Anf homogena vrsta luminiscencije. Za šta se koriste antinuklearna antitijela? Opće informacije o studiji

Spada u grupu velikih kolagenoza, koju karakteriše difuzno oštećenje vezivnog tkiva i krvnih sudova. Rana dijagnoza ove patologije predstavlja ozbiljan problem, jer SLE može početi pod "maskom" drugih bolesti. Budući da je SLE autoimuna bolest, mehanizam njenih kliničkih manifestacija, prema savremenim konceptima, objašnjava se sa sljedećih pozicija:

• cirkulirajući imuni kompleksi (CIC), koji uključuju antinuklearna antitijela, taloženi u mikrocirkulatornoj vezi, dovode do razvoja vaskulopatije i oštećenja tkiva;
• autoantitijela na krvne stanice dovode do leuko-, limfotrombopenije i anemije;
• antifosfolipidna antitijela dovode do razvoja antifosfolipidnog sindroma (APS).

Savremene metode imunološke laboratorijske dijagnostike omogućavaju da se identifikuju sve komponente patogeneze SLE i da se na taj način potvrdi dijagnoza bolesti sa izuzetnom, gotovo 100% tačnošću. Istovremeno, prisutnost bilo kakvih promjena u analizama omogućava njihovo tumačenje samo uzimajući u obzir individualnu kliničku sliku.

Treba napomenuti da stara metoda dijagnosticiranja SLE po prisutnosti LE ćelija u krvi nije izdržala test vremena, pokazujući izuzetno nisku osjetljivost i specifičnost, te je stoga napuštena. LE ćelije nisu ni uključene u SLE kriterijume.

Glavni markeri SLE su:

Indikacije za imenovanje krvnog testa za markere sistemskog eritematoznog lupusa

• kožni lupus;
• medicinski lupus;
• trombocitopenična purpura;
• eritrodermija;
• teško oštećenje jetre;
• CREST sindrom;
• polimiozitis;
• dermatomiozitis;
• kronični juvenilni artritis;
• autoimuni hepatitis;
• sklerozirajući holangitis;
• polineuropatija;
• mijelitis;

Kako je procedura?

Uzimanje krvi se vrši iz kubitalne vene na prazan želudac ujutru.

Priprema za analizu

Lupus antikoagulant

Lupus antikoagulant (LA) je jedan od važnih skrining i potvrdnih testova za dijagnozu APS. VA nastaju u organizmu kao rezultat razvoja autoimunih procesa nakon infektivnih utjecaja i potiskuju reakciju pretvaranja protrombina u trombin u krvi. Kada se ova antitijela otkriju u krvi produženim testovima koagulacije, definišu se kao "lupus antikoagulant".

Pozitivan rezultat:

• tumori;

antinuklearni faktor

Antinuklearni faktor na HEp-2 ćelijskoj liniji (ANF HEp-2, titri; ANA IF, titri). Pozitivan rezultat ANF-a uočava se kod više od 90% pacijenata sa SLE i kožnim oblicima ove bolesti, sklerodermijom, mješovitom bolešću vezivnog tkiva, Sjogrenovim sindromom. Rezultat određivanja ANF je titar, koji je vrijednost konačnog razrjeđenja seruma, koji zadržava značajnu fluorescenciju jezgra. Što je nazivnik frakcije veći, to je veće razrjeđenje seruma, to je više antitijela u serumu pacijenta. Osetljivost ovog testa na SLE je 95%.

Visoki titri ANF (1/640 i više):

• velika vjerovatnoća sistemske reumatske bolesti;
• visok rizik od autoimune bolesti jetre;
• povećanje titara ANF u dinamici ukazuje na pogoršanje sistemske bolesti;
• kod SLE, titar je u korelaciji sa težinom bolesti i smanjuje se efikasnom terapijom.

Niski titri ANF (do 1/160):

• kod 1-2% zdravih osoba;
• kod srodnika pacijenata sa sistemskim oboljenjima;
• mnoge autoimune, zarazne i onkološke bolesti.

Antitijela na nukleozome

Nukleozomska antitela (NCA) su među prvima koja se formiraju u telu tokom razvoja SLE. Titri NCA koreliraju sa aktivnošću bolesti. Specifičnost ovih autoantitijela za dijagnozu SLE je više od 95%.

