A bakteriológiai laboratórium. A bakteriológiai laboratórium eszköze és munkaszabályai A bakteriológiai laboratórium felépítése

Mikrobiológiai
kutatás a kórházakban és klinikákon ill
tőlük függetlenül léteznek
bakteriológiai laboratóriumok.
Különféle kutatásokat kapnak
beteg emberektől nyert anyagok
(köpet, vizelet, genny, széklet, vér, gerinc
folyadék stb.).
Ezen kívül vannak egészségügyi és bakteriológiai laboratóriumok is, amelyekben
a vizet bakteriológiai ellenőrzésnek vetik alá,
levegő és étel.
2

A bakteriológiai laboratóriumok vizsgálati tárgyai a következők:

A tanulmányi tárgyak
A bakteriológiai laboratóriumok a következők:
1. Kiválasztás a szervezetből: vizelet, széklet, köpet, genny, ill
vér, kóros és holttest anyag is.
2. Környezeti objektumok: víz, levegő, talaj, kimosódások
raktári cikkekből, takarmányból, technológiai alapanyagokból
haszonállatok levágásából nyerik.
3. Élelmiszeripari termékek, hús- és húskészítményminták,
tej és tejtermékek, amelyeket adni kell
élelmiszeripari célokra való alkalmasság értékelése.
3

szándékolt

bakteriológiai laboratórium
szándékolt
– tartalmazó anyagok tanulmányozására
bakteriális fertőzések kórokozói,
- egészségügyi és mikrobiológiai mutatók meghatározására,
– az állapot és a feszültség kontrollja
specifikus immunitás és mások
mikrobiológiai kutatás.
4

bakteriológiai laboratórium

A mikrobiológiai munka sajátossága megkívánja, hogy a laboratórium számára elkülönített helyiséget elkülönítsék:
- a nappaliból,
- élelmiszer blokkok és
– egyéb nem alapvető ipari helyiségek.
A bakteriológiai laboratóriumot ben kell elhelyezni
más laboratóriumoktól elkülönített helyiségekben
szükséges felszerelések és bútorok.
A laboratóriumnak rendelkeznie kell:
- külön bejárat,
- gardrób és
- zuhany.
5

bakteriológiai laboratórium

A bakteriológiai laboratórium a következőket tartalmazza:
- anyagok fogadására és nyilvántartására szolgáló helyiség;
– bakteriológiai laboratóriumi helyiségek
kutató- és használati helyiségek;
- autoklávban vagy sterilizálásban ("tiszta",
"piszkos") a hulladék fertőtlenítésére
anyagok és szennyezett edények;
– mosogatás, mosogatásra felszerelve;
– bakteriológiai konyha – főzéshez,
táptalaj kiömlése, sterilizálása és tárolása;
– vivárium kísérleti állatok tartására;
- a tartalék reagensek tárolására szolgáló anyagok,
edények, berendezések és háztartási felszerelések.
6

bakteriológiai laboratórium

Felsorolt ​​használati helyiségek mint
önálló szerkezeti egységek szerepelnek
összetételében nagy bakteriológiai
laboratóriumok.
kis laboratóriumokban
bakteriológiai konyha és
A sterilizáló helyiség egyben van egyesítve
szoba;
- speciális tároló helyiség
nincsenek kísérleti állatok.
7

bakteriológiai laboratórium

Mikrobiológiai helyiségek
laboratóriumok a veszélyességi fok szerint
A személyzet 2 zónára van osztva:
I. "Fertőző" zóna - szoba vagy csoport
laboratóriumi helyiségek, ahol
manipuláció patogén biológiai
ügynökök és raktáruk, a személyzet be van öltözve
megfelelő típusú védőruházat.
II. "Tiszta" zóna - helyiségek, ahol nem végeznek
biológiai anyaggal dolgozni, a személyzet fel van öltözve
személyes ruhában.
8

Laboratóriumi helyiségek

A laboratóriumi helyiségek alatt, ahol termelnek
minden bakteriológiai vizsgálat
a legvilágosabb, legtágasabb szobák.
Ezekben a szobákban a falak a padlótól 170 cm magasságig
világos színekre festve olajfestékkel ill
csempével fedjük le.
A padlót relin vagy linóleum borítja.
Ez a fajta felület lehetővé teszi a tisztítás során történő használatát
helyiségek fertőtlenítő oldatokkal.
Minden helyiségben legyen egy mosogató vízvezetékkel és egy tartály fertőtlenítőszerrel.
megoldás.
9

10. Bakteriológiai laboratórium

A szükséges helyek a következők:
Bélfertőzési laboratóriumok
Cseppfertőzési laboratóriumok
Egészségügyi és bakteriológiai laboratórium
Szerológiai laboratórium
Kisegítő helyiségek:
sredovarnya,
mosás
Sterilizáció
Iktató hivatal
Raktárhelyiségek
Fürdőszoba az alkalmazottak számára
Akvárium
Minden laboratóriumot fel kell szerelni mikroszkóppal,
autoklávok, termosztátok, szárítás és sterilizálás
szekrények, véralvadó készülékek, centrifugák,
laboratóriumi mérleg, pH-mérő, mosófürdő
10

11. Bakteriológiai laboratórium

Az egyik helyiségben egy üvegezett doboz van felszerelve egy külön helyiséggel előszobával (elődoboz)
munkavégzés aszeptikus körülmények között.
A dobozba termények asztalát, zsámolyt tettek a munkahely fölé
telepítsen baktericid lámpákat.
Az előszobában van egy szekrény a steril tárolására
anyag.
A "fertőző" zóna helyiségeinek ablakai és ajtói legyenek
zárt.
Meglévő elszívó szellőzés a "fertőző" területről kell
el kell szigetelni más szellőzőrendszerektől és
finom légszűrőkkel felszerelt.
11

12. Mikrobiológiai kutatások helyiségei

Mikrobiológiai helyiségek
kutató berendezés:
termosztátok,
hűtőszekrények,
centrifugák,
Mérleg,
vízfürdők,
elektromágneses keverők.
Helyezze az asztalokra a szükségeset
felszerelés.
Munkavégzés fertőzött anyaggal
elődobozos dobozban végezzük.
12

13. Bakteriológiai laboratórium

A dobozban a kapott mintákat szétszedjük, előkészítjük és rögzítjük
keneteket-lenyomatokat, mikroorganizmus-termesztést végez
tápközeg.
Ezért a dobozban vannak asztalok, amelyekre helyezik őket
a munkához szükséges eszközök: kémcsövek állványai,
kémcsövek és Petri-csészék tápközeggel, sterilek
használt pipetták, habarcsok, fertőtlenítőszerrel ellátott tartályok
edények stb.
A kerékpárok elődobozában sterilnek kell lennie
ruhák, sapkák, maszkok, valamint az öltözőben kell lennie
benti cipő.
Az előszobában termosztátokat, hűtőszekrényeket,
centrifugák és egyéb berendezések.
Dobozokban és elődobozokban naponta végezzük nedvesen
tisztítás, fertőtlenítés és besugárzás
baktericid lámpák 30-40 percig indítás előtt
munka és munka után.
13

14. Autokláv

Egy autoklávban kettőnek kell lennie
autokláv:
egy autokláv tiszta anyagokhoz (az
edények, tápközegek sterilizálása,
eszközök);
egy másik autokláv a fertőzött anyagok számára
(a fertőzöttek semlegesítésére
eszközök és anyagok).
14

15. Mosás

A mosás célja a mosás és
edényfeldolgozás.
A mosdókagylónak mosogatóval kell rendelkeznie
hideg-meleg víz és tűzhely.
A mosógépet fel kell szerelni
tisztítószerek és felszerelések
cserépedény
A szárító szekrények a mosóhelyiségben találhatók.
15

16. Vivárium

A vivárium egy használt helyiség
laboratóriumi állatok tartására.
A viváriumnak rendelkeznie kell:
karantén osztály,
helyiségek kísérleti és egészséges állatok számára,
ketrecek mosására és fertőtlenítésére szolgáló létesítmények, leltár és
overall,
főzőkonyha,
éléskamra,
takarmány,
szemétégető.
Minden vivárium helyiségnek olyannak kell lennie
elszigetelve egymástól.
16

17.

bakteriológiai laboratóriumban
a szobák úgy vannak elrendezve, hogy
"piszkos" és "tiszta" patakok nem
keresztbe tette és nem érintette
17

18. A bakteriológiai laboratóriumban történő munkavégzés szabályai

A laboratóriumi személyzetnek be kell tartania a következőket
előírások:
1. Speciális ruhában - pongyolában és sapkában - szabad dolgozni. a bokszban
steril köntösben, maszkban, sapkában dolgozni, szükség esetén felvenni
gumikesztyűt és védőszemüveget.
Mindenképpen cserélj cipőt!
2. A laboratóriumot kabátban vagy viseletben elhagyni tilos
felsőruházat fürdőköpenyen.
3. Laboratóriumban dohányozni és ételt enni tilos.
4. A laboratóriumba elemzés céljából bekerülő összes anyagot kötelező
fertőzöttként kell kezelni.
Ezért az anyag kicsomagolásakor körültekintően kell eljárni.
A tartályokat kívülről le kell törölni fertőtlenítő oldattal, és el kell helyezni
tálcákon vagy küvettákban.
18

