A bakteriológiai diagnosztika általános sémája. A bakteriológiai kutatási módszer szakaszai
20. A bakteriológiai kutatási módszer jellemzői
Kulturális (bakteriológiai) kutatási módszer - olyan módszerek összessége, amelyek a mikroorganizmusok (baktériumok) tiszta kultúráinak izolálására és azonosítására irányulnak tápközegen végzett tenyésztéssel.
A tiszta kultúra ugyanazon fajhoz tartozó mikroorganizmusok gyűjteménye. Leggyakrabban egy izolált telep (egyetlen mikrobasejt utóda) kiválasztásával és tenyésztésével nyernek tiszta tenyészetet.
A módszer lépései:
1. Anyaggyűjtés a kutatáshoz.
2. A tiszta kultúra izolálása és azonosítása.
3. Következtetés.
Anyaggyűjtés kutatáshoz. A vizsgált anyag típusa a vizsgálat céljától függ (diagnózis - a betegtől; epidemiológiai elemzés - a környezetből, az élelmiszerből, a betegből és (vagy) a baktériumhordozóból).
A tiszta kultúra elszigeteltsége. 3 vagy 4 szakaszt tartalmaz:
1. Az anyag vetése (előzetes mikroszkópos vizsgálat után) egy csészébe sűrű tápközeggel (lehetőleg differenciáldiagnosztikai vagy szelektív) izolált telepek kinyerése érdekében. Leggyakrabban mechanikai elválasztási módszerrel állítják elő. Egyes esetekben (például vér) az anyagot folyékony dúsító táptalajba előzetesen beoltják, majd agar táptalajt tartalmazó tányéron áttenyésztik. Néha az anyag szelektív kezelését végzik az oltás előtt (figyelembe véve az izolált mikroorganizmus tulajdonságait; például savval vagy lúggal történő kezelés a rezisztens baktériumok izolálására). 37°C-os hőmérsékleten tenyésztik 18-24 óráig. A különböző típusú baktériumok tenyésztési ideje eltérő lehet.
2(3): a) a telepek vizsgálata agarlemezen (kultúrajegyek), a legjellemzőbbek kiválasztása; b) kenet készítése ezekről a telepekről festéssel (Gram vagy más módszer szerint); a) a vizsgált telep többi részének kiszűrése az akkumulációs táptalajon és termosztátban az optimális hőmérsékleten történő tenyésztése.
3. (4) bekezdése alapján. Az akkumulációs táptalajon nyert tenyészet tisztaságának vizsgálata. Ezzel
a cél kenet készítése, festés (általában Gram szerint), mikroszkópos vizsgálat
morfológiai és színárnyalati homogenitás (különböző látómezőkben).
4. (5) bekezdése alapján. Tiszta kultúra azonosítás.
Következtetés. A jellemzők összessége alapján a referencia (tipikus) törzsek tulajdonságaival összehasonlítva az anyagból izolált mikroorganizmus típusát jelzik.
A módszer értékelése:
előnyei: viszonylag nagy érzékenység és pontosság, a vizsgált anyagban lévő mikrobák számának meghatározására való képesség, valamint az antibiotikumokkal szembeni érzékenység; korlátozások: relatív időtartam, a módszer drága.
21. Tápláló táptalajok aerobok és anaerobok számára. A táptalajokra vonatkozó követelmények, osztályozás.
Követelmények:
tápanyagnak táplálónak kell lennie
bizonyos ph-val kell rendelkeznie
izotóniásnak kell lennie, pl. a közegben az ozmotikus nyomásnak meg kell egyeznie a sejtben lévővel.
nedvesnek és nem túl folyósnak kell lennie
rendelkeznie kell bizonyos redox potenciállal
sterilnek kell lennie
egységesnek kell lennie, i.e. állandó mennyiségben tartalmazzák az egyes összetevőket.
A tápközeg felosztható:
A) Eredet
1) természetes - természetes élelmiszer (hús, tej, burgonya);
2) mesterséges - speciálisan mikrobák tenyésztésére előkészített táptalajok: - természetes termékekből származó táptalajok (húsvíz, hús-pepton leves (MBB), hús-pepton agar (MPA), - nem állandó összetételű; - szintetikus táptalajok - szigorúan alkalmazott oldatok meghatározott mennyiségű sók, aminosavak, nitrogéntartalmú bázisok, vitaminok desztillált vízben - állandó összetételűek, mikroorganizmusok és sejtkultúrák tenyésztésére használják vakcinák, immunszérumok és antibiotikumok előállításához;
B) Megbeszélés szerint:
1) általános célú (MPB, MPA) - a legtöbb mikroba nő rajtuk;
2) választható - szelektíven elősegítik egyfajta mikrobák növekedését keverékből (például sárgája-só agar a staphylococcusokhoz);
3) differenciáldiagnosztika - lehetővé teszi, hogy egy mikrobát a környezet megjelenése alapján meg lehessen különböztetni a többitől (például Endo, Levin táptalaj a mikrobák bélrendszeri csoportjához).
Ráadásul attól függően felhasználási célokra A tiszta kultúrák izolálásának sémájában a következő táptalajokat lehet megkülönböztetni a cél szerint:
1) dúsítás - gátolja a kórokozóhoz kapcsolódó mikrobák növekedését;
2) izolált telepek előállítása;
3) a tiszta kultúra felhalmozódása;
B) Konzisztencia:
1) folyékony;
2) félig folyékony (agar-agar hozzáadásával 0,5-0,7% koncentrációban);
3) sűrű - 1% felett.
A bakterioszkópos módszer lényege: mikrobák kimutatása a vizsgált anyagban; a morfológiai és színárnyalati tulajdonságaik vizsgálata, a bakteriológiai kenetben való elhelyezkedés jellege a látómezőben.
Végrehajtási technika. A páciensből származó anyagot vizuálisan tanulmányozzák, kiválasztják azt a részt, amelyben a betegség kórokozója (nyálkahártya, gennyes dugók) a legnagyobb valószínűséggel kimutatható. Egy tárgylemezre alkalmazzák (néha az anyagot előzetesen sóoldatban emulgeálják, ritkábban centrifugálják). A cseppet szétterítjük az üvegen, megszárítjuk és rögzítjük. Ezt követően a kenetet megfestik, és a készítményt mikroszkóp alatt nézik. A kenet általában Gram-festett. Néha, mint a legkíméletesebb, az egyszerű festési módszerek egyikét alkalmazzák, majd a készítményt egy festékkel festik (például meningococcus fertőzés, kolera diagnosztizálására).
Szükség esetén speciális, kifinomult festési módszereket alkalmaznak, mint például a Burri-Gins módszer a tokszerű szervezetek kimutatására, vagy a Ziehl-Neelsen módszer a saválló baktériumok kimutatására. Egyes esetekben (különösen a mikroorganizmusok motoros aktivitásának tanulmányozásakor) „függő csepp” és „zúzott csepp” készítményeket készítenek, és a festetlen baktériumokat mikroszkóppal vizsgálják.
A bakterioszkópos módszer előnyei: a végrehajtás egyszerűsége, a gyors eredmények elérése, a műszaki és gazdasági hozzáférhetőség.
A módszer hátrányai: a mikroorganizmusok típusának meghatározásához gyakran nem elegendő a morfológiai tulajdonságaik meghatározása, mivel a rokon fajok képviselőiben azonosak. Ezenkívül a jellegzetes morfológiájú baktériumok gyakran változásokon mennek keresztül, különösen az antibiotikumok hatására, és felismerhetetlenné válnak; végül a vizsgált anyagban a kórokozók koncentrációja rendkívül alacsony lehet, és ekkor nehéz kimutatni őket.
A fentiekre tekintettel a bakterioszkópos módszert ritkán alkalmazzák a betegség etiológiájának egyetlen és végső módjaként. Gyakrabban indikatív, előzetes, és egyes fertőző betegségek diagnosztizálásában egyáltalán nem biztosítják.
Hogyan lehet megérteni a tájékozódást és az előzetest? Ez vonatkozik a klinikusra és a bakteriológusra. Az előzetes (pozitív vagy negatív) választ kapott klinikus a kapott információkat kisebb-nagyobb mértékben felhasználja további vizsgálatai során a bakteriológiai diagnosztikai módszer végeredményének megszerzéséig. A bakteriológus, miután indikatív információkat kapott a feltételezett kórokozóról, annak koncentrációjáról a felhasznált anyagban, az egyidejű mikroflóra jelenlétéről, meghatározza az anyag feldolgozásának és a kórokozó tiszta tenyészetének izolálásának módszereit, kiválasztja a táptalajt a későbbi tenyésztéshez.
Bakteriológiai módszer
A módszer lényege a mikroba - kórokozó tiszta tenyészetének izolálása a kóros anyagból, morfológiai, tinctoriális, kulturális, biokémiai, szerológiai tulajdonságainak részletes vizsgálata a kórokozó későbbi azonosítása céljából. A bakteriológiai kutatási módszer alkalmazásakor 4 szakaszt különböztetnek meg.