Interpretacija rezultata analize

Visok sadržaj antitela na nukleozome (pozitivno):

• medicinski lupus;
• aktivni SLE, praćen nefritisom.

• mala vjerovatnoća SLE;
• nizak rizik od oštećenja bubrega kod SLE.

Antitijela klase IgG na dvolančanu DNK

Prisustvo IgG antitela na dvolančanu DNK (anti-dsDNA IgG; anti-dsDNA IgG) je visoko specifično za SLE, u manjoj meri za druge difuzne bolesti vezivnog tkiva ili SLE izazvane lekovima. Osetljivost testa na SLE je 85%. Kvantitativno određivanje anti-dsDNA IgG antitela je najpogodnije za praćenje statusa, prognoze i kontrolu terapije kod pacijenata sa SLE, jer je u korelaciji sa njegovom aktivnošću i težinom glomerulonefritisa.

Dešifrovanje rezultata analize

Nivo gore:

• infekcija uzrokovana Epstein-Barr virusom;

Nivo niži:

• norma.

Antitela na kardiolipin IgG

Antikardiolipin IgG antitijela (aCL IgG) su jedan od tipova autoimunih antifosfolipidnih antitijela uključenih u patogenezu antifosfolipidnog sindroma. Njihovo prisustvo u krvi manifestuje se produženjem fosfolipidno-zavisnih koagulogramskih testova (protrombin, APTT), koji se naziva „lupus antikoagulant“.

Interpretacija rezultata analize

• medicinski lupus;
• hepatitis C;
• borelioza;
• HIV infekcija.

Antitela na kardiolipin IgM

Antitela na kardiolipin IgM (aCL IgM), kada se otkriju, ukazuju na visok rizik od razvoja SLE; aCL IgM se detektuju kod 20-50% pacijenata sa sistemskim eritematoznim lupusom i 3-20% pacijenata sa drugim sistemskim reumatskim oboljenjima.

Interpretacija

Pozitivno (otkrivena antitijela):

• hepatitis C;
• borelioza;
• HIV infekcija;
• sistemske bolesti vezivnog tkiva.

Norms

U medicini postoje specifična stanja u kojima zaštitne ćelije počinju da napadaju sopstveni organizam – autoimune bolesti. Većina ovih bolesti se javlja u hroničnoj formi i potencijalno su opasne, jer mogu izazvati ozbiljne probleme u radu određenih organa i sistema. To često dovodi do invaliditeta i ozbiljnih posljedica.

Mogućnosti moderne medicine su velike, a sve ove promjene moguće je uočiti u ranoj fazi i na vrijeme započeti liječenje. Jedan od najčešćih testova koji se koriste za dijagnosticiranje ovih stanja je test na antinuklearna antitijela ili skraćeno AHA.

Analiza ANA je najinformativnija metoda za dijagnosticiranje svih sumnjivih autoimunih poremećaja, uglavnom bolesti vezivnog tkiva. Ali postoje i prisutnost antitijela u malignim procesima, infektivnim itd.

ANA analiza je najinformativnija dijagnostička metoda za sumnju na autoimune poremećaje

Najveća osjetljivost antitijela na takve bolesti:

1. Sistemski eritematozni lupus.
2. Reumatoidni artritis.
3. Sjogrenova bolest.

Ove ćelije se mogu naći i kod oko trećine pacijenata sa hroničnim hepatitisom.

Različiti faktori utiču na povećanje performansi. Konkretno, malarija, leukemija, infektivna mononukleoza i još mnogo toga.

Uz otkrivanje ANA tokom studije, važno je procijeniti nivo imunoglobulina kao što su IgA, IgM, IgG. Otkrivanje ovih komponenti u krvi pacijenata može ukazivati ​​na veliku mogućnost pojave reumatskih patologija i kolagenoza.

Ako nije utvrđena povezanost između sadržaja antitijela i simptoma, sama prisutnost ANA u krvi ukazuje na izbor ispravne taktike liječenja. Dugoročno očuvanje visokih kredita govori o razočaravajućem stanju stvari. Smanjenje ovih titara ukazuje na remisiju patologije, mnogo rjeđe na skoru smrt.