19. (folytatás)

5. Köntösön, kézen, asztalon, cipőn fertőzött anyaggal való érintkezés esetén szükséges
fertőtlenítést végezni és erről a laboratórium vezetőjét tájékoztatni.
6. A fertőzött anyagot autoklávozással kell megsemmisíteni. eszközök, és
munka után az asztal felületét is fertőtlenítjük.
7. A laborból felszerelést, leltárt, anyagokat kivinni tilos anélkül
előzetes fertőtlenítés.
8. Pipetták, tárgylemezek, fedőlemezek és egyéb használt edények,
fertőtlenítőszerbe mártással fertőtlenítjük.
9. A munka végén a munkahely rendbetétele és alapos fertőtlenítése történik.
A további munkához szükséges mikroorganizmusok tenyészeteit tárolják
hűtőszekrény.
10. Csak olyan személyek, akiket potenciális veszélyre figyelmeztettek
veszélyeket, és akik teljesítették a speciális követelményeket (például immunizálás, védőruházat
stb.)
19

20. A bakteriológiai laboratórium az alábbi dokumentációt vezeti:

1. Kultúrák múzeumi törzseinek leltárkönyve.
2. A laboratóriumi anyagmozgás naplója.
3. A sterilizálás és megsemmisítés nyilvántartása
fertőzött anyag.
4. A fertőzött kísérleti állatok nyilvántartása.
5. Kutatási folyóirat (szakértelem).

AZ ÓRA TÉMÁJA: Bakteriológiai laboratórium és a benne végzett munka szabályai. A mikroorganizmusok osztályozása. A baktériumok morfológiája. A mikrobák típusának meghatározására szolgáló módszerek. bakterioszkópos módszer. Mikroszkópos technika merülő rendszerrel.

TANULÁSI CÉL: Ismerkedjen meg a bakteriológiai laboratórium készülékével és a benne végzett munka szabályaival. Ismerkedjen meg a mikroorganizmusok osztályozásának elveivel. A baktériumok morfológiai jellemzőinek és a mikrobák típusának meghatározására szolgáló módszerek tanulmányozása. Elsajátítani a bakterioszkópos kutatási módszert és a merülőrendszeres mikroszkópos technikát.

A LECKE CÉLKITŰZÉSEI:

1. Ismerkedjen meg a bakteriológiai laboratórium felépítésével és a benne végzett munka szabályaival.

2. Ismerkedjen meg a mikroorganizmusok osztályozási elveivel.

3. A baktériumok morfológiai jellemzőinek és a mikrobák típusának meghatározására szolgáló módszerek tanulmányozása.

4. Sajátítsa el a merülőrendszerrel végzett mikroszkópos technikát.

Bakteriológiai laboratóriumi készülék

A bakteriológiai laboratórium célja a bakteriális fertőzések kórokozóit tartalmazó anyagok tanulmányozása, az egészségügyi és mikrobiológiai mutatók meghatározása, a specifikus immunitás állapotának és intenzitásának ellenőrzése, valamint egyéb mikrobiológiai vizsgálatok. A bakteriológiai laboratóriumot más laboratóriumoktól elkülönített helyiségekben kell elhelyezni, a szükséges felszereléssel és bútorzattal. A laboratóriumnak külön bejárattal, gardróbbal és zuhanyzóval kell rendelkeznie. A bakteriológiai laboratóriumnak a következő helyiségekkel kell rendelkeznie:

Szoba anyagok fogadására és nyilvántartására;

Dobozos helyiségek mikrobiológiai kutatásokhoz;

Autokláv;

mosás;

Akvárium.

A mikrobiológiai kutatások helyiségei termosztátokkal, hűtőszekrénnyel, centrifugákkal, mérlegekkel, vízfürdőkkel és elektromágneses keverőkkel vannak felszerelve. A szükséges felszerelést az asztalokra helyezzük. A fertőzött anyagokkal való munkavégzés ben történik boksz Val vel előbokszoló. A doboz bejáratánál legyen egy fertőtlenítőszerrel átitatott szőnyeg. A dobozban a beérkezett mintákat szétszedjük, keneteket-lenyomatokat készítenek és rögzítenek, táptalajokon mikroorganizmus-oltásokat végeznek. Ezért a dobozban asztalokat helyeznek el, amelyekre a munkához szükséges eszközöket helyezik el: használt edényekhez fertőtlenítőszeres tartályok, kémcsövek állványai, kémcsövek és Petri-csészék tápközeggel, steril pipetták, mozsárok stb., kupakok, maszkok, és az öltözőben is legyen cserélhető cipő. Az előszobában termosztátok, hűtőszekrények, centrifugák és egyéb berendezések helyezhetők el. A dobozokban és elődobozokban a nedves tisztítást, fertőtlenítést és baktericid lámpákkal történő besugárzást naponta 30-40 percig munka előtt és után végezzük.

NÁL NÉL autoklávozva két autokláv szükséges: egy autokláv a tiszta anyagokhoz (üvegedények, tápközegek, műszerek sterilizálásához); egy másik autokláv a fertőzött anyagok számára (a fertőzött műszerek és anyagok ártalmatlanításához).

mosás mosogatáshoz tervezték. A fertőzött anyaggal szennyezett edényeket, pipettákat és eszközöket csak sterilizálás után szabad elmosni. Szárító szekrényekkel rendelkezik.

akvárium laboratóriumi állatok tartására használt helyiségekre vonatkozik. A viváriumban karantén részleg, kísérleti és egészséges állatok elhelyezésére szolgáló helyiségek, ketrecmosó és fertőtlenítő helyiségek, leltár és overall, ételkészítési konyha, kamra, takarmány, szemétégető szükséges. A vivárium minden helyiségét el kell szigetelni egymástól.

A bakteriológiai laboratóriumban meghatározzák a fertőzés típusát, amely a szervezet adott betegségét okozta. Ehhez különböző táptalajokon vért, vizeletet, agy-gerincvelői folyadékot és egyéb testnedveket tenyésztenek. Néha a termést a bőrből, az orrnyálkahártyából és a garatból készítik. A szemorvosok, miután "kötőhártya-gyulladást" diagnosztizáltak, gyakran bakteriológiai vizsgálatra is utalják a beteget.

Ha akut vagy krónikus kötőhártya-gyulladásra gyanakszik, a vizsgálat segít a diagnózis tisztázásában és a kötőhártya-gyulladást okozó baktériumok típusának meghatározásában. A vizsgálat azzal kezdődik, hogy egy speciális eszköz segítségével a kötőhártya zsák tartalmát egy speciális húslevesre, majd táptalajra vetik fel és vetik fel. 24-48 óra elteltével baktériumkolóniák nőnek a táptalajon. Speciális festés után mikroszkóp alatt megvizsgálják, és meghatározzák a kötőhártyán élő mikroorganizmusok típusát. Ezek leggyakrabban baktériumok, ritkábban más mikroorganizmusok (gombák, amőba).

A leghatékonyabb antibiotikum alkalmazásának eldöntéséhez meg kell határozni a kórokozó baktériumok gyógyászati ​​anyagokkal szembeni érzékenységét.

Befejezésül adunk néhány számot, és még egyszer emlékeztetünk arra, hogyan védheti meg magát a fertőzésektől.

Ne feledje, hogy a földben, a vízben és a levegőben mikroorganizmusok élnek. Minden mozdulattal, pislogással, lélegzettel érintkezünk velük. Nyálkahártyánk nem engedi bejutni a létfontosságú szervekbe. Figyeljen a mikrobiológia egyik szerelmese által összegyűjtött érdekes tényekre.

1 g utcai por körülbelül 2 millió mikroorganizmust tartalmaz, ezek a talajból kerülnek a levegőbe. A legtöbb mikrobát a talaj felső 50 cm-ében találjuk.

A vízmedencék 5-10 000 baktériumot tartalmaznak 1 négyzetméterenként. cm, és a város folyójában - 23000 1 négyzetméteren. cm.

De az adatok a mikroorganizmusok számáról 1 négyzetben. m körülvevő levegő: erdőben vagy parkban a levegőben - 100-1000 mikroba 1 négyzetméterenként. m, tengeri levegőben 100 km-re a parttól - csak 0,6, 2000 m magasságban - 3.

Teljesen más kép figyelhető meg egy átlagos város központi utcáján - 3500 mikroba 1 négyzetméterenként. m, az új házban - 4500, a régiben - 36 000, a kórházban - 79 000, a hostelben - 40 000.

Ezek a számok magukért beszélnek. A mikroorganizmusok közé tartoznak a vírusok, baktériumok, gombaspórák és penészgombák. Ezenkívül maga a por kémiai összetételét tekintve, különösen a városi utcákon, lakásokban, különféle iparágakban, a szervezetre káros kémiai és fizikai szennyeződéseket tartalmaz. Nyálkahártyánk és bőrünk nem mindig tud megbirkózni ilyen terheléssel a segítségünk nélkül. Annak érdekében, hogy ne legyen beteg, emlékeznie kell a megelőzés szabályaira.

