Kas perdavė RV analizę imunobloto metodu. Imunoblotavimas (antikūnų aptikimas pacientų serume prieš tam tikrus patogeno antigenus)

MPBA-Blot-HIV-1, ŽIV-2 reagentų rinkinys skirtas patvirtinti antikūnų prieš atskirus ŽIV-1 ir (arba) ŽIV-1 grupės O ir (arba) ŽIV-2 baltymus (antigenus) aptikimą žmogaus serume arba plazma imuninio bloto metodu.

Skiriamieji bruožai:

• Reagentų rinkinyje "MPBA - Blot - HIV-1, HIV-2" yra išgryninti lizato viruso baltymai ŽIV 1 ir peptidas - ŽIV-2 gp36 antigeninis determinatas;
• Užtikrina antikūnų prieš ŽIV-1, ŽIV-1 O grupės, ŽIV 2 aptikimą vienoje juostelėje;
• Paprasta analizės rengimo ir atlikimo procedūra;
• Vidinė reakcijos kokybės kontrolė*
• Maksimalus analizės greitis (3 valandos);
• Nedidelis tiriamojo mėginio tūris - 20 µl;
• Nereikalauja papildomos įrangos tyrimams;
• Rinkinio kokybę garantuoja rusiškų ir tarptautinių standartų pavyzdžiai**

* Vidinę kokybės kontrolę užtikrina:

• vidinės kontrolės juostelės, užtikrina serumo ar plazmos mėginio įvedimo kontrolę;
• kontrolinis neigiamas serumas (K-);
• kontrolinis teigiamas serumas (K+), leidžiantis identifikuoti juostelėje aptiktas juostas;
• kontrolinis silpnai teigiamas serumas (K + cl), kuris užtikrina reagento rinkinio jautrumo kontrolę.

**Kokybės užtikrinimas:

MPBA-Blot-HIV-1, ŽIV-2 reagentų rinkinio charakteristikos buvo nustatytos tiriant mėginius iš atsitiktinės donorų imties, pacientų, kuriems diagnozuota ŽIV infekcija, komercines serokonversijos grupes, standartines paneles ir mėginius, kurie „galimai trukdo determinacija“ komponentai.

Reagentų rinkinys neduoda klaidingai teigiamų rezultatų tiriant standartinės grupės serumus, kuriuose nėra antikūnų prieš ŽIV 1.2 ir ŽIV-1 antigeną ("Standartinis AT (-) HIV", Nr. FSR 2007/00953 of 10/ 25/2007). Specifiškumas – 100%.

Diagnostinis specifiškumas nustatytas ištyrus atsitiktinę 200 donorų atranką iš įvairių kraujo centrų ir klinikų, kurių preliminariai patvirtinta, kad nėra ŽIV-1, ŽIV-2 infekcijos. Specifiškumas tiriant atsitiktinę donorų imtį buvo 100 %;

Reagentų rinkinio specifiškumas buvo nustatytas tiriant 250 mėginių, įskaitant serumo ar plazmos mėginius, paimtus iš nėščių moterų, hospitalizuotų pacientų, pacientų, sergančių hepatitu C ir E, ir mėginius su „galimai trukdančiais nustatymui“ komponentais. Naudojant MPBA-Blot-HIV-1, ŽIV-2 rinkinį, šių mėginių klaidingai teigiamų rezultatų nerasta.

Diagnostinis jautrumas buvo nustatytas naudojant:
- Boston Biomedica, Inc. ŽIV-1 skydelio plazmos mėginiai (WWRB 301) iš skirtingų regionų, kuriuose yra skirtingi ŽIV-1 potipiai: M grupė (A, B, C, D, E, F potipiai) ir O grupė; reagento rinkinio jautrumas buvo 100 %;

Reagentų rinkinio jautrumas buvo nustatytas tiriant tarptautines serokonversijos plokštes Boston Biomedica, Inc (SeraCare Life Sciences), kat. nrs. PRB 903, PRB 904, PRB 909, PRB 912, PRB 916, PRB 917, PRB 918, PRB 919, PRB 921, PRB 923, PRB 924, PRB 927, PRB 928, PRB 930

Reagentų rinkinys aptinka antikūnus prieš ŽIV-1 standartinės grupės, kurioje yra antikūnų prieš ŽIV-1 („Standartinis AT (+) HIV-1“, Nr. FSR 2007/00953, 2007 m. spalio 25 d.), serume, aptinka antikūnus. į ŽIV-2 standartinės grupės, kurioje yra antikūnų prieš ŽIV-2, serume ("Standartinis AT (+) HIV-2", Nr. FSR 2007/00953, 2007-10-25). Jautrumas – 100%.