Istovremeno, ova antitijela se mogu otkriti kod određenog procenta zdravih osoba, a titri ANF-a mogu ići izvan normalnog raspona.

Indikacije za studiju

Imunolog i svaki certificirani specijalista, ovisno o području lezije, imaju pravo tumačiti rezultate.

Indikacije za ovu studiju su:

1. Identifikacija sistemskih bolesti, kao i autoimunih poremećaja bez očiglednih simptoma.
2. Otkrivanje sistemskog eritematoznog lupusa i njegovo sveobuhvatno proučavanje, odabir strategije liječenja.
3. Identifikacija lupusa lijeka.
4. Prisustvo određenih kliničkih manifestacija, kao što su produžena groznica bez ikakvog razloga, krhkost zglobova i njihova bolnost, kožni osip, bolovi u mišićima i visok stepen umora.
5. Znakovi simptomatskih manifestacija mješovitih bolesti: bolesti kože i unutrašnjih organa, konvulzivna stanja, povišena temperatura.
6. Prepisivanje lijekova dizopiramida, hidralazina itd.

Vrste pregleda

lupus streak

Postoje dva načina za otkrivanje antitijela u krvi. Prva tehnika se zove indirektna imunofluorescentna mikroskopija. Ako su prisutna antitijela, ona će se vezati za specifične nuklearne antigene. Koriste se elementi koji sijaju u posebnom spektru svjetlosti. Pod mikroskopom postaje moguće identificirati vrstu luminescencije.

Saznajte više o tome šta je miofascijalni sindrom i kako se liječi.

Ova metoda je prepoznata kao najbolja za određivanje vrijednosti antinuklearnih antitijela. Također, tehnika je dobila drugo ime - test trake za lupus.
Druga dijagnostička metoda je enzimski imunotest. Njegovo značenje leži u činjenici da antitijela u krvi stupaju u vezu s antigenom i kao rezultat toga otopina mijenja nijansu.

Važno je naglasiti da pozitivan skrining ne može biti jedini razlog za dijagnozu.

Potrebna je dodatna studija uz pomoć koje je moguće odrediti bolest u ranoj fazi. U slučaju negativnog skrininga, može se pretpostaviti potpuno odsustvo poremećaja. Međutim, to nikako ne isključuje prisutnost autoimune bolesti kod pacijenta.

Krv se daje na antinuklearni faktor u kombinaciji s drugim testovima. Ali na konačni rezultat utječe uzimanje određenih lijekova i prisutnost kroničnih i akutnih patologija kod pacijenta. Specijalist će vam pomoći da analizirate sve ove točke, zatim će postaviti ispravnu dijagnozu i savjetovati kako dalje.

Kako se pripremiti za istraživanje

Materijal za analizu je venska krv.

Karakteristike pripreme:

1. Materijal se uzima na prazan želudac. Nakon posljednjeg obroka mora proći najmanje 8 sati. Dozvoljeno je piti kvalitetnu filtriranu vodu bez plina.
2. Dva sata prije uzimanja krvi pušenje i upotreba nikotinskih proizvoda su isključeni.
3. Nekoliko dana prije operacije isključena je konzumacija alkoholnih i energetskih pića, zabranjeno je bavljenje teškim fizičkim radom.
4. Za dvije sedmice trebao bi biti potpuno izbjegavajte uzimanje lijekova posebno hormoni, antibiotici i drugi lijekovi.
5. Da bi se studija potvrdila, važno je ponoviti skrining nakon dvije sedmice.

Materijal za analizu je venska krv

Očekujte rezultate u roku od 48 sati nakon zahvata. Moguće je primanje podataka u hitnim slučajevima u roku od 3 sata.

Interpretacija rezultata

U kvalitativnom istraživanju mogu se dobiti sljedeći rezultati:

• ispod 0,9 - negativno, normalno;
• vrijednosti od 0,9 do 1,1 - sumnjivo;
• preko 1,1 - pozitivno.

Pacijenti često postavljaju pitanje: da li je antinuklearni faktor 1:160 normalan ili ne? Sve iznad ovog pokazatelja je van norme.