BAKTERIOLÓGIAI LABORATÓRIUM- bakteriológiai, immunológiai és egyéb mikrobiológiai vizsgálatokat végző tudományos és gyakorlati intézmény. A mikrobiológia általánosságban és a bakteriológia, mint egyik ága differenciálódásával összhangban léteznek a bakteriológiai laboratóriumok változatos feladatokkal és funkciókkal. A kórházak klinikai és diagnosztikai bakteriológiai laboratóriumai olyan kutatásokat végeznek, amelyek szükségesek egy fertőző betegség diagnózisának megállapításához vagy tisztázásához, a kezelés hatékonyságának ellenőrzéséhez.

A kórházi bakteriológiai laboratóriumok specializációját a kórház profilja határozza meg (akut fertőző betegségek, gyermekkori fertőző betegségek, nemi betegségek, tuberkulózis stb.). Az egészségügyi-járványügyi állomások bakteriológiai laboratóriumai, hasonlóan a klinikai laboratóriumokhoz, diagnosztikai munkát végeznek, olyan kórházakat szolgálnak ki, amelyek nem rendelkeznek saját laboratóriummal, megelőző vizsgálatokat végeznek a lakosság körében, valamint egészségügyi-bakteriológiai vizsgálatokat végeznek az élelmiszerek és a víz.

Az orvosi laboratóriumok mellett kiterjedt állatorvosi bakteriológiai laboratóriumok hálózata is végez állatok fertőző betegségeinek diagnosztikai és megelőző vizsgálatait (lásd Állatorvosi Laboratórium). Erősen specializálódtak az ellenőrzési feladatokat ellátó bakteriológiai laboratóriumok, mint például a vízművek bakteriológiai laboratóriumai, az oltóanyagokat, szérumokat és egyéb baktériumkészítményeket gyártó vállalatok ellenőrző laboratóriumai. A fertőtlenítő létesítményekben speciális bakteriológiai laboratóriumokat szerveznek. Feladatuk a fertőtlenítés bakteriológiai minőségellenőrzése. Az orvosi és állatorvosi profilú bakteriológiai laboratóriumok mellett léteznek speciális bakteriológiai laboratóriumok, amelyek az élelmiszeripar (pincészetek, pékségek, sörfőzdék és egyéb vállalkozások), a mezőgazdaság, stb. igényeit szolgálják ki. a megfelelő kutatóintézetek felépítésében különféle profilú bakteriológiai laboratóriumokat biztosítanak, amelyek különböző kutatási problémák megoldására szolgálnak. A bakteriológiai laboratóriumok lehetnek helyhez kötöttek és mobilak. Ez utóbbiakat katonai egységek egészségügyi és járványellenes karbantartására, valamint expedíciós, terepi körülmények között használják (lásd Laboratórium, katonai terepi körülmények között). A mobilokon kívül helyhez kötött laboratóriumokkal is rendelkeznek a csapatok. A bakteriológiai laboratóriumokban végzett kutatások sajátosságai meghatározzák a laboratóriumok felépítését és a bennük végzett munka módját.

A bakteriológiai laboratóriumokkal szemben a munkavégzés sajátosságaiból fakadó fő követelmény olyan feltételek megteremtése, amelyek biztosítják a kutatások legsterilebb körülmények között történő elvégzését, és garantálják a személyzetet és másokat az esetleges fertőzésektől. A bakteriológiai laboratórium felépítése magában foglalja magát a laboratóriumot és számos további alegységet. Kezelje őket: sredovovarnya, mosás, előkészítés, sterilizálás és vivárium (lásd). Ezek az alosztályok, mint önálló szerkezeti egységek, nagy bakteriológiai laboratóriumok részét képezik. A kis bakteriológiai laboratóriumokban nincs vivárium és külön előkészítő helyiség, a tápközeg és a sterilizáló helyiség egy helyiségben kombinálható.

Készülék és felszerelés

Rizs. 5. Üveg spatulák. 6. ábra. Spatula platina drótból.

A bakteriológiai laboratóriumok helyiségeinek világosnak és tágasnak kell lenniük. A falakat olajfestékkel kell festeni, a padlón nem lehetnek repedések. A laboratórium ablakai északi vagy északnyugati tájolásúak legyenek. Déli tájolás esetén az ablakok fehér függönyökkel vannak felakasztva. A bakteriológiai laboratóriumban legyen mosdó vagy mosdó, amely fölé egy polcra helyezzük a kézfertőtlenítő oldattal ellátott palackot. A bakteriológus asztalát, ha lehetséges, az ablaktól 1 m távolságra helyezzük el, és linóleummal vagy üveggel fedjük le. Az asztalra gázégő kerül (gázégő hiányában alkoholégő). Kötelező munkahelyi felszerelés a pipetta edény fertőtlenítő oldattal (3%-os karbolsav oldat), visszazárható porcelán- vagy üvegedény vattához, bakteriális huroktartó, bakteriális etalonkészlet, kémcsőtartók, zománcozott küvetták, csipeszek, olló és szike, tiszta üveglemezek lyukakkal és anélkül, valamint fedőlemezek. Általában 26 x 76 mm méretű és 1-1,2 mm vastagságú tárgylemezeket, 18 x 18 vagy 20 x 20 mm-es fedőlemezeket használnak. A bakteriológiai laboratóriumot fémtálcákkal kell felszerelni Petri-csészék, horganyzott vödrök vagy tartályok szállítására a fertőzött edények vagy felszerelések lerakására. A mikroszkópokat tokban vagy üvegfedél alatt tárolják. Az asztal ne legyen tele felesleges tárgyakkal. Általában a bakteriológiai laboratóriumban egy további kis asztal van felszerelve a rögzített készítmények festésére. Egy ilyen asztalon helyezzük el: a szükséges festékek és reagensek készletét egy blokkban pipettákkal és gumidobozokkal (1. ábra), egy zománcozott küvettát vagy kristályosítót állvánnyal a készítményekhez, drótcsipeszt vagy Cornet csipeszt (2. ábra) rögzítő tárgylemezek, szűrőpapír lapok a folyadék eltávolítására a mosott készítményekből, alátét (3. ábra) vagy egy palack víz. A bakteriológiai laboratórium számos, a kutatáshoz szükséges eszközzel felszerelt. A szokásos vegyszeres edényeken (palackok, lombikok, főzőpohárok, mérőpipetták stb.) kívül speciális, bakteriológiai és immunológiai vizsgálatokra szánt edényekre van szükség: 1) üveg Petri-csészék, amelyeket sűrű táptalajon baktériumtenyésztéshez és izolált baktériumtelepek előállításához használnak; 2) bakteriális szőnyegek (4. ábra) - lapos palackok (22 x 17 x 5 cm méretű), amelyeket nagyszámú baktérium szaporítására használnak; 3) Roux-csövek szűkítéssel a baktériumok burgonyarajokon történő szaporodásához; 4) 90 mm hosszú és 9-10 mm belső átmérőjű Wasserman kémcsövek komplementkötési és agglutinációs reakciók beállítására; 5) 90 mm hosszú és 3-5 mm átmérőjű csapadékcsövek a csapadékreakció beállításához; 6) bakteriális kémcsövek, amelyeket szilárd és folyékony táptalajokon történő baktériumok szaporításához használnak; 7) Folyékony anyagok beoltására, folyadékok cseppeljárással történő hígítására, színezékek felvitelére használt Pasteur pipetták, stb. ; 8) Mohr-pipetták vagy pipetták középső részén gömb alakú kitágulással a fertőzött folyékony anyag beoltására, valamint automata pipetták vagy pipetták gumikörtével, kivéve az anyag szájon keresztül történő leszívását. A tenyészetek folyékony tápközegben történő tenyésztéséhez, a tápközegek, reagensek stb. tárolásához és palackozásához szokásos laboratóriumi üvegedényeket használnak. A bakteriológiai laboratóriumban használt üvegedényeket előzetesen ki kell mosni, amihez általában 1-2%-os sósavoldatban forralják. Az olyan bakteriológiai edények fertőtlenítését, amelyekben mikrobákat tenyésztenek, csak magas hőmérsékleten szabad fertőtlenítőszer használata nélkül végezni, mivel az utóbbiak jelenléte akár nyomokban is tovább gátolhatja a mikrobák fejlődését. A mikroorganizmusok beoltását a bakteriológiai laboratóriumban bakteriológiai hurkok, üveg vagy platina spatulák segítségével végezzük (5. és 6. ábra). A baktériumok tenyésztését légtermosztátban (lásd), nagy bakteriológiai laboratóriumokban pedig speciális termosztatikus helyiségekben végzik.

Ha precíz hőmérsékletszabályozásra és viszonylag rövid ideig tartó baktériumtenyésztésre van szüksége, vagy immunológiai reakciók felállítására van szüksége, célszerű a víz ultratermosztátokat használni. Minden bakteriológiai laboratóriumot, ahol az anaerobokat tanulmányozzák, fel kell szerelni anaerob ballonnal (lásd), exszikkátorokkal és vákuumszivattyúkkal a levegő eltávolítására. Ez utóbbiakat a szűrésnél is használják. Az oltáshoz, a tenyészetek izolálásához vagy szubkultúrájához szükséges legjobb aszeptikus feltételek elérése érdekében a bakteriológiai laboratóriumokat speciális üvegezett dobozokkal szerelik fel elődobozokkal. A dobozban található egy gázégő, egy edény fertőtlenítő oldattal, és ahol lehetséges, egy baktériumölő uvio lámpa. Helyhez kötött doboz hiányában nagyfokú aszepszist igénylő munkák elvégzésekor használhat hordozható asztali dobozt (lásd Dobozok, mikrobiológiai).

