagi i drugi biološki supstrati (serumi, rastvori peptona i dr.) čuvaju se u frižideru. Bakterijske kulture treba da se čuvaju u zatvorenim epruvetama ili ampulama, za šta bakteriološke laboratorije moraju imati gorionik za lemljenje ili običnu lampu. Obavezni pribor svake bakteriološke laboratorije je mikroskop (vidi). Za većinu studija koriste se mikroskop MBI-3 i iluminatori. Istraživačke bakteriološke laboratorije opremljene su i fazno-kontrastnim, luminiscentnim i elektronskim mikroskopima. Za kvantificiranje kolonija bakterija uzgojenih na Petrijevim zdjelicama koriste se brojači različitih sistema. Jedan takav brojač je automatski brojač sa uređajem za skeniranje i uređajem za kontrolu televizije koji može da broji do 500 šoljica na sat (slika 7). Važni elementi opreme bakterioloških laboratorija su uređaji za mućkanje koji se koriste u slučajevima kada je potrebno obezbijediti miješanje i mućkanje materijala određeno vrijeme (defibrinacija krvi, homogenizacija materijala i sl.). Za sedimentaciju gustih čestica (mikrobne ćelije, ćelije tkanine, suspenzija proučavanog materijala) koje se nalaze u tečnosti koriste se centrifuge (vidi). Za većinu studija najčešće se koriste centrifuge koje se rotiraju brzinom od 3000 - 3500 o/min. U nedostatku električnih centrifuga, koriste se ručne centrifuge.

Djelatnost bakterioloških laboratorija u velikoj mjeri ovisi o ispunjavanju osnovnog zahtjeva - rada u aseptičnim uvjetima sa sterilnim predmetima (alatima, hranjivim podlogama, posuđem). Stoga u opremi bakterioloških laboratorija oprema za sterilizaciju zauzima značajno mjesto (vidi). Svaka bakteriološka laboratorija ima autoklav (vidi), Kochov aparat, Pasterovu peć (vidi Pasteurovu peć), aparat za zgrušavanje surutke. Za sterilizaciju ključanjem koriste se konvencionalni sterilizatori (vidi), grijani iz električne mreže ili na drugi način.

Za sterilizaciju tečnih supstrata koji se menjaju pod uticajem temperature koristite bakterijske filtere (vidi). Sušenje navlaženih predmeta (posuđa, alata) nakon sterilizacije parom ili pod pritiskom vrši se u ormarićima za sušenje (vidi). Oprema bakterioloških laboratorija neophodna za pripremu najčešće korišćenih hranljivih podloga, pored naznačene opreme, obuhvata i uređaje za izlivanje medija, komplete reagensa i pribor za obavljanje određenih hemijskih analiza (određivanje azota, triptofana, hlorida). i dr.), kao i instrumenti i reagensi za određivanje pH sredine; univerzalni indikator, indikatori i Michaelisov komparator ili potenciometar.

Rad sa životinjama u bakteriološkim laboratorijama obavlja se u posebnoj prostoriji - vivarijumu. Eksperimenti sa životinjama nisu dozvoljeni u stvarnim bakteriološkim laboratorijama. Za obavljanje osnovnih poslova sa životinjama (vađenje krvi, postavljanje bioloških uzoraka, dijagnostičke reakcije i sl.), morate imati: vagu za vaganje miševa, svinja i zečeva, mašine ili uređaje za njihovo fiksiranje (Sl. 8), komplet špricevi, brojevi za označavanje životinja (ili boja), depilatori.

Specifičnost bakteriološkog rada određuje posebno visoke zahtjeve za čistoćom prostorija bakterioloških laboratorija. Od posebnog značaja je čistoća vazduha, odsustvo prašine u njemu. Prostorije bakterioloških laboratorija je bolje očistiti na kraju radnog dana ili nekoliko sati prije početka rada, jer prašina koja se diže u zrak tokom čišćenja povećava sadržaj mikroba u njemu i otežava sterilizaciju rada. . Preporučljivo je nakon čišćenja prostorija prije rada izložiti ih zračenju uvio baktericidnim lampama u trajanju od 0,5-1 sat. Da bi se sprečila intralaboratorijska infekcija i mogućnost širenja infekcije pri radu u bakteriološkim laboratorijama, moraju se poštovati sledeća osnovna pravila: 1) sve osobe u laboratoriji moraju da nose ogrtače; 2) nije dozvoljeno pretjerano pričanje i hodanje; 3) svaki zaposleni mora da koristi samo radno mesto koje mu je dodeljeno; 4) u bakteriološkoj laboratoriji zabranjeno je jesti i pušiti; 5) pri radu sa infektivnim materijalom potrebno je koristiti alate (pincete, igle, kuke) i ni u kom slučaju ga ne dodirivati ​​rukama; sav inventar koji je bio u kontaktu sa zaraznim materijalom podliježe sterilizaciji ili uništenju; 6) kod usisavanja tečnog materijala preporučuje se upotreba gumenih sijalica; pipete treba zatvoriti pamučnim čepovima; 7) transfuzija zaraženih tečnosti iz posude u posudu vrši se preko tacne ili kristalizatora napunjenog dezinfekcionom tečnošću; 8) svi poslovi u vezi sa setvom, ponovnim zasejavanjem, izolovanjem kultura i pripremanjem preparata od zaraženog materijala izvode se na gorioniku, uz spaljivanje ivica epruveta, petlji, lopatica i sl.; 9) epruvete, tikvice, bočice i sl., u koje se zaraženi materijal stavlja u rad, odmah se označavaju vrstom materijala, nazivom i brojem kulture i datumom; 10) ako je zarazni materijal dospeo na okolne predmete, potrebno je odmah izvršiti temeljnu dezinfekciju: ovo mesto preliti dezinfekcionim rastvorom, a zatim, ako je moguće, spaliti tamponom sa zapaljenim alkoholom; 11) predmeti i materijali zaraženi tokom rada se evidentiraju, sakupljaju u rezervoare ili kante, zatvaraju, zatvaraju i sterilišu istog dana; 12) kulture se po potrebi čuvaju u agar kolonama pod uljem u zatvorenim epruvetama sa etiketama; 13) evidentiranje i evidentiranje svih kultura, kao i životinja zaraženih tokom rada, vodi se u dnevnik na posebnom obrascu.

