Imunoblot šta pokazuje. Dijagnoza AIDS-a imunoblotom za HIV

Imuni blot (imunoblot, Western blot, Western blot)- kombinuje enzimski imunosorbentni test (ELISA) s preliminarnim elektroforetskim prijenosom virusnih antigena na nitroceluloznu traku (traku).

U ovom prekrasnom naučnom nazivu, “blot” se najvjerovatnije prevodi kao “blot”, a “western” kao “zapadni” odražava smjer distribucije ove “mrlje” na papiru s lijeva na desno, odnosno na geografskoj karti, ovo odgovara smjeru od zapada prema istoku." Suština metode "imune blot" je da se imunoenzimska reakcija ne provodi sa mješavinom antigena, već s HIV antigenima, prethodno raspoređenim imunoforezom u frakcije smještene prema molekularnoj težini na površini nitrocelulozne membrane. Kao rezultat toga, glavni proteini HIV-a, nosioci antigenskih determinanti, distribuiraju se po površini u obliku odvojenih traka, koje se pojavljuju tokom enzimskog imunoeseja.

Imunoblot uključuje nekoliko faza:

Priprema trake. Virus imunodeficijencije (HIV), koji je prethodno pročišćen i uništen do svojih sastavnih komponenti, podvrgava se elektroforezi, dok se antigeni koji čine HIV razdvajaju po molekularnoj težini. Zatim, upijanjem (analogno istiskivanju viška mastila na "bloteru"), antigeni se prenose na traku nitroceluloze, koja sada sadrži spektar antigenskih traka karakterističnih za HIV, nevidljivih za oko.

Uzorak studije. Ispitni materijal (serum, krvna plazma pacijenta, itd.) se nanosi na nitroceluloznu traku, a ako u uzorku postoje specifična antitijela, ona se vezuju za striktno odgovarajuće (komplementarne) antigene trake. Kao rezultat naknadnih manipulacija, rezultat ove interakcije se vizualizira - postaje vidljiv.

Interpretacija rezultata. Prisustvo traka u određenim područjima nitrocelulozne ploče potvrđuje prisustvo u ispitivanom serumu antitela na strogo definisane HIV antigene.

    Traka A - Pozitivna kontrola

    Traka B - Slaba pozitivna kontrola

    Traka C - negativna kontrola

    Strip D - Pozitivan uzorak (otkrivena antitijela na HIV-1)

Trenutno je imunološki blot (imunoblot) glavna metoda za potvrđivanje prisustva antitijela specifičnih za virus u test serumu. U nekim slučajevima HIV infekcije, prije serokonverzije, specifična antitijela se efikasnije otkrivaju imunoblotingom nego ELISA-om. Imuno blot studija je otkrila da se antitijela na gp 41 najčešće otkrivaju u serumima oboljelih od AIDS-a, a otkrivanje p24 kod osoba pregledanih u profilaktičke svrhe zahtijeva dodatne studije na prisustvo HIV infekcije. Imunoblot test sistemi zasnovani na genetski modifikovanim rekombinantnim proteinima pokazali su se specifičnijim od konvencionalnih sistema baziranih na pročišćenom lizatu virusa. Pri korištenju rekombinantnog antigena formira se ne difuzna, već jasno definirana uska traka antigena, koja je lako dostupna za obračun i procjenu.

Serum osoba inficiranih HIV-1, detektovati antitela na sledeće glavne proteine ​​i glikoproteine ​​- proteini strukturnog omotača (env) - gp160, gp120, gp41; jezgra (gag) - p17, p24, p55, kao i enzimi virusa (pol) - p31, p51, p66. Za HIV-2, tipična su antitela na env - gp140, gp105, gp36; gag - p16, p25, p56; pol-p68.

Među laboratorijskim metodama neophodnim za utvrđivanje specifičnosti reakcije, najveću prepoznatljivost ima detekcija antitijela na proteine ​​ovojnice HIV-1 - gp41, gp120, gp160 i HIV-2 - gp36, gp105, gp140.