Rizs. 7. Automatikus telepszámláló televíziós vezérlővel: 1 - Petri-csésze kifejlett telepekkel; 2 - elektronikus eredményjelző tábla számokkal, amelyek a Petri-csészében lévő telepek számát jelzik; 3 - TV képernyő a Petri-csészében termesztett telepek kinagyított képének megfigyelésére.

A baktériumtenyészeteket, terápiás és diagnosztikai szérumokat, fágokat és egyéb biológiai szubsztrátokat (szérum, pepton oldatok stb.) hűtőszekrényben tárolják. A baktériumtenyészeteket állítólag lezárt kémcsövekben vagy ampullákban kell tárolni, amelyekhez a bakteriológiai laboratóriumoknak forrasztóégővel vagy közönséges fúvókával kell rendelkezniük. Minden bakteriológiai laboratórium kötelező tartozéka a mikroszkóp (lásd). A legtöbb tanulmányhoz MBI-3 mikroszkópot és megvilágítókat használnak. A kutató bakteriológiai laboratóriumok fáziskontrasztos, lumineszcens és elektronmikroszkóppal is fel vannak szerelve. A Petri-csészéken tenyésztett baktériumkolóniák számszerűsítésére különböző rendszerű számlálókat használnak. Az egyik ilyen számláló egy leolvasó eszközzel és egy televíziós vezérlőkészülékkel ellátott automatikus számláló, amely óránként akár 500 csészét is képes számolni (7. ábra). A bakteriológiai laboratóriumok felszerelésének fontos elemei a rázókészülékek, amelyeket olyan esetekben használnak, amikor az anyag meghatározott ideig történő keverését, rázatását kell biztosítani (vér defibrinálás, anyag homogenizálása stb.). Sűrű részecskék (mikrobiális sejtek, szövetsejtek, a vizsgált anyag szuszpenziója) ülepítésére, amelyek folyékony felhasználású centrifugák (lásd). A legtöbb tanulmányhoz leggyakrabban centrifugákat használnak, amelyek 3000-3500 fordulat / perc sebességgel forognak. Elektromos centrifugák hiányában kézi centrifugákat használnak.

A bakteriológiai laboratóriumok tevékenysége nagymértékben függ az alapvető követelmény betartásától - steril tárgyakkal (szerszámok, táptalajok, edények) aszeptikus körülmények között végzett munka. Ezért a bakteriológiai laboratóriumok berendezésében jelentős helyet foglal el a sterilizáló berendezés (lásd). Minden bakteriológiai laboratóriumnak van egy autoklávja (lásd), Koch készüléke, Pasteur kemencéje (lásd Pasteur kemencéje), tejsavó koagulálására szolgáló készülék. A forralással történő sterilizáláshoz hagyományos sterilizátorokat használnak (lásd), elektromos hálózatról vagy más módon melegítve.

A hőmérséklet hatására változó folyékony szubsztrátumok sterilizálásához használjon bakteriális szűrőket (lásd). A megnedvesített tárgyak (edények, szerszámok) szárítása gőz- vagy nyomássterilizálás után szárítószekrényekben történik (lásd). A leggyakrabban használt tápközegek készítéséhez szükséges bakteriológiai laboratóriumok felszereltsége a jelzett eszközökön kívül tápközeg-öntő eszközöket, reagenskészleteket és egyes kémiai elemzések (amin-nitrogén, triptofán, kloridok meghatározása) elvégzéséhez szükséges eszközöket tartalmaz. stb.), valamint a tápközeg pH-értékének meghatározására szolgáló műszerek és reagensek; univerzális indikátor, indikátorok és Michaelis komparátor vagy potenciométer.

A bakteriológiai laboratóriumokban az állatokkal végzett munkát egy speciális helyiségben - egy viváriumban - végzik. A tényleges bakteriológiai laboratóriumokban állatokkal végzett kísérletek nem megengedettek. Az állatokkal végzett alapvető munkák elvégzéséhez (vérvétel, biológiai minták beállítása, diagnosztikai reakciók stb.) rendelkeznie kell: mérleggel egerek, sertések és nyulak mérésére, rögzítésére szolgáló gépekkel vagy eszközökkel (8. ábra), fecskendők, állatok címkézésére szolgáló számok (vagy festékek), szőrtelenítők.

A bakteriológiai munka sajátossága különösen magas követelményeket támaszt a bakteriológiai laboratóriumok helyiségeinek tisztaságával szemben. Különösen fontos a levegő tisztasága, a por hiánya. A bakteriológiai laboratóriumok helyiségeit célszerű a munkanap végén vagy néhány órával a munka megkezdése előtt kitakarítani, mivel a tisztítás során a levegőbe kerülő por növeli a mikrobák tartalmát, és megnehezíti a steril munkavégzést. . A helyiségek munka előtti tisztítása után tanácsos uvio baktericid lámpákkal 0,5-1 órán át sugárzásnak kitenni. A bakteriológiai laboratóriumban végzett munka során a laboratóriumon belüli fertőzés és a fertőzés terjedésének megakadályozása érdekében az alábbi alapvető szabályokat kell betartani: 1) a laboratóriumban minden személynek köpenyt kell viselnie; 2) túlzott beszéd és séta nem megengedett; 3) minden alkalmazott csak a számára kijelölt munkahelyet használhatja; 4) a bakteriológiai laboratóriumban enni és dohányozni tilos; 5) ha fertőző anyagokkal dolgozik, eszközöket (csipeszt, tűt, kampót) kell használni, és semmi esetre sem érintheti meg kézzel; minden olyan készletet, amely fertőző anyaggal érintkezett, sterilizálni vagy megsemmisíteni kell; 6) folyékony anyag leszívásakor gumi izzók használata javasolt; a pipettákat pamutdugóval kell lezárni; 7) a fertőzött folyadékok transzfúzióját edényből edénybe fertőtlenítő folyadékkal töltött tálcán vagy kristályosítón kell végrehajtani; 8) a vetéssel, újravetéssel, a tenyészetek izolálásával és a fertőzött anyagból a preparátumok elkészítésével kapcsolatos minden munkát az égőhelyen kell elvégezni, miközben égetik a kémcsövek, hurkok, spatulák stb. széleit; 9) azokat a kémcsöveket, lombikok, fiolák stb., amelyekbe a fertőzött anyagot a munkafolyamatba helyezik, azonnal fel kell tüntetni az anyag jellegével, a tenyészet nevével és számával, valamint a dátummal; 10) ha a fertőző anyag a környező tárgyakra került, azonnal alapos fertőtlenítést kell végezni: ezt a helyet öntse le fertőtlenítő oldattal, majd lehetőség szerint égesse el égető alkoholos törlővel; 11) a munka során fertőzött tárgyakat és anyagokat ugyanazon a napon nyilvántartásba veszik, tartályokba vagy vödrökbe gyűjtik, lezárják, lezárják és sterilizálják; 12) a tenyészeteket szükség esetén agaroszlopokban, olaj alatt, lezárt címkés csövekben tárolják; 13) az összes tenyészet, valamint a munka során fertőzött állatok nyilvántartását és elszámolását speciális formában naplóban vezetik.

Bevezetés

Mint minden más tudomány általános része, az általános bakteriológia sem konkrét kérdésekkel (mondjuk az egyes baktériumfajok azonosításával) foglalkozik, hanem általában a problémákkal; módszertana lefedi azokat az alapvető eljárásokat, amelyeket széles körben alkalmaznak a legkülönfélébb laboratóriumi vizsgálatokban. Ennek a tanulmányi útmutatónak nem célja a mikroorganizmusok egyetlen csoportjának azonosítása sem. Ez a feladat a következő publikációkban - a magán- és egészségügyi mikrobiológiáról. A benne bemutatott módszerek azonban hasznosak lehetnek minden olyan területen, ahol baktériumokkal kell küzdeni, és gyakorlati problémákra is alkalmazhatók, beleértve a baktériumok izolálását és tipizálását.

A bakteriológia csak azután vált tudománygá, hogy olyan egyedi technikákat fejlesztettek ki, amelyek továbbra is befolyásolják és beszivárogják a később feltörekvő tudományterületeket, például a virológiát, az immunológiát és a molekuláris biológiát. Az R. Koch által kifejlesztett tisztatenyészetek felhasználási technikája és L. Pasteur által úttörő immunológiai reakciók és kémiai elemzések még ma sem veszítették el jelentőségét.