2011 m. liepos 13 d. registracijos liudijimas Nr. FSR 2010/07958 (galiojimas neribojamas)

Junginys:

• Imunosorbentas. Baltos nitroceliuliozės membranos juostelės su atskirais ŽIV-1 baltymais (gp160, gp120, p66, p55, p51, gp41, p31, p24, p17), adsorbuotos ant jų elektrotransferiniu būdu ir užteptos ant juostelės sintetiniu ŽIV-2 peptidu, gp36 baltymo ir anti-IgG žmogaus analogas (vidinė kontrolė) - 18 vnt;
• K- – kontrolinis neigiamas serumas. Žmogaus kraujo serumas, kuriame nėra antikūnų prieš ŽIV-1,2, HCV, ŽIV antigeną, HBsAg, inaktyvuojamas kaitinant 560C temperatūroje; skaidrus šviesiai geltonas skystis - 1 mėgintuvėlis (0,08 ml). Sudėtyje yra konservantų: timerosalio ir natrio azido;
• K+ – kontrolinis teigiamas serumas. Žmogaus kraujo serumas, kuriame yra antikūnų prieš ŽIV-1,2 (titras ne mažesnis kaip 1:10000), neturintis HBsAg, ŽIV antigeno, antikūnų prieš HCV, inaktyvuotas kaitinant 560C temperatūroje; skaidrus šviesiai geltonas skystis - 1 mėgintuvėlis (0,08 ml) Sudėtyje yra konservantų: timerosalio ir natrio azido;
• K+sl – kontrolinis silpnai teigiamas serumas. Žmogaus kraujo serumas, kuriame yra antikūnų prieš ŽIV-1,2 (titras ne didesnis kaip 1:200), neturintis HBsAg, ŽIV antigeno, antikūnų prieš HCV, inaktyvuotas kaitinant 560C temperatūroje; skaidrus šviesiai geltonas skystis - 1 mėgintuvėlis (0,08 ml). Sudėtyje yra konservantų: timerosalio ir natrio azido;
• RROKk (x10) – tirpalas mėginiams ir konjugatui skiesti. Koncentratas – Tris buferis, kuriame yra iš anksto apdorotas normalus ožkos serumas; nepermatomas pilkas skystis - 1 buteliukas (10 ml). Sudėtyje yra konservantų: timerosalio;
• PRk (x20) - plovimo tirpalas. Koncentratas – Tris buferis, kuriame yra Tween-20; skaidrus bespalvis skystis - 1 buteliukas (70 ml). Sudėtyje yra konservantų: timerosalio;
• Konjugatas. Ožkos antikūnai prieš žmogaus IgG, konjuguoti su šarmine fosfataze; skaidrus bespalvis skystis - 1 mėgintuvėlis (0,06 ml);
• Substratas (dažymasis tirpalas). 5-brom-4-fluor-indolil-fosfato (BCIP) ir nitrozintetrazolio (NBT) tirpalas; skaidrus šviesiai geltonas skystis - 1 buteliukas (50 ml);
• Milteliai imuniniam blotavimui. Nugriebto pieno milteliai - amorfiniai balti arba šviesiai geltoni milteliai - 5 pak. x 1g;
• Tabletė su dangteliu reakcijai nustatyti - 2 vnt.;
• Plastikiniai pincetai - 1 vnt.

Imuninis blotavimas (imunoblotas, Western blot, Western blot)- derina su fermentais susietą imunosorbentinį tyrimą (ELISA) su preliminariu elektroforetiniu viruso antigenų perkėlimu į nitroceliuliozės juostelę (juostelę).