SZO smatra serume pozitivnim ako se imunoblotingom otkriju antitijela na bilo koja dva HIV glikoproteina. Prema ovim preporukama, ako dođe do reakcije samo sa jednim od proteina ovojnice (rp 160, rp 120, rp 41) u kombinaciji ili bez reakcije s drugim proteinima, rezultat se smatra sumnjivim i preporučuje se drugi test pomoću kompleta iz druge serije ili iz druge kompanije. Ako nakon ovoga rezultat ostane sumnjiv, preporučuje se promatranje 6 mjeseci (istraživanje nakon 3 mjeseca).

Prisustvo pozitivne reakcije na antigen p24 može ukazivati ​​na period serokonverzije, jer se antitijela na ovaj protein ponekad pojavljuju prva. U ovom slučaju preporučuje se, ovisno o kliničkim i epidemiološkim podacima, ponoviti ispitivanje sa uzorkom seruma uzetim najmanje 2 sedmice kasnije, a to je upravo slučaj kada su upareni serumi potrebni kod HIV infekcije.

Pozitivne reakcije sa gag i pol proteinima bez prisustva reakcije sa env proteinima mogu odražavati stadijum rane serokonverzije, a takođe mogu ukazivati ​​na HIV-2 infekciju ili nespecifičnu reakciju. Osobe sa takvim rezultatima nakon testiranja na HIV-2 ponovo se pregledaju nakon 3 mjeseca (unutar 6 mjeseci).

Šta je to - imunoblot? Ovo je uobičajena metoda za laboratorijsku dijagnostiku ljudskih virusnih infekcija. Smatra se jednim od najpreciznijih i najpouzdanijih načina otkrivanja prisustva HIV-a. Po svojoj pouzdanosti nadmašuje čak i rezultate imunoblota koji se smatraju nepobitnim i konačnim.

opće informacije

Imunoblot - šta je to? Da bi se kod osobe prepoznala HIV infekcija, potrebno je podvrgnuti se laboratorijskom ispitivanju krvnog seruma na prisustvo antitijela. Western blot tehnika se također naziva Western blot. Koristi se za otkrivanje ljudskih virusnih infekcija kao dodatna stručna metoda. Potrebno je potvrditi ELISA - laboratorijski test koji vam omogućava da utvrdite prisustvo antitijela na HIV u krvi. Pozitivna ELISA analiza se ponovo provjerava imunoblotingom. Smatra se najosjetljivijim, složenijim i skupim.

svrha

Šta je to - imunoblot? Ovo je tehnika za laboratorijsko ispitivanje krvnog seruma na prisustvo antitijela na virus. Tokom studije, specijalist prethodno odvaja proteine ​​virusa u gelu i prenosi ih na nitroceluloznu membranu. Procedura imunoblotinga namijenjena je utvrđivanju HIV-a u različitim fazama. U prvoj fazi, pročišćeni virus iz njegovih sastavnih dijelova se podvrgava elektroforezi, a antigeni koji čine njegov sastav se odvajaju po molekularnoj težini.

Reproducira se u živoj ćeliji, ugrađujući svoje genetske informacije u nju. U ovoj fazi, osoba postaje nosilac virusa HIV-a ako je zaražena. Specifičnost bolesti je u tome što se može dugo vremena ne manifestirati. Virus uništava limfocite, pa se ljudski imunitet smanjuje, a tijelo postaje nesposobno da se odupre infekcijama. Ako se HIV liječi kompetentno i na vrijeme, pacijent će doživjeti duboku starost. Nedostatak terapije neminovno dovodi do smrti. Od trenutka infekcije, ali bez liječenja, maksimalni životni vijek nije duži od deset godina.

Posebnosti

Imunoblot analiza je pouzdana metoda koja vam omogućava da odredite prisutnost antitijela na HIV antigene prvog i drugog tipa. Ako je osoba zaražena, antitijela se pojavljuju u roku od dvije sedmice, koja se mogu otkriti mnogo kasnije. Posebnost HIV-a je da se broj antitijela brzo povećava i ostaje u krvi pacijenta. Čak i ako su prisutni, bolest se možda neće manifestirati dvije ili više godina. ELISA metoda ne može uvijek precizno odrediti prisutnost bolesti, stoga je potrebna potvrda rezultata imunoblotingom i PCR-om ako je enzimski imunotest pozitivan.

