Ако общо при. Подробности за имуноензимния анализ, какво представлява и неговата интерпретация

Инфекцията с човешкия имунодефицитен вирус е сериозна диагноза. Грешките в диагнозата могат да доведат до катастрофални последици. ELISA анализът за ХИВ е най-достъпният метод за изследване, но не във всички случаи е информативен.

ELISA - ензимен имуноанализ. Задачата на метода ELISA е да открие антитела срещу вируса на имунната недостатъчност в биологичен материал. С помощта на метода е възможно да се проследи наличието в течността не на самите вируси, а само на антитела, произведени в отговор на тяхното присъствие. ELISA се използва широко при диагностицирането на ППБ. Помага за идентифициране на болести, предавани по полов път.

Има няколко вида ELISA: директен вариант, индиректен вариант, сандвич метод. Във всеки случай техниката се основава на определянето на наличието на антитела, които служат като индикатор за проникването на чужд агент. За да се разкрият тези „белези“, биологичният компонент се третира с ензими.

ELISA открива антитела с точност 96 - 98%, грешката е незначителна. Тя е 2-4%.

ELISA - метод за диагностициране на ХИВ

ELISA анализът за ХИВ е първият етап от диагностиката. Антигените на вируса на имунната недостатъчност са протеини p24, p15, p17, p31 и гликопротеини gp 41, gp55, gp66, gp120, gp160.

За да се открие вирусен протеин, се взема част от кръвта от вената. Проба, изпратена за кръвен тест ELISA, се третира с реагенти за ензимен имуноанализ. Серумът се изолира от кръвта. Ако по време на изследването те бъдат открити, тогава вирусът вече присъства в кръвта.

Кръвта се дава строго на празен стомах. 2 дни преди анализа не се препоръчва да ядете мазни храни и да пиете алкохол. Трябва да спрете приема на антивирусни лекарства в рамките на 14 дни.

Предимства на метода:

• относително ниска цена;
• висока стабилност на реагентите;
• висока чувствителност;
• кратко време за изпълнение;
• минимално влияние на човешкия фактор.

Съвременните тест системи за ELISA се произвеждат по световните стандарти. Това подобрява точността на метода.

ELISA не винаги дава надеждни резултати. След навлизането на вируса в кръвта започва латентният (скрит) етап на развитие. Периодът, докато вирусите са започнали да се размножават и антителата все още не са се образували, се нарича „серонегативен прозорец“. Безсмислено е да се прави ELISA на този етап. Ако е настъпила инфекция, резултатът ще бъде . Колко бързо вирусът се открива зависи от това колко опасни клетки са влезли в тялото. При незащитен полов акт или преливане на заразена кръв този период ще бъде минимален.

За висока надеждност на ELISA за ХИВ изследването се провежда три пъти. Срокове за ELISA за вируса на човешката имунна недостатъчност:

• 6 седмици след вероятен контакт,
• след 3 месеца,
• шест месеца по-късно.

ELISA от 4-то поколение за ХИВ е най-информативният метод в ранните стадии на инфекция. Може да се извърши най-рано 1 месец след предполагаемата инфекция. Тестът е скъп в сравнение с колегата от 3-то поколение. Поради това в обществените лечебни заведения се използва като допълнителен диагностичен метод. Безплатно се извършва тест 3. Ако въз основа на резултатите от него не може да се даде недвусмислен отговор, пациентът се изпраща за ELISA от 4 поколение.

важно!Веднага след заразяването човек става заразен. Той е опасен за околните, дори когато още не знае за диагнозата си!

Ако по време на ELISA се открият антитела срещу HIV антигени, са необходими допълнителни изследвания. Принадлежи към тези. Надеждността на този метод е 80%. С помощта на PCR се изследва кръв, сперма и вагинален секрет. Биологичната течност се разделя в медицински реактор, след което се подлага на ензимна обработка. В резултат на това се получават данни за концентрацията на HIV клетки в течна среда. Поради голямата грешка (20%), при положителен резултат се извършва допълнително имунен блот.

Следващата диагностична стъпка е Combo тестът (или имуноблотинг). Това е силно чувствително изследване (98% увереност) и трябва да се направи, ако резултатите от ELISA са неубедителни след 6 месеца.