Šiame gražiame moksliniame pavadinime „dėmė“ greičiausiai verčiama kaip „dėmė“, o „vakarinis“ kaip „vakarinis“ atspindi šio „dėmės“ pasiskirstymo popieriuje kryptį iš kairės į dešinę, tai yra, geografiniame žemėlapyje, tai atitinka kryptį iš vakarų į rytus. „Imuninio bloto“ metodo esmė yra ta, kad imunofermentinė reakcija vykdoma ne su antigenų mišiniu, o su ŽIV antigenais, anksčiau imunoforezės būdu paskirstytais į frakcijas, esančias pagal molekulinę masę nitroceliuliozės membranos paviršiuje. Dėl to pagrindiniai ŽIV baltymai, antigeninių determinantų nešiotojai, pasiskirsto paviršiuje atskirų juostų pavidalu, atsirandančių fermento imunologinio tyrimo metu.

Imunoblotas apima kelis etapus:

Juostos paruošimas. Imunodeficito virusas (ŽIV), kuris anksčiau buvo išgrynintas ir sunaikintas iki sudedamųjų dalių, yra veikiamas elektroforezės, o antigenai, sudarantys ŽIV, atskiriami pagal molekulinę masę. Tada blotuojant (analogiškai išspaudžiant rašalo perteklių ant „bloterio“) antigenai perkeliami į nitroceliuliozės juostelę, kurioje dabar yra ŽIV būdingų, akiai nematomų antigeninių juostų spektras.

Pavyzdinis tyrimas. Ant nitroceliuliozės juostelės užtepama tiriamoji medžiaga (serumas, paciento kraujo plazma ir kt.), o jei mėginyje yra specifinių antikūnų, jie jungiasi prie griežtai atitinkamų (papildomų) antigeninių juostų. Dėl vėlesnių manipuliacijų šios sąveikos rezultatas vizualizuojamas – tampa matomas.

Rezultato interpretacija. Juostų buvimas tam tikrose nitroceliuliozės plokštelės vietose patvirtina, kad tiriamame serume yra antikūnų prieš griežtai apibrėžtus ŽIV antigenus.

A juosta – teigiamas valdymas

B juosta – silpna teigiama kontrolė

C juosta – neigiama kontrolė

D juostelė – teigiamas mėginys (aptikti antikūnai prieš ŽIV-1)

Šiuo metu imunoblotavimas (imunoblotas) yra pagrindinis metodas, patvirtinantis virusui specifinių antikūnų buvimą tiriamajame serume. Kai kuriais ŽIV infekcijos atvejais prieš serokonversiją specifiniai antikūnai veiksmingiau nustatomi imunoblotingu nei ELISA. Imuninio blotingo tyrimas atskleidė, kad antikūnai prieš gp 41 dažniausiai aptinkami sergančiųjų AIDS serume, o norint nustatyti p24 profilaktiniais tikslais tirtiems asmenims, reikia atlikti papildomus tyrimus dėl ŽIV infekcijos buvimo. Imunoblotų testų sistemos, pagrįstos genetiškai modifikuotais rekombinantiniais baltymais, pasirodė esančios specifiškesnės nei įprastos sistemos, pagrįstos išgrynintu viruso lizatu. Naudojant rekombinantinį antigeną susidaro ne difuzinė, o aiškiai apibrėžta siaura antigeno juosta, kuri lengvai pasiekiama apskaitai ir įvertinimui.

ŽIV-1 užsikrėtusių asmenų serume aptinkami šių pagrindinių baltymų ir glikoproteinų antikūnai – struktūriniai apvalkalo baltymai (env) – gp160, gp120, gp41; branduoliai (gag) - p17, p24, p55, taip pat viruso fermentai (pol) - p31, p51, p66. ŽIV-2 tipiški antikūnai prieš env – gp140, gp105, gp36; gag - p16, p25, p56; pol-p68.

Tarp laboratorinių metodų, reikalingų reakcijos specifiškumui nustatyti, didžiausią pripažinimą turi ŽIV-1 apvalkalo baltymų – gp41, gp120, gp160 ir ŽIV-2 – gp36, gp105, gp140 antikūnų nustatymas.