Tumačenje rezultata testa sadrži informacije za ljekara koji prisustvuje i nije dijagnoza. Informacije u ovom odjeljku ne bi se trebale koristiti za samodijagnozu ili samoliječenje. Tačnu dijagnozu postavlja doktor, koristeći kako rezultate ovog pregleda, tako i potrebne informacije iz drugih izvora: anamneza, rezultati drugih pregleda itd.

Jedinice mjere: titar.

Interpretacija rezultata

Rezultat određivanja ANF je titar, koji je vrijednost konačnog razrjeđenja seruma, koji zadržava značajnu fluorescenciju jezgra. Što je nazivnik frakcije veći, to je veće razrjeđenje seruma, to je više antitijela u serumu pacijenta. Visoki titri razrjeđenja seruma odražavaju visok afinitet i koncentraciju autoantitijela.

Otkrivanje visokih titara (1/640 i više) ukazuje na veliku vjerovatnoću sistemske reumatske bolesti ili autoimune bolesti jetre i zahtijeva pažljiv klinički, laboratorijski i instrumentalni pregled. Odsustvo povišenih titara antinuklearnog faktora značajno smanjuje vjerovatnoću sistemskih autoimunih bolesti.

U niskim titrima (do 1/160), antinuklearni faktor se može uočiti kod 1-2% zdravih osoba i srodnika pacijenata sa sistemskim oboljenjima. Učestalost pozitivnih titara u populaciji neznatno raste s godinama. Nizak titar antinuklearnih antitijela može se pojaviti kod mnogih autoimunih, infektivnih i onkoloških bolesti. Odsustvo visokih titara antinuklearnih antitijela značajno smanjuje vjerovatnoću sistemskog reumatskog procesa i može se koristiti za isključenje, a ne za potvrdu dijagnoze.

Povećanje titara ANF u dinamici ukazuje na egzacerbaciju sistemske bolesti, pa je kod SLE titar u korelaciji sa težinom procesa i smanjuje se efikasnom terapijom.

Pored titra seruma, uz pozitivan rezultat analize, opisan je i tip luminescencije jezgra. Uzrokuje ga širok spektar antitijela koja pronalaze svoje mete unutar ćelije. Opisano je više od 20 tipova luminiscencije, ali se 8 od njih koristi u kliničkoj praksi:

Referentne vrijednosti:< 1:160

Ponekad se mogu opisati 2 vrste sjaja, u kojima jedna maskira drugu niskim kreditima. Ukoliko se otkrije pozitivan ANF rezultat, potrebno je pokušati utvrditi antigenske mete antinuklearnih antitijela pomoću testova za detekciju antitijela na dvolančanu DNK (br. 126) i antitijela na nukleozome (br. 956), imunoblot antinuklearnih antitijela (br. 827), imunoblot antitela kod skleroderme (br. 826), imunoblot antitela kod polimiozitisa (br. 939) i određivanje antitela na kardiolipin (br. 967-969, 997).

antinuklearni faktor

antinuklearni faktor- laboratorijske analize koje imaju za cilj određivanje različitih tipova specifičnih imunoglobulina na strukture ćelijskog jezgra. ANF ​​indeks raste kod sistemskih bolesti vezivnog tkiva. Test se radi u svrhu njihove dijagnoze, diferencijacije, kontrole liječenja, otkrivanja egzacerbacija. Propisuje se kod kliničkih i laboratorijskih znakova sistemskog eritematoznog lupusa, skleroderme, Sharpovog sindroma, Sjogrenovog sindroma, reumatoidnog artritisa, inflamatorne miopatije. Serum venske krvi se ispituje RNIF metodom. Normalan indikator je titar koji nije veći od 1:160. Vrijeme pripreme test podataka je 8 radnih dana.

Osnova reumatskih bolesti je autoimuna reakcija na strukture ćelijskog jezgra - komplekse proteina i nukleinskih kiselina. Antigeni se formiraju tokom programirane smrti epiteliocita i limfocita. Ultraljubičaste zrake, infektivni agensi, lijekovi ubrzavaju uništavanje stanica, usporavaju uklanjanje apoptotičkih tijela i izazivaju razvoj autoimunih procesa. Antitijela na strukture jezgra predstavljena su mnogim tipovima, a u proučavanju antinuklearnog faktora razlikuje se oko osam. Prednost testa je njegova visoka specifičnost – otkrivaju se antitijela koja se ne mogu pročistiti ELISA-om. Međutim, dio imunoloških kompleksa se ekstrahuje u plazmu tokom RNIF-a, pa postoji mogućnost lažno negativnog rezultata.