Indikacije za termin

Šta je to "imunoblot" već je otkriveno, ali kome se ova studija prepisuje? Razlog za testiranje na metodu imunoblotinga je pozitivan rezultat ELISA. Za pacijente koji će biti operisani potrebno je proći enzimski imunotest. Osim toga, treba napraviti analizu za žene koje planiraju trudnoću, kao i za sve koji su seksualno promiskuitetni. Dodijelite imunobloting pacijentima sa HIV-om, ako su rezultati ELISA upitni. Razlog za odlazak ljekaru mogu biti sljedeći alarmantni simptomi:

  • oštar gubitak težine;
  • slabost, gubitak radne sposobnosti;
  • poremećaj crijeva (proljev) koji traje tri sedmice;
  • dehidracija organizma;
  • vrućica;
  • otečeni limfni čvorovi u tijelu;
  • razvoj kandidijaze, tuberkuloze, upale pluća, toksoplazmoze, pogoršanja herpesa.

Pacijent se ne mora pripremati prije davanja venske krvi. 8-10 sati prije studije ne možete jesti. Nije preporučljivo piti alkoholna pića i pića od kafe, baviti se teškim fizičkim vježbama, iskusiti uzbuđenje dan prije davanja krvi.

Gdje uraditi analizu?

Gdje se mogu testirati na HIV? ELISA, imunoblot studije se provode u urbanim privatnim klinikama, rezultati se objavljuju u roku od jednog dana. Moguća je i trenutna dijagnoza. U državnim medicinskim ustanovama, ELISA testovi i imunobloting se provode besplatno, u skladu sa zakonodavstvom Ruske Federacije. Trudnice, kao i pacijenti koji se nalaze u bolnici ili na operaciji, obavezni su da se testiraju na zarazne bolesti.

Kako se radi istraživanje?

Kako se izvodi ELISA? Imunoblot pozitivan/negativan potvrđuje ili opovrgava rezultate enzimskog imunoeseja. Procedura istraživanja je prilično jednostavna. Specijalista provodi vađenje venske krvi, a vremenom to ne traje više od pet minuta. Nakon uzorkovanja, mjesto ubrizgavanja treba dezinficirati i zapečatiti flasterom. Uzorkovanje se vrši na prazan želudac, tako da nakon zahvata ne škodi pojesti pločicu crne čokolade ili popiti slatki topli napitak.

Da biste dobili uputnicu za besplatnu analizu u javnoj zdravstvenoj ustanovi, potrebno je da posetite lekara opšte prakse. Općenito, imunoblot se ne razlikuje od drugih testova krvi u smislu metode uzorkovanja. Metodologija istraživanja je jednostavna. Ako je virus prisutan u krvi osobe, tijelo počinje proizvoditi antitijela kako bi ga uništila. Svaki virus ima svoj skup antigenskih proteina. Detekcija ovih antitijela je osnova Western blotting tehnike.

Cijena

Koliko košta analiza? Imunoblot za HIV se ne primjenjuje na jeftina istraživanja. U prosjeku, skrining pregled enzimskim imunotestom košta od 500 do 900 rubalja. Imunobloting je verifikaciona studija, čija je cijena od tri do pet hiljada rubalja. Složenije metode su mnogo skuplje. Na primjer, za to ćete morati platiti oko 12.000 rubalja.

Interpretacija rezultata

Najčešće metode za dijagnosticiranje HIV infekcije su enzimski imunotest i imunoblot. Koriste se za određivanje serumskih antitijela na virus imunodeficijencije. Prisustvo infekcije obično se potvrđuje pomoću dva testa: skrining i potvrdni. Tumačenje rezultata studije trebao bi obaviti liječnik, on također postavlja dijagnozu i propisuje liječenje. Ako je imunoblot pozitivan, to znači da je virus prisutan u ljudskom tijelu.

Pozitivan rezultat ne bi trebao biti razlog za samoliječenje, jer svaki pacijent može imati svoju sliku bolesti. Kvalitativna analiza uključuje skrining i verifikaciju. Ako pacijent nema virus, rezultat se označava kao „negativan“. Kada se otkrije metodom skrininga, provodi se dodatna studija verifikacije. Imunoblot je analiza koja potvrđuje ili opovrgava skrining. Ako se na test traci pojavi potamnjenje u određenim područjima (mjesta lokalizacije proteina), postavlja se dijagnoza HIV-a. Ako su rezultati upitni, testovi se provode u roku od tri mjeseca.