Uvod

Kao i opći dio svake druge nauke, opća bakteriologija se ne bavi specifičnim pitanjima (recimo, identifikacijom pojedinih vrsta bakterija), već problemima općenito; njegova metodologija pokriva osnovne procedure koje se široko koriste u širokom spektru laboratorijskih studija. Ovaj vodič za proučavanje nije namijenjen identificiranju bilo koje grupe mikroorganizama. To je zadatak sljedećih publikacija - o privatnoj i sanitarnoj mikrobiologiji. Međutim, metode predstavljene u njemu mogu biti korisne u bilo kojem području gdje se treba baviti bakterijama i mogu se primijeniti na praktične probleme, uključujući izolaciju i tipizaciju bakterija.

Bakteriologija je postala nauka tek nakon što su razvijene jedinstvene tehnike koje nastavljaju da utiču i infiltriraju se u kasnija polja nauke kao što su virologija, imunologija i molekularna biologija. Tehnika korišćenja čistih kultura koju je razvio R. Koch i imunološke reakcije i hemijske analize koje je pionir L. Pasteur nisu izgubile na značaju ni sada.

Metodologija opšte bakteriologije je u ovom izdanju reflektovana uz pomoć takve konstrukcije, koja je tipična za standardne udžbenike ove discipline. Međutim, za razliku od laboratorijskih radionica o kursu mikrobiologije za univerzitete, on je detaljnije predstavljen u nekim odjeljcima i služi samo kao referenca. Ova struktura uzima u obzir posebnosti obuke i specijalizacije bakteriologa i veterinarsko-sanitarnih stručnjaka. Često se gradivo predstavlja proizvoljno, pa se neke metode spominju više puta, zbog želje da se pokaže njihov odnos.

bakteriološka laboratorija

Bakteriološke laboratorije kao strukturne jedinice organizovane su u sastavu regionalnih, okružnih, međuokružnih veterinarskih laboratorija, kao iu sastavu zonskih veterinarskih laboratorija. Organizuju se i u centrima sanitarnog i epidemiološkog nadzora, u infektivnim bolnicama, opštim bolnicama, nekim specijalizovanim bolnicama (npr. za tuberkulozu, reumatologiju, dermatovenerologiju) i poliklinikama. Bakteriološke laboratorije su dio specijalizovanih istraživačkih institucija. Bakteriološke laboratorije se stalno koriste za potvrđivanje ili utvrđivanje ocjene prikladnosti mesa za hranu prema ESS-u.

Predmeti proučavanja u bakteriološkim laboratorijama su:

1. Iscjedak iz organizma: urin, izmet, sputum, gnoj, kao i krv, patološki i kadaverični materijal.

2. Objekti spoljašnje sredine: voda, vazduh, zemljište, ispiranja iz inventara, stočna hrana, tehnološke sirovine dobijene klanjem domaćih životinja.

3. Prehrambeni proizvodi, uzorci mesa i mesnih prerađevina, mlijeko i mliječni proizvodi, koji moraju biti ocijenjeni na pogodnost za prehrambene svrhe.

Oprema za bakteriološku laboratoriju i radno mjesto

Specifičnost mikrobiološkog rada zahtijeva da prostorija dodijeljena laboratoriji bude izolirana od dnevnih soba, prehrambenih blokova i drugih neosnovnih industrijskih prostorija.

Bakteriološka laboratorija obuhvata: laboratorijske prostorije za bakteriološka istraživanja i pomoćne prostorije; autoklav ili sterilizacija za dekontaminaciju otpadnog materijala i kontaminiranog pribora; pranje, opremljeno za pranje suđa; bakteriološka kuhinja - za pripremu, flaširanje, sterilizaciju i skladištenje hranljivih podloga; vivarij za držanje pokusnih životinja; materijal za skladištenje rezervnih reagensa, pribora, opreme i kućne opreme.

Navedene pomoćne prostorije, kao samostalne strukturne cjeline, dio su velikih bakterioloških laboratorija. U malim laboratorijama, bakteriološka kuhinja i kuhinja za sterilizaciju su kombinovane u jednoj prostoriji; ne postoji poseban prostor za držanje pokusnih životinja.

Prema stepenu opasnosti po osoblje, prostori mikrobioloških laboratorija su podeljeni u 2 zone:

I. "Zarazna" zona - prostorija ili grupa prostorija u laboratoriji u kojoj se rukuje i skladišti patogeni biološki agensi, a osoblje je obučeno u odgovarajuću zaštitnu odjeću.