Indikacije

Proučavanje antinuklearnog faktora indicirano je za sistemske patologije vezivnog tkiva. Osnovi za imenovanje testa su:

• Simptomi reumatske bolesti. Karakteristične manifestacije su groznica, umor, slabost, gubitak težine, bolovi u mišićima i zglobovima, osip na koži. Test se koristi za otkrivanje i razlikovanje SLE, skleroderme, Sjogrenovog sindroma, Sharpovog sindroma, reumatoidnog artritisa, inflamatornih miopatija.
• Rezultati laboratorijskih testova. Sumnja na reumatsku patologiju javlja se povećanjem ESR-a, nivoa C-reaktivnog proteina i CIC-a. Test se nalaže radi potvrđivanja dijagnoze.
• Dijagnoza reumatske bolesti. Analiza se radi nekoliko puta godišnje (učestalost se određuje pojedinačno) kako bi se pratio tok patologije, nakon kursa primjene imunosupresiva - za procjenu efikasnosti terapije.

Priprema za analizu

Biomaterijal za određivanje antinuklearnog faktora - venska krv. Postupak prikupljanja se obavlja u jutarnjim satima. Pravila pripreme su sledeća:

1. Posljednji obrok treba uzeti najkasnije 4 sata prije. Voda za piće je dozvoljena u bilo koje vrijeme.
2. Dan prije zahvata treba isključiti alkohol, vježbanje, emocionalna iskustva.
3. O upotrebi lekova treba razgovarati sa lekarom. Neki lijekovi izazivaju proizvodnju antitijela, razvoj lupusa izazvanog lijekovima. Na pozadini uzimanja glukokortikosteroida, moguće je dobiti lažno negativne podatke.
4. Instrumentalne dijagnostičke procedure, fizioterapijske sesije treba obaviti nakon davanja krvi.
5. Pušenje je zabranjeno u posljednjih 30 minuta prije zahvata.

U laboratoriji se serum izoluje iz krvi. Određivanje antinuklearnih antitijela u njemu vrši se RNIF metodom koristeći HEp-2 ćelijsku kulturu. Titar se procjenjuje prema najvećem razrjeđenju biomaterijala, pri kojem se detektuje luminiscencija nuklearnih struktura, tip imunoglobulina - po prirodi fluorescencije. Termini analize su 6-8 dana.

Normalne vrijednosti

Normalno, rezultat studije antinuklearnog faktora je negativan. Titar nije veći od 1:160 za odrasle i djecu. Prilikom tumačenja konačne vrijednosti uzimaju se u obzir sljedeće napomene:

• Niski titri ANA smanjuju vjerovatnoću autoimune patologije, ali je ne isključuju. Kod SLE, u 5% slučajeva rezultat je negativan, radi se test na antitela na SS antigene.
• Postizanje normalnog rezultata nakon kursa imunosupresivne terapije potvrđuje njen uspjeh.
• Negativan rezultat na pozadini simptoma autoimune patologije zahtijeva dodatne testove (NCA, ANA pomoću ELISA).

Povećanje indikatora

Antinuklearna antitijela nemaju citotoksična svojstva, ali nakon njihovog vezivanja za antigene nastaju imunološki kompleksi koji pokreću upalne procese u vaskularnim zidovima. Manifestuju se lezijama kože, bubrežnih glomerula, membrana zglobova, pleure. Razvijaju se simptomi karakteristični za sistemske patologije. Moguće bolesti određuju se prema vrsti luminescencije uz minimalno razrjeđenje seruma:

• Homogene. Difuzna fluorescencija ukazuje na prisustvo antitela na ds DNK, histona. Određuje se kod SLE i lupusa izazvanog lijekovima.
• Peripheral. Vrsta luminescencije određena je lokacijom hromatina, detektuje se u prisustvu komponenti Ig do DNK specifičnih za SLE.
• granularni. Antigeni su kompleksi nukleoproteina. Sjaj je nespecifičan, nalazi se kod mnogih reumatskih bolesti. Visok titar i fluorescencija velikih granula su najkarakterističniji za Sharpov sindrom.
• Nuklearni. Odražava prisustvo specifičnog Ig u strukturama nukleola. Otkriva sklerodermu i Sjogrenov sindrom. Rijetko se primjećuje kod endokrinopatija, kožnih patologija, transplantacija organa.
• Centromeric. Antigeni su centromeri hromozoma. Sjaj potvrđuje ograničenu sklerodermu.
• citoplazmatski. Provocirano prisustvom antitijela na tRNA sintetazu (Jo-1), ribozoma, organela. Omogućuje vam da odredite upalne miopatije, autoimuno oštećenje jetre.
• Mitohondrijski. Antigeni su komponente kompleksa piruvat dekarboksilaze. Sjaj je karakterističan za primarnu bilijarnu cirozu.
• tačkasta. Povezano s cirkulacijom antitijela na nukleoproteine, povezano s autoimunim oštećenjem jetre.

Smanjenje indikatora

Smanjenje indikatora ima prognostičku vrijednost u praćenju sistemskih bolesti vezivnog tkiva. Nivo ANA korelira s aktivnošću patoloških procesa, stoga je smanjenje njihove koncentracije znak remisije, uspješnosti terapije.

Ljudski imuni sistem je jedinstven dobro koordiniran mehanizam sposoban da odgovori na bilo koje spoljašnje unošenje patogenih faktora, čime štiti organizam od brojnih bolesti. Ali kao što znate, od svakog pravila postoje izuzeci, a u ovom slučaju oni izgledaju kao odgovor imunog sistema na sopstvene ćelije, što se naziva autoimunim bolestima.

Kod ovih patologija stvaraju se antitijela koja napadaju zdrave stanice, oštećujući ih ili uništavajući ih. Kao rezultat toga, dolazi do kršenja funkcioniranja pojedinih struktura tkiva, pa čak i organa. Takve patologije, zbog njihove prevalencije i uključenosti u procese nekoliko organa ili sistema, nazivaju se sistemskim bolestima.

Pojavom modernih metoda laboratorijske dijagnostike, od kojih je jedna ANF, test krvi za traženje antinuklearnog faktora, koji omogućava identifikaciju antinuklearnih (antinuklearnih) antitijela i utvrđivanje uzroka patologije. Ovaj indikator je jedan od markera sistemskih bolesti vezivnog tkiva (MCTD), prihvaćen kao „zlatni standard“ ove vrste istraživanja.

Osnovni koncepti koji karakterišu WCTD

Kao što je već opisano, patogeneza ovih patologija proizlazi iz poremećaja u radu imunološkog sistema i proizvodnje zaštitnih antitijela na određene komponente vlastitih ćelija. Takve ćelije, zbog posebnosti svog porijekla, imaju drugo ime - autoantitijela. U procesu imunološkog zatajenja dolaze u kontakt sa nuklearnim proteinskim spojevima, nukleinskim kiselinama i antigenima citoplazme, što dovodi do pojave simptoma upalnih bolesti, kao što su:

• strukturne promjene u tkivima i organima;
• izražen nerazuman umor;
• bol u mišićima i zglobovima;
• oštećenje kože;
• gubitak težine i drugo.

Antinuklearna antitijela (ANA) mogu se formirati u prilično širokom spektru autoimunih patologija, ali se najvjerojatnije pojavljuju kod sistemskog eritematoznog lupusa (SLE).

ANF ​​treba uzimati ako postoje znakovi produženog upalnog procesa

Referenca! Prema statistikama, više od 90% pacijenata koji pate od CTD-a ima abnormalnu proizvodnju takvih antitijela. Trenutno je proučavano oko 200 njihovih vrsta, koje su dobile generalizirani naziv - antinuklearni faktor. Uglavnom su predstavljeni imunoglobulinima klase G, ali se ponekad nalaze M ili A.