PSO mano, kad serumas yra teigiamas, jei imunoblotingu aptinkami antikūnai prieš bet kuriuos du ŽIV glikoproteinus. Remiantis šiomis rekomendacijomis, jei yra reakcija tik su vienu iš apvalkalo baltymų (rp 160, rp 120, rp 41) kartu arba be reakcijos su kitais baltymais, rezultatas laikomas abejotinu ir rekomenduojama atlikti antrą testą naudojant rinkinį. iš kitos serijos ar kitos kompanijos. Jei po to rezultatas išlieka abejotinas, rekomenduojama stebėti 6 mėnesius (tyrimas po 3 mėnesių).

Teigiama reakcija su p24 antigenu gali rodyti serokonversijos laikotarpį, nes kartais pirmiausia atsiranda šio baltymo antikūnai. Tokiu atveju, atsižvelgiant į klinikinius ir epidemiologinius duomenis, tyrimą rekomenduojama pakartoti su serumo mėginiu, paimtu ne vėliau kaip po 2 savaičių, o būtent tuo atveju, kai sergant ŽIV būtini suporuoti serumai.

Teigiamos reakcijos su gag ir pol baltymais be reakcijos su env baltymais gali atspindėti ankstyvos serokonversijos stadiją, taip pat gali rodyti ŽIV-2 infekciją arba nespecifinę reakciją. Asmenys, turintys tokius rezultatus po ŽIV-2 testo, pakartotinai tiriami po 3 mėnesių (per 6 mėnesius).

Infekcinių ligų laboratorinės diagnostikos praktikoje kartais atsiranda poreikis nustatyti antikūnus ne prieš patogeną apskritai, o prieš tam tikrus jo baltymus (antigenus), tai yra specifinių antikūnų spektrą. Jei šiam tikslui naudojamas fermentinio imunosorbento tyrimo metodas, tokiu atveju reikia išskirti ir išvalyti būtinus antigenus iš patogeno kultūros. Gauti baltymai atskirai dedami į kietąją fazę. Jei naudojama 96 šulinėlių plokštelė – kiekvienoje duobutėje vienos rūšies antigenas. Tada specifiniai antikūnai nustatomi netiesioginiu metodu.

Pagal teigiamą reakciją šulinyje su vienu ar kitu antigenu galima spręsti apie atitinkamų specifinių antikūnų buvimą. Tokias fermentų imuninės analizės testų sistemas siūlo gamintojai, tačiau dėl didesnio informacijos kiekio ir paties tyrimo atlikimo paprastumo, imuninio blotingo (Western blot) metodas tapo plačiai paplitęs.

Imuninis blotingas leidžia vienu metu ir skirtingai aptikti antikūnus kraujo serume prieš visus diagnostiškai reikšmingus patogeno baltymus. Išvertus iš anglų kalbos Western blot reiškia Western transfer (pažodžiui – blot). Šio neįprasto termino istorija yra tokia.

Mokslininkas, vardu Southern (E. Southern), 1975 metais pirmą kartą pasiūlė elektroforetiškai atskirtų DNR fragmentų perkėlimo iš gelio į membraną metodą. Pasak autoriaus, metodas buvo vadinamas Southern blot, o tai reiškia „pietų perkėlimas“. Savo ruožtu RNR molekulių perdavimo būdas specialistų buvo pavadintas Northern blot - „šiauriniu perkėlimu“. Iš pradžių kaip pokštas, o vėliau šis pavadinimas buvo užfiksuotas oficialioje mokslinėje literatūroje.

G. Toubinas 1979 metais paskelbė pirmųjų baltymų blotavimo eksperimentų rezultatus. Tęsiant "geografinių" biologinių makromolekulių perkėlimo metodų pavadinimų tradicijas, šis metodas tapo žinomas kaip "vakarietiškas" perkėlimas - Western blot.