Zarazu virusom imunodeficijencije možete spriječiti ako se pridržavate određenih pravila: izbjegavajte neobavezne seksualne odnose, koristite kondom tokom kontakta, ne uzimajte droge. Ako se bolest otkrije kod trudnice, važno je striktno slijediti preporuke liječnika, ne zaboravite proći preglede na prisutnost virusa.

IMMUNOBLOT(Western blot) - metoda laboratorijskog ispitivanja krvnog seruma na prisustvo antitijela na HIV; to je precizniji test od ELISA i koristi se za potvrdu rezultata ELISA. ELISA - enzimski imunosorbentni test (ELISA) - laboratorijski test koji vam omogućava da odredite prisustvo antitijela na HIV u krvi; Test na HIV antitela.

Prema preporuci SZO, imunobloting (western blot) se koristi u dijagnostici HIV infekcije kao dodatna stručna metoda, koja treba da potvrdi rezultate ELISA. Ova metoda se obično koristi za dvostruku provjeru pozitivnog ELISA rezultata, jer se smatra osjetljivijom i specifičnijom, iako složenijom i skupljom.

Imunoblotiranje kombinuje enzimski imunotest (ELISA) s preliminarnim elektroforetskim odvajanjem virusnih proteina u gelu i njihovim prijenosom na nitroceluloznu membranu. Imunoblot procedura se sastoji od nekoliko faza (). Prvo, prethodno pročišćen i uništen do svojih sastavnih komponenti, HIV se podvrgava elektroforezi, dok su svi antigeni koji čine virus razdvojeni po molekularnoj težini. Zatim se blotiranjem antigeni prenose iz gela na traku nitroceluloze ili najlonski filter, koji sada sadrži spektar proteina karakterističan za HIV, nevidljiv za oko. Zatim se ispitni materijal (serum, plazma pacijenta itd.) nanosi na traku, a ako u uzorku postoje specifična antitijela, ona se vezuju za trake proteina antigena koji im striktno odgovaraju. Kao rezultat naknadnih manipulacija (kao ELISA), rezultat ove interakcije se vizualizira - postaje vidljiv. Prisustvo pruga u određenim područjima trake potvrđuje prisustvo u ispitivanom serumu antitela na strogo definisane HIV antigene.

Imunobloting se najčešće koristi za potvrdu dijagnoze HIV infekcije. SZO smatra serume pozitivnim ako se imunoblotingom otkriju antitijela na bilo koja dva proteina ovojnice HIV-a. Prema ovim preporukama, ako postoji reakcija samo sa jednim od proteina ovojnice (gp160, gp120, gp41) u kombinaciji sa ili bez reakcije s drugim proteinima, rezultat se smatra sumnjivim i preporučuje se druga studija korištenjem kompleta od druge serije ili druge kompanije. Ako nakon toga rezultat ostane sumnjiv, studije se nastavljaju svaka 3 mjeseca.

Za imunoblotiranje, u prvoj fazi, proteini sadržani u krvnom serumu se odvajaju u gelu prema njihovoj molekularnoj težini i naboju pomoću električnog polja (metoda gel elektroforeze). Zatim se na gel nanese nitrocelulozna ili najlonska membrana i "nakvasi" (ovo je upijanje). To se izvodi u posebnoj komori, koja omogućava potpuni prijenos materijala sa gela na membranu. Kao rezultat toga, obrazac rasporeda proteina koji je bio na gelu se reproducira na membrani (blot), kojom se onda može lako manipulirati. U početku se membrana tretira antitijelima na željeni antigen, a nakon ispiranja nevezanog materijala dodaje se radioaktivno obilježen konjugat koji se specifično vezuje za antitijela (kao u ELISA-i). Lokacija rezultirajućeg kompleksa konjugata obilježenog antigenom-antitijelom određena je autoradiografijom pomoću rendgenskog filma. Nakon njegove manifestacije, sve postaje jasno da li postoje antigeni u krvi ili ne.

MPBA-Blot-HIV-1, HIV-2 komplet reagensa je dizajniran da potvrdi detekciju antitela na pojedinačne proteine ​​(antigene) HIV-1 i/ili HIV-1 grupe O i/ili HIV-2 u ljudskom serumu ili plazma metodom imuno blot.