A. A bakterioszkópos vizsgálat során kapott adatok figyelembevételével kiválasztják a leghatékonyabb táptalajokat, amelyeken a legnagyobb valószínűséggel lehetséges az állítólagos mikrobák - kórokozók - kultúrájának növekedése.
B. A vizsgálati anyagot számos táptalajra vetik: folyékony és szilárd, univerzális, elektív-szelektív, differenciáldiagnosztikai. Ugyanakkor a sűrű tápközeggel rendelkező Petri-csészékre történő vetést bakteriológiai hurokkal, ütéssel hajtják végre, hogy biztosítsák az egymástól izolált mikrobiális telepek növekedésének lehetőségét (használhatja a Drygalsky-módszert vagy egy másikat is mikroorganizmus-tenyészetek elválasztásának módszere).
A. Tanulmányozzák a táptalajokon termesztett mikroorganizmusok tenyésztési tulajdonságait; gyanús kolóniákat választanak ki. Hangsúlyozni kell, hogy a gyanús telepek kiválasztása a munka legfontosabb és legnehezebb szakasza. Elsősorban a mikrobakolóniák jellemző tulajdonságainak meghatározásán alapul, de gyakran ez nem teszi lehetővé az egyes fajok mikrobakolóniáinak megkülönböztetését, és szükség van a gyanús telepekről származó kenetekben lévő mikrobák morfológiájának, a mikroorganizmusok szaporodási jellemzőinek további tanulmányozására. differenciáldiagnosztikai közegek stb. A tiszta baktériumkultúrák izolálása és vizsgálata folyékony akkumulációs táptalajon végzett előzetes inokulációval is elvégezhető, de ebben az esetben további kutatási idő szükséges.
B. A gyanús telepekről bakteriológiai kenetet készítünk, Gram szerint és mikroszkóposan megfestjük (a mikroorganizmusok azonossága az 1. szakaszban mikroszkópos vizsgálat során vizsgált mikroorganizmusokkal). C. A gyanús telep többi részéből a tenyészetet metszett hús-pepton agarra visszük át (más tápközeg is használható, amelyen az izolált mikroorganizmusok jó szaporodása várható). A cél a mikroba - a betegség állítólagos kórokozója - tiszta kultúrájának felhalmozása, mert. a vizsgálat következő szakaszában sok mikrobiális tömegre lesz szükség.
A javasolt kórokozó szacharolitikus tulajdonságait (az oltás tarka táptalajokon, Olkenitsky, Ressel táptalajokon stb.), proteolitikus aktivitását (zselatinra, tejre való oltás Tukaev szerint, indol és hidrogén-szulfid képződésének meghatározása a növekedés során) vizsgálják. hús-pepton húsleves). Az izolált tenyészetek antibiotikumokra való érzékenységét vizsgálják (gyakrabban szabványos papírkorongok, ritkábban sorozathígítások módszerével). A szerotipizálást az agglutinációs reakcióban végezzük üvegen csoportos és tipikus diagnosztikai szérummal; fágtipizálás standard diagnosztikai bakteriofágokkal. Egyes esetekben a baktériumok patogenitási tényezőit vizsgálják azonosítás céljából.
Az elvégzett kutatás eredményeit figyelembe veszik. A mikroorganizmusokban azonosított tulajdonságok (morfológiai, tinctoriális, kulturális, biokémiai, szerológiai stb.) összehasonlítása alapján azonosítják a mikrobákat. A végső választ egy bakteriológiai vizsgálat eredményeivel adják ki, amely jelzi a kórokozó típusát (esetenként szerotípusát, biovariánsát, fágtípusát) és antibiotikumokkal szembeni érzékenységét.
A megbízható eredmények elérése érdekében gyakran biológiai, allergológiai vagy egyéb kutatási módszerek előzik meg a válaszadást.
A bakteriológiai diagnosztikai módszer előnyei: a kutatási eredmények nagy megbízhatósága; további adatok beszerzésének lehetősége az izolált kórokozók antibiotikumokkal szembeni érzékenységére vonatkozóan; epidemiológiai vizsgálatok lefolytatásának lehetősége.
A módszer hátrányaira magában foglalhatja a vizsgálat időtartamát (legalább 4-5 nap), valamint alkalmazásának lehetetlenségét olyan esetekben, amikor a kórokozók (pl. rickettsia, chlamydia) fertőzései nem szaporodnak mesterséges táptalajokon.
biológiai módszer
Egyes esetekben a fertőző betegségek diagnosztizálásának optimalizálása érdekében biológiai módszert (bioassay) alkalmaznak, amely a laboratóriumi állatok megfertőzését foglalja magában. Ebben az esetben a kutatónak különböző céljai lehetnek:
A betegség klinikai és patoanatómiai képének reprodukciója (például tetanusz, leptospirosis diagnosztizálásában);
A kórokozó tiszta tenyészetének rövid időn belüli izolálása (a pneumococcus fertőzés diagnosztizálásában);
A kórokozó virulenciájának és patogenitásának meghatározása (tuberkulózis diagnosztikában);
A toxinok típusának és típusának meghatározása (a botulizmus diagnózisában)
A fertőző betegségek diagnosztizálására különféle állatokat használnak. Választásukat a fajok különféle etiológiai ágensekkel szembeni érzékenysége határozza meg. Például az egerek érzékenyek a pneumococcus fertőzésre, lépfenére, tetanuszra; tengerimalacok - tuberkulózis, brucellózis, tularémia kórokozóira; nyulak - staphylococcusokra, streptococcusokra, botulizmusra. A vizsgálathoz csak egy bizonyos korú és testtömegű egészséges állatokat választanak ki.
Az anyag bevezetése előtt az állatokat rögzítjük. A kisállatokat a kísérletvezető tartja, a nagytestű állatokhoz speciális eszközöket használnak. A fertőzött anyag injekciójának helyét alkohollal vagy jóddal kezelik. A fertőzött anyagot szubkután, bőrön, intravénásan, intraperitoneálisan, intracerebrálisan stb. adjuk be, a vizsgált betegség patogenezisének jellemzőitől függően.
Nál nél bőr módszer fertőzések előre levágják a gyapjút, sértik a bőrt, majd dörzsölik bele az anyagot.
Szubkután módszer: az állatok bőrét redőben, lehetőleg csipesszel befogják, a tűt félig szúrják, az injekció beadása után alkoholos vattacsomót helyeznek rá, és a tűt eltávolítják.
Intramuszkuláris módszer: az anyagot a hátsó végtag felső részének izomszövetébe fecskendezik.
Intraperitoneális módszer: az állatot fejjel lefelé kell tartani, hogy ne sértse meg a beleket. Az injekciót az alsó hasba, a középvonal oldalán adják be. A hasfalat rángatózó mozdulattal átszúrjuk, a fecskendő derékszögben áll.
Intravénás módszer: egerek, patkányok injektálnak anyagot - a farokvénába vagy intrakardiálisan. A nyulat injekciózzák - a fülvénákba, amelyek felületesen helyezkednek el és jól láthatóak (jobb a külső véna szúrása). Az injekció beadása után az injekció helyét alkoholos vattával rögzítik, hogy ne legyen vérzés. Az intrakardiális fertőzésben szenvedő tengerimalacokat tűvel a szív „sokkjának” magasságában fecskendezik be a bordaközi térbe. Ha a tűt megfelelően szúrja be, vér jelenik meg a fecskendőben.
Eszközök és anyagok előkészítése: a fecskendőket, szikéket, tűket forralással sterilizáljuk. Az anyagot felszívjuk a fecskendőbe (kicsit többet, mint amennyi a bejutáshoz szükséges), függőlegesen felfelé fordítjuk, fedjük le a tűt steril vattával, és dugattyúval nyomjuk ki a levegőbuborékokat a fecskendőből. Ezt a manipulációt fertőtlenítő oldat felett végezzük.
Méreganyag (botulin, lépfene) hatására fellépő fertőzések diagnosztizálásánál a feltehetően kórokozót és méreganyagokat tartalmazó anyagot sóoldatba helyezik, majd talkummal dörzsölt papírszűrőn átszűrik (jól adszorbeálja a toxint). Az érzékeny állatokat szűrőpálcikákkal fertőzik meg. Egyes esetekben, amikor a betegség patogenezise magának a kórokozónak a patogén tulajdonságainak köszönhető, az állatok mikrobiális szuszpenzióval fertőződnek meg.
A fertőzött fehér egereket felcímkézik és speciális üvegedényekbe helyezik; címkével vannak felragasztva, amely jelzi a fertőzés időpontját és a mikroorganizmus típusát, amellyel a munkát végezték. Ugyanígy aláírják a fertőzött nyulakat vagy tengerimalacokat tartalmazó ketreceket is. Az állatokat figyelik. Halál esetén azonnal kinyitják.