II. "Čista" zona - prostorije u kojima se ne obavlja rad sa biološkim materijalom, osoblje je obučeno u ličnu odjeću.

Pod laboratorijskim prostorijama, u kojima se provode sve bakteriološke studije, raspoređene su najsvjetlije, prostrane prostorije. Zidovi u ovim prostorijama na visini od 170 cm od poda su ofarbani u svijetle boje uljanom bojom ili obloženi pločicama. Pod je obložen relinom ili linoleumom. Ova vrsta završne obrade vam omogućava da koristite dezinfekciona rješenja prilikom čišćenja prostorije.

Svaka soba treba da ima umivaonik sa vodovodom i policu za flašu dezinfekcionog rastvora.

U jednoj od prostorija je opremljena zastakljena kutija - izolovana prostorija sa predprostorom (preboksom) za obavljanje radova u aseptičnim uslovima. U kutiju stavljaju sto za usjeve, stolicu, baktericidne lampe su montirane iznad radnog mjesta. U predsoblju je postavljen ormar za čuvanje sterilnog materijala. Prozori i vrata prostorija "zarazne" zone moraju biti hermetički zatvoreni. Postojeća izduvna ventilacija iz "zaraznog" područja mora biti izolovana od drugih ventilacionih sistema i opremljena finim filterima za vazduh.

Laboratorijska prostorija je opremljena laboratorijskim stolovima, ormarićima i policama za odlaganje opreme, pribora, boja i reagensa neophodnih za rad.

Za rad je veoma važna pravilna organizacija radnog mjesta bakteriologa i laboratorijskog asistenta. Laboratorijski stolovi su postavljeni u blizini prozora. Kada ih postavljate, morate nastojati osigurati da svjetlo pada ispred ili sa strane radnika, po mogućnosti s lijeve strane, ali ni u kojem slučaju s leđa. Poželjno je da prostorije za analizu, posebno za mikroskopiju, imaju prozore orijentisane na sjever ili sjeverozapad, jer je za rad potrebna čak i difuzna svjetlost. Osvetljenost površine stolova za rad treba da bude 500 luksa. Radi praktičnosti dezinfekcije, površina laboratorijskih stolova je prekrivena plastikom ili tapacirana željezom. Svaki zaposleni u laboratoriji ima posebno radno mjesto dimenzija 150x60 cm.

Sva radna mjesta su opremljena sredstvima potrebnim za svakodnevni bakteriološki rad, čiji je popis dat u tabeli 1.

Tabela 1.

Potrebni predmeti za bakteriološki rad

Naziv artikla	Približna količina
1. Set boja i reagensa za bojenje
2. Slajdovi	25-50
3. Poklopne čaše	25-50
4. Čaše sa rupama	5-10
5. Stalak za epruvete
6. Bakterijska petlja
7. Staklene lopatice
8. Metalne lopatice
9. Tegla pamuka
10. Graduirane pipete 1, 2, 5, 10 ml	25 svake sveske
11. Pasterove pipete	25-50
12. Pinceta, makaze, skalpel	Do 1
13. Kontejneri sa dezinfekcionim rastvorima
14. Mikroskop sa iluminatorom
15. Lupa 5 ´
16. Posuda za puter sa potopljenim uljem
17. Filter papir	3-5 listova
18. Tegla dezinfekcionog rastvora za pipete
19. Alkohol ili plinski plamenik
20. Instalacija za preparate za bojenje
21. Peščani sat za 1 ili 2 minute	Do 1
22. Kruška sa gumenom cijevi
23. Olovka na staklu
24. Tegla alkoholnih briseva
25. Neophodno sterilno posuđe	-

Dezinfekcija

Dezinfekcija je uništavanje mikroorganizama u objektima životne sredine.

U mikrobiološkim laboratorijama mjere dezinfekcije se vrlo široko koriste. Prilikom završetka radova sa infektivnim materijalom zaposleni u bakteriološkim laboratorijama vrše preventivnu dezinfekciju ruku i radnog mjesta.

Potrošeni patološki materijal (izmet, urin, sputum, razne vrste tečnosti, krv) se dezinfikuje pre nego što se izbacuje u kanalizaciju.

Graduirane i Pasterove pipete, staklene lopatice i metalni instrumenti kontaminirani patološkim materijalom ili kulturom mikroba odmah nakon upotrebe spuštaju se u staklene tegle sa dezinfekcionim rastvorom koji se nalazi na stolu na svakom radnom mestu.

Stakalna i pokrovna stakla koja se koriste u radu također podliježu obaveznoj dezinfekciji, jer čak iu fiksiranom i obojenom razmazu ponekad ostaju živi mikroorganizmi koji mogu biti izvor unutarlaboratorijske kontaminacije. Dezinficijensima se ne tretiraju samo ona jela u kojima su uzgajani mikroorganizmi. Preklapa se u metalne rezervoare ili bikse, zatvara i predaje na autoklaviranje.

Izbor dezinficijensa, koncentracija njegove otopine, omjer količine dezinficijensa i materijala koji se dezinficira, kao i trajanje perioda dezinfekcije određuju se ovisno o specifičnim uvjetima, uzimajući u obzir prvo od svega, stabilnost mikroba koji se dezinfikuju, stepen očekivane kontaminacije, sastav i konzistencija materijala u kojem se nalaze.