Az általános bakteriológia módszertana jelen kiadásban egy olyan konstrukció segítségével jelenik meg, amely az e tudományág standard tankönyveire jellemző. Az egyetemi mikrobiológia tantárgyakkal foglalkozó laboratóriumi műhelyektől eltérően azonban egyes fejezetekben részletesebben is bemutatásra kerül, és csak tájékoztató jellegű. Ez a struktúra figyelembe veszi a bakteriológusok és állategészségügyi szakértők képzésének és specializációjának sajátosságait. Az anyagot gyakran önkényesen mutatják be, így egyes módszereket többször is megemlítenek, kapcsolatuk bemutatásának vágya miatt.

bakteriológiai laboratórium

A bakteriológiai laboratóriumok, mint szerkezeti egységek a regionális, járási, járásközi állatorvosi laboratóriumok részeként, valamint övezeti állatorvosi laboratóriumok struktúrájában szerveződnek. Az egészségügyi és járványügyi felügyeleti központokban, fertőzőkórházakban, általános kórházakban, egyes szakkórházakban (például tuberkulózis, reumatológia, dermatovenereológia) és poliklinikákban is megszervezik őket. A bakteriológiai laboratóriumok speciális kutatóintézetek részét képezik. Bakteriológiai laboratóriumokat folyamatosan használnak a hús élelmiszer-alkalmassági minősítésének megerősítésére vagy megállapítására az ESS szerint.

A bakteriológiai laboratóriumok vizsgálati tárgyai a következők:

1. Kiválasztás a szervezetből: vizelet, széklet, köpet, genny, valamint vér, kóros és holttestek.

2. A külső környezet tárgyai: víz, levegő, talaj, leltári cikkekből származó kimosódások, takarmány, haszonállatok levágásából nyert technológiai alapanyagok.

3. Élelmiszeripari termékek, hús- és hústermékminták, tej és tejtermékek, amelyek élelmiszeripari célra való alkalmasságát értékelni kell.

Bakteriológiai laboratóriumi helyiségek és munkahelyi berendezések

A mikrobiológiai munka sajátossága megkívánja, hogy a laboratórium számára elkülönített helyiséget el kell különíteni a lakószobáktól, élelmiszer-blokkoktól és egyéb, nem alapvető ipari helyiségektől.

A bakteriológiai laboratórium a következőket tartalmazza: bakteriológiai kutatás laboratóriumi helyiségei és használati helyiségei; autokláv vagy sterilizálás a hulladékanyagok és a szennyezett edények fertőtlenítésére; mosogatás, mosogatáshoz felszerelt; bakteriológiai konyha - tápközegek előkészítésére, palackozására, sterilizálására és tárolására; Vivárium kísérleti állatok tartására; tartalék reagensek, edények, berendezések és háztartási felszerelések tárolására szolgáló anyagok.

A felsorolt ​​használati helyiségek, mint önálló szerkezeti egységek nagy bakteriológiai laboratóriumok részét képezik. Kislaboratóriumokban a bakteriológiai konyhát és a sterilizáló konyhát egy helyiségben egyesítik; nincs külön hely a kísérleti állatok tartására.

A személyzet veszélyeztetettségének mértéke szerint a mikrobiológiai laboratóriumok helyiségei 2 zónára oszthatók:

I. „Fertőző” terület - laboratóriumi helyiség vagy helyiségcsoport, ahol kórokozó biológiai ágenseket kezelnek és tárolnak, a személyzet megfelelő típusú védőruházatot visel.

II. "Tiszta" zóna - olyan helyiségek, ahol biológiai anyagokkal nem dolgoznak, a személyzet személyes ruházatban van.

A laboratóriumi helyiségek alatt, ahol minden bakteriológiai vizsgálatot végeznek, a legvilágosabb, tágasabb helyiségek vannak kiosztva. Ezekben a szobákban a padlótól 170 cm magasságban lévő falak világos színekre vannak festve olajfestékkel vagy csempével burkolva. A padlót relin vagy linóleum borítja. Ez a fajta felület lehetővé teszi fertőtlenítő oldatok használatát a helyiség tisztítása során.

Minden szobában legyen egy mosdó vízvezetékkel és egy polc egy üveg fertőtlenítő oldat számára.

Az egyik szobában egy üvegezett doboz van felszerelve - egy elszigetelt helyiség előszobával (elődoboz) az aszeptikus körülmények közötti munkavégzéshez. A dobozba termények asztalát, zsámolyt, baktériumölő lámpákat helyeztek el a munkahely fölé. Az előszobában egy szekrény van elhelyezve a steril anyagok tárolására. A "fertőző" zóna helyiségeinek ablakainak és ajtóinak légmentesnek kell lenniük. A „fertőző” területről származó elszívó szellőzést el kell szigetelni a többi szellőzőrendszertől, és finom légszűrőkkel kell felszerelni.

A laboratóriumi helyiség laboratóriumi típusú asztalokkal, szekrényekkel, polcokkal van felszerelve a munkavégzéshez szükséges eszközök, edények, festékek, reagensek tárolására.

A bakteriológus és a laboráns munkahelyének megfelelő megszervezése nagyon fontos a munkához. A laboratóriumi asztalok az ablakok közelében vannak felszerelve. Elhelyezésüknél törekedni kell arra, hogy a lámpa a dolgozó elé vagy oldalára essen, lehetőleg a bal oldalra, de semmi esetre se hátulról. Kívánatos, hogy az elemzéshez, különösen a mikroszkópiához szükséges helyiségek ablakai északi vagy északnyugati irányúak legyenek, mivel a munkához még szórt fényre is szükség van. A munkaasztalok felületének megvilágítása 500 lux legyen. A fertőtlenítés megkönnyítése érdekében a laboratóriumi asztalok felületét műanyaggal borítják, vagy vasalóval kárpitozzák. Minden laboratóriumi dolgozó külön 150x60 cm méretű munkahelyet kap.

Valamennyi munkahely fel van szerelve a napi bakteriológiai munkához szükséges eszközökkel, melyek listája az 1. táblázatban található.

Asztal 1.

A bakteriológiai munkához szükséges tárgyak

Termék név	Hozzávetőleges mennyiség
1. Festék- és reagenskészlet színezéshez
2. Diák	25-50
3. Takarja le a poharakat	25-50
4. Szemüvegek lyukakkal	5-10
5. Kémcsőtartó állvány
6. Bakteriális hurok
7. Üveg spatulák
8. Fém spatulák
9. Egy üveg pamut
10. 1, 2, 5, 10 ml-es beosztású pipetták	minden kötetből 25
11. Pasteur pipetták	25-50
12. Csipesz, olló, szike	1-től
13. Tartályok fertőtlenítő oldatokkal
14. Mikroszkóp megvilágítóval
15. Nagyító 5 ´
16. Vajas edény merülőolajjal
17. Szűrőpapír	3-5 lap
18. Egy üveg fertőtlenítő oldat pipettákhoz
19. Alkohol- vagy gázégő
20. Színező készítmények telepítése
21. Homokóra 1 vagy 2 percig	1-től
22. Körte gumicsővel
23. Ceruza üvegen
24. Egy tégely alkoholos törlőkendővel
25. Szükséges steril edények	-

Fertőtlenítés

A fertőtlenítés a mikroorganizmusok elpusztítása a környezeti tárgyakban.

A mikrobiológiai laboratóriumokban nagyon széles körben alkalmazzák a fertőtlenítő intézkedéseket. A fertőző anyaggal végzett munka befejezésekor a bakteriológiai laboratóriumok dolgozói megelőzően fertőtlenítik a kezet és a munkahelyet.

Az elhasznált kóros anyagot (ürülék, vizelet, köpet, különféle folyadékok, vér) fertőtlenítésnek vetik alá, mielőtt a csatornába dobnák.

A kóros anyaggal vagy mikrobakultúrával szennyezett graduált és Pasteur pipettákat, üveglapátokat és fémeszközöket használatuk után azonnal az asztalon elhelyezett fertőtlenítő oldattal ellátott üvegedényekbe engedik le.

A munkában felhasznált tárgylemezeket és fedőlemezeket is kötelező fertőtleníteni, hiszen még a rögzített és festett kenetben is időnként életképes mikroorganizmusok maradnak, amelyek laboratóriumon belüli szennyeződés forrásai lehetnek. Csak azokat az edényeket nem kezelik fertőtlenítőszerrel, amelyekben mikroorganizmusokat termesztettek. Fémtartályokba vagy bixekbe hajtogatják, lezárják és átadják autoklávozásra.

A fertőtlenítőszer megválasztását, oldatának koncentrációját, a fertőtlenítőszer és a fertőtlenítendő anyag mennyiségének arányát, valamint a fertőtlenítés időtartamát az adott körülmények függvényében határozzák meg, figyelembe véve először mindenekelőtt a fertőtlenítendő mikrobák stabilitása, a várható szennyeződés mértéke, az anyag összetétele és állaga, amelyben elhelyezkednek.