Suština krvnog testa na antinuklearni faktor

Prije nego što se upustimo u specifičnosti provođenja studije o ANF-u, vrijedi napomenuti da je tehnika izumljena i počela se koristiti prilično davno - 60-ih godina prošlog stoljeća. Ali postao je široko rasprostranjen u dijagnostičkoj praksi tek početkom 80-ih godina XX vijeka nakon poboljšanja. Naučnik Bek je još 1961. godine koristio ćelije laboratorijskih životinja kao supstrat, a tek 1982. Tan je koristio kontinuiranu ljudsku ćelijsku liniju HEp-2 za traženje ANF.

Iako je glavna svrha korištenja ovog testa postavljanje dijagnoze eritematoznog lupusa, on se i dalje smatra univerzalnom tehnikom za druge kolagenoze (MCTS). Potonji uključuju:

• skleroderma;
• dermatomiozitis;
• nodularni periarteritis;
• hronični aktivni hepatitis itd.

Jedna od najpogodnijih, a samim tim i najčešće korištenih metoda za određivanje antinuklearnog faktora u krvi pacijenata, je indirektna imunofluorescencija. Studija se provodi primjenom krvnog seruma na stanice transplantabilne epiteloidne linije adenokarcinoma ljudskog larinksa HEp-2 (sadrži određeni broj nuklearnih antigena) korištenjem obilježenog konjugata (spoja) s antitijelima.

Ovaj izbor nije napravljen slučajno - HEp-2 ćelije su vrlo pogodan supstrat za proučavanje biomaterijala. Imaju prilično velike jezgre i, kada se posade na laboratorijskim stakalcima, rastu u jednom sloju. Druge ljudske ćelijske linije također se mogu koristiti kao supstrat, ali uspješna morfologija i kultivacija definitivno čine HEp-2 nezamjenjivim materijalom.

U toku dijagnostike, kada se serum pacijenta inkubira sa ćelijskim supstratom, u prisustvu ANA, oni se kombinuju sa odgovarajućim nuklearnim antigenima. Vezna mjesta ANF-a sa HEp-2 određuju se korištenjem konjugata označenog fluoresceinom (bojom). Za procjenu rezultata reakcija koje su se dogodile koristi se luminiscentni mikroskop, koji omogućava razlikovanje prirode i stupnja nastalih ligamenata.

Fluorescentni mikroskop za laboratorijska istraživanja ANF

Referenca! Ljudski HEp-2, za razliku od krioreza tkiva životinja, ima veću stopu diobe stanica, što omogućava otkrivanje antitijela na antigene koja se eksprimiraju samo tokom diobe. Takođe, u ljudskom supstratu ne postoji ćelijski matriks, što smanjuje kvalitetu vizualizacije proučavane luminiscencije.

Koje grupe antigena se koriste u istraživanju?

Prilikom dekodiranja materijala uvijek je potrebno uzeti u obzir da ANA spektar uključuje prilično veliku grupu autoantitijela na nukleoproteine, ribonukleoproteine, histone, DNK i druge strukturne jedinice jezgre. Iz ovoga proizilazi da je funkcionalnost testa usmjerena na otkrivanje antitijela na komponente jezgra i citoplazme, koje su prvobitno identificirane kod SLE.

Kasnije su dijagnostičke mogućnosti studije proširene, zbog određivanja takvih antitijela u drugim CTD. U skrining metodama za detekciju ukupne ANA, u pravilu se koristi određeni skup antigena koji se uzimaju kao glavni markeri autoimune CTD.

To uključuje antitela IgG klase:

• SS-A (Ro) – nuklearni ribonukleoproteini;
• SS-B (La) – nuklearni proteini;
• Scl-70, protein-enzim (topoizomeraza-1);
• nativna dvolančana DNK;
• RNP/Sm, kompleks antigena;
• Jo-1, enzim RNA sintetaze;
• CENP-B (Centromere)
• Hep-2 ćelije;
• mitohondrije (PDC).

AHA su praktično bezopasne za organizam – nisu u stanju da prodru u živa tkiva. Ali u nekim slučajevima mogu se kombinirati u komplekse antigen-antitijelo, što kao rezultat dovodi do strukturnog uništenja tkiva. Jedan takav primjer je oštećenje parenhima bubrega kod SLE. Budući da je u procesu CTD uključeno više organa, otkrivanje ANA nije od presudne važnosti za dijagnozu, već se smatra samo potvrdom određenih simptoma.