Prepoznatljive karakteristike:

  • Set reagensa "MPBA - Blot - HIV-1, HIV-2" sadrži prečišćeni lizat virusnih proteina HIV 1 i peptida - HIV-2 gp36 antigenski determinat;
  • Omogućava otkrivanje antitela na HIV-1, HIV-1 grupu O, HIV 2 na jednoj traci;
  • Jednostavna procedura za pripremu i provođenje analiza;
  • Interna kontrola kvaliteta reakcije*
  • Maksimalna brzina analize (3 sata);
  • Mala zapremina testnog uzorka - 20 µl;
  • Ne zahtijeva dodatnu opremu za istraživanje;
  • Kvalitet kompleta je zagarantovan upotrebom ruskih i međunarodnih standardnih uzoraka**

* Interna kontrola kvaliteta je obezbeđena prisustvom:

  • interne kontrolne trake, omogućavaju kontrolu unošenja uzorka seruma ili plazme;
  • kontrolni negativni serum (K-);
  • kontrolni pozitivan serum (K+), koji omogućava identifikaciju traka otkrivenih na traci;
  • kontrola slabo pozitivnog seruma (K + cl), što omogućava kontrolu osjetljivosti kompleta reagensa.

**Osiguranje kvaliteta:

Karakteristike MPBA-Blot-HIV-1, HIV-2 kompleta reagensa određene su testiranjem uzoraka iz slučajnog uzorka donatora, pacijenata s dijagnozom HIV infekcije, komercijalnih panela za serokonverziju, standardnih panela i uzoraka koji „potencijalno ometaju određivanje” komponente.

Komplet reagensa ne daje lažno pozitivne rezultate u ispitivanju seruma standardnog panela koji ne sadrže antitela na HIV 1.2 i HIV-1 antigen ("Standard AT (-) HIV", br. FSR 2007/00953 od 10/ 25/2007). Specifičnost - 100%.

Dijagnostička specifičnost utvrđena je proučavanjem slučajnog uzorka od 200 davalaca iz različitih krvnih centara i klinika kod kojih je preliminarno potvrđeno odsustvo HIV-1, HIV-2 infekcije. Specifičnost u istraživanju slučajnog uzorka donora bila je 100%;

Specifičnost kompleta reagensa utvrđena je proučavanjem 250 uzoraka, uključujući uzorke seruma ili plazme dobijene od trudnica, hospitalizovanih pacijenata, pacijenata sa hepatitisom C i E, i uzoraka sa komponentama "potencijalno ometajućim određivanjem". Kada se koristi MPBA-Blot-HIV-1, HIV-2 komplet, nisu pronađeni lažno pozitivni rezultati za ove uzorke.

Dijagnostička osjetljivost je određena korištenjem:
- Boston Biomedica, Inc. Uzorci plazme HIV-1 panela (WWRB 301) iz različitih regiona koji sadrže različite podtipove HIV-1: grupa M (podtipovi A, B, C, D, E, F) i grupa O; osetljivost kompleta reagensa bila je 100%;

Osetljivost kompleta reagensa određena je u studiji međunarodnih panela za serokonverziju Boston Biomedica, Inc (SeraCare Life Sciences), kat. nrs. TRN 903, TRN 904, TRN 909, TRN 912, TRN 916, TRN 917, TRN 918, TRN 919, TRN 921, TRN 923, TRN 924, TRN 927, TRN 928, TRN 932

Komplet reagensa detektuje antitela na HIV-1 u serumu standardnog panela koji sadrži antitela na HIV-1 (“Standard AT (+) HIV-1”, br. FSR 2007/00953 od 25. oktobra 2007.), detektuje antitela na HIV-2 u serumu standardnog panela koji sadrži antitela na HIV-2 („Standard AT (+) HIV-2“, br. FSR 2007/00953 od 25.10.2007.). Osetljivost - 100%.