Интерпретация на резултатите от ELISA

Времето за дешифриране е от 24 до 48 часа. Ако е необходимо спешно да се получи информация (необходима е хирургическа намеса), декодирането се извършва след 2 часа. Провинциалните медицински станции не винаги разполагат с необходимите реактиви. Пробата се взема на мястото на обръщение, след което се пренася в областния център. При такива обстоятелства резултатът може да се установи след 1-2 седмици.

Резултатът от ензимен имуноанализ може да бъде положителен или отрицателен; няма други опции.

Дори ако резултатът е положителен по време на първичния и повторния ELISA, пациентът не може да бъде разпознат като HIV-инфектиран. Възможна грешка. Причини за фалшив положителен резултат:

• хронични болести;
• продължителни инфекциозни заболявания;
• бременност.

Следователно резултатът от анализа трябва да бъде изяснен чрез допълнителни изследвания.

Ако по време на имуноблотинг за ХИВ (реактивен), човек се счита за заразен с ХИВ, което означава, че той е здрав.

Клетките на вируса в крайна сметка се адаптират към предписаните лекарства. За контрол периодично се повтаря ELISA тестът.

Понякога имуноблотингът показва фалшиво отрицателен резултат. Изключително рядък вирус на имунна недостатъчност 6 месеца (или повече). Това е възможно, ако малко количество вирусни клетки са попаднали в кръвта. При 0,5% от общия брой случаи инфекцията може да бъде диагностицирана едва след една година. В 99,5%, в рамките на шест месеца след заразяването, ELISA ще даде надежден резултат.

Дори при високопрецизни изследвания все още има граница на грешка от 2%. Не трябва да забравяме и човешкия фактор. За да се елиминира възможността за грешка, тестът може да се проведе в 2 различни институции.

Как е изследването чрез ELISA

механизъм на реакция

Ензимният имуноанализ се основава на имунната реакция на антиген с антитяло и прикрепването на ензимен етикет към антителата позволява да се вземе предвид резултатът от реакцията антиген-антитяло чрез появата на ензимна активност или чрез промяна в нивото й. В опростена форма механизмът на реакцията може да бъде представен по следния начин:

Точкуване

Провеждане на имуноензимен анализ

За серодиагностика се използват 96-ямкови полистиренови плаки, върху клетъчните стени на които антигенът е адсорбиран предварително. Тестовият серум се добавя към клетката на таблетката. В този случай към него са прикрепени антитела, хомоложни на антигена. Неприкрепените антитела се отстраняват чрез промиване. След това в клетките се въвеждат маркирани с ензим антитела срещу човешки имуноглобулини (антитела). Ако откриваемите антитела присъстват в тестовия серум, тогава на този етап те ще действат като антигени, с които белязаните антитела ще реагират. Добавянето на хромогенно вещество (багрило) след измиване ще позволи да се вземе предвид реакцията чрез развитие на оцветяване в клетките. В този случай интензитетът на цвета е пропорционален на количеството ензим и следователно количеството на антителата.При измерване на оптичната плътност (ОП) на течност в клетка и сравняването й с контролна проба се изчислява концентрацията на антитела в обемни единици Най-често използваните резултати се изчисляват в единици оптична плътност Всяка тестова система има свои собствени показатели за отчитане на резултатите и показатели за норма и патология, които трябва да се ръководят при тълкуване на резултатите.

Какви инфекции могат да бъдат открити чрез ELISA

Използва се основно в съвременната венерология за диагностика на сифилис (в комбинация с други реакции), ХИВ инфекция, вирусен хепатит.Има ограничено значение за диагностицирането на хламидийна инфекция, цитомегаловирусна инфекция и други херпесни инфекции.Методът ELISA също е използва се за определяне на антитела при различни инфекциозни заболявания, нива на хормони, автоантитела и различни ракови маркери.

Как да тълкуваме резултатите от ELISA

Изследването на наличието и нивото на антитела от различни класове в някои случаи помага да се определят етапите на инфекциозния процес

За съжаление такова важно предимство на ELISA като количественото определяне на антитела не е от голямо значение в практическата работа - т.е. не позволява точна диагноза и не влияе на дозировката и времето на предписване на лекарства.