Dezinfekcija ruku nakon rada sa infektivnim materijalom i kada dođe u kontakt sa kožom. Po završetku rada sa infektivnim materijalom, ruke se profilaktički dezinfikuju. Vata ili krpa od gaze se navlaži 1% otopinom kloramina, prvo se lijeva, a zatim desna ruka brišu sljedećim redoslijedom: stražnja strana šake, površina dlana, međudigitalni prostori, nokatna ležišta. Tako se prvo tretiraju najmanje kontaminirana područja, a zatim se prelaze na najjače kontaminirana područja kože. Obrišite ruke 2 minute sa dva tupfera uzastopno. Kada su ruke kontaminirane kulturom patogenog mikroba ili patološkog materijala, kontaminirana područja kože prvo se dezinficiraju. U tu svrhu prekrivaju se 3-5 minuta vatom navlaženom 1% rastvorom hloramina, zatim se pamuk baca u rezervoar ili kantu sa otpadnim materijalom, a ruke se tretiraju drugim štapićem u istom. način kao i tokom preventivne dezinfekcije. Nakon tretmana hloraminom, ruke se peru toplom vodom i sapunom. Prilikom rada s bakterijama koje stvaraju spore, ruke se tretiraju 1% aktiviranim kloraminom. Ako infektivni materijal dospije na ruke, izlaganje dezinficijensu se povećava na 5 minuta.

Sterilizacija

Sterilizacija, za razliku od dezinfekcije, podrazumijeva uništavanje svih vegetativnih i spornih, patogenih i nepatogenih mikroorganizama u steriliziranom predmetu. Sterilizacija se vrši na različite načine: parom, suvim toplim vazduhom, ključanjem, filtracijom itd. Izbor jedne ili druge metode sterilizacije određen je kvalitetom i svojstvima mikroflore predmeta koji se steriliše.

Priprema i sterilizacija laboratorijske opreme

Pre sterilizacije, laboratorijsko stakleno posuđe se opere i osuši. Epruvete, boce, boce, dušeci i tikvice se zatvaraju čepovima od pamučne gaze. Preko čepova na svaku posudu (osim epruveta) staviti papirnate kapice.

Gumeni, pluteni i stakleni čepovi se sterilišu u posebnoj vrećici vezanoj za vrat posude. Petrijeve zdjelice se steriliziraju umotane u papir, po 1-10 komada. Pasterove pipete, 3-15 kom. umotano u papir za umotavanje. U gornji dio svake pipete stavlja se komadić vate kako bi se spriječilo ulazak materijala u okolinu. Prilikom umotavanja pipeta treba paziti da se ne odlomi zapečaćeni krajevi kapilara. Tokom rada, pipete se vade iz pakovanja za gornji kraj.

Sigurnosna vata se ubacuje u gornji dio graduiranih pipeta, kao kod Pasteurovih pipeta, a zatim umotava u debeli papir, prethodno isečen na trake širine 2-2,5 cm i dužine 50-70 cm. Traka se postavlja na sto , njen lijevi kraj je presavijen i omotan njima vrh pipete, a zatim, rotirajući pipetu, omotajte traku papira oko njega. Da bi se spriječilo odvijanje papira, suprotni kraj je uvrnut ili zalijepljen. Zapremina umotane pipete je napisana na papiru. Ako postoje slučajevi, u njima se steriliziraju graduirane pipete.

Sterilizirajte laboratorijsko stakleno posuđe

a) suva toplota na 180°C i 160°C u trajanju od 1 sata, odnosno 150 minuta.

b) u autoklavu pod pritiskom od 1,5 atm. u roku od 60 minuta, za uništavanje mikroflore spora - 90 minuta na 2 atm.

Sterilizacija špriceva. Špricevi se sterilišu rastavljeni: odvojeno cilindar i klip u 2% rastvoru natrijum bikarbonata 30 minuta. Kada se radi sa mikroflorom koja nosi spore, sterilizacija se vrši u autoklavu na 132±2°C (2 atm.) 20 minuta, na 126±2°C (1,5 atm.) - 30 minuta. Sterilizirani špric se sakuplja nakon što se ohladi, u cilindar se ubacuje klip, stavlja se igla, nakon što se iz njega izvadi trn. Igla, cilindar i klip se uzimaju pincetom, koja se sterilizira zajedno sa špricem.

Sterilizacija metalnih instrumenata. Metalni instrumenti (makaze, skalpeli, pincete itd.) se sterilišu u 2% rastvoru natrijum bikarbonata, što sprečava rđu i gubitak oštrine. Preporučuje se da se oštrice skalpela i makaza omotaju vatom prije potapanja u otopinu.

Sterilizacija bakterijskih petlji. Bakterijske petlje napravljene od platinaste ili nikromske žice steriliziraju se u plamenu alkoholnog ili plinskog plamenika. Ova metoda sterilizacije naziva se kalcinacija ili plamen.

Petlja u vodoravnom položaju se dovodi u donji, najhladniji, dio plamena gorionika kako ne bi prskao izgorjeli patogeni materijal. Nakon što pregori, omča se prebacuje u vertikalni položaj, prvo donji, a zatim gornji dio žice se zagrije užareno i držač petlje se spali. Paljenje u cjelini traje 5-7 s.