Pirmajame šio metodo etape atliekamas patogeninių baltymų mišinio elektroforetinis atskyrimas poliakrilamido gelyje, dalyvaujant natrio dodecilsulfatui (SDS). SDS, būdama paviršinio aktyvumo medžiaga, tolygiai apgaubia baltymų molekules ir visoms joms suteikia maždaug vienodo dydžio neigiamą krūvį. Todėl molekulės elektriniame lauke juda viena kryptimi, o judėjimo greitis priklauso tik nuo baltymo molekulės dydžio (molekulinės masės).

Atlikus elektroforezės procedūrą, gaunama gelio plokštelė, kurios storyje baltymai išsidėstę atskirų plonų linijinių zonų pavidalu. Judėjimo kryptimi jie skirstomi tokia tvarka: arčiau starto yra didelės molekulinės masės, apie 120-150 kDa, baltymai, o toliau iki finišo pažengę 5-10 kDa masės baltymai. Antrame etape gelio plokštelė dedama ant nitroceliuliozės lakšto ir ši struktūra dedama tarp nuolatinės srovės šaltinio elektrodų. Veikiant elektriniam laukui, baltymai teka iš porėto gelio į tankesnę membraną, kur tvirtai užsifiksuoja.

Gautas dėmė yra apdorojamas blokuojančiu tirpalu, kuriame yra antigeniškai indiferentiškų baltymų ir (arba) nejoninių detergentų (Tween 20), kurie blokuoja membranos vietas, kuriose nėra antigenų. Tada membranos lakštas supjaustomas siauromis juostelėmis, kad kiekvienoje juostelėje būtų visos antigeninės frakcijos. Aprašytus veiksmus atlieka gamintojas.

Komercinėse bandymų sistemose, skirtose antikūnams aptikti imuninio blotingo būdu, yra blotų (juostelių arba juostelių), paruoštų analizei. Vartotojas nustato visą specifinių antikūnų prieš patogeno baltymus spektrą pagal netiesioginio metodo schemą. Kaip chromogenas spalvinei (fermentinei) reakcijai atlikti naudojama tirpi bespalvė medžiaga, kurios produktas įgauna spalvą, tampa netirpus ir nusėda (nusėda) ant nitroceliuliozės.

Dėl nuoseklių imuninių ir fermentinių reakcijų, kai tiriamajame mėginyje yra antikūnų prieš patogeninius baltymus, ant bloto atsiranda tamsios skersinės juostelės, kurių vieta yra tam tikrų patogeninių baltymų zonoje. Kiekviena tokia juosta rodo specifinių antikūnų prieš atitinkamą antigeną buvimą. Tyrimo, atlikto imuninio blotingo metodu, rezultatas išduodamas kaip antikūnų prieš specifinius patogeno baltymus sąrašas. Pavyzdžiui: „aptikta antikūnų prieš p17 ir p24 baltymus“.

Nitroceliuliozės dėmės po išsivystymo gali būti ilgai laikomos džiovintos. Tačiau spalvos intensyvumas gerokai susilpnėja. Drėgnas dėmes galima fotografuoti arba naudojant skaitytuvus jų grafinį vaizdą įvesti į asmeninių kompiuterių atmintį. Specialios kompiuterinės programos leidžia apdoroti rezultatus ir greitai sekti antikūnų spektro dinamiką dinaminio stebėjimo metu

IMUNOBLOTAS(Western blot) - laboratorinio kraujo serumo tyrimo, siekiant nustatyti antikūnus prieš ŽIV, metodas; tai tikslesnis testas nei ELISA ir naudojamas ELISA rezultatams patvirtinti. ELISA – su fermentais susietas imunosorbentinis tyrimas (ELISA) – laboratorinis tyrimas, leidžiantis nustatyti ŽIV antikūnų buvimą kraujyje; ŽIV antikūnų tyrimas.

Pagal PSO rekomendaciją imunoblotavimas (Western blot) ŽIV infekcijos diagnozei taikomas kaip papildomas ekspertinis metodas, kuris turėtų patvirtinti ELISA rezultatus. Šis metodas paprastai naudojamas norint dar kartą patikrinti teigiamą ELISA rezultatą, nes jis laikomas jautresniu ir specifiškesniu, nors ir sudėtingesniu ir brangesniu.