Каква е ролята на метода ELISA в диагностиката на сифилис

Методът ELISA при диагностицирането на сифилис е използван за първи път през 1975 г. В момента той се използва широко за серологична диагностика на сифилис в Русия и се използва като потвърждаващ тест за сифилис. Обикновено се провежда изследване, което открива т.н. наречени общи антитела срещу антигени на treponema pallidum (IgM и IgG), въпреки че в някои случаи е възможно да се определят само "ранни" антитела от клас М. ELISA за сифилис става положителен след 3 седмици от момента на инфекцията и остава положителен за доста дълго време дори след лечение (понякога за цял живот).Следователно, като тест, потвърждаващ лечението на сифилис, ELISA не се използва.В повечето случаи се извършва само качествено определяне на ELISA - т.е. само положителен или отрицателен резултат, въпреки че е възможно и количествено определяне.

ELISA (ензимно-свързан имуносорбентен анализ, ELISA - английски) навлиза в живота на практическата медицина някъде другаде през 60-те години на миналия век. Първоначалната му задача е хистологично изследване за научни цели, което се ограничава до търсене и идентифициране на антигенната структура на клетките на живия организъм.

Методът ELISA се основава на взаимодействието на специфични (AT) и свързани антигени (AG) с образуването на комплекс антиген-антитяло, който се открива с помощта на ензим. Този факт навежда учените на идеята, че методът може да се използва за диагностични цели за идентифициране на специфични имуноглобулини от различни класове, участващи в имунния отговор към определена инфекция. И това беше пробив в клиничната лабораторна диагностика!

Методът започва да се използва активно едва в началото на 80-те години, и то предимно в специализирани институции. Първите анализатори ELISA бяха доставени на центрове и станции за кръвопреливане, инфекциозни и венерически болници, тъй като страховитият СПИН, роден на африканския континент, се появи на хоризонта с нас и веднага се присъедини към „старите“ инфекции, изисква незабавни мерки за диагностициране и търсене на терапевтични лекарства, които му въздействат.

Обхват на метода ELISA

Възможностите на ензимния имуноанализ са наистина обширни.Сега е трудно да си представим как може да се направи без такива изследвания, които се използват буквално във всички отрасли на медицината. Изглежда, че ELISA може да направи в онкологията? Оказва се, че може. И то много. Способността на анализа да открива маркери, характерни за определени видове злокачествени новообразувания, е в основата на ранното откриване на тумор, когато той все още не е открит по друг начин поради малкия си размер.

Съвременната клинична лабораторна диагностика (КЛД), в допълнение към туморните маркери, разполага със значителен арсенал от панели за ELISA и ги използва за диагностициране на различни патологични състояния (инфекциозни процеси, хормонални нарушения) и мониториране на фармацевтични лекарства, за да идентифицира ефекта им върху пациента. тяло и, между другото, не само човек. В момента ензимният имуноанализ се използва широко във ветеринарната служба, тъй като "нашите по-малки братя" също са податливи на много заболявания, от които понякога страдат много.

По този начин, ELISA, поради своята чувствителност и специфичност, може да определи от кръвна проба, взета от вена:

• Хормонален статус (хормони на щитовидната жлеза и надбъбречните жлези, полови хормони);
• Наличието на вирусна и бактериална инфекция (HIV, B и C, хламидия, сифилис и, и, както и много други заболявания, причинени от патогенни микроорганизми);
• Следи от жизнена активност на микроорганизми, които са инициирали инфекциозния процес, който е завършил успешно и е преминал към етапа на формиране на имунен отговор към този патоген. Такива следи, тоест антитела, в много случаи остават да циркулират в кръвта за цял живот, което предпазва човек от повторно заразяване.

Каква е същността на IF?

Методът на ензимния имуноанализ позволява да се определи не само наличието на самия патоген (качествен анализ), но и неговото количествено съдържание в кръвния серум на пациента.

Вирусна или бактериална доза значително влияе върху хода на инфекциозния процес и неговия резултат, следователно количественият анализ играе важна роля в диагностиката и лечението на заболявания в различни форми и етапи.

Познавайки обаче ензимно-свързания имуноанализ като метод ELISA, ние дори не се замисляме как той успява да обхване толкова широк спектър от микроорганизми, обитаващи нашата планета, много от които представляват пряка заплаха за здравето и живота на хората и животни. Факт е, че ELISA има много опции (неконкурентни и конкурентни - директни и косвени), всяка от които решава свой собствен проблем и по този начин дава възможност за целенасочено търсене.