A fehér egerek boncolása előtt az állatokat előzetesen étergőzzel elaltatjuk. Az egereket rövid időre fertőtlenítő oldatba merítjük, majd a mancsainál fogva a hasukat felfelé helyezzük küvettába. Meg kell jegyezni a külső kóros elváltozások jelenlétét vagy hiányát. A bőrmetszés a szeméremtesttől az alsó állkapocsig hosszirányban, a végtagok felé keresztirányban történik. Megfigyelhető a bőrszövet és a nyirokcsomók állapotának változása. Ez utóbbiakból készíts keneteket-lenyomatokat. A mellüreg vizsgálatához a szegycsontot úgy távolítjuk el, hogy mindkét oldalon ollóval bemetszjük a bordákat. Külső vizsgálat után a szív darabjait levágják és a BCH-ba helyezik. A vetés közvetlenül az MPA kenetekre-lenyomatokra történik a szívből, a tüdőből.
A hasüreget kinyitják, külső vizsgálat során megjegyzik a belső szervek állapotát (méret, szín, konzisztencia, gennyes gócok jelenléte). Ne növények a máj, a lép és a kenet nyomatok.
A munka steril eszközökkel történik, minden szervfelvétel után csipeszt és ollót leeresztenek egy pohár alkoholba és elégetik.
A boncolás után a holttestet és a küvettát, ahol a boncolást végezték, egy napig fertőtlenítőszerrel öntik le.
A növényeket 24 órán át (szükség esetén tovább) inkubáljuk
t 37 körül C. Ezután megvizsgálják, a kórokozó tiszta tenyészetét izolálják és bakteriológiai módszerrel azonosítják.
A módszer előnyei: a kapott eredmények megbízhatósága, nincs szükség bonyolult berendezésekre.
Hibák: magas költség, korlátozott használat, fertőzésveszély.
Hasonló információk.
CÉL:
1. Tanulmányi módszerek tiszta baktériumkultúrák izolálására
2. Sajátítsa el a fertőző betegségek diagnosztizálásának bakteriológiai módszerét.
ELMÉLETI HIVATKOZÁS
Bakteriológiai módszer a fertőző betegségek diagnosztizálásának fő módszere. Lényege a fertőző ágens típusának meghatározása, ezért a bakteriológiai módszer eredményei alapján etiológiai (végső) diagnózis állítható fel. A módszer fő hátránya a vizsgálat időtartama - 3-5 nap, és bizonyos esetekben még több.
A bakteriológiai módszer sikere nagymértékben függ az előzetes szakasztól, beleértve a vizsgálati anyag mintavételét és szállítását, valamint a bakteriológiai laboratóriumba történő beutaló megtervezését. Ebben az esetben számos szabályt be kell tartani.
1. Kerítés A vizsgálati anyag vizsgálatát az antibiotikum terápia megkezdése előtt vagy az utolsó antibiotikum adag beadása után 8-10 órával kell elvégezni. A minta környezeti mikroflórával való szennyeződésének elkerülése érdekében a legszigorúbb aszepszis betartása szükséges. Ehhez használjon steril anyagokat: a) pamut törlőkendő anyag felvételéhez a sebből, a nyálkahártyákról (szem, garat, orr); b) dróthurok a hüvelyből, végbélnyílásból történő anyagfelvételhez; c) fecskendő vér, genny vételére; d) steril edények a vizelet, köpet, széklet közvetlen összegyűjtésére.
2. Szállítás A beérkezett anyagot a lehető leghamarabb (2-3 óra) kell előállítani speciális biciklikben vagy tolltartókban.
3. Irány a klinikai mintához csatolva, mint kísérő dokumentum. A mikrobiológiai vizsgálat elvégzéséhez szükséges alapvető információkat tartalmazza:
a beteg vezetékneve, neve, családneve, életkora;
A betegség javasolt diagnózisa;
Előzetes antimikrobiális terápia;
Az anyag jellege;
az anyag felvételének dátuma és időpontja;
A tanulmány célja;
Az egészségügyi intézmény neve, osztály, osztály száma;
Az orvos aláírása.
A bakteriológiai módszer két szakaszban történik (2.1. ábra):
1. A kórokozó tiszta tenyészetének izolálása (1-2 nap);
2. Tiszta tenyészet azonosítása (1-3 nap).
Az első szakaszban a vizsgálati anyagot szilárd vagy folyékony táptalajra vetik, értékelik a tenyésztési tulajdonságokat, kiválasztják a gyanús telepeket, és ferde agaron szűrik. Az azonosítási szakasz magában foglalja az izolált tiszta tenyészet morfológiájának, biokémiai tulajdonságainak és antigénszerkezetének kötelező vizsgálatát, valamint további vizsgálatokat az antibiotikum-érzékenység, a fágérzékenység, a fágtipizálás, a patogenitás és a perzisztens tulajdonságok meghatározására.
ELŐKÉSZÜLÉSI KÉRDÉSEK:
1. A vizsgálati anyag bakteriológiai vizsgálatra történő begyűjtésének és szállításának szabályai.
2. Bakteriológiai vizsgálatra történő beutaló kiadásának szabályai.
3. Módszerek a mikroorganizmusok tiszta kultúráinak izolálására.
4. Bakteriológiai diagnosztikai módszer. Cél. Szakasz. diagnosztikai érték.
ÖNÁLLÓ MUNKATERV:
1. Tanulmányozza a "Módszerek a baktériumok tiszta tenyészeteinek izolálására" és a "Tiszta kultúrák izolálása és azonosítása" táblázatokat.
2. Tiszta tenyészet izolálása baktériumkeverékből és azonosítása – a bakteriológiai diagnosztikai módszer elsajátítása (1. munka)
4.2. BIOLÓGIAI ÉS MIKROBIOLÓGIAI TÉNYEZŐK
A tífusz és paratífusz A, B és C bakteriológiai diagnosztikája
A bevezetés időpontja: a jóváhagyás pillanatától
1. FEJLESZTETT: FGUN St. Petersburg NIIEM őket. Rospotrebnadzor Pasteur (L.A. Kaftyreva, Z.N. Matveeva, G.F. Trifonova); GOUVPO "I. I. Mechnikovról elnevezett Szentpétervári Állami Orvosi Akadémia", a Szövetségi Egészségügyi és Szociális Fejlesztési Ügynökség (A.G. Boytsov).
3. JÓVÁHAGYVA a Fogyasztói Jogok Védelmét és Emberi Jólétét Felügyelő Szövetségi Szolgálat vezetője, az Orosz Föderáció állami egészségügyi főorvosa, G. G. Oniscsenko 2007. december 29. 0100/13745-07-34
4. BEVEZETÉS a jóváhagyás pillanatától.
5. ELŐSZÖR BEVEZETÉS.
1 felhasználási terület
1 felhasználási terület
1.1. Az irányelvek rögzítik a tífusz és paratífusz A, B és C bakteriológiai diagnosztikájának alapelveit és jellemzőit; modern információkat tartalmaz a kórokozók biológiai tulajdonságairól, az antibakteriális gyógyszerekkel szembeni rezisztenciáról, az izolálásukhoz szükséges tápközegekről, valamint a tífusz és paratífusz kórokozóinak a Salmonella más szerológiai változataitól való megkülönböztetésének jellemzőiről.
2. Rövidítések listája
ABP - antibakteriális gyógyszer
BCA - bizmut-szulfit agar
MPU - egészségügyi és megelőző intézmény
MIC – minimális gátló koncentráció
P - köztes
U - stabil
H - érzékeny
RIF - immunfluoreszcens reakció
CNS - központi idegrendszer
A táblázatokban:
"+" - pozitív reakció az első napon;
"-" - negatív reakció 4-20 napig;
"(+)" - késleltetett pozitív reakció 2-20 napig;
d - különféle enzimatikus reakciók.
Lehetséges az enzimes változatokra való differenciálás.
3. Általános rendelkezések
3.1. A tífusz és a paratífusz A, B és C antroponotikus bélfertőzések, amelyeket Salmonella Typhi, Salmonella Paratyphi A, Salmonella Paratyphi B és Salmonella Paratyphi C. ritkán - paratífusz C. okoz.
3.2. A betegségekre jellemzőek a vékonybél nyirokrendszerének fekélyes elváltozásai, bakteremia, láz, súlyos mérgezéssel járó ciklikus klinikai lefolyás, rózsás bőrkiütés a test bőrén, máj- és lépmegnagyobbodás. A székrekedés gyakoribb, mint a hasmenés. Az ileum Peyer-foltjainak fekélyesedése az esetek körülbelül 1%-ában bélvérzéshez és a bélperforációhoz vezet, ami a legkedvezőtlenebb következményekkel jár a betegre nézve.