Kézfertőtlenítés a fertőző anyaggal végzett munka és a bőrrel való érintkezés után. A fertőző anyaggal végzett munka végén a kezet profilaktikusan fertőtlenítjük. Egy vattakorongot vagy gézruhát 1%-os klóramin-oldattal megnedvesítünk, először a bal, majd a jobb kezét töröljük le a következő sorrendben: kézhát, tenyérfelszín, ujjközi terek, körömágyak. Így először a legkevésbé szennyezett területeket kezelik, majd ezek továbbhaladnak a bőr legerősebben szennyezett területeire. Két egymás utáni pálcikával 2 percig törölgessen kezet. Ha a kezet kórokozó mikroba vagy kóros anyag tenyészetével szennyezik, először a bőr szennyezett területeit fertőtlenítik. Ebből a célból 3-5 percre 1%-os klóramin oldattal megnedvesített vattával letakarják, majd a gyapotot hulladékanyagot tartalmazó tartályba vagy vödörbe dobják, és a kezeket egy második pálcikával kezelik ugyanabban. úgy, mint a megelőző fertőtlenítés során. A klóraminnal végzett kezelés után kezet mosunk meleg vízzel és szappannal. Amikor spórákat képző baktériumokkal dolgozunk, a kezünket 1%-os aktivált klóraminnal kezeljük. Ha fertőző anyag kerül a kézre, a fertőtlenítőszer expozíciós ideje 5 percre nő.

Sterilizáció

A sterilizálás a fertőtlenítéssel ellentétben magában foglalja a sterilizált tárgyban lévő összes vegetatív és spóra, patogén és nem patogén mikroorganizmus elpusztítását. A sterilizálást különféle módokon hajtják végre: gőzzel, száraz forró levegővel, forralással, szűréssel stb. Az egyik vagy másik sterilizációs módszer kiválasztását a sterilizálandó tárgy mikroflórájának minősége és tulajdonságai határozzák meg.

Laboratóriumi eszközök előkészítése, sterilizálása

Sterilizálás előtt a laboratóriumi üvegedényeket kimossák és szárítják. A kémcsöveket, palackokat, palackokat, matracokat és lombikokat pamut-gézdugóval zárják le. Az egyes edények dugóit (kivéve a kémcsöveket) helyezze papírkupakokra.

A gumi-, parafa- és üvegdugókat az edény nyakára kötözött külön zacskóban sterilizálják. A Petri-csészéket papírba csomagolva sterilizáljuk, egyenként 1-10 darabot. Pasteur pipetta, 3-15 db. csomagolópapírba csomagolva. Mindegyik pipetta felső részébe egy darab vattát helyeznek, hogy az anyag ne kerüljön a környezetbe. A pipetták becsomagolásakor nagyon ügyelni kell arra, hogy a kapillárisok lezárt vége ne törjön le. Működés közben a pipettákat a felső végénél távolítják el a csomagolásból.

A beosztásos pipetták felső részébe biztonsági vattát helyeznek, mint a Pasteur pipettáknál, majd vastag papírba csomagolják, előre vágva 2-2,5 cm széles és 50-70 cm hosszú csíkokra A csíkot az asztalra helyezzük. , bal végét behajtjuk és rájuk tekerjük a pipetta hegyét, majd a pipettát forgatva tekerjünk rá papírszalagot. A papír kihajtásának megakadályozása érdekében a másik végét csavarják vagy ragasztják. A becsomagolt pipetta térfogata papírra van írva. Ha vannak esetek, beosztásos pipettákat sterilizálnak bennük.

Sterilizálja a laboratóriumi üvegedényeket

a) száraz hő 180°C-on, illetve 160°C-on 1 órán át, illetve 150 percig.

b) autoklávban 1,5 atm nyomáson. 60 percen belül, a spóra mikroflóra elpusztítására - 90 perc 2 atm.

A fecskendők sterilizálása. A fecskendőket szétszerelve sterilizáljuk: külön a hengert és a dugattyút 2%-os nátrium-hidrogén-karbonát oldatban 30 percig. A spórás mikroflórával végzett munka során a sterilizálást autoklávban 132±2°C-on (2 atm.) 20 percig, 126±2°C-on (1,5 atm.) - 30 percig végezzük. A sterilizált fecskendőt lehűlés után összegyűjtjük, dugattyút helyezünk a hengerbe, tűt helyezünk rá, miután eltávolítjuk belőle a tüskét. A tűt, a hengert és a dugattyút csipesszel veszik, amelyeket fecskendővel együtt sterilizálnak.

Fémműszerek sterilizálása. A fémeszközöket (olló, szike, csipesz stb.) 2%-os nátrium-hidrogén-karbonát oldatban sterilizálják, ami megakadályozza a rozsdásodást és az élesség elvesztését. Javasoljuk, hogy a szike és olló pengéit vattával tekerje be, mielőtt az oldatba merítené.

Bakteriális hurkok sterilizálása. A platina- vagy nikrómhuzalból készült bakteriális hurkokat alkohol- vagy gázégő lángjában sterilizálják. Ezt a sterilizálási módszert kalcinálásnak vagy lángolásnak nevezik.

A vízszintes helyzetben lévő hurok az égő lángjának alsó, leghidegebb részébe kerül, hogy az égett kórokozó anyag ne fröcsköljön ki. Kiégése után a hurkot függőleges helyzetbe helyezzük, először a huzal alsó, majd a felső részét vörösre melegítjük és a huroktartót elégetjük. A teljes gyújtás 5-7 másodpercet vesz igénybe.

Előkészítés papír, géz és pamut sterilizálására és sterilizálására. A vattát, gézet, szűrőpapírt száraz hőkemencében 160 ° C hőmérsékleten sterilizálják egy órán keresztül attól a pillanattól kezdve, hogy a hőmérsékletet hőmérővel jelzik, vagy autoklávban 1 atm nyomáson. 30 percen belül.

Sterilizálás előtt a papírt és a gézt darabokra vágják, és a vattát a kívánt méretű golyók vagy tamponok formájában feltekerik. Ezt követően minden anyagtípust külön-külön, egy vagy több darabot vastag papírba csomagolnak. Ha a csomagolás megsérül, a sterilizált anyagot újra sterilizálni kell, mivel a sterilitás sérül.

Kesztyűk és egyéb gumitermékek sterilizálása. A mikrobák vegetatív formájával szennyezett gumitermékeket (kesztyűk, tubusok stb.) 2%-os nátrium-hidrogén-karbonát-oldatban vagy átfolyó gőzben 30 percig forralva sterilizálják; ha spórás mikroflórával szennyezett, autoklávban 1,5-2 atm nyomáson. 30 vagy 20 percen belül. Sterilizálás előtt a gumikesztyűket kívül-belül megszórjuk talkummal, hogy megóvjuk a letapadást. A kesztyűk közé géz kerül. Minden pár kesztyűt külön-külön gézbe csomagolunk, és ebben a formában kerékpárokba helyezzük.

Patogén mikrobák tenyészeteinek sterilizálása. A további munkához nem szükséges mikrobatenyészetet tartalmazó kémcsöveket, csészéket fémtartályba helyezzük, a fedelet lezárjuk és átadjuk sterilizálásra. A patogén mikrobák, vegetatív formák tenyészeteit autoklávban 30 percig 1 atm nyomáson elpusztítják. A sterilizálásra szánt tartályok autoklávba szállítását egy erre kijelölt személy végzi átvétel ellenében. A sterilizálási módot egy speciális naplóban rögzítik. Az I. és II. patogenitási csoportba tartozó mikrobák tenyészeteinek, valamint az e csoportokhoz tartozó kórokozókkal fertőzött vagy fertőzésre gyanús anyagok megsemmisítésekor a hulladékanyagot tartalmazó tartályokat magas oldalú fémtálcákra helyezik át egy kísérő személy jelenlétében, fertőző anyagokkal dolgozhat.

A sterilizálás típusai

Sterilizálás forralással. A forralással történő sterilizálást sterilizátorban végezzük. Desztillált vizet öntünk a sterilizátorba, mivel a csapvíz vízkövet képez. (Az üvegtárgyakat hideg, a fémtárgyakat nátrium-hidrogén-karbonát hozzáadásával forró vízbe merítjük). A sterilizált tárgyakat alacsony lángon 30-60 percig főzzük. A sterilizálás kezdetének azt a pillanatot kell tekinteni, amikor a víz felforr a sterilizátorban. A forralás végén steril csipesszel veszik a műszereket, amelyeket a többi elemmel együtt felforralnak.

Száraz hő sterilizálás. A száraz hővel történő sterilizálást Pasteur kemencében végezzük. A sterilizálásra előkészített anyagot úgy helyezzük a polcokra, hogy ne érintkezzen a falakkal. A szekrény zárva van, és utána bekapcsolják a fűtést. A sterilizálás időtartama 150°C-on 2 óra, 165°C-on - 1 óra, 180°C-on - 40 perc, 200°C-on - 10-15 perc (170°C-on papír- és vattaforgatás sárga, és magasabb hőmérsékleten elszenesedett). A sterilizálás kezdete az a pillanat, amikor a sütő hőmérséklete eléri a kívánt magasságot. A sterilizálási időszak végén a sütőt kikapcsolják, de a szekrényajtókat nem nyitják ki, amíg teljesen ki nem hűltek, mivel a szekrénybe belépő hideg levegő repedéseket okozhat a forró edényeken.