За откриване на имуноглобулини от един или друг клас се използва традиционен 96-ямков панел от полистирол (таблетка), в чиито ямки са концентрирани адсорбирани рекомбинантни протеини в твърда фаза. Антителата или антигените, попаднали в ямката с кръвен серум, намират „познат“ обект и образуват комплекс с него (AG - AT), който, фиксиран от ензимния конюгат, ще се прояви като промяна в цвета на ямката при четене на резултатите.

Имуноензимният анализ се извършва на тест-системи с определена специфичност, направени в специални лаборатории и оборудвани с всички необходими реагиращи компоненти. Изследванията могат да се извършват с помощта на шайби ("шайби") и спектрофотометри за отчитане, където е включен най-много ръчен труд. На напълно автоматични машини, освобождаващи лаборанта от монотонно вливане, измиване и други рутинни задачи, разбира се, е по-бързо и по-удобно да се работи, но не всички лаборатории могат да си позволят такъв лукс и да продължат да работят по старомодния начин - на полуавтоматични устройства.

Тълкуването на резултатите от ELISA е в компетенцията на лекаря по лабораторна диагностика, като задължително се взема предвид свойството, присъщо на почти всички имунохимични реакции, да дават фалшиво положителни или фалшиво отрицателни отговори.

Видео: модерен ензимен имуноанализ

Резултати от ELISA на примера на сифилис

ELISA е подходящ за откриване на всички формии освен това се използва в скринингови изследвания. За анализ се използва венозна кръв на пациента, взета на празен стомах. В работата се използват плаки с определена специфичност (AT класове A, M, G) или общи антитела.

Като се има предвид, че антителата при сифилис се произвеждат в определена последователност, ELISA може лесно да отговори на въпроса кога е настъпила инфекцията и на какъв етап е процесът, а декодирането на получените резултати може да бъде представено в следната форма:

• IgM показват продължителността на инфекциозния процес (може да се появи по време на обостряне на хронични възпалителни заболявания);
• IgA показват, че инфекцията е станала преди повече от месец;
• IgG показват, че инфекцията е в разгара си или скорошно лечение, което лесно се установява при събиране на анамнеза.

При тестване за сифилис, отрицателните ямки (и отрицателната контрола) ще останат безцветни, докато положителните (като положителната контрола) ще покажат ярко жълт цвят поради промяната на цвета на добавения по време на теста хромоген. Но интензивността на цвета не винаги съответства на контролата, тоест може да е малко по-бледа или леко жълтеникава. Това са съмнителни резултати, които по правило подлежат на повторно изследване със задължителното отчитане на количествените показатели, получени на спектрофотометъра, но като цяло цветът е пряко пропорционален на броя на имунните комплекси (свързани антигени и антитела). един на друг).

Най-вълнуващият ензимен имуноанализ - ELISA за HIV

Анализът, може би повече от други, представлява интерес за широк кръг от населението, тъй като все още не е възможно да се каже със сигурност, че много социални проблеми (проституция, наркомания и др.) са изчезнали. За съжаление, ХИВ засяга не само тези части от човешкото общество, можете да се заразите при различни обстоятелства, които не са свързани със сексуална безразборност или употреба на наркотици. Но ако има нужда от тест за ХИВ, тогава не трябва да се страхувате, че всички наоколо ще разберат за посещението на такава лаборатория. Сега ХИВ-инфектираните са защитени от закона и тези, които имат съмнения, могат да се обърнат към анонимни офиси, където могат да разрешат проблема без страх от публичност и осъждане.

Ензимният имуноанализ, използван за диагностициране на ХИВ инфекция, е едно от основните стандартни изследвания, които обаче изискват специални условия, тъй като темата е много чувствителна.

Има смисъл да се провежда ELISA за ХИВ след сексуален контакт, кръвопреливане, други медицински процедури, свързани с инфекция, и в края на инкубационния период („серонегативен прозорец“), но трябва да се има предвид, че този период от време не е постоянен. Може да приключи след 14-30 дни или да продължи до шест месеца, така че средната стойност се счита за интервал от 45 до 90 дни. Кръвта се дарява за ХИВ по същия начин, както при други инфекции - от вена на празен стомах. Резултатите ще бъдат готови в зависимост от натрупването на материал в лабораторията и нейната натовареност (от 2 до 10 дни), въпреки че повечето лаборатории дават отговор на същия ден или на следващия.