Priprema za sterilizaciju i sterilizaciju papira, gaze i pamuka. Pamučna vuna, gaza, filter papir steriliziraju se u suhoj pećnici na temperaturi od 160 °C sat vremena od trenutka kada se temperatura pokaže termometrom ili u autoklavu pod pritiskom od 1 atm. u roku od 30 minuta.

Prije sterilizacije, papir i gaza se režu na komade, a vata se mota u obliku kuglica ili štapića željene veličine. Nakon toga se svaka vrsta materijala pojedinačno, jedan ili više komada, umotava u debeli papir. Ako je pakiranje slomljeno, sterilizirani materijal treba ponovo sterilizirati, jer je narušena njegova sterilnost.

Sterilizacija rukavica i ostalih proizvoda od gume. Gumeni proizvodi (rukavice, tube, itd.) kontaminirani vegetativnim oblikom mikroba steriliziraju se kuhanjem u 2% otopini natrijum bikarbonata ili na pari u trajanju od 30 minuta; kada je kontaminiran mikroflorom koja nosi spore, u autoklavu pod pritiskom od 1,5-2 atm. u roku od 30 ili 20 minuta. Prije sterilizacije gumene rukavice se iznutra i izvana posipaju talkom kako bi se zaštitile od lijepljenja. Između rukavica se polaže gaza. Svaki par rukavica se posebno umota u gazu i stavi u bicikle u ovom obliku.

Sterilizacija patogenih kultura mikroba. Epruvete i čaše sa mikrobnim kulturama koje nisu potrebne za dalji rad stavljaju se u metalni rezervoar, zatvaraju poklopac i predaju na sterilizaciju. Kulture patogenih mikroba, vegetativnih oblika, ubijaju se u autoklavu 30 minuta pod pritiskom od 1 atm. Isporuku rezervoara za sterilizaciju u autoklav vrši posebno određena osoba uz račun. Način sterilizacije se bilježi u posebnom dnevniku. Prilikom uništavanja kultura mikroba I i II grupe patogenosti, kao i materijala zaraženog ili za kojeg se sumnja da je inficiran uzročnicima iz ovih grupa, cisterne sa otpadnim materijalom se prebacuju na metalne posude sa visokim stranicama u prisustvu osobe koja je u pratnji. dozvoljeno je raditi sa infektivnim materijalom.

Vrste sterilizacije

Sterilizacija ključanjem. Sterilizacija kuhanjem se vrši u sterilizatoru. Destilirana voda se sipa u sterilizator, jer voda iz slavine stvara kamenac. (Stakljeni predmeti se uranjaju u hladnu, metalni predmeti u toplu vodu uz dodatak natrijum bikarbonata). Sterilizovani proizvodi se kuvaju na laganoj vatri 30-60 minuta. Početkom sterilizacije smatra se trenutak ključanja vode u sterilizatoru. Na kraju ključanja instrumenti se uzimaju sterilnom pincetom, koja se prokuva zajedno sa ostalim predmetima.

Sterilizacija suvom toplotom. Sterilizacija suvom toplotom se vrši u Pasteur pećnici. Materijal pripremljen za sterilizaciju stavlja se na police tako da ne dolazi u dodir sa zidovima. Ormar se zatvara i nakon toga se uključuje grijanje. Trajanje sterilizacije na temperaturi od 150°C je 2 sata, na 165°C - 1 sat, na 180°C - 40 minuta, na 200°C - 10-15 minuta (na 170°C okretanje papira i vate žuta, a na višoj temperaturi ugljenisana). Početak sterilizacije je trenutak kada temperatura u pećnici dostigne željenu visinu. Na kraju perioda sterilizacije, pećnica se isključuje, ali se vrata ormarića ne otvaraju dok se potpuno ne ohlade, jer hladni zrak koji ulazi u ormar može uzrokovati pukotine na vrućem posuđu.

Sterilizacija parom pod pritiskom. Sterilizacija parom pod pritiskom se vrši u autoklavu. Autoklav se sastoji od dva kotla umetnuta jedan u drugi, kućišta i poklopca. Vanjski kotao se naziva vodeno-parna komora, a unutrašnji se naziva sterilizaciona komora. Para se proizvodi u parnom kotlu. Materijal koji se steriliše stavlja se u unutrašnji kotao. U gornjem dijelu kotla za sterilizaciju postoje male rupe kroz koje prolazi para iz parne komore. Poklopac autoklava je hermetički pričvršćen za kućište. Osim navedenih glavnih dijelova, autoklav ima niz dijelova koji regulišu njegov rad: manometar, vodomjerno staklo, sigurnosni ventil, ispušni, zračni i kondenzacijski ventili. Manometar se koristi za određivanje pritiska koji se stvara u komori za sterilizaciju. Normalni atmosferski pritisak (760 mm Hg. Art.) uzima se kao nula, stoga je u autoklavu u praznom hodu igla manometra na nuli. Postoji određena veza između očitavanja manometra i temperature (tabela 2).

Tabela 2.

Odnos očitavanja manometra i tačke ključanja vode

Crvena linija na skali pokazuje maksimalni radni pritisak koji je dozvoljen u autoklavu. Sigurnosni ventil služi za zaštitu od prekomjernog povećanja pritiska. Postavlja se na unaprijed određen tlak, odnosno tlak pri kojem se sterilizacija treba izvršiti, kada strelica mjernog mjerača pređe liniju, ventil autoklava se automatski otvara i ispušta višak pare, čime se usporava daljnji porast tlaka .