Gőzsterilizálás nyomás alatt. A nyomás alatti gőzsterilizálást autoklávban végezzük. Az autokláv két egymásba helyezett kazánból, egy burkolatból és egy fedélből áll. A külső kazánt víz-gőz kamrának, a belsőt sterilizáló kamrának nevezik. A gőzt gőzkazánban állítják elő. A sterilizálandó anyagot a belső üstbe helyezzük. A sterilizáló vízforraló felső részén kis lyukak vannak, amelyeken keresztül a gőzkamrából származó gőz áthalad. Az autokláv fedele hermetikusan a házhoz van csavarozva. Az autoklávnak a felsorolt ​​főbb részeken kívül számos működését szabályozó alkatrésze van: nyomásmérő, vízmérő üveg, biztonsági szelep, kipufogó-, levegő- és kondenzvízcsapok. A nyomásmérő a sterilizáló kamrában keletkező nyomás meghatározására szolgál. A normál légköri nyomást (760 Hgmm. Art.) nullának vesszük, ezért az üresjárati autoklávban a nyomásmérő mutatója nullán áll. Van egy bizonyos kapcsolat a nyomásmérő leolvasása és a hőmérséklet között (2. táblázat).

2. táblázat.

A nyomásmérő leolvasásának és a víz forráspontjának aránya

A piros vonal a mérőskálán az autoklávban megengedett legnagyobb üzemi nyomást jelzi. A biztonsági szelep a túlzott nyomásképződés elleni védelemre szolgál. Előre meghatározott nyomásra van beállítva, vagyis arra a nyomásra, amelyen a sterilizálást végre kell hajtani, amikor a nyomásmérő nyila túlmegy a vonalon, az autokláv szelepe automatikusan kinyílik és kiengedi a felesleges gőzt, ezáltal lelassítja a nyomás további emelkedését. .

Az autokláv oldalfalán egy mérőüveg található, amely a gőzkazán vízszintjét mutatja. A vízmérő üveg csövére két vízszintes vonal van felhelyezve - az alsó és a felső, amelyek jelzik a vízgőz kamrában a megengedett alsó és felső vízszintet. A légcsapot úgy tervezték, hogy a sterilizálás kezdetén eltávolítsa a levegőt a sterilizáló és a víz-gőz kamrából, mivel a levegő, mivel rossz hővezető, megsérti a sterilizálási rendszert. Az autokláv alján egy kondenzációs csap található, amely a sterilizáló kamrát kiszabadítja a sterilizált anyag melegítése során keletkező kondenzátumból.

Autokláv szabályok. A munka megkezdése előtt ellenőrizze az autoklávot és a műszereket. Az automatikus gőzszabályozással rendelkező autoklávokban a vízgőzkamra elektrovákuum-manométerén lévő nyilak a sterilizálási módnak megfelelően vannak beállítva: az alsó nyíl 0,1 atm-re van állítva. alsó, felső - 0,1 atm. az üzemi nyomás felett a vízgőz kamra a mérőüveg felső jeléig vízzel van feltöltve. A vízzel való feltöltés ideje alatt a cső szelepét, amelyen keresztül a gőz belép a kamrába, nyitva tartják, hogy szabad levegő távozhasson a kazánból. Az autokláv sterilizáló kamrája meg van töltve a sterilizálandó anyaggal. Ezt követően az autokláv fedelét (vagy ajtaját) zárják, szorosan rögzítik központi zárral vagy csavarokkal; a torzulás elkerülése érdekében a csavarokat keresztben (átmérőben) csavarják be. Ezután kapcsolja be a fűtőforrást (villamos áram, gőz), zárja el a gőzforrást a sterilizáló kamrával összekötő cső szelepét. A párologtatás megkezdésével és a víz-gőz kamrában nyomás keletkezésével öblítést hajtanak végre (levegőt eltávolítanak a sterilizáló kazánból). A levegő eltávolításának módját az autokláv kialakítása határozza meg. Eleinte a levegő külön-külön adagokban távozik, majd egyenletes, folyamatos gőzáram jelenik meg, jelezve, hogy a levegő teljesen kiürült a sterilizáló kamrából. A levegő eltávolítása után a szelep záródik, és a sterilizáló kamrában fokozatosan megnövekszik a nyomás.

A sterilizálás kezdete az a pillanat, amikor a nyomásmérő mutatja a beállított nyomást. Ezt követően a fűtési intenzitás csökken, hogy az autoklávban a nyomás a szükséges ideig ugyanazon a szinten maradjon. A sterilizálási idő végén a melegítés leáll. Zárja el a sterilizáló kamrába gőzt szállító csővezeték szelepét, és nyissa ki a kondenzvízcső szelepét (lefelé), hogy csökkentse a kamrában lévő gőznyomást. Miután a nyomásmérő tű nullára süllyedt, lassan lazítsa meg a szorítóeszközöket, és nyissa ki az autokláv fedelét.

A sterilizálás hőmérsékletét és időtartamát a sterilizálandó anyag minősége és a fertőzött mikroorganizmusok tulajdonságai határozzák meg.

A sterilizáló kamrában a hőmérsékletet rendszeresen bakteriológiai tesztekkel szabályozzák. A bioteszteket a Központi Epidemiológiai Szolgálat bakteriológiai laboratóriumai készítik. Ha ezek a tesztek sikertelenek, az autokláv műszaki állapotát ellenőrzik.

Gőzsterilizálás. A folyékony gőzzel történő sterilizálást Koch folyadékgőz készülékben vagy lecsavart fedéllel és nyitott kiömlőcsappal rendelkező autoklávban végezzük. A Koch-készülék egy fém üreges henger, kettős fenékkel. A felső és az alsó alsó lemez közötti teret 2/3-ig feltöltjük vízzel (van egy csap a sterilizálás után visszamaradt víz leeresztéséhez). A készülék fedelének közepén egy lyuk van a hőmérő számára, és több kis lyuk a gőz távozásához. A sterilizálandó anyagot lazán töltik be a készülék kamrájába, hogy a lehető legnagyobb mértékben érintkezzen a gőzzel. A sterilizálás kezdete az az idő, amikor a víz felforr, és a gőz belép a sterilizáló kamrába. Folyékony gőzkészülékben főként tápközeget sterilizálnak, amelyek tulajdonságai 100°C feletti hőmérsékleten megváltoznak. Az áramló gőzzel történő sterilizálást meg kell ismételni, mivel egyetlen melegítés 100 ° C-on nem biztosítja a teljes fertőtlenítést. Ezt a módszert frakcionált sterilizálásnak nevezik: a sterilizált anyagot 3 napon keresztül naponta 30 percig áramló gőzzel kezelik. A sterilizálások közötti időközökben az anyagot szobahőmérsékleten tartják, hogy a spórák vegetatív formába csírázzanak, amelyek a későbbi melegítés során elhalnak.

Tindalizáció. A Tyndall a Tyndall által javasolt frakcionált sterilizálást jelenti 100 °C alatti hőmérsékleten. A sterilizálandó anyag melegítését termosztáttal ellátott vízfürdőben egy órán keresztül 60-65°C-on 5 napig, illetve 70-80°C-on 3 napig végezzük. A hevítések között a feldolgozott anyagot 25°C hőmérsékleten tartják, hogy a spórák vegetatív formába csírázzanak, amelyek a későbbi hevítések során elpusztulnak. A tindalizálást a fehérjét tartalmazó tápközeg dehidratálására használják.

Mechanikus sterilizálás bakteriális ultraszűrőkkel. Bakteriális szűrőket használnak a folyadék megszabadítására a benne lévő baktériumoktól, valamint a baktériumok elválasztására a vírusoktól, fágoktól és exotoxinoktól. A vírusokat a bakteriális szűrők nem tartják vissza, ezért az ultraszűrés nem tekinthető a szó elfogadott értelmében vett sterilizálásnak. Az ultraszűrők gyártásához finoman porózus anyagokat (kaolin, azbeszt, nitrocellulóz stb.) használnak, amelyek képesek megfogni a baktériumokat.

Az azbesztszűrők (Seitz-szűrők) 3-5 mm vastag és 35 és 140 mm átmérőjű azbesztlemezek kis és nagy térfogatú folyadékok szűrésére. Hazánkban az azbesztszűrőket két fokozatban gyártják: „F” (szűrő), lebegő részecskéket visszatartó, de áthaladó baktériumokat és „SF” (sterilizáló), sűrűbb, visszatartó baktériumokat. Használat előtt az azbesztszűrőket szűrőberendezésekbe szerelik, és velük együtt sterilizálják egy autoklávban. Az azbesztszűrőt egyszer használják. A membrán ultraszűrők nitrocellulózból készülnek, és 35 mm átmérőjű, 0,1 mm vastagságú fehér korongok.

A bakteriális szűrők pórusméretükben különböznek, és sorozatszámmal vannak jelölve (3. táblázat).

3. táblázat

Bakteriális szűrők

A membránszűrőket közvetlenül felhasználás előtt forralással sterilizálják. A szűrőket 50-60°C-ra melegített desztillált vízbe helyezzük, hogy ne csavarodjanak ki, 30 percig lassú tűzön forraljuk, 2-3-szor cserélve a vizet. A sterilizált szűrőket flambírozott és hűtött, sima hegyű csipesszel távolítják el a sterilizátorból a sérülések elkerülése érdekében.