Какво може да се очаква от резултатите за ХИВ?

ELISA за HIV инфекция открива антитела срещу два вида вирус: HIV-1 (по-често срещан в Русия и други европейски и азиатски страни) и HIV-2 (по-често срещан в Западна Африка).

Задачата на HIV ELISA е да търси антитела от клас G, които се откриват във всички тестови системи, но в по-късен период, и антитела от клас А и М, откривани в рекомбинантни тестови комплекти от ново поколение, което позволява откриването на антитела най-рано етапи (инкубационният период е серонегативен прозорец). От ELISA могат да се очакват следните отговори:

1. Първичен положителен резултат: кръвта подлежи на повторна проверка на тестова система от същия тип, но по възможност от друга серия и от друго лице (лаборант);
2. Повторното (+) включва ново вземане на кръв от пациент с изследване, подобно на първичния анализ;
3. Следващият положителен резултат подлежи на референтен анализ, при който се използват високоспецифични тестови комплекти (2-3 бр.);
4. Положителният резултат и в двете (или три) системи се изпраща за имуноблотинг (същият ELISA, но извършен индивидуално върху тестови комплекти с особено висока специфичност).

Заключението за HIV инфекция се прави само въз основа на имуноблотинг. Със заразения се провежда разговор при пълна конфиденциалност. Разкриването на медицинска тайна в Русия, както и в други страни, подлежи на наказателно наказание.

Анализите за хламидия и цитомегаловирус чрез ензимен имуноанализ също придобиха особена популярност, поради факта, че ви позволяват да определите времето на инфекцията, стадия на заболяването и ефективността на терапевтичните мерки.

По време на въвеждането е възможно също да се наблюдава появата на антитела от различни класове.в различни фази на патологично състояние, причинено от инфекциозен агент:

• IgM може да се открие още седем дни след заразяването;
• IgA показват, че инфекцията живее в тялото повече от месец;
• IgG потвърждава диагнозата хламидия, помага да се наблюдава лечението и да се определи неговата ефективност. Трябва да се отбележи, че антителата от клас G остават и циркулират в тялото независимо от продължителността на заболяването, следователно за правилното тълкуване на анализа трябва да се вземат предвид референтните стойности (норми), които, от начина, са различни за всеки CDL: като се вземе предвид марката на тест системата и спецификата на реагентите, включени в комплекта. Нормалните стойности се въвеждат във формуляра до резултата от ELISA.

Що се отнася до това, тук е малко по-различно:антитела от клас М се появяват след около месец и половина, т.е. положителен резултат (IgM +) става във фазата на първична инфекция или по време на реактивиране на латентна инфекция и остава такъв от 4 месеца до шест месеца.

Наличието на антитела от клас G е характерно за началото на първична остра инфекция или реинфекция. Анализът посочва наличието на вируса, но не дава информация на какъв етап е инфекциозният процес. Междувременно определянето на нормата на титъра на IgG също създава трудности, тъй като зависи изцяло от имунния статус на конкретен човек, който обаче се установява чрез откриване на имуноглобулини от клас G. Като се има предвид това поведение на антителата, при диагностицирането на CMVI, става необходимо да се оцени способността на антителата от клас G да взаимодействат с CMV, за да го „неутрализират“ по-късно (AT авидитет). В началния стадий на заболяването IgG се свързва много слабо с антигените на вируса (нисък авидитет) и едва тогава те започват да проявяват активност, следователно можем да говорим за повишаване на авидитета на антителата.

Можем да говорим за предимствата на ензимния имуноанализ дълго време, тъй като този метод успя да реши много диагностични проблеми, използвайки само венозна кръв. Няма нужда от дълго чакане, притеснения и проблеми с вземането на материал за изследване. В допълнение, тестовите системи за ELISA продължават да се подобряват и денят, в който тестът ще даде 100% надеждност на резултата, не е далеч.

Видео: учебен филм на Московския държавен медицински университет. Сеченов за основите на ELISA

Методът на ензимния имуноанализ е съвременен метод за лабораторно изследване на кръвта за наличието на антитела срещу вируси и антигени към патогени в нея. Този метод е в състояние не само да идентифицира етиологията, но и да определи стадия на заболяването. Резултатите от анализа имат качествен и количествен показател.

Защо се прави ензимен имуноанализ?