Na bočnoj stijenci autoklava nalazi se mjerno staklo koje pokazuje nivo vode u parnom kotlu. Na cijevi vodomjernog stakla primjenjuju se dvije horizontalne linije - donja i gornja, koje označavaju dopušteni donji i gornji nivo vode u vodeno-parnoj komori. Vazdušni ventil je dizajniran da odvodi vazduh iz sterilizacionih i vodeno-parnih komora na početku sterilizacije, jer vazduh, kao loš provodnik toplote, krši režim sterilizacije. Na dnu autoklava nalazi se kondenzacijski ventil za oslobađanje komore za sterilizaciju od kondenzata koji nastaje tijekom zagrijavanja steriliziranog materijala.

Pravila autoklava. Prije početka rada pregledajte autoklav i instrumentaciju. U autoklavima sa automatskom kontrolom pare, strelice na elektrovakuum manometru komore vodene pare su postavljene u skladu sa režimom sterilizacije: donja strelica je postavljena na 0,1 atm. donji, gornji - za 0,1 atm. iznad radnog pritiska, vodeno-parna komora se puni vodom do gornje oznake mernog stakla. Za vrijeme punjenja vodom ventil na cijevi kroz koji para ulazi u komoru se drži otvoren kako bi slobodan zrak izašao iz kotla. Komora za sterilizaciju autoklava je napunjena materijalom koji se steriliše. Nakon toga, poklopac (ili vrata) autoklava se zatvara, čvrsto se pričvršćuje centralnom bravom ili vijcima; kako bi se izbjeglo izobličenje, vijci su ukršteni (u prečniku). Zatim uključite izvor grijanja (električna struja, para), zatvarajući ventil na cijevi koja povezuje izvor pare sa komorom za sterilizaciju. S početkom isparavanja i stvaranjem pritiska u vodeno-parnoj komori, vrši se pročišćavanje (vazduh se uklanja iz kotla za sterilizaciju). Način uklanjanja zraka određen je dizajnom autoklava. Najprije zrak izlazi u odvojenim dijelovima, zatim se pojavljuje ravnomjeran kontinuirani mlaz pare, što ukazuje da je zrak potpuno izbačen iz komore za sterilizaciju. Nakon uklanjanja zraka, ventil se zatvara i počinje postepeno povećanje tlaka u komori za sterilizaciju.

Početak sterilizacije je trenutak kada manometar pokazuje podešeni pritisak. Nakon toga, intenzitet grijanja se smanjuje tako da tlak u autoklavu ostaje na istom nivou potrebno vrijeme. Na kraju vremena sterilizacije, zagrijavanje se zaustavlja. Zatvorite ventil u cjevovodu koji dovodi paru u komoru za sterilizaciju i otvorite ventil na cijevi za kondenzat (dolje) kako biste smanjili tlak pare u komori. Nakon što igla manometra padne na nulu, polako otpustite stezne uređaje i otvorite poklopac autoklava.

Temperatura i trajanje sterilizacije određuju se kvalitetom materijala koji se steriliše i svojstvima mikroorganizama kojima je zaražen.

Kontrola temperature u komori za sterilizaciju vrši se periodično bakteriološkim testovima. Biotestove proizvode bakteriološke laboratorije Centralne epidemiološke službe. Ako ovi testovi ne uspiju, provjerava se tehničko stanje autoklava.

Sterilizacija parom. Sterilizacija tečnom parom vrši se u aparatu za tečnu paru Koch ili u autoklavu s odvrnutim poklopcem i otvorenim izlaznim ventilom. Koch aparat je metalni šuplji cilindar sa duplim dnom. Prostor između gornje i donje donje ploče ispunjen je vodom do 2/3 (postoji slavina za ispuštanje vode koja je ostala nakon sterilizacije). Poklopac aparata ima rupu u sredini za termometar i nekoliko malih otvora za izlazak pare. Materijal koji se steriliše labavo se ubacuje u komoru aparata kako bi se obezbedila mogućnost njegovog najvećeg kontakta sa parom. Početak sterilizacije je vrijeme od trenutka kada voda proključa i para uđe u komoru za sterilizaciju. U aparatu za tečnu paru steriliziraju se uglavnom hranjivi mediji čija se svojstva mijenjaju na temperaturama iznad 100°C. Sterilizaciju tekućom parom treba ponoviti, jer jedno zagrijavanje na temperaturi od 100 °C ne osigurava potpunu dezinfekciju. Ova metoda se naziva frakciona sterilizacija: tretiranje steriliziranog materijala tekućom parom provodi se 30 minuta dnevno tijekom 3 dana. U intervalima između sterilizacija materijal se drži na sobnoj temperaturi kako bi spore proklijale u vegetativne forme, koje uginu prilikom naknadnog zagrijavanja.

Tindalizacija. Tindalizacija je frakcijska sterilizacija korištenjem temperatura ispod 100°C, koju je predložio Tyndall. Zagrijavanje materijala koji se steriliše vrši se u vodenom kupatilu opremljenom termostatom sat vremena na temperaturi od 60-65°C 5 dana ili na 70-80°C 3 dana. Između zagrijavanja, obrađeni materijal se drži na temperaturi od 25°C kako bi spore proklijale u vegetativne forme, koje u narednim zagrijavanjima umiru. Tindalizacija se koristi za dehidrataciju hranjivih podloga koji sadrže protein.