Imunoblotingas apjungia fermentinį imuninį tyrimą (ELISA) su preliminariu elektroforetiniu viruso baltymų atskyrimu gelyje ir jų perkėlimu į nitroceliuliozės membraną. Imunobloto procedūra susideda iš kelių etapų (). Pirma, iš anksto išgrynintas ir sunaikintas iki sudedamųjų dalių, ŽIV yra veikiamas elektroforezės, o visi virusą sudarantys antigenai yra atskiriami pagal molekulinę masę. Tada blotuojant antigenai iš gelio perkeliami į nitroceliuliozės juostelę arba nailono filtrą, kuriame dabar yra ŽIV būdingas, akiai nematomas baltymų spektras. Toliau ant juostelės uždedama tiriamoji medžiaga (serumas, paciento plazma ir kt.), o jei mėginyje yra specifinių antikūnų, jie jungiasi prie juos griežtai atitinkančių antigeninių baltymų juostelių. Dėl vėlesnių manipuliacijų (pvz., ELISA) šios sąveikos rezultatas vizualizuojamas – tampa matomas. Juostelių buvimas tam tikrose juostelės vietose patvirtina, kad tiriamame serume yra antikūnų prieš griežtai apibrėžtus ŽIV antigenus.

Imunoblotavimas dažniausiai naudojamas ŽIV infekcijos diagnozei patvirtinti. PSO mano, kad serumas yra teigiamas, jei imunoblotavimo būdu aptinkami antikūnai prieš bet kuriuos du ŽIV apvalkalo baltymus. Remiantis šiomis rekomendacijomis, jei yra reakcija tik su vienu iš apvalkalo baltymų (gp160, gp120, gp41) kartu su reakcija su kitais baltymais arba be jo, rezultatas laikomas abejotinu ir rekomenduojama atlikti antrą tyrimą naudojant rinkinį iš skirtingų serijų ar kitos kompanijos. Jei po to rezultatas lieka abejotinas, tyrimai tęsiami kas 3 mėnesius.

Imunoblotavimui pirmajame etape kraujo serume esantys baltymai atskiriami gelyje pagal jų molekulinę masę ir krūvį, naudojant elektrinį lauką (gelio elektroforezės metodas). Tada ant gelio užtepama nitroceliuliozės arba nailono membrana ir „sušlapinama“ (tai yra blotingas). Tai atliekama specialioje kameroje, kuri leidžia visiškai perkelti medžiagą iš gelio į membraną. Dėl to baltymų išdėstymo modelis, kuris buvo ant gelio, atkuriamas ant membranos (dėmės), kurią vėliau galima lengvai manipuliuoti. Iš pradžių membrana apdorojama antikūnais prieš norimą antigeną, o nuplovus nesurištą medžiagą, pridedamas radioaktyviai pažymėtas konjugatas, kuris specifiškai jungiasi su antikūnais (kaip ELISA). Gauto antigenu-antikūnu pažymėto konjugato komplekso vieta nustatoma autoradiografijos būdu naudojant rentgeno plėvelę. Po jo pasireiškimo viskas tampa aišku, ar kraujyje yra antigenų, ar ne.

apibūdinimas

Nustatymo metodas Imunoblotas.

Tiriama medžiaga Serumas

Galimas vizitas į namus

Antibranduoliniai antikūnai yra autoantikūnų, kurie jungiasi su ribonukleino rūgštimis ir su jomis susijusiais baltymais, šeima. Jie atsiranda daugiau nei 90% pacientų, sergančių difuzinėmis jungiamojo audinio ligomis, taip pat dažnai stebimi sergant autoimuninėmis kepenų ligomis ir daugeliu kitų būklių. Iki šiol buvo apibūdinta apie 200 šios autoantikūnų šeimos atmainų, tačiau ne visos jos gali būti naudojamos klinikinėje praktikoje.

Antibranduolinių antikūnų imunoblotas leidžia vienu tyrimu vienu metu ištirti 15 pagrindinių antinuklearinių antikūnų tipų, o tai užtikrina pagrindinių sisteminių reumatinių ligų diferencinę diagnostiką. Kiekvienas imunoblotu aptiktas autoantikūnų tipas dažniausiai stebimas pacientams, turintiems būdingą klinikinį vaizdą, todėl autoantikūnų spektras leidžia ne tik diagnozuoti ligą, bet ir nustatyti tam tikrų klinikinių apraiškų išsivystymo riziką.