Potvrda o registraciji br. FSR 2010/07958 od 13.07.2011. (važenje nije ograničeno)

spoj:

  • Imunosorbent. Bijele nitrocelulozne membranske trake sa pojedinačnim HIV-1 proteinima (gp160, gp120, p66, p55, p51, gp41, p31, p24, p17) adsorbiranim na njih metodom elektrotransfera i nanesenim na traku sa sintetičkim HIV-2 peptidom, analog gp36 proteina i anti-IgG-humanog (interna kontrola) - 18 kom;
  • K- - kontrolni negativni serum. Ljudski krvni serum koji ne sadrži antitela na HIV-1,2, HCV, HIV antigen, HBsAg inaktivira se zagrevanjem na 560C; prozirna svijetložuta tekućina - 1 epruveta (0,08 ml). Sadrži konzervanse: timerosal i natrijum-azid;
  • K+ - kontrolni pozitivni serum. Ljudski krvni serum koji sadrži antitela na HIV-1,2 (titar ne manji od 1:10000), ne sadrži HBsAg, HIV antigen, antitela na HCV, inaktiviran zagrevanjem na 560C; providna svijetložuta tekućina - 1 epruveta (0,08 ml) Sadrži konzervanse: timerosal i natrijum-azid;
  • K+sl - kontrolni slabo pozitivan serum. Ljudski krvni serum koji sadrži antitela na HIV-1,2 (titar ne veći od 1:200), ne sadrži HBsAg, HIV antigen, antitela na HCV, inaktiviran zagrevanjem na 560C; prozirna svijetložuta tekućina - 1 epruveta (0,08 ml). Sadrži konzervanse: timerosal i natrijum-azid;
  • RROKk (x10) - rastvor za razblaživanje uzoraka i konjugata. Koncentrat - Tris pufer koji sadrži prethodno tretirani normalni kozji serum; neprozirna siva tečnost - 1 bočica (10 ml). Sadrži konzervans: timerosal;
  • PRk (x20) - otopina za pranje. Koncentrat - Tris pufer koji sadrži Tween-20; bistra bezbojna tečnost - 1 bočica (70 ml). Sadrži konzervans: timerosal;
  • Konjugirati. Kozja antitijela na ljudski IgG, konjugirana sa alkalnom fosfatazom; bistra bezbojna tečnost - 1 epruveta (0,06 ml);
  • Podloga (rastvor za bojenje). Rastvor 5-bromo-4-fluoro-indolil-fosfata (BCIP) i nitrozin tetrazolijuma (NBT); prozirna svijetložuta tekućina - 1 bočica (50 ml);
  • Prašak za imunoblotiranje. Obrano mleko u prahu - amorfni beli ili svetlo žuti prah - 5 pakovanja x 1g;
  • Tableta s poklopcem za postavljanje reakcije - 2 komada;
  • Plastična pinceta - 1 kom.

Pravovremena dijagnoza HIV infekcije postaje izuzetno važna mjera, jer ranije liječenje u velikoj mjeri može odrediti daljnji razvoj bolesti i produžiti život pacijenta. Posljednjih godina zabilježen je značajan napredak na polju otkrivanja ove strašne bolesti: stari testni sistemi se zamjenjuju naprednijim, metode ispitivanja postaju pristupačnije, a njihova preciznost je značajno povećana.

U ovom članku ćemo govoriti o savremenim metodama dijagnosticiranja HIV infekcije, koje je korisno znati za pravovremeno liječenje ovog problema i održavanje normalne kvalitete života pacijenta.

Metode za dijagnosticiranje HIV-a

U Rusiji se za dijagnozu HIV infekcije provodi standardna procedura koja uključuje dva nivoa:

  • ELISA test sistem (skrining analiza);
  • imunoblotiranje (IB).

Mogu se koristiti i druge dijagnostičke metode:

  • ekspresnim testovima.

ELISA test sistemi

U prvoj fazi dijagnoze koristi se skrining test (ELISA) za otkrivanje HIV infekcije, koji se zasniva na HIV proteinima stvorenim u laboratorijama koji hvataju specifična antitijela proizvedena u tijelu kao odgovor na infekciju. Nakon njihove interakcije sa reagensima (enzimima) test sistema, boja indikatora se menja. Nadalje, ove promjene boje se obrađuju na posebnoj opremi, što određuje rezultat izvršene analize.

Takvi ELISA testovi mogu pokazati rezultate u roku od nekoliko sedmica nakon uvođenja HIV infekcije. Ova analiza ne utvrđuje prisustvo virusa, već otkriva proizvodnju antitijela na njega. Ponekad u ljudskom tijelu proizvodnja antitijela na HIV počinje nakon 2 sedmice nakon infekcije, ali kod većine ljudi se stvaraju kasnije, nakon 3-6 sedmica.