Mehanička sterilizacija bakterijskim ultrafilterima. Bakterijski filteri se koriste za oslobađanje tečnosti od bakterija u njoj, kao i za odvajanje bakterija od virusa, faga i egzotoksina. Virusi se ne zadržavaju bakterijskim filterima, pa se ultrafiltracija ne može smatrati sterilizacijom u prihvaćenom smislu te riječi. Za proizvodnju ultrafiltera koriste se fino porozni materijali (kaolin, azbest, nitroceluloza itd.) koji mogu uhvatiti bakterije.

Azbestni filteri (Seitz filteri) su azbestne ploče debljine 3-5 mm i prečnika 35 i 140 mm za filtriranje malih i velikih količina tečnosti. U našoj zemlji se azbestni filteri proizvode u dva razreda: “F” (filterski), koji zadržavaju suspendovane čestice, ali prolazne bakterije, i “SF” (sterilizirajući), gušći, zadržavajući bakterije. Prije upotrebe, azbestni filteri se montiraju u filter aparate i zajedno s njima steriliziraju u autoklavu. Azbestni filteri se koriste jednokratno. Membranski ultrafilteri su napravljeni od nitroceluloze i predstavljaju bijele diskove prečnika 35 mm i debljine 0,1 mm.

Bakterijski filteri se razlikuju po veličini pora i označeni su serijskim brojevima (tablica 3).

Tabela 3

Bakterijski filteri

Membranski filteri se sterilišu ključanjem neposredno pre upotrebe. Filteri se stavljaju u destilovanu vodu zagrijanu na temperaturu od 50-60°C kako bi se spriječilo njihovo uvrtanje, kuhaju na laganoj vatri 30 minuta, mijenjajući vodu 2-3 puta. Sterilizirani filteri se vade iz sterilizatora flambiranim i ohlađenim pincetama sa glatkim vrhovima kako bi se izbjegla oštećenja.

Za filtriranje tekućina, bakterijski filteri se ugrađuju u posebne filterske uređaje, posebno u Seitz filter.

Sastoji se iz 2 dijela: gornjeg, u obliku cilindra ili lijevka, i donjeg nosećeg dijela aparata, sa tzv. filter stolom od metalne mreže ili čiste keramičke ploče, na kojem je membranski ili azbestni filter. je postavljen. Noseći dio aparata ima oblik lijevka, čiji se suženi dio nalazi u gumenom čepu grla Bunsenove tikvice. U radnom stanju, gornji dio uređaja je pričvršćen za donji vijcima. Prije početka filtracije spojevi različitih dijelova instalacije se pune parafinom kako bi se stvorila nepropusnost. Izlazna cijev tikvice spojena je gumenom cijevi debelog zida na mlaz vode, ulje ili pumpu za bicikl. Nakon toga, filtrirana tekućina se ulijeva u cilindar ili lijevak aparata i pumpa se uključuje, stvarajući vakuum u prijemnoj posudi. Kao rezultat nastale razlike tlaka, filtrirana tekućina prolazi kroz pore filtera u prijemnik. Mikroorganizmi ostaju na površini filtera.

Priprema razmaza

Za proučavanje mikroorganizama u obojenom obliku, bris se pravi na stakalcu, suši, fiksira i zatim boji.

Ispitni materijal se raširi u tankom sloju preko površine dobro odmašćenog staklenog tobogana.

Razmazi se pripremaju od kultura mikroba, patološkog materijala (sputum, gnoj, urin, krv itd.) i iz organa leševa.

Tehnika pripreme razmaza određena je prirodom materijala koji se proučava.

Priprema razmaza iz mikrobnih kultura sa tečnim hranljivim medijumom i iz tečnog patološkog materijala (urina, likvora itd.). Mala kap tečnosti za testiranje se nanosi bakterijskom petljom na staklo, a petlje se kružnim pokretima raspoređuju u ravnomernom sloju u obliku kruga prečnika novčića za peni.

Priprema razmaza krvi. Kap krvi se nanosi na staklo, bliže jednom od njegovih krajeva. Drugo – uglačano – staklo, koje treba da bude uže od stakla predmeta, postavlja se na prvo pod uglom od 45° i dovodi do kapi krvi dok ne dođe u dodir sa njim. Nakon što se krv proširi duž polirane ivice, staklo se klizi s desna na lijevo, ravnomjerno raspoređujući krv u tankom sloju po cijeloj površini stakla. Debljina poteza zavisi od ugla između stakala: što je ugao oštriji, to je tanji potez. Pravilno pripremljen razmaz ima svijetloružičastu boju i istu debljinu po cijeloj površini.

Priprema guste kapi. Kap krvi se nanosi na sredinu stakalca Pasteurom pipetom ili se staklo nanosi direktno na kap krvi koja strši. Krv nanesena na čašu se razmazuje bakterijskom petljom tako da promjer dobivenog razmaza odgovara veličini novčića. Čaša se ostavlja u vodoravnom položaju dok se krv ne osuši. Krv u "debeloj kapi" se neravnomjerno raspoređuje, formirajući neravnu ivicu.

Priprema razmaza od viskoznog materijala (sputum, gnoj). Sputum ili gnoj natopljen na predmetnom predmetu bliže uskom rubu prekriva se drugim stakalcem. Čaše su blago pritisnute jedna uz drugu.