3.3. A tífusz és paratífusz A, B és C diagnózisa a betegség klinikai tünetei alapján történik, figyelembe véve a járványtörténetet és a klasszikus bakteriológiai és szerológiai módszereket is magában foglaló átfogó laboratóriumi vizsgálat adatait. A bakteriológiai diagnosztika kiemelt fontosságú, mert ebben az esetben lehetőség nyílik a legteljesebb információ megszerzésére a kórokozó biológiai tulajdonságairól, beleértve az antibakteriális gyógyszerekkel szembeni érzékenységét is.
3.4. A tífusz és paratífusz etiotróp terápiájában az antimikrobiális szerek alkalmazása lehetővé tette egyrészt a mortalitás 10-20%-ról 1% alá való csökkentését, másrészt megnehezítette a laboratóriumi diagnózist, mert A laboratóriumi kutatásokhoz szükséges anyagmintavétel gyakran az antibiotikum-terápia megkezdése után történik. Ez a tény szükségessé teszi a kutatási anyag kiválasztásának, a vizsgált anyag és a kutatási technikák körültekintésének kérdését.
3.5. A tífusz epidemiológiájának modern jellemzője a fertőzések behozatalának (szállításának) gyakoriságának meredek növekedése a betegségben endemikus területekről, a közeli és távoli külföldi országokból, valamint az orosz lakosok fertőzése, amikor ezekbe az országokba távoznak. az országon belüli migráció folyamatában. Egy másik jellemző a magas járványügyi kockázatú nagy kontingens jelenléte állandó lakóhellyel nem rendelkező személyek formájában, akik között magas a tífusz előfordulása.
3.6. Ezen irányelvek a tífusz és paratífusz A, B és C bakteriológiai diagnosztikai módszereinek egységesítése, valamint a laboratóriumi vizsgálat eredményeinek helyes értelmezése érdekében készültek, figyelembe véve a klinika modern adottságait, kezelés és járványügyi helyzet bizonyos területeken.
4. Bakteriológiai diagnosztika indikációi
A tífusz és paratífusz A, B és C kórokozóinak jelenlétére vonatkozó biológiai anyag bakteriológiai vizsgálatának indikációja a vizsgálat szükségessége:
4.1) tífuszgyanús, valamint 5 vagy több napig tartó, ismeretlen eredetű lázban szenvedő betegek;
4.2) tífuszos és paratífuszos A, B, C betegekkel érintkező személyek;
4.3) egyes szakmák, iparágak és szervezetek alkalmazottai munkavállaláskor és járványügyi indikációk alapján;
4.4) a klinikai és járványügyi javallatok szerinti kórházi és szakszanatóriumi felvétel előtt;
4.5) pszicho-neurológiai (pszichoszomatikus) profilú kórházakban (osztályokon), idősek otthonában, krónikus elmebetegek és központi idegrendszeri elváltozásokban szenvedők bentlakásos iskoláiban, valamint más típusú, éjjel-nappal működő zárt intézetekben fekvőbeteg-kezelésre bejelentkezett személyek. marad;
4.6) tífuszos és paratífuszos betegek a betegség klinikai tüneteinek megszűnése után a kórházból való hazabocsátás előtt;
4.7) az orvosi megfigyelés során tífuszban és paratífuszban megbetegedett személyek;
4.8) bizonyos szakmák, iparágak és szervezetek alkalmazottai körében azonosított krónikus baktériumhordozók, ezeknél a vállalkozásoknál és létesítményeknél történő újrafoglalkoztatáskor;
4.9) metszetanyag tífusz- és paratífusz-láz gyanúja esetén.
5. A módszer logisztikája
5.1. Normál vizsgáló- és segédberendezések, mérőeszközök mikrobiológiai laboratóriumok számára.
5.2. Tápközegek, diagnosztikai szérumok és kémiai reagensek a tífusz és paratífusz A, B és C kórokozóinak tenyésztéséhez, izolálásához, azonosításához és antibakteriális gyógyszerekkel szembeni érzékenységének meghatározásához.
5.3. A tífusz és paratífusz betegségek laboratóriumi diagnosztizálására és a baktériumhordozók kimutatására az Orosz Föderáció területén a megállapított eljárásnak megfelelően engedélyezett tápközeget és reagenseket kell használni.
6. Tífusz és paratífusz laboratóriumi diagnosztikája
6.1. A bakteriológiai módszer elve a betegség stádiumától függően különböző biológiai szubsztrátumokban (vér, vizelet, széklet, epe, csontvelő, roseola) élő mikroorganizmusok kimutatásán alapul. Ehhez bizonyos mennyiségű biológiai anyagot speciális táptalajra vetnek, majd termosztátban inkubálják, és azonosítják a S. Typhi, S. Paratyphi A, S. Paratyphi B és S. Paratyphi jellegzetes mikroorganizmusok kifejlett kolóniáit. C, a kulturális és enzimatikus tulajdonságok és az antigén jellemzők szerint.
6.2. Csak egy bakteriológiai vizsgálat nyújthat pontos etiológiai diagnózist és a szervezet kórokozóból való felszabadulásának szabályozását. A tífusz és a paratífusz differenciáldiagnózisa tekintetében az egyetlen módszer a biológiai anyag laboratóriumi vizsgálata a kórokozó izolálásával és szerológiai variáns szintjéig történő azonosításával, tk. a fertőző folyamat klinikai lefolyása nem mindig teszi lehetővé e nosológiai formák megkülönböztetését.
7. Bakteriológiai vizsgálat
7.1. A tífusz és az A, B és C paratífusz kórokozóinak izolálása a bioanyagok bakteriológiai vizsgálatának ugyanazon sémája szerint történik.
7.2. A tífusz és paratífusz betegségek laboratóriumi vizsgálataihoz szükséges anyaggyűjtési eljárást az SP 3.1.1.2137-06 határozza meg.
7.3. A bioanyagok összegyűjtésének és mikrobiológiai laboratóriumokba szállításának technikáját az MU 4.2.2039-05 írja le.
7.4. A tífusz és paratífusz diagnosztizálására szolgáló bakteriológiai vizsgálat anyaga:
vér;
ürülék;
vizelet;
A kórokozók izolálhatók a következőkből is:
roseol;
csontvelő;
anyatej.
A baktériumhordozók azonosítására szolgáló bakteriológiai kutatás anyaga az SP 3.1.1.2137-06 szerint:
ürülék;
vizelet;
epe (nyombéltartalom).
7.5. A metszetanyag tanulmányozása a diagnózis tisztázása érdekében történik.
7.6. A laboratóriumi kutatáshoz szükséges biológiai anyag gyűjtését az etiotróp kezelés megkezdése előtt végzi: tífusz-paratífusz fertőzésre gyanús egészségügyi dolgozó; csoportos és kitörési morbiditás esetén - a Rospotrebnadzor intézmények szakemberei és az egészségügyi intézmények személyzete. A kórházi betegektől a bakteriológiai vizsgálathoz szükséges anyagot a kórház sürgősségi osztályán veszik.
7.7. A betegekkel vagy hordozókkal kommunikáló személyektől (kapcsolattartók) az anyaggyűjtést az egészségügyi intézmények és más szervezetek és intézmények egészségügyi dolgozói végzik a betegek észlelésének helyén.
7.8. A laboratóriumi kutatásokhoz használt bioanyagot egy speciális irány kíséri. Az anyagok átadása az alanyok által nem megengedett. Ha az anyag időben történő szállítása lehetetlen, tartósítószereket és szállítóközegeket kell használni (1. táblázat).
8. Bakteriológiai vérvizsgálat
Vérvizsgálat jelzése tífusz-paratífusz megbetegedések gyanúja vagy ismeretlen eredetű lázas állapot (ismeretlen eredetű láz), 5 vagy több napig megfigyelhető (SP 3.1.1.2137-06).
A vér-tápközeg aránya 1:10-1:60 legyen. Az önállóan vett vérminták számát és levételük idejét a kezelőorvos határozza meg az ismeretlen eredetű lázra vonatkozó MU 4.2.2039-05 vagy a Szovjetunió Egészségügyi Minisztériumának MU 04-723/3. 1984) tífusz-paratífusz gyanúja miatt. Antibakteriális gyógyszert szedő betegeknél a mintákat közvetlenül a gyógyszer következő adagjának bevezetése (bevétele) előtt kell venni.
Láz jelenlétében optimális a vérvétel a testhőmérséklet-emelkedés hátterében (de nem a hőmérséklet csúcsán!). A táptalajra történő vetés közvetlenül a beteg ágyánál történik.
Tífusz-paratífusz megbetegedések gyanúja esetén Rapoport táptalaj, 20%-os epeleves, hús-peptonleves 1% glükóz hozzáadásával (100 ml-es fiolákban) használható a vértenyésztéshez. Korábban használt vértenyészetek steril desztillált (csap)vízben. Előnyös azonban speciális vértenyésztő tápközeg használata.
Az elvetett vér mennyisége a láz magasságában 10 ml, későbbi időpontban - legfeljebb 20 ml (gyermekeknél - legfeljebb 5 ml) lehet.