Postoje četiri generacije ELISA testova različite osjetljivosti. Poslednjih godina sve se češće koriste testni sistemi III i IV generacije koji se baziraju na sintetičkim peptidima ili rekombinantnim proteinima i imaju veću specifičnost i tačnost. Mogu se koristiti za dijagnosticiranje HIV infekcije, praćenje prevalencije HIV-a i osiguranje sigurnosti prilikom testiranja darovane krvi. Tačnost ELISA test sistema III i IV generacije je 93-99% (osetljiviji su testovi koji se proizvode u zapadnoj Evropi - 99%).

Za izvođenje ELISA testa uzima se 5 ml krvi iz vene pacijenta. Između posljednjeg obroka i analize treba proći najmanje 8 sati (u pravilu se radi ujutro na prazan želudac). Takav test se preporučuje da se uradi ne ranije od 3 nedelje nakon navodne infekcije (na primer, nakon nezaštićenog odnosa sa novim seksualnim partnerom).

Rezultati ELISA testa dobijaju se nakon 2-10 dana:

  • negativan rezultat: ukazuje na odsustvo HIV infekcije i ne zahtijeva upućivanje specijalistu;
  • lažno negativan rezultat: može se uočiti u ranim fazama infekcije (do 3 sedmice), u kasnijim stadijumima AIDS-a sa teškom imunosupresijom i nepravilnom pripremom krvi;
  • lažno pozitivan rezultat: može se uočiti kod nekih bolesti i u slučaju nepravilne pripreme krvi;
  • pozitivan rezultat: ukazuje na infekciju HIV infekcijom, potrebna je IB i upućivanje pacijenta specijalisti u centar za AIDS.

Zašto ELISA test može dati lažno pozitivne rezultate?

Lažno pozitivni rezultati ELISA testa na HIV mogu se uočiti kod nepravilne obrade krvi ili kod pacijenata sa takvim stanjima i bolestima:

  • multipli mijelom;
  • zarazne bolesti izazvane virusom Epstein-Barr;
  • stanje nakon ;
  • autoimune bolesti;
  • na pozadini trudnoće;
  • stanje nakon vakcinacije.

Iz gore opisanih razloga, u krvi mogu biti prisutna nespecifična unakrsna antitijela, čija proizvodnja nije izazvana HIV infekcijom.

Posljednjih godina učestalost lažno pozitivnih rezultata značajno je smanjena zbog primjene test sistema III i IV generacije, koji sadrže osjetljivije peptidne i rekombinantne proteine ​​(sintetizirani su in vitro genetskim inženjeringom). Nakon upotrebe ovakvih ELISA testova, učestalost lažno pozitivnih rezultata značajno se smanjila i iznosi oko 0,02-0,5%.

Lažno pozitivan rezultat ne znači da je osoba zaražena HIV-om. U takvim slučajevima SZO preporučuje još jedan ELISA test (obavezna IV generacija).

Krv pacijenta se šalje u referentnu ili arbitražnu laboratoriju sa oznakom "ponoviti" i testira se na ELISA test sistemu IV generacije. Ako je rezultat nove analize negativan, tada se prvi rezultat prepoznaje kao pogrešan (lažno pozitivan) i IB se ne provodi. Ako je rezultat pozitivan ili sumnjiv tokom drugog testa, pacijent mora da se podvrgne IB za 4-6 sedmica kako bi potvrdio ili opovrgnuo HIV infekciju.

imuno bloting

Konačna dijagnoza HIV infekcije može se postaviti samo nakon što se dobije pozitivan rezultat imunoblotinga (IB). Za njegovu implementaciju koristi se nitrocelulozna traka na koju se nanose virusni proteini.

Uzimanje krvi za IB se vrši iz vene. Zatim se podvrgava posebnom tretmanu i proteini koji se nalaze u njegovom serumu se odvajaju u poseban gel prema njihovom naboju i molekularnoj težini (manipulacija se vrši na posebnoj opremi pod uticajem električnog polja). Nitrocelulozna traka se nanosi na gel krvnog seruma, a upijanje („blotting“) se provodi u posebnoj komori. Traka se obrađuje i ako upotrijebljeni materijali sadrže antitijela na HIV, vezuju se za antigenske trake na IB i pojavljuju se kao linije.