• кръвни изследвания () за наличие на автоимунни заболявания в него;
• изследване на пациента за туморни маркери;
• способността за изследване на хормоналния състав на кръвта;
• търсене на антигени за инфекциозни и венерически болести;
• търсене на антитела срещу вирусни инфекции.

Предимствата на имуноензимния анализ са, че той гарантира висока степен на специфичност на резултатите и има висока чувствителност (повече от 90%) към инфекциозни агенти. ELISA е достъпен диагностичен метод, който се извършва във всеки медицински център. Също така, използвайки този метод, можете да определите не само заболяването, но и да наблюдавате процеса на неговото развитие, като сравнявате количеството протеин, произведен в кръвта на различни интервали.

Единственият недостатък на ELISA може би е, че не може да се използва за определяне на причинителя на инфекцията, а само за идентифициране на имунния отговор към този патоген.

Основни термини на ензимния имуноанализ (ELISA)

Първо, нека се справим с някои понятия, за да разберем принципа на провеждане на лабораторно изследване.

Имунният комплекс е комплекс от антитела и антигени, присъстващи в кръвта и участващи в имунния процес.

Антигените са вещества, които имат органичен произход и се образуват в резултат на определено заболяване в клетките на тялото. Причината за това може да е автоимунно или онкологично заболяване. Също така антигените могат да бъдат вещества от различни патогени на инфекциозни заболявания.

Авидността на антитялото е мярка за силата на връзката между антиген и антитяло, както и количеството антиген, което е влязло в контакт с антитела (имуноглобулини).
Това е много важен показател, тъй като може да се използва за определяне на датата на заразяване на човек, което е много важно за инфекцията по време на гестационната възраст.
Тестът за авидност се извършва в лаборатория чрез третиране на комплекса антитяло-антиген с урея, която разрушава протеина. В този случай съединенията с ниска авидност се унищожават, докато съединенията с висока авидност остават непокътнати. Резултатите от теста за авидност се изразяват в проценти.

Антителата (имуноглобулини) са специален протеин, произвеждан от лимфоцити, т.е. имунни клетки, когато бактерии, вируси или гъбички (инфекциозен патоген) навлязат в човешкото тяло.
Има пет вида имуноглобулини: A, E, M, G, D. Те се различават един от друг по маса, форма, участие в инфекциозния процес, полуживот и време на образуване от момента на инфекцията.
Имуноглобулинът IgM (пентамер) има най-голямо молекулно тегло, тежи 950 000 далтона, докато останалите имат тегло в диапазона 150 - 200 000 далтона. Поради размера си IgM не преминават през плацентарната бариера. IgG имуноглобулините заемат по-голямата част от кръвния серум, техният процент е приблизително 80%. И най-малка част в серума е заета от IgE антитела - 0,003%. Имуноглобулините IgG, IgM, IgA участват в инфекциозния процес. Докато IgE са резултат от алергични реакции. Протеини като IgD участват в образуването на локален имунитет и се образуват в лимфните възли и сливиците.

Има няколко вида ELISA, сред които директен, индиректен, конкурентен и блокиращ метод. Въпреки че на практика лабораторните техници най-често използват твърдофазов хетерогенен имуноанализ, наречен ELISA (ензимно свързан имуносорбентен анализ).

Принципът на ензимния имуноанализ се проявява в реакцията на антитяло и антиген, при което се образува имунен комплекс - антиген-антитяло. Такава реакция води до промяна на ензимната активност на етикетите на повърхността на антителата.

За да разберем това, ще разгледаме този процес на етапи.

Първи етап. На този етап лабораторният асистент, провеждащ изследването, поставя пречистения антиген на инфекциозния агент върху повърхността на ямките на таблетката. След това кръвният серум на пациента се добавя към патогена, което провокира специфична реакция между антитялото в кръвта и антигена. Това съединение се получава и участва в следващия етап от експеримента.

Втора фаза. На втория етап от изследването се образуват имунни комплекси, които са реакцията между антигена, получен на първия етап, и конюгата, т.е. имуноглобулин, белязан с ензима пероксидаза. В този случай се добавя специфичен хромоген. Реакцията произвежда оцветено съединение в ямката. Интензивността на цвета в този случай зависи от количеството имуноглобулини, съдържащи се в кръвта на пациента.