5 napon túl tartó, ismeretlen eredetű láz esetén általában több vérmintát kell megvizsgálni. A vénából történő vérvétel a MU 4.2.2039-05 szerint történik. Erre azért van szükség, hogy megkülönböztessük a valódi bakteriémiát a véletlen vérszennyeződéstől a vénapunkció során (a faggyú- vagy verejtékmirigy véletlen szúrása miatti mintaszennyeződés valószínűsége 3%). Ebben az esetben két táptalajt használnak a vértenyésztéshez: 1) táptalajt aerobokhoz és fakultatív anaerobokhoz és 2) táptalajt kötelező anaerobokhoz (például "kettős" táptalaj + tioglikol táptalaj a Szovjetunió Egészségügyi Minisztériumának rendelkezése szerint 85.04.12-én kelt N 535) vagy univerzális közeg aerobok és anaerobok számára.
Előnyösebb iparilag előállított, Oroszországban használatra engedélyezett hordozót használni.
A növényeket 37 °C-on inkubáljuk 10 napig, napi megfigyelés mellett. Ebben az esetben a "kettős" közeggel ellátott fiolákat megdöntjük, lemosva a közeg sűrű részét.
A növekedés jeleinek hiányában a 10. napon nemleges választ adnak ki.
Ha a növekedés jelei vannak (a Rapoport táptalaj zavarossága, vörössége, látható telepek megjelenése a "kettős" táptalaj sűrű részén), a vetést párhuzamosan poliszénhidrát táptalajra és sűrű táptalajra Petri-csészékben végezzük ( véragar ismeretlen eredetű láz esetén és Endo medium tífuszos paratífusz megbetegedések gyanúja esetén).
A poliszénhidrát táptalajra történő közvetlen beoltást a vizsgálat idejének csökkentése érdekében végezzük, abból a feltételezésből kiindulva, hogy ha nagy valószínűséggel vért oltunk be, a kórokozó monokultúra növekedése figyelhető meg. Ennek a feltételezésnek a szabályozásához és a tiszta tenyészet izolálásához az egyes telepek felosztásával párhuzamos Endo táptalajra vagy véragarra van szükség.
Ha ezeken a táptalajokon monokultúrás növekedés figyelhető meg, akkor figyelembe lehet venni a polikarbonát táptalaj biokémiai tulajdonságait. A tenyészet tisztaságának ellenőrzése érdekében Grammal festett poliszénhidrát táptalajról kenet mikroszkópos vizsgálata szükséges. Ebben a szakaszban a megfelelő agglutináló O- és H-szalmonella szérummal üvegen is lehetséges agglutinációs reakciót felállítani és előzetes választ adni.
A tífusz- és paratífusz-gyanús betegek vérének bakteriológiai vizsgálatának sémáját az 1. ábra mutatja.
1. ábra. A tífusz és paratífusz gyanújában szenvedő betegek vérének bakteriológiai vizsgálatának sémája
1. ábra. A tífusz és paratífusz gyanújában szenvedő betegek vérének bakteriológiai vizsgálatának sémája
Az ismeretlen eredetű lázas betegek vérének bakteriológiai vizsgálatának sémáját a 2. ábra mutatja.
2. ábra. Ismeretlen eredetű lázas betegek vérének bakteriológiai vizsgálatának sémája
2. ábra. Ismeretlen eredetű lázas betegek vérének bakteriológiai vizsgálatának sémája
A tenyészet kulturális-morfológiai, enzimatikus tulajdonságok és szerológiai jellemzők alapján történő további azonosításának menetét a vonatkozó fejezetekben ismertetjük részletesebben.
9. A széklet bakteriológiai vizsgálata
A székletmintát a székletürítés után azonnal fertőtlenített és alaposan kimosott edényből veszik, amelynek aljára vastag tiszta papírlapot helyeztek. Az anyagot egy steril tartály fedelébe szerelt kanál spatulával gyűjtik össze. Spatulával ellátott edény hiányában bármilyen steril eszközt (steril fa spatula, dróthurok, kanál stb.) használunk az anyag felvételéhez. Kóros szennyeződések jelenlétében ki kell választani a nyálkát, gennyet, pelyheket tartalmazó, de vértől mentes területeket. A folyékony székletből mintákat veszünk steril műanyag Pasteur pipettával, zárt tartállyal.
A kivett anyag térfogatának legalább 2 g-nak kell lennie Az optimális anyag, ha díszített szék esetén az anyagot - dió mennyiségben - szedjük; laza széklet esetén annak rétege a tartályban legalább 1,5-2,0 cm legyen A steril edénybe helyezett anyagot 2 órán belül a laboratóriumba szállítjuk.
Ha az anyagot 2 órán belül nem lehet a laboratóriumba szállítani, akkor konzerválószerben (közeggel szállító rendszer) gyűjtjük. Az anyag térfogata nem haladhatja meg a közeg térfogatát.
A székletet gondosan homogenizálni kell a közegben. A minták a vizsgálat megkezdése előtt napközben hűtőszekrényben (4-6 °C) tárolhatók.
A tífusz és paratífusz A, B és C kórokozóinak, valamint az akut bélfertőzések egyéb kórokozóinak izolálására használt szállítóközegeket és tartósítószereket az 1. táblázat tartalmazza.
Asztal 1
A széklet szállítására leggyakrabban használt szállítóközegek és tartósítószerek
|
Környezet neve |
Konzerválást biztosít |
|
Szerda Carrie Blair |
minden enterális kórokozó, beleértve a Campylobactert is |
|
Szerda Ames |
minden enterobaktérium |
|
Szerda Stewart |
szalmonella és shigella |
|
glicerin keverék |
minden enterobaktérium, kivéve a yersiniát; a sigellához preferált |
|
foszfát puffer keverék |
minden enterobaktérium |
|
borát pufferoldat |
minden enterobaktérium |
|
sóoldat |
minden enterobaktérium, beleértve a campylobactert is |
A rektális tampon segítségével közvetlenül a végbélből vett székletmintákat elsősorban a diagnózis tárgyiasításához használják (MU 4.2.2039-05). Az anyagot a mentősök veszik át. Általános szabály, hogy egy speciális szonda a kenet vételére a szállítási rendszer része. Fontos megjegyezni, hogy a szállítóközeg bejutása a végbél nyálkahártyájára elfogadhatatlan! Ezért a rektális tampont csak az anyag felvétele után szabad a szállítóközegbe meríteni. A pácienst arra kérik, hogy feküdjön az oldalára úgy, hogy a csípőjét a gyomorhoz húzza, a fenekét pedig széthúzva tenyerével. A tampon szondát 4-5 cm mélyen a végbélnyílásba helyezzük, és a tengely körül finoman forgatva anyagot gyűjtenek a végbélnyílás kriptáiból. Óvatosan távolítsa el a tampont, és merítse a szállítóközegbe. Tampon szállítása közeg nélkül nem megengedett.
A laboratóriumban a székletminták beoltása közvetlenül sűrű differenciáldiagnosztikai táptalajra és ezzel párhuzamosan a dúsító táptalajra történik.
A széklet bakteriológiai vizsgálatának sémája a 3. ábrán látható.
3. ábra. A széklet bakteriológiai vizsgálatának sémája
3. ábra. A széklet bakteriológiai vizsgálatának sémája
A natív ürülékből 0,9%-os nátrium-klorid-oldatban 1:5-1:10 arányban szuszpenziót készítenek, és 30 percig hagyják állni, hogy a nagy részecskék leülepedjenek. Ezt követően a felülúszóból egy cseppet sűrű tápközeget tartalmazó edényekbe oltunk, és 1 ml szuszpenziót a dúsító táptalajba (az anyag-tápközeg aránya 1:5 legyen).
A laboratóriumba tartósítószerben (szállítóközegben) szállított ürüléket az oltás előtt a táptalajban gondosan homogenizálni kell, majd az anyagot közvetlenül szilárd táptalajra és dúsító táptalajra oltjuk a natív ürülékkel megegyező arányban.
A rektális tamponnal vett székletmintákat a tartósítószerben szállított széklethez hasonló módon vizsgálják. Emlékeztetni kell arra, hogy a végbéltampon kevesebb mikroorganizmust tartalmaz, mint a natív székletben, ezért az oltóanyag adagját növelni kell.
Az S. Typhi, S. Paratyphi A, S. Paratyphi B és S. Paratyphi C maximális kimutatása a székletben dúsító táptalaj használatával érhető el, bár a betegség akut periódusában lévő betegeknél a kórokozót gyakran közvetlen oltással izolálják. A direkt oltással párhuzamosan dúsító táptalajra történő oltás kötelező!
Minden beoltást 37 °C-on inkubálunk differenciáldiagnosztikai táptalajon 18-24 óráig, bizmut-szulfit agaron 24-48 óráig, 24 óra elteltével a dúsító táptalajból történő oltást szilárd táptalajra (bizmut-szulfit agar vagy Endo) végezzük. közepes). Az ezekre a kórokozókra jellemző, sűrű táptalajon nevelt telepeket poliszénhidrát táptalajon szűrjük ki.