Mogućnosti ANF analize, izražene u postocima

Proučavanje rezultata

Nakon provođenja svih potrebnih procedura – uzimanja biomaterijala i njegove laboratorijske pripreme za studiju, rezultati se evaluiraju i interpretiraju. Ovo uključuje određivanje titra (koncentracije) antitijela i vrste luminescencije. Značajan parametar za dijagnozu je indeks koncentracije preko 1:160. Na primjer, tokom egzacerbacije reumatizma može premašiti 1:640, dok u periodu remisije dolazi do smanjenja na 1:160–1:320.

Tip sjaja pokazuje ANA mete, što je posebno važna klinička tačka koja usmjerava naknadne radnje liječnika u propisivanju dijagnostičkih mjera. Prema prirodi sjaja jezgara pri korištenju HEp-2, odredit će se više od 20 varijanti nuklearnog bojenja, ovisno o vrstama antitijela prisutnih u biomaterijalu. Glavne uključuju sljedeće vrste sjaja.

• Peripheral. Sjaj ukazuje na prisustvo anti-DNK antitela, što potvrđuje SLE. Glavni tipovi antigena za periferni tip su histonski proteini i DNK.
• Difuzno (homogeno). Takav sjaj se uočava kod SLE, praćen oštećenjem strukture bubrega i sličnim CTD, nefritisom, sklerodermom, kao i SLE izazvanim lekovima. Antigene ovog tipa predstavljaju dsDNK, histonati i nukleozomi.
• Nukleolarni (nuklearni). Ovaj tip je karakterističan za sistemski oblik skleroderme, a utvrđuje se u prisustvu antitela kod pacijenata - RNA polimeraze 1, PM/Scl, NOR, U3RNP.
• Citoplazmatski. Ova vrsta osvjetljenja ukazuje na prisustvo ANA do tRNA sintetaze, odnosno Jo-1, i uočena je kod polimiozitisa.
• Granular. Određuje se kod Sjögrenovog sindroma, infektivne mononukleoze, mješovitog CTD (Sharp-sindrom, MCTD) i lupus sindroma izazvanog lijekovima. Pretežno prisutni antigeni za ovaj tip su SS-A, SS-B, Sm, U1-RNP i PCNA.
• Velike granule. Karakterističan je za mješoviti CTD i, prema mnogim naučnicima, povezan je s prisustvom RNP antigena.
• Fine granule. Utvrđuje se prisustvo antitela formiranih protiv ribonukleinskih proteina – ASSP (ACCP), SS-A, SS-B i drugih. Ovakva antitela su karakteristična za SLE, kao i za njegove specifične kožne oblike, reumatoidni artritis, sklerodermu, polimiozitis, Sjogrenov sindrom.
• Centromeric. Ovaj tip se uglavnom opaža kod skleroderme. Iako se u jednom uzorku krvi, posebno kod ispitanika sa difuznom CTD, mogu otkriti antitijela na različite nuklearne komponente u odvojenoj plazmi.
• Tačkaste inkluzije u jezgru. Ovaj tip se uglavnom otkriva kod autoimunih bolesti jetre. S njim se može kombinirati nekoliko fluorescentnih tipova, na primjer, nukleolarni i fino granularni, što je posljedica antitijela na Scl-70.

Referenca! Primijećeno je da se s povećanjem razrjeđenja biomaterijala u plazmi, parametri luminiscencije mogu promijeniti, jer mnoga antitijela karakterizira promjena aktivnosti pri različitim stupnjevima koncentracije.

Faktori koji mogu iskriviti rezultate

Na pouzdanost podataka dobijenih tokom studije može uticati samo nekoliko faktora koji mogu pokazati i lažno pozitivan i lažno negativan rezultat. Dakle, nevjerojatne reakcije prema gore opažene su kod starijih pacijenata starijih od 60 godina (prema statistici u 10-37% slučajeva) i kada uzimaju lijekove koji uzrokuju lupus (određeni antibiotici, kontraceptivi, sulfonamidi, tiazidni diuretici).

Primjećuje se da se kod 5-55% žena s implantatima u grudima povećava nivo koncentracije AHA. Pogrešna dijagnoza s pomakom naniže može biti uzrokovana upotrebom glukokortikoidnih lijekova - prednizolona, ​​metipreda ili deksametazona.