Трети етап. На третия етап лабораторните асистенти обикновено оценяват резултатите от изследването. За целта се извършва фотометрия с помощта на спектрофотометър, сравнение на плътността на биологичния материал с плътността на пробите и се извършва математическо изчисление на резултатите. Нивото на имуноглобулините в кръвта зависи от плътността на гнездото на таблетката.
В практиката най-често се използват 96-ямкови плаки.

Когато се измерва оптичната плътност (съкратено IP) на кръвта, тогава антителата се преброяват в една единица обем. След това резултатът се сравнява с контролния материал.
Важно е да запомните, че всеки метод на изследване има свои собствени показатели, които отчитат референтните стойности на теста. Това са показатели за патологии и норми. Следователно трябва да помните това във всеки случай. Невъзможно е резултатите от едно изследване да се интерпретират в друго. Освен това е невъзможно да се сравняват резултатите от отделните лаборатории.

Заболявания, открити чрез ELISA диагностика

С помощта на ензимен имуноанализ е възможно да се открие наличието на такива заболявания в организма:

1) Инфекциозни заболявания

2) Индикатори за състоянието на човешкия имунитет и маркери на автоимунни заболявания.
3) Онкологични заболявания (хроничен гонадотропин, простатно-специфичен антиген, алвеомуцин, фактор на туморна некроза, раково-ембрионален антиген и др.).
4) Ендокринни заболявания.
5) Нарушения на репродуктивната система.

Списъкът не включва всички заболявания, които могат да бъдат диагностицирани с помощта на ELISA, този списък може да бъде продължен.

Проучване

Вземане на материал за изследване чрез имуноензимен анализ.

За ELISA изследвания пациентите могат да вземат цереброспинална течност, стъкловидна течност, амниотична течност, слуз от цервикалния канал или уретрата, както и намазки. Но най-честата проба за изследване все още е кръвта на пациента.

Резултатите от имуноензимния анализ обикновено се правят в рамките на един ден. Закъсненията не трябва да се случват, въпреки че при големи натрупвания на серуми лабораторните асистенти може просто да нямат време да направят анализа навреме.

Резултати от изследванията

При оценката на резултатите от изследванията, проведени за идентифициране на всякакви инфекции, броят на имуноглобулините, открити в кръвта, както и техният тип, е от особено значение. Наличието на инфекция в тялото или нейното отсъствие зависи от тези показатели. Също така, чрез сравняване на количествени и качествени показатели, лаборантът може да определи очаквания стадий на развитие на заболяването, както и да разграничи острата форма на заболяването от хроничната форма. Оценява се и наличието на активен вирус в човешкото тяло, което се проявява в обострена хронична или остра форма на заболяването.
Приблизително време, след което Ig имуноглобулините се появяват в кръвта.

Въпросът е, че IgM са най-бързо появяващите се антитела. Откриването им става в рамките на 1-3 седмици след процеса на инфекция на тялото, това е признак на острата фаза на инфекция с човешки вирус.

Също така, такива антитела могат да бъдат открити в кръвта на пациента по време на обостряне на хронично заболяване. Количеството IgM антитела се запазва около 3 месеца от момента на образуването им, след което те постепенно започват да изчезват. Въпреки че има изключения. Например, някои пациенти след окончателното възстановяване запазват количеството антитела в кръвта си. По този начин циркулацията на имуноглобулините се извършва няколко години след инфекцията.

При такива пациенти е необходимо да се проверят положителните показатели за наличие на IgM антитела, тъй като са възможни ситуации, когато системата за тестване прави грешка и дава фалшив положителен резултат. Такива ситуации много често се случват при бременни жени.

Що се отнася до появата на IgA антитела, те могат да се образуват 2 или 4 седмици след като тялото е било изложено на инфекцията. Но антителата могат да бъдат открити само след месец. Тогава техният брой достига оптималния брой за откриване.

IgA антителата се произвеждат от клетките на лимфните възли, далака и лигавиците. Такива имуноглобулини са в състояние да се концентрират върху повърхностите на лигавиците на органите, където изпълняват своята защитна функция, участвайки в местния човешки имунитет.