Meg kell jegyezni, hogy az anyagnak a lemez felületére sűrű tápközeggel történő szétterítésének technikájának biztosítania kell a tipikus típusú izolált telepek növekedését, amely felhasználható a mikroorganizmus tenyésztési tulajdonságainak vizuális értékelésére.
A bizmut-szulfit agar (BCA) az előnyben részesített módszer az S. Typhi izolálására. A S. Typhi tipikus kolóniái feketék, és fémes fényű fekete vagy barna peremmel vannak körülvéve. Az S. Typhi azonban gyakran nem eredményezi az ICA jellegzetes elfeketedését, amikor bőséges növekedés következik be, ezért a lemezeket be kell oltani, hogy lehetővé tegyük az egyetlen telep növekedését.
A székletminták beolthatók az Orosz Föderációban engedélyezett enterobaktériumok standard szelektív táptalajra. Azonban a bizmut-szulfit agar az előnyben részesített módszer a S. tymhi izolálására. A tenyészetek enzimatikus tulajdonságok és szerológiai jellemzők alapján történő további azonosításának menetét a vonatkozó fejezetekben ismertetjük részletesebben.
10. A vizelet bakteriológiai vizsgálata
A vizelettenyésztést diagnosztizálják a betegség első napjaitól egészen a beteg elbocsátásáig, valamint a bakteriohordozó azonosítására. Mivel a kórokozó tífuszos és paratífuszos kiválasztódása a vizelettel időszakosan és rövid ideig fordul elő, a vizeletvizsgálatot 5-7 napos időközönként meg kell ismételni.
Szigorúan tartsa be a vizeletgyűjtésre vonatkozó általános szabályokat, amelyeket az MU 4.2.2039-05 tartalmaz. A vizeletfelvétel módjától függetlenül 2 órán belül a laboratóriumba kell szállítani, szélsőséges esetben a vizelet egy éjszakán át hűtőszekrényben tárolható.
Emlékeztetni kell arra, hogy a vizelet kémiai összetételétől függően a benne lévő baktériumok a tárolás során elpusztulhatnak és szaporodhatnak.
Az anyag eltarthatósági idejének növekedése rendkívül megnehezítheti az eredmény értelmezését.
A vizelet (vagy a centrifugálás utáni üledék) közvetlen beoltása előzetes dúsítás nélkül történik a Szovjetunió Egészségügyi Minisztériumának N 535-ös rendelete szerint sűrű differenciáldiagnosztikai táptalajokon, amelyeket szalmonellára, beleértve a tífusz és paratífusz kórokozóit is ajánlanak. Ezzel egyidejűleg a natív vizeletet kétszeres koncentrációjú dúsító tápközegbe oltják be 1:1 arányban, vagy a vizeletüledéket normál koncentrációjú táptalajba. Az oltásokat 37 °C-os termosztátba helyezzük 18-24 órára, majd a dúsító táptalajt sűrű differenciáldiagnosztikai táptalajra oltjuk. A szilárd táptalajon nevelt telepeket kulturális-enzimatikus és szerológiai tulajdonságok alapján azonosítják.
11. Az epe (nyombéltartalom) bakteriológiai vizsgálata
Az epét a MU 4.2.2039-05 szerint három steril kémcsőben vagy steril eldobható tartályban külön-külön A, B, C részekben gyűjtik össze, és szállítják a laboratóriumba.
Vizsgálja meg mindegyik adagot (A, B, C) külön-külön, vagy készítsen három rész keverékét. A minták beoltása:
sűrű differenciáldiagnosztikai közegeken (ICA, Endo, EMS stb.) 0,5 ml mennyiségben;
kémcsőben (üvegben) táplével 1:10 arányban. Nem szükséges epét dúsító táptalajra oltani, mint maga az epe jó táptalaja a tífusz és paratífusz kórokozóinak.
A beoltott tápközeget 37 °C-on epemaradékokkal inkubáljuk.
18-24 óra elteltével a beoltásokat sűrű táptalajra vizsgáljuk (24 és 48 óra elteltével vesszük figyelembe az ICA-n történő növekedés eredményeit), és a gyanús telepeket poliszénhidrát táptalajra újra ültetjük.
A táplevesből sűrű differenciáldiagnosztikai táptalajra magokat készítenek.
A visszamaradó epéből direkt vetés negatív eredménye esetén 18-24 óra elteltével, valamint a 3., 5., 7. és 10. napon ismételt vetést végzünk sűrű differenciáldiagnosztikai táptalajra.
A tenyésztett mikroorganizmusokat kulturális-morfológiai, enzimatikus és szerológiai tulajdonságaik alapján azonosítják.
12. Roseola anyagának bakteriológiai vizsgálata
A bakteriológiai vizsgálatot ("kaparás" roseolával) jól meghatározott roseola jelenlétében végezzük. Az anyagot aszeptikusan gyűjtik össze. Ehhez a roseola feletti bőrfelületet 70%-os etil-alkohollal kezeljük, majd steril 0,9%-os nátrium-klorid-oldattal megnedvesített vattacsomóval töröljük le, majd steril törlőkendővel szárítjuk.
A kutatáshoz szükséges anyagot (szövetfolyadékot) úgy állítják elő, hogy a roseola feletti bőrt szikével súrolják. 1-2 csepp epelevest vagy izotóniás nátrium-klorid oldatot csepegtetünk a sérült bőrre, összekeverjük a kiálló szövetfolyadékkal, és Pasteur pipettával vagy hasonló eldobható steril eszközzel összegyűjtjük egy kémcsőben a folyékony dúsítóközeg (epe) egyikével. húsleves, Rapoport táptalaj stb.). A laboratóriumban az oltást 37 °C-on tartják 18-24 órán keresztül, majd sűrű differenciáldiagnosztikai táptalajon (Endo, EMS, ICA) végezzük az oltást.
13. A csontvelő bakteriológiai vizsgálata
Köztudott, hogy a tífusz diagnózisának laboratóriumi igazolása esetén a leghatékonyabb a csontvelő bakteriológiai vizsgálata (90-95%-os a kórokozó beoltása). Még a tífusz enyhe és kitört formáiban szenvedő, klinikailag nehezen felismerhető betegeknél is, valamint az antimikrobiális gyógyszerek szedésének hátterében is, a mielokultúrák beoltása lényegesen magasabb, mint a vérkultúráké.
A gyakorlatban azonban a csontvelő bakteriológiai vizsgálatát nagyon ritkán, csak speciális klinikai indikációk esetén végezzük, a tífusz vagy paratífusz diagnózisát megerősítő egyéb laboratóriumi adatok hiányában, tk. ez az invazív eljárás meglehetősen traumatikus. A kutatáshoz szükséges anyagmintavétel csak kórházban, megfelelő szakember jelenlétében történik.
A bakteriológiai vizsgálathoz szükséges anyagot (aspirátum) 0,50-0,75 ml mennyiségben aszeptikusan a szegycsont (nyél vagy test) átszúrásával nyerjük, és kémcsőbe oltjuk valamelyik dúsító közeggel (epeleves, Rapoport táptalaj stb.).
Ha az aspirátumot a szúrás után nem lehet közvetlenül a dúsító táptalajba oltani, akkor steril csőbe gyűjtjük, és azonnal a laboratóriumba küldjük, ahol a dúsító táptalajba történő beoltást végzik. A laboratóriumban az oltásokat 37 °C-on 18-24 órán át inkubálják, majd sűrű differenciáldiagnosztikai táptalajra oltják.
További kutatásokat végeznek, akárcsak más biológiai anyagok bakteriológiai vizsgálatánál.
14. Tápközeg és reagensek
A bélfertőzések kórokozóinak, különösen az enterobaktériumoknak az izolálására és azonosítására szolgáló tápközegek listája kiterjedt és folyamatosan bővül. A konkrét környezet kiválasztását nagymértékben meghatározzák a helyi gazdasági feltételek és hagyományok. Ezt azonban több alapelvnek kell vezérelnie.
14.1. A táptalaj leírásában jelezni kell, hogy nem csak a Salmonella, hanem a Salmonella Typhi és S. Paratyphi A, B és C kimutatására is használható.
14.2. A jó hírű gyártóktól származó dehidratált tápközeget előnyben kell részesíteni a közvetlenül a laboratóriumban készített táptalajokkal szemben.
14.3. A laboratóriumban lévő táptalaj minden egyes tételét teszttörzsekkel kell ellenőrizni (belső minőségellenőrzés).
14.4. A tífusz és paratífusz betegségek laboratóriumi diagnosztizálására és a baktériumhordozók kimutatására az Orosz Föderáció területén a megállapított eljárásnak megfelelően engedélyezett tápközeget és reagenseket kell használni.