A folyadékok szűrésére bakteriális szűrőket szerelnek fel speciális szűrőeszközökbe, különösen a Seitz szűrőbe.

2 részből áll: a felső, henger vagy tölcsér alakú, valamint a készülék alsó tartórésze, fémhálóból vagy tiszta kerámialapból készült úgynevezett szűrőasztallal, amelyen membrán vagy azbesztszűrő található. kerül elhelyezésre. A készülék alátámasztó része tölcsér alakú, amelynek elvékonyodó része a Bunsen-lombik nyakának gumidugójában található. Működőképes állapotban a készülék felső része csavarokkal van rögzítve az alsóhoz. A szűrés megkezdése előtt a berendezés különböző részeinek csomópontjait paraffinnal töltjük fel a tömítettség érdekében. A lombik kivezető csöve vastag falú gumicsővel csatlakozik vízsugárhoz, olaj- vagy kerékpárszivattyúhoz. Ezt követően a szűrt folyadékot a berendezés hengerébe vagy tölcsérébe öntik, és a szivattyút bekapcsolják, vákuumot hozva létre a fogadóedényben. A kialakuló nyomáskülönbség hatására a szűrt folyadék a szűrő pórusain keresztül a vevőbe jut. A mikroorganizmusok a szűrő felületén maradnak.

Kenetek készítése

A mikroorganizmusok színes formában történő tanulmányozásához egy üveglemezen kenetet készítenek, szárítják, rögzítik, majd megfestik.

A vizsgálandó anyagot vékony rétegben eloszlatjuk egy jól zsírtalanított tárgylemez felületén.

A keneteket mikrobakultúrákból, kóros anyagból (köpet, genny, vizelet, vér stb.) és a holttestek szerveiből készítik.

A kenetek készítésének technikáját a vizsgált anyag természete határozza meg.

Mikrobatenyészetekből folyékony tápközeggel és folyékony kóros anyagból (vizelet, agy-gerincvelői folyadék stb.) kenet készítése. A tesztfolyadék egy kis cseppjét bakteriális hurokkal egy tárgylemezre visszük, és a hurkokat körkörös mozdulatokkal egyenletes rétegben, egy fillér érme átmérőjű kör alakjában elosztjuk.

Vérkenetek készítése. Egy csepp vért csepegtetünk a tárgylemezre, közelebb annak egyik végéhez. A második - polírozott - üveget, amelynek keskenyebbnek kell lennie, mint a tárgyüveg, 45°-os szögben ráhelyezzük az elsőre, és a vércsepphez tesszük, amíg az nem érintkezik vele. Miután a vér szétterül a polírozott él mentén, az üveget jobbról balra csúsztatják, egyenletesen elosztva a vért vékony rétegben az üveg teljes felületén. Az ütés vastagsága az üvegek közötti szögtől függ: minél élesebb a szög, annál vékonyabb a körvonal. A megfelelően elkészített kenet halvány rózsaszín színű és végig azonos vastagságú.

Vastag csepp elkészítése. Pasteur pipettával egy csepp vért csepegtetünk a tárgylemez közepére, vagy az üveget közvetlenül a kiálló vércseppre. Az üvegre felvitt vért bakteriális hurokkal bekenjük úgy, hogy a kapott kenet átmérője egy fillér érme méretének feleljen meg. Az üveget vízszintes helyzetben kell hagyni, amíg a vér meg nem szárad. A "vastag csepp" vére egyenetlenül oszlik el, egyenetlen szélt képezve.

Kenet készítése viszkózus anyagból (köpet, genny). A keskeny széléhez közelebb eső üveglemezre lerakódott köpetet vagy gennyet egy másik üveglemez fedi le. A szemüvegek kissé egymáshoz vannak nyomva.

Ezt követően mindkét kéz 1 és 2 ujjával megfogják a poharak szabad végeit, és ellentétes irányba terítik szét, hogy mozgás közben mindkét pohár szorosan illeszkedjen egymáshoz. A keneteket egyenletesen elosztott anyaggal készítik, nagy területet elfoglalva.

Kenet készítése sűrű tápközeggel rendelkező tenyészetekből. Tiszta, jól zsírtalanított tárgylemez közepére csepp vizet csepegtetünk, abba egy baktériumhurkot vezetünk be a vizsgált mikrobatenyészet kis mennyiségével, így a folyadékcsepp enyhén zavarossá válik. Ezt követően a hurkon lévő mikrobiális anyag feleslegét lángban elégetjük, és a fenti módszer szerint elkészítjük a kenetet.

Kenet készítése szervekről és szövetekről. Fertőtlenítés céljából a szerv felületét csipesz felhevített ágaival cauterizálják, ezen a helyen bemetszést készítenek, majd hegyes ollóval a mélységből kis szövetdarabot vágnak ki, amelyet két üveglap közé helyeznek. . Ezután járjon el ugyanúgy, mint a gennyből és köpetből készült kenet elkészítésekor. Ha a szerv szövete sűrű, akkor a bemetszés mélységéből szikével kaparják le. A kaparással nyert anyagot szikével vagy bakteriális hurokkal vékony rétegben eloszlatjuk az üveg felületén.

A szövet elemeinek és a benne lévő mikroorganizmusok egymáshoz viszonyított helyzetének tanulmányozására keneteket készítenek. Ennek érdekében a szerv közepéről levágott kis szövetdarabot csipesszel befogjuk, és a vágott felülettel egymás után többször felvisszük a tárgylemezre, így kenet-lenyomat sorozatot kapunk.

Kenetek szárítása és rögzítése. Az üveglemezre készített kenetet levegőn szárítják, és a teljes száradás után rögzítik. Rögzítéskor a kenetet a tárgylemez felületére rögzítik, ezért a készítmény későbbi festése során a mikrobasejtek nem mosódnak le. Ráadásul az elölt mikrobasejtek jobban festődnek, mint az élők.

Megkülönböztetik a fizikai rögzítési módszert, amely a magas hőmérsékletnek a mikrobiális sejtre gyakorolt ​​hatásán alapul, és a kémiai módszerek között, amelyek során fehérje koagulációt okozó szereket használnak. Az I-II patogenitási csoportba tartozó kórokozókat tartalmazó keneteket a láng fölött nem lehet rögzíteni.

A rögzítés fizikai módja. A készítménnyel ellátott tárgylemezt csipesszel vagy a jobb kéz I-es és II-es ujjával a bordák mögé, felfelé húzással, sima mozdulattal 2-3-szor az égőláng felső része fölött veszik. A teljes rögzítési folyamat nem tarthat tovább 2 másodpercnél. A rögzítés megbízhatóságát a következő egyszerű technikával ellenőrizzük: az üveglemez kenettől mentes felületét a bal kéz hátsó felületére visszük fel. A kenet megfelelő rögzítésével az üvegnek forrónak kell lennie, de nem okozhat égési érzést.

Kémiai rögzítés. A 4. táblázatban látható vegyszereket és vegyületeket a kenetek rögzítésére is használják.

4. táblázat

Kémiai rögzítéshez használt anyagok

A megszáradt kenettel ellátott tárgylemezt fixálószeres palackba merítjük, majd levegőn megszárítjuk.

Színező vonások

A kenetfestési technika. A kenetek színezéséhez festékoldatokat vagy színezőpapírt használnak, amelyet A. I. javasolt. Kék. Az egyszerű előkészítés, a könnyű használat, valamint a színezőpapír korlátlan ideig történő tárolásának lehetősége volt az alapja a különféle színezési módszerekben való széles körű használatuknak.

Színező körvonalak színező papírral. A megszáradt és rögzített készítményre néhány csepp vizet csepegtetünk, 2x2 cm-es színes papírokat helyezünk, amelyekre a teljes festési idő alatt nedvesnek kell lennie, és szorosan illeszkednie kell az üvegfelülethez. Szárításkor a papírt még vízzel is megnedvesítik. A kenetfestés időtartamát a festési módszer határozza meg. A festés végén a papírt csipesszel óvatosan eltávolítjuk, a kenetet csapvízzel lemossuk és levegőn vagy szűrőpapíron megszárítjuk.

Kenetek festése festékoldatokkal. A megszáradt és rögzített készítményre pipettával olyan mennyiségben festéket viszünk fel, hogy az a teljes kenetet befedje. A kenetek koncentrált festékoldatokkal (Ziehl karbolikus fukszin, karbolikus encián vagy kristályibolya) történő festéskor a festést szűrőpapíron keresztül végezzük, amely visszatartja a festékrészecskéket: egy szűrőpapírcsíkot helyezünk egy rögzített kenetre, és festékoldatot öntünk rá. azt.

Mikroszkópos vizsgálathoz az előkészített, szárított és fixált keneteket megfestik. A színezés egyszerű és összetett. Az egyszerű színezés abból áll, hogy bármely festéket felvisz egy kenetre egy bizonyos ideig. Leggyakrabban alkohol-víz (1:10) Pfeiffer fukszint, Leffler-féle metilénkéket és szafranint használnak egyszerű színezéshez. Az eozint, mint savas festéket, csak a sejtek citoplazmájának festésére és a háttér színezésére használják. A savas fukszin teljesen alkalmatlan a baktériumok megfestésére.