Antibranduolinių antikūnų imunoblotą patartina naudoti antrajame serologinio tyrimo etape, kai kitų tyrimų rezultatas yra teigiamas, rodantis, kad tiriamojo serume yra antinuklearinių antikūnų. Šie tyrimai apima antinuklearinių antikūnų nustatymą (ELISA atranka), antibranduolinio faktoriaus (ANF) nustatymą ant Hep2 ląstelių (), antibranduolinių antikūnų ir antikūnų prieš ekstrahuojamą branduolinį antigeną (ENA).

Antinuklearinių antikūnų imunoblotinis metodas diagnozuojant sistemines reumatines ligas pasižymi dideliu klinikiniu specifiškumu. Tačiau ne visada įmanoma nustatyti antibranduolinių antikūnų specifiškumą, net ir esant dideliems ANF titrai (), nes daugelis antibranduolinių antikūnų antigenų vis tiek lieka neapibūdinti. Neigiamas imunobloto rezultatas šiuo atveju neatmeta sisteminių reumatinių ligų diagnozės. Daugelį antinuklearinių antikūnų galima aptikti naudojant imunoblotą – miozitui specifinių autoantikūnų grupę () ir imunoblotą – sklerodermijos autoantikūnų grupę ().

Literatūra

1. Lapinas S.V. Totolyanas A.A. Imunologinė laboratorinė autoimuninių ligų diagnostika / Leidykla "Chelovek", Sankt Peterburgas - 2010. 272 ​​p.
2. Nasonovas E.L., Aleksandrova E.N. Šiuolaikiniai reumatinių ligų laboratorinės diagnostikos standartai. Klinikinės gairės / BHM, M - 2006.
3. Conrad K, Schlosler W., Hiepe F., Fitzler M.J. Autoantikūnai organų specifinėse autoimuninėse ligose: diagnostikos nuoroda/ PABST, Dresdenas – 2011. 300 p.
4. Conrad K, Schlosler W., Hiepe F., Fitzler M.J. Autoantikūnai sisteminėse autoimuninėse ligose: diagnostinė nuoroda / PABST, Dresdenas - 2007. 300 p.
5. Gershvin ME, Meroni PL, Shoenfeld Y. Autoantibodies 2nd ed./ Elsevier Science - 2006. 862 p.
6. Shoenfeld Y., Cervera R, Gershvin ME Diagnostic Criteria in Autoimune Diseases / Humana Press - 2008. 598 p.
7. Reagentų rinkinio instrukcijos.

Treniruotės

Pageidautina atlaikyti 4 valandas po paskutinio valgio, nėra jokių privalomų reikalavimų.

Indikacijos paskyrimui

Tyrimas skirtas šių būklių diagnozei ir diferencinei diagnozei:

• sisteminė raudonoji vilkligė;
• poūmė odos vilkligė ir kitos odos vilkligės rūšys;
• mišri jungiamojo audinio liga;
• Sjögreno sindromas ir susijusios ligos;
• difuzinė ir lokalizuota sklerodermija, CREST sindromas;
• uždegiminės miopatijos (polimiozitas ir dermatomiozitas);
• nepilnamečių lėtinis artritas;
• autoimuninis hepatitas;
• pirminė tulžies cirozė ir sklerozuojantis cholangitas;
• šio tyrimo naudojimas yra skirtas aukštiems antibranduolinio faktoriaus, antibranduolinių antikūnų, antikūnų prieš ekstrahuojamą branduolinį antigeną, antikūnų prieš DNR, antikūnus prieš nukleosomas ir antifosfolipidiniams antikūnams nustatyti.