15. Módszerek enzimatikus tulajdonságok vizsgálatára
Jelenleg az Enterobacteriaceae családba tartozó mikroorganizmusok, köztük a tífusz és paratífusz kórokozóinak enzimaktivitásának vizsgálatára különböző hazai és külföldi gyártású diagnosztikai tesztrendszereket fejlesztettek ki, gyártottak és regisztráltak (a legegyszerűbb klasszikus Hiss táptalajtól a kémcsövekben és tányérokban az automatikusig. elemzők). Ha a tesztrendszerek lehetővé teszik egy mikroorganizmus nemzetségi szintű azonosítását és a törzsek enzimaktivitásának jellemzőit, akkor a tífusz és a paratífusz kórokozóinak azonosítására is alkalmasak. A tesztrendszerekkel való munkavégzés menetét a használati utasítás részletezi, és azt szigorúan be kell tartani.
16. A kórokozók biológiai tulajdonságai
A tífusz és az A, B és C paratífusz kórokozói az Enterobacteriaceae családba, a Salmonella nemzetségbe, az enterica fajokba, az I. alfajba (enterica) tartoznak, és az erre az alfajra, fajra, nemzetségre és családra jellemző morfológiai, kulturális és enzimatikus tulajdonságokkal rendelkeznek.
A Salmonella fajok enterica nemzetség képviselői történelmileg kialakult egy olyan helyzet, amikor a szerovariánsokat nem antigénképlet alapján jelölték meg, mint más baktériumoknál, hanem a betegségek (emberi vagy állati) nevével, az országgal, várossal vagy utcával, ahol izolálták őket, stb. Hiba ezeket a fajneveket figyelembe venni, mert nincs taxonómiai állapotuk. A leggyakoribb Salmonella szerovariumok nevei azonban annyira ismerősek, hogy szinte lehetetlen antigénképletekkel helyettesíteni őket. Ezért a modern Kaufman-White sémában a Salmonella enterica I. alfaj megjelölésénél a fajmegjelölés helyett a szerovariáns nevét használják, de nagybetűvel írják.
Így a tífusz és a paratífusz kórokozóinak teljes neve a következő:
Salmonella enterica subsp. enterica szerovar Typhi;
Salmonella enterica subsp. enterica szerovar Paratyphi A;
Salmonella enterica subsp. enterica szerovar Paratyphi B;
Salmonella enterica subsp. enterica szerovar Paratyphi C
Az általános gyakorlatban a nevek rövidített változatai is használhatók:
Salmonella ser. Typhi vagy Salmonella Typhi vagy S. Typhi;
Salmonella ser. Paratyphi A vagy Salmonella Paratyphi A vagy S. Paratyphi A;
Salmonella ser. Paratyphi B vagy Salmonella Paratyphi B vagy S. Paratyphi B;
Salmonella ser. Paratyphi C vagy Salmonella Paratyphi C vagy S. Paratyphi C
16.1. Kulturális és morfológiai tulajdonságok
A mobil gram-negatív pálcikák nem képeznek spórákat és kapszulákat, a fakultatív anaerobok jól növekednek közönséges táptalajokon.
Egy egyszerű tápanyag-agaron - a telepek enyhén domborúak, sima széllel és sima felülettel, nedvesek, fénye meghaladja az 1 mm-t.
Differenciáldiagnosztikai táptalajokon (laktózt, mint megkülönböztető anyagot) - átlátszó, színtelen vagy kékes, és néha rózsaszínű vagy színű a telepkörnyezet (Endo, Ploskirev, EMS és más hasonló közegek).
SS-arapé-n közepes színű telepek fekete középponttal.
Bizmut-szulfit táptalajon a S. Typhi, S. Paratyphi B izolált telepei feketék, jellegzetes fémes fényűek, a telep alatti táptalaj feketére festett. A S. Paratyphi A kolóniái zöldesek, a táptalaj világos színűek, érzékenyek.
Az S. Paratyphi B (a paratífusz B kórokozója) törzsei a hús-pepton agaron megemelkedett nyálkahártya falat képezhetnek a telepek perifériáján. A nyálkahártya 2-5 napig fejlődik ki, ha a terményeket szobahőmérsékleten tárolják. Ez a tünet nem állandó és diagnosztikus.
16.2. Enzimatikus tulajdonságok
Az enzimatikus tulajdonságok vizsgálatát szénhidrátok, többértékű alkoholok, aminosavak és egyéb szerves vegyületek csoportjával kapcsolatban végzik, amelyeket a Salmonella és más enterobaktériumok azonosítására és tanulmányozására használnak. A gyakorlati laboratóriumokban általában kis számú vizsgálatot alkalmaznak a bélbaktériumok családjába tartozó fő nemzetségek azonosítására. A Salmonella enzimatikus tulajdonságainak jellemzőit, beleértve a tífusz, valamint a paratífusz A, B és C kórokozóit, a 2. táblázat mutatja be.
2. táblázat
A tífusz és paratífusz A, B, C kórokozóinak enzimatikus tulajdonságai
|
szubsztrát |
S. Paratyphi A |
||||
|
Glükóz (gáz) |
A mikobaktériumok izolálására és azonosítására szolgáló kóros anyag tanulmányozásának bakteriológiai módszere 3 módszert tartalmaz: bakterioszkópos, kulturális és biológiai / R.V. Tkzova, 1983; I. I. Rumachik, 1987, 1993; MINT. Doncsenko, 1989; Yu.Ya. Kassich, 1990; A. Kh. Naimanov, 1993; L. P. Khodun, 1997/. A bakteriológiai vizsgálat időtartama nem haladhatja meg a 3 hónapot.
Tekintettel arra, hogy a szarvasmarhák szerveiben és szöveteiben a makroszkópos tuberkulózisos elváltozásokat a szarvasmarhák tuberkulózisának kórokozója okozza, az ilyen anyagok bakteriológiai vizsgálatának nincs értelme. Ha az ilyen anyagot kutatás céljából a laboratóriumba szállítják, akkor bizottsági ellenőrzést végeznek, és egy aktust készítenek. Az anyag ártalmatlanná válik.
Az anyag bakterioszkópos (mikroszkópos) vizsgálata abból áll, hogy minden szervből (vagy tuberkulózis gyanús elváltozású szervdarabokból) és egy vizsgálatra leadott nyirokcsomót előkészítünk, 2 lenyomat kenetet, levegőn szárítjuk, egy láng fölé rögzítjük. alkohollámpa, Cyl-Nielsen szerinti festés és a megfestett kenetek mikroszkóp alatti megtekintése, minden kenetben legalább 50 látómezővel. Egy hasított testből legalább 20 kenet-lenyomatot kell készíteni az anyagból. Ezenkívül a mikroszkópos keneteket táptalajra vetett anyag szuszpenziójából is készítik.
A kenetek Ziehl-Neelsen festése szelektív a mikobaktériumok kimutatására: a festett szövetek vagy az idegen mikroflóra kék hátterében a mikobaktériumok vörös, rózsaszín vagy rubinvörös pálcikákként jelennek meg. A legjobb, ha binokuláris mikroszkóp alatt nézi a keneteket 1,5 (fúvóka) x 7 (okulár) x 90 vagy 100 (objektív) nagyítással.
A módszert jelzésként alkalmazzák, mivel a kenetekben a mikobaktériumok jelenléte vagy hiánya abszolút nem befolyásolja a további kutatás menetét, és még a pozitív bakterioszkópiai következtetésnek sincs jogi jelentősége (madarak kivételével). Az anyagot tovább kell vizsgálni.
A madarak tuberkulózisának laboratóriumi diagnózisát megállapítottnak tekintik, ha a vizsgálati anyagból madármikobaktériumot (papagájokból - emberi vagy madárfajokból) izolálnak, és pozitív biológiai vizsgálati eredményt kapnak, valamint ha a kóros anyagból származó kenetekben mikobaktériumot mutatnak ki. mikroszkópos vizsgálat során (7.3 .2. pont).
Arra is figyelni kell, hogy a lenyomatkenetek elkészítése, rögzítése, megtekintése sok időt vesz igénybe, és nagyon ritkán lehet bennük mikobaktériumot kimutatni, még magozott anyagszuszpenzióból származó kenetekben is. Ezért annak érdekében, hogy munkaidőt és pénzt takarítsunk meg a vágás során nem változott állatokból származó anyagok tanulmányozása során, ajánlatos csak a táptalajra vetett szuszpenzióból származó kenet készítésére és megtekintésére szorítkozni. Ez nem okoz kárt a tuberkulózis diagnózisában, mert az anyag vizsgálata tovább folytatódik.
A hagyományos fénymikroszkópia mellett fluoreszcens mikroszkópia is használható. A keneteket ugyanúgy készítjük el, rögzítjük és fluorokrómok keverékével festjük. A megfestett keneteket fluoreszcens mikroszkóp alatt nézzük. A módszer érzékenyebb, de kevésbé specifikus, ezért nem túl elfogadható, különösen a gyakorlati laboratóriumokban.