Nakon toga slobodne krajeve naočala hvataju 1 i 2 prsta obje ruke i rašire u suprotnim smjerovima tako da pri kretanju obje čaše dobro priliježu jedna uz drugu. Razmazi se dobijaju ravnomerno raspoređenim materijalom koji zauzimaju veliku površinu.

Priprema razmaza iz kultura sa gustim hranjivim podlogama. Kap vode se nanosi na sredinu čistog, dobro odmašćenog staklenog stakala, u njega se uvodi bakterijska petlja s malom količinom proučavane mikrobne kulture, tako da kap tekućine postaje blago zamućena. Nakon toga, višak mikrobnog materijala na petlji se spaljuje u plamenu i priprema se bris prema gore navedenoj metodi.

Priprema briseva iz organa i tkiva. U svrhu dezinfekcije, površina organa se kauterizira zagrijanim granama pincete, na tom mjestu se napravi rez, a iz dubine se šiljastim makazama izreže mali komadić tkiva koji se stavlja između dva stakla. . Zatim postupite na isti način kao i kada pripremate bris od gnoja i sputuma. Ako je tkivo organa gusto, tada se skalpelom vrši struganje iz dubine reza. Materijal koji se dobije struganjem razvlači se u tankom sloju po površini stakla skalpelom ili bakterijskom omčom.

Da bi se proučio relativni položaj elemenata tkiva i mikroorganizama u njemu, izrađuju se brisevi. Da bi se to postiglo, mali komad tkiva izrezan iz sredine organa se hvata pincetom i nanosi nekoliko puta uzastopno sa izrezanom površinom na staklo, čime se dobija niz mrlja-otisaka.

Sušenje i fiksiranje razmaza. Razmaz pripremljen na predmetnom predmetu se suši na vazduhu i fiksira nakon potpunog sušenja. Prilikom fiksiranja, razmaz se fiksira na površini predmetnog stakla, pa se pri naknadnom bojenju preparata mikrobne ćelije ne ispiru. Osim toga, ubijene mikrobne ćelije bolje se boje od živih.

Pravi se razlika između fizičke metode fiksacije, koja se zasniva na dejstvu visoke temperature na mikrobnu ćeliju, i hemijskih metoda koje uključuju upotrebu agenasa koji izazivaju koagulaciju proteina. Nemoguće je fiksirati briseve koji sadrže patogene I-II grupe patogenosti preko plamena.

Fizički način fiksiranja. Stakleno staklo sa preparatom uzima se pincetom ili I i II prstima desne ruke iza rebara potezom prema gore i laganim pokretom 2-3 puta preko gornjeg dela plamena gorionika. Cijeli proces fiksacije ne bi trebao trajati više od 2 s. Pouzdanost fiksacije se provjerava sljedećom jednostavnom tehnikom: površina staklenog stakalca slobodna od mrlje nanosi se na stražnju površinu lijeve ruke. Uz pravilnu fiksaciju razmaza, staklo bi trebalo biti vruće, ali ne izaziva osjećaj opekotina.

Hemijska fiksacija. Hemikalije i spojevi prikazani u Tabeli 4 također se koriste za fiksiranje mrlja.

Tabela 4

Supstance za hemijsku fiksaciju

Stakalca sa osušenim razmazom uroni se u bocu sa sredstvom za fiksiranje i zatim se suši na zraku.

Bojenje poteza

Tehnika bojenja mrlja. Za bojenje mrlja koriste se otopine boja ili papir za bojenje, što je predložio A.I. Plava. Lakoća pripreme, jednostavnost upotrebe, kao i mogućnost čuvanja papira za bojanje na neograničeno dugo vrijeme, bili su osnova za njihovu široku primjenu u različitim metodama bojanja.

Bojanje poteza papirom za bojanje. Na osušeni i fiksirani preparat nanosi se nekoliko kapi vode, stavljaju se papiri u boji veličine 2x2 cm.Za sve vreme bojenja papir treba da ostane vlažan i da dobro pristaje uz staklenu površinu. Prilikom sušenja, papir se dodatno navlaži vodom. Trajanje bojenja razmazom određuje se metodom bojenja. Na kraju bojenja papir se pažljivo uklanja pincetom, a bris se ispere vodom iz slavine i suši na zraku ili filter papiru.

Bojenje mrlja rastvorima boja. Na osušeni i fiksirani preparat se pipetom nanosi boja u tolikoj količini da pokrije cijeli razmaz. Prilikom bojenja mrlja koncentriranim otopinama boja (Ziehl carbolic fuchsine, carbolic gentian ili crystal violet), bojenje se provodi kroz filter papir koji zadržava čestice boje: traka filter papira se stavlja na fiksni razmaz i na njega se izlije otopina boje. to.

Za mikroskopski pregled, pripremljeni razmazi, osušeni i fiksirani, se boje. Bojanje je jednostavno i složeno. Jednostavno bojenje se sastoji u nanošenju bilo koje boje na mrlju u određenom vremenskom periodu. Za jednostavno bojenje najčešće se koriste alkohol-voda (1:10) Pfeiffer fuksin, Lefflerovo metilen plavo i safranin. Eozin, kao kisela boja, koristi se samo za bojenje citoplazme stanica i nijansiranje pozadine. Kiseli fuksin je potpuno neprikladan za bojenje bakterija.