Появата на IgG антитела може да се проследи чрез тестови системи още на 4-та седмица от прогресирането на инфекциозния процес в организма. Титърът на такива имуноглобулини може постепенно да се увеличи в продължение на 2 месеца. След възстановяване малък титър от тях остава в организма и подпомага имунната система. Заболявания като хламидия, трихомониаза и микоплазмоза се характеризират с ниско ниво на IgG антитела в кръвта, което се обяснява с липсата на силен имунитет срещу такива инфекции.

Класове

Варианти на откриване в човешка кръв на имуноглобулини от различни класове.

• Откриването на IgM антитела, което се извършва изолирано, показва първична инфекция на човек.
• Откриването в кръвния серум едновременно на антитела от клас IgM и IgG се случва и по време на първичната инфекция, настъпила през последните 2-3 месеца. Или тази комбинация може да е признак на обостряне на хронично заболяване.
• Следователно такива резултати по време на бременност не винаги показват първична инфекция.
• Откриването на IgG антитела в изолация може да е признак за имунитет към тази инфекция, въпреки че може също да показва хронично заболяване. При наличие на хронична форма на заболяването количеството на антителата и тяхната динамика играят важна роля. Такива изследвания се провеждат на интервали от приблизително 2 седмици.
• Когато IgA и IgM антителата присъстват веднага в кръвта, това може да означава първична инфекция. Откриването на IgA в изолация също е следствие от първичната инфекция на тялото.

Когато се открият IgA антитела заедно с IgG антитела, това означава активиране на хроничната форма на инфекцията. Имуноглобулините се появяват в кръвта 2 седмици след обостряне на заболяването.
Авидността на антителата е мярка за силата на връзката между антиген и антитяло, както и количеството антиген, което е влязло в контакт с антитела (имуноглобулини). Това е допълнителна стъпка в диагностиката чрез ELISA.

Това е много важен показател, тъй като може да се използва за определяне на датата на заразяване на човек, което е много важно за инфекцията по време на гестационната възраст. Освен това можете да оцените всички рискове от вътрематочна инфекция на детето.

Тестът за авидност се извършва в лаборатория чрез третиране на комплекса антитяло-антиген с урея, която разрушава протеина. В този случай съединенията с ниска авидност се унищожават, докато съединенията с висока авидност остават непокътнати. Резултатите от теста за авидност се изразяват в проценти. Високата авидност на антителата показва хронична форма на заболяването или е признак на постоянен имунитет.

Характеристики на появата на антитела в кръвта на кърмачета

Ако майчиният IgG се открие в кръвта на деца на възраст под една година или до 1,5 години, това означава, че антителата са влезли в тялото на детето през плацентата по време на бременността. Този симптом не може да означава инфекция на бебето, а е имунитет към инфекция, предавана от майката.

Но ако в малък организъм се открият имуноглобулини от клас IgM, които поради теглото си не могат да проникнат през плацентата до бебето, това е признак на инфекция. Инфекцията може да възникне след раждането или по време на развитието на плода.

Метод за количествен имуноензимен анализ.

Резултатът от диагностицирането на заболявания чрез ELISA се представя в определени мерни единици:

1. OD - оптичната плътност на пробата - е нивото на концентрация на антитела в една единица обем. Колкото по-висок е този показател, толкова повече имуноглобулини има в кръвта.
2. Някои резултати от ELISA предполагат наличието на такава единица като коефициент на положителност - CP. Това също е обозначение за плътността на пробата.
3. Единиците за концентрация на имуноглобулин се изразяват в нанограми, милилитри или ng/ml.
4. Серумните титри се изразяват както следва: 1:20, 1:40, 1:100, 1:200, 1:400, 1:800, 1:1200 и други подобни.
5. Титрите, при които се диагностицира заболяването при различните инфекции, са различни.
6. Резултатите от изследването съдържат следните символи: "-", "+", "?" (+, ++, +++, ++++).
7. Качествената оценка предполага наличието само на една от двете точки: положителна или отрицателна.

Правилното тълкуване на резултатите от това изследване зависи от квалификацията на лекаря, тъй като никой освен специалист няма право да предписва лечение.

Специалистите оценяват количеството на антителата в кръвта, техния вид и концентрация.

Също така трябва да се помни, че е невъзможно да се сравняват резултатите от различни методи на изследване или резултатите от тестове, получени в различни лаборатории. Тъй като за всеки диагностичен метод има индикатори и мерни единици.

Сравнението на резултатите е разрешено само в една и съща лаборатория.

Видео на метода ELISA