IB se smatra pozitivnim ako:

  • prema američkim kriterijima CDC-a - postoje dvije ili tri linije gp41, p24, gp120 / gp160 na traci;
  • prema američkim kriterijima FDA - na traci se nalaze dvije linije p24, p31 i linija gp41 ili gp120 / gp160.

U 99,9% slučajeva pozitivan IB nalaz ukazuje na HIV infekciju.

U nedostatku linija - IB je negativan.

Kada se identifikuju linije sa gp160, gp120 i gp41, IB je sumnjiv. Takav rezultat se može otkriti kada:

  • onkološke bolesti;
  • trudnoća;
  • česte transfuzije krvi.

U takvim slučajevima preporučuje se da se izvrši još jedna studija koristeći komplet druge kompanije. Ako nakon dodatne IB rezultat ostane sumnjiv, potrebno je praćenje šest mjeseci (IB se radi svaka 3 mjeseca).

lančana reakcija polimeraze

PCR test može otkriti RNK virusa. Njegova osjetljivost je prilično visoka i omogućava otkrivanje HIV infekcije već 10 dana nakon infekcije. U nekim slučajevima PCR može dati lažno pozitivne rezultate, jer njegova visoka osjetljivost može reagirati i na antitijela na druge infekcije.

Ova dijagnostička tehnika je skupa, zahtijeva posebnu opremu i visoko kvalificirane stručnjake. Ovi razlozi ne dozvoljavaju da se to sprovede tokom masovnog testiranja populacije.

PCR se koristi u takvim slučajevima:

  • otkrivanje HIV-a kod novorođenčadi koja su rođena od majki zaraženih HIV-om;
  • za otkrivanje HIV-a u "prozorskom periodu" ili u slučaju sumnjive IB;
  • za kontrolu koncentracije HIV-a u krvi;
  • za proučavanje krvi donora.

Samo PCR testom ne postavlja se dijagnoza HIV-a, već se provodi kao dodatna dijagnostička metoda za rješavanje sporova.


Ekspresne metode

Jedna od inovacija u dijagnostici HIV-a su brzi testovi, čiji se rezultati mogu procijeniti za 10-15 minuta. Najefikasniji i najprecizniji rezultati se dobijaju imunohromatografskim testovima zasnovanim na principu kapilarnog toka. To su posebne trake na koje se nanosi krv ili druge testne tekućine (slina, urin). U prisustvu antitijela na HIV, nakon 10-15 minuta, na testu se pojavljuje obojena i kontrolna traka - pozitivan rezultat. Ako je rezultat negativan, pojavljuje se samo kontrolna linija.

Kao i kod ELISA testova, rezultate brzih testova treba potvrditi IB analizom. Tek tada se može postaviti dijagnoza HIV infekcije.

Postoje ekspresni kompleti za kućno testiranje. OraSure Technologies1 (SAD) test je odobren od FDA, dostupan je bez recepta i može se koristiti za otkrivanje HIV-a. Nakon testa, u slučaju pozitivnog rezultata, pacijentu se preporučuje da se podvrgne pregledu u specijaliziranom centru radi potvrđivanja dijagnoze.

Preostale testove za kućnu upotrebu još nije odobrila FDA i njihovi rezultati mogu biti vrlo upitni.

Unatoč činjenici da su brzi testovi inferiorni u preciznosti od IV generacije ELISA testova, oni se široko koriste za dodatno testiranje populacije.

Možete se testirati na HIV infekciju u bilo kojoj poliklinici, Centralnoj regionalnoj bolnici ili u specijalizovanim centrima za AIDS. Na teritoriji Rusije oni se drže potpuno povjerljivo, ili anonimno. Svaki pacijent može očekivati ​​medicinski ili psihološki savjet prije ili nakon analize. Testove na HIV ćete morati da plaćate samo u komercijalnim medicinskim ustanovama, a u javnim klinikama i bolnicama oni se rade besplatno.

Za informacije o tome kako se možete zaraziti HIV-om i koji mitovi postoje o mogućnostima zaraze, pročitajte