A mikobaktériumok kulturált izolálása táptalajokon a tuberkulózis laboratóriumi diagnózisának egyik fontos láncszeme a jelenlegi szakaszban. Az első 2-3 hétben azonban a táptalaj, amelyre az anyagot vetettük (5-10 csőre az utasításoknak megfelelően), általában részleges vagy teljes csírázással rendelkezik, ami az oltás során megsérti a sterilitást. az anyagból. A növényeket éppen akkor dobják ki, amikor a legvalószínűbb az atipikus mikobaktériumok kezdeti növekedése (nem beszélve a tuberkulózis kórokozójának kezdeti növekedésének megnyilvánulásáról, amely még később is növekedést mutat). Ilyen esetekben a mikobaktériumok táptalajokon történő izolálásának kultúrmódszere mechanikusan kiesik. Ez az egyik fő oka annak, hogy az anyag bakteriológiai vizsgálata során negatív eredményeket kapunk. Ennek eredményeként, miután az anyag beoltása után a táptalajokon nem szaporodtak el a mikobaktérium telepek, és a laboratóriumi állatok 3 hónapig életben maradtak, a laboratóriumok standard válasza a következő: „A tuberkulózis kórokozója nem izolált” vagy „ Az anyag tuberkulózisra vonatkozó vizsgálata negatív”. A vizsgálatok eredményei alapján a szarvasmarhák tuberkulinra adott válaszának okát nem állapították meg, és ez jelentős számú, tuberkulinra reagáló állat további indokolatlan levágásához vezet a szarvasmarha-tuberkulózistól mentes telepeken, ami nagy gazdasági kárt okoz, megzavarja az állomány forgalmát és szaporodását.
A fentiek ismeretében előnyben kell részesíteni a mikobaktériumok táptalajon lévő anyagból történő izolálásának kultúrmódszerét, amely a tuberkulózis bakteriológiai diagnózisának leggyengébb láncszeme a körzeti állatorvosi laboratóriumokban.
A mikobaktériumok izolálásának kultúrmódszerének pozitív eredményei főként két körülménytől függenek: a mikobaktériumok anyagból való kioltásának megbízhatóságának növekedésétől és a sterilitási feltételek betartásától a dobozban végzett munka során.
A vizsgálathoz vett anyagból a mikobaktériumok oltásának megbízhatóságának növekedése elsősorban annak minőségi kiválasztásától, a vetés előtti kezeléstől és a vetést végző táptalaj kémcsövek számának növekedésétől függ.
A fő feltételek, amelyek betartása az anyag táptalajra vetésekor garantálja a mikobaktériumok telepek növekedését:
a) a levágott állatokból, amelyek a vágás során nem változtak, bakteriológiai vizsgálatra anyagot kell venni, külön minden tetemről, és minden egyes mintát (az egyes állatokból származó anyagot) 10-20 táptalaj kémcsőbe beoltva az alábbi séma szerint:
A fej nyirokcsomói (submandibularis, garat);
Bronchialis és mediastinalis nyirokcsomók;
Mesenterialis (mesenterialis) nyirokcsomók;
Egyéb nyirokcsomók (ha vannak gyanús területek);
Szervek (szükség esetén is).
Az eredmény egy állatból származó anyag beoltása 30-50 kémcső táptalajra. Ez 3-5-szörösére növeli a mikobaktériumok beoltásának megbízhatóságát, mivel a minták szétválasztása nélkül (az utasításoknak megfelelően) csak 5-10 tápközeg kémcsőbe ajánlott beoltani az anyagot egy két fejből. tanya.
b) Közvetlenül az anyag bakteriológiai beoltása során vágjunk ki a nyirokcsomó vagy szerv zavart morfológiai szerkezetű (hiperplázia, induráció, tűpontos és harántcsíkolt vérzések stb.) darabjait. Ezenkívül ki kell vágni az összes megváltozott területet. Ha egy habarcsban térfogat szerint sok anyag van, akkor két részre osztható.
c) Szigorúan tartsa be a munkavégzés módszertanát, ne sértse meg az anyag feldolgozási és vetési módját.
d) Az anyag, különösen a nyirokcsomók homogenizálása során steril homokot vagy finomra tört steril üveget kell használni. A lehető legjobban őrölje meg az anyagot (krémes állagúra), hogy a mikobaktériumokat jobban kivonja a vizsgált anyagból
e) Adjunk sóoldatot a homogenizált anyaghoz mozsárban annyi mennyiségben, amennyi a tápközegben lévő anyagszuszpenzió beoltásához és a biológiai vizsgálathoz szükséges (átlagosan legfeljebb 0,5 cm3 egy kémcsőben és 1-2 cm3 a szubkután fertőzéshez egy tengerimalac). Ez a sóoldat mennyisége előre kiszámítható.
f) Az anyag termésének felülvizsgálatát 3, 5, 7, 10, 15 nap elteltével, majd hetente egyszer kell elvégezni.
g) A táptalajon tenyésztett (tipikus vagy atipikus, pigmentált vagy nem pigmentált, nyálkás vagy száraz stb.) mikroorganizmus telepeket mikroszkóppal, szelektív festéssel Ziehl-Neelsen szerint kell elvégezni.
Figyelmet kell fordítani az anyag savtól (vagy lúgtól) való mosásának mértékére, amelyet az anyag idegen mikroflóra általi szennyeződésének kezelésére használtak. Maradék sav mindig jelen lesz a maganyagból származó szuszpenzióban, de ezt minimálisra kell csökkenteni. Ennek jelzője a táptalaj eredeti színének visszaállítása az anyag elvetése utáni 2-4. napon. Ha a táptalaj színe nem áll helyre, ez a maradék sav megnövekedett mennyiségét jelzi. A közeg színe változó intenzitású kékes árnyalatot kap. A (feltételezett) mikobaktériumok szaporodása ebben az esetben lelassul, vagy egyáltalán nem fog létezni, különösen a tuberkulózis kórokozója, mivel a termesztési rendet igényesebbé teszi. A visszamaradó savmennyiség bizonyos mértékig bakteriosztatikusan hat a mikobaktériumokra.
Az anyag beoltása után a kémcsövek lezárására pamut és pamut-géz dugót lehet használni, majd paraffinos, gumimentes és gumis, kivágott ferde hornyú, kortikális és fém dugókkal (redőnyökkel) tölthető fel.
Egy izolált mikobaktériumtenyészet faji hovatartozásának meghatározásakor számos (kb. 300) különböző vizsgálat ismert: kulturális-morfológiai, biológiai, biokémiai, szerológiai, gyógyszerrezisztencia meghatározása stb. Az állatorvosi gyakorlatban azonban ezek minimumát használják (lásd a kézikönyvet). Laboratóriumok számára elegendő meghatározni a következő fajok mikobaktériumainak izolált tenyészetét: szarvasmarha, ember és madár, amelyet biológiai vizsgálattal határoznak meg, valamint atípusos mikobaktériumok - Runyon (1959) szerint csoportokra osztva: I - fotokromogén (képző pigment fény hatására), II - skotokromogén (fényhatástól függetlenül pigmentet képez - mind sötétben, mind fényben), III - nem kromogén (nem képződik pigment) vagy nem-pigmentáltnak is nevezik őket. a madártuberkulózis kórokozója is ide tartozik), IV - gyorsan szaporodó mikobaktériumok és saválló szaprofiták.
Ehhez meglehetősen hatékony és gazdaságilag indokolt az izolált tenyészet tulajdonságainak tanulmányozása egy rövidített séma szerint, amelyben a fő figyelmet a telepek elsődleges növekedésének, a pigmentképződésnek, a kulturális- morfológiai és színárnyalati tulajdonságok Ziehl-Neelsen festéssel. Különösen jelentős a köldökzsinór kialakulásának vizsgálata primer vagy akár szubkultúrában a bioassay eredményeivel kombinálva. Felnőtt telepekről kenet készítéséhez célszerű egyszerre készíteni azokat telepekből és lebegőanyag- és kondenzátummaradványokból, pl. a cső alján lévő folyékony részből.
Ezen túlmenően a laboratóriumi dolgozóknak lehetőségük van nem csak a tuberkulinra reagáló állatok ellenőrző levágására és kutatási anyagminta vételére, hanem az állatok élete során bakteriológiai kutatáshoz szükséges mintavételre is (hörgő- vagy orrnyálka, tej, ürülék, vizelet, váladék, vér stb.), valamint takarmány-, víz-, környezeti tárgyak minták a mikobaktériumok izolálására, és így közvetve bizonyítják a szarvasmarha tuberkulinra adott válaszának okát. További anyagok és minták vetésekor a mikobaktériumok koncentrálására jól ismert módszereket alkalmaznak: ülepítés, flotáció, flotáció-ülepítés és mások.
A mikobaktériumok differenciálódásának rövidített sémája bioassay segítségével