Rezultatų interpretacija

Tyrimo rezultatų aiškinimas turi informaciją gydančiam gydytojui ir nėra diagnozė. Šiame skyriuje pateikta informacija neturėtų būti naudojama savidiagnostikai ar savęs gydymui. Tikslią diagnozę nustato gydytojas, naudodamasis tiek šio tyrimo rezultatais, tiek reikiama informacija iš kitų šaltinių: istorijos, kitų tyrimų rezultatų ir kt.

Matavimo vienetai: kokybinis testas, rezultatas pateikiamas "aptikta" arba "nerasta" forma.

Kai aptinkama juosta, apibūdinanti bet kokio tipo antikūnų buvimą, juostos spalvos intensyvumas papildomai apibūdinamas pliusų ("kryžių") skaičiumi kiekvienam iš identifikuotų antikūnų tipų. Teigimo laipsnio padidėjimas netiesiogiai atspindi autoantikūnų turinį ir afinitetą.

Pamatinės reikšmės: antikūnai prieš Sm, RNP/Sm, SS-A (60 kDa), SS-A (52 kDa), SS-B, Scl-70, PM-Scl, PCNA, CENP-B, dsDNR, histoną, nukleozomą , Rib P, AMA-M2, Jo-1 nerasta.

Kiekvienam atitinkamam antigenui autoantikūnų nustatymo rezultatas pateikiamas „kryžiukais“. Seropozityvumo laipsnio padidėjimas netiesiogiai atspindi autoantikūnų kiekį ir afinitetą. Seropozityvumo balo parinktys pateikiamos toliau:

1. Antikūnų nerasta.
2. +/- - ribinis rezultatas;
3. + - mažas autoantikūnų prieš specifinį antigeną kiekis;
4. ++ – vidutinis autoantikūnų prieš konkretų antigeną kiekis;
5. +++ - didelis autoantikūnų kiekis konkrečiam antigenui.

Pagrindinės ligos, susijusios su antinuklearinių antikūnų nustatymu:

Antigenas	Reikšmė
Sm (Smitas)	Specifinis sisteminės raudonosios vilkligės žymuo (įtrauktas į 10-ąjį Amerikos reumatologijos koledžo SLE kriterijų, ACR)
SS-A (Ro52)	Jis pastebimas sergant įvairiomis autoimuninėmis ligomis, dažniau sergant sistemine raudonąja vilklige ir jos odos formomis, sisteminėmis reumatinėmis ligomis, reumatoidiniu artritu, autoimuninėmis kepenų ligomis ir kt.
SS-A (Ro60)	Sisteminė raudonoji vilkligė, odos formos raudonoji vilkligė, jautrumas šviesai sergant sistemine raudonąja vilklige, didelė įgimtos raudonosios vilkligės ir vaisiaus širdies ligos rizika. Pagrindinis serologinis Sjögreno sindromo rodiklis. Jis dažnai pastebimas kartu su antikūnais prieš SS-A (Ro52) antigeną.
SS-B	Sjögreno sindromas, sisteminė raudonoji vilkligė.
PCNA	Sisteminė raudonoji vilkligė, vilkligės nefrito rizika.
Ribosomos (Ribo P)	Sisteminė raudonoji vilkligė, centrinės nervų sistemos pažeidimo rizika.
Nukleosomos	Sisteminė raudonoji vilkligė, didelė glomerulonefrito rizika.
dvigrandė DNR	Specifinis sisteminės raudonosios vilkligės žymuo (įtrauktas į 10-ąjį SRV ACR kriterijų), didelė rizika susirgti vilkligės nefritu.
snRNP/Sm	Mišri jungiamojo audinio liga, sisteminė raudonoji vilkligė su maža inkstų pažeidimo rizika, sklerodermija.
Histonai	Sisteminė raudonoji vilkligė, vaistų sukelta vilkligė, sklerodermija.
Scl-70	Sisteminė sklerozė su difuziniais odos ir vidaus organų pažeidimais.
PM-Scl	Sklerodermija su polimiozitu.
CENP-B	CREST sindromas su sklerodaktilija, telangiektazijomis, poodinėmis kalcifikacijomis, Raynaud sindromu, ezofagitu.
Jo-1	Polimiozitas antisintetazės sindromo forma.
AMA-M2	Pirminė tulžies cirozė, Sjögreno sindromas.