Kas turi ANF daugiau nei 1000. Antibranduolinis faktorius (ANF)

Tyrimo rezultatų aiškinimas turi informaciją gydančiam gydytojui ir nėra diagnozė. Šiame skyriuje pateikta informacija neturėtų būti naudojama savidiagnostikai ar savęs gydymui. Tikslią diagnozę nustato gydytojas, naudodamasis tiek šio tyrimo rezultatais, tiek reikiama informacija iš kitų šaltinių: istorijos, kitų tyrimų rezultatų ir kt.

Matavimo vienetai: titras.

Rezultatų interpretacija

ANF ​​nustatymo rezultatas yra titras, kuris yra galutinio serumo praskiedimo, išlaikančio reikšmingą branduolio fluorescenciją, vertė. Kuo didesnis frakcijos vardiklis, tuo didesnis serumo praskiedimas, tuo daugiau antikūnų paciento serume. Dideli serumo praskiedimo titrai atspindi didelį autoantikūnų afinitetą ir koncentraciją.

Nustačius aukštus titrus (1/640 ir daugiau), tai rodo didelę sisteminės reumatinės ligos arba autoimuninės kepenų ligos tikimybę ir reikalauja kruopštaus klinikinio, laboratorinio ir instrumentinio tyrimo. Padidėjusių antinuklearinio faktoriaus titrų nebuvimas žymiai sumažina sisteminių autoimuninių ligų tikimybę.

Esant žemiems titrams (iki 1/160), antinuklearinis faktorius gali būti stebimas 1-2% sveikų asmenų ir pacientų, sergančių sisteminėmis ligomis, giminaičių. Teigiamų titrų dažnis populiacijoje šiek tiek didėja su amžiumi. Žemi antinuklearinių antikūnų titrai gali atsirasti sergant daugeliu autoimuninių, infekcinių ir onkologinių ligų. Didelių antinuklearinių antikūnų titrų nebuvimas žymiai sumažina sisteminio reumatinio proceso tikimybę ir gali būti naudojamas diagnozei atmesti, o ne patvirtinti.

ANF ​​titrų padidėjimas dinamikoje rodo sisteminės ligos paūmėjimą, todėl sergant SRV titras koreliuoja su proceso sunkumu ir mažėja gydant efektyviai.

Be serumo titro, esant teigiamam analizės rezultatui, aprašomas branduolio liuminescencijos tipas. Jį sukelia daugybė antikūnų, kurie savo taikinius randa ląstelės viduje. Aprašyta daugiau nei 20 liuminescencijos tipų, tačiau 8 iš jų naudojami klinikinėje praktikoje:

Pamatinės vertės:< 1:160

Kartais galima apibūdinti 2 švytėjimo tipus, kuriuose vienas maskuoja kitą mažais kreditais. Nustačius teigiamą ANF rezultatą, reikia pabandyti nustatyti antigeninius antibranduolinių antikūnų taikinius, naudojant antikūnų prieš dvigrandę DNR (Nr. 126) ir antikūnų prieš nukleosomas (Nr. 956) nustatymo testus, antinuklearinių antikūnų imunoblotą. (Nr. 827), antikūnų imunoblotas sergant sklerodermija (Nr. 826), antikūnų imunoblotas sergant polimiozitu (Nr. 939) ir antikūnų prieš kardiolipiną nustatymas (Nr. 967-969, 997).

Žmogaus imuninė sistema yra unikalus, gerai koordinuotas mechanizmas, galintis reaguoti į bet kokį išorinį patogeninių veiksnių įvedimą ir taip apsaugoti organizmą nuo daugelio ligų. Tačiau, kaip žinote, kiekvienoje taisyklėje yra išimčių, ir šiuo atveju jos atrodo kaip imuninės sistemos atsakas į savo ląsteles, kurios vadinamos autoimuninėmis ligomis.

Sergant šiomis patologijomis, gaminami antikūnai, kurie atakuoja sveikas ląsteles, jas pažeidžia arba naikina. Dėl to pažeidžiamas atskirų audinių struktūrų ir net organų funkcionavimas. Tokios patologijos dėl jų paplitimo ir įsitraukimo į kelių organų ar sistemų procesą vadinamos sisteminėmis ligomis.

Atsiradus šiuolaikiniams laboratorinės diagnostikos metodams, vienas iš kurių yra ANF – kraujo tyrimas antibranduolinio faktoriaus paieškai, leidžiantis nustatyti antibranduolinius (antbranduolinius) antikūnus ir nustatyti patologijos priežastį. Šis rodiklis yra vienas iš sisteminių jungiamojo audinio ligų (MCTD) žymenų, priimtas kaip tokio pobūdžio tyrimų „auksinis standartas“.

Pagrindinės sampratos, apibūdinančios WCD

Kaip jau aprašyta aukščiau, šių patologijų patogenezė kyla dėl imuninės sistemos sutrikimų ir apsauginių antikūnų prieš tam tikrus savo ląstelių komponentus gamybos. Tokios ląstelės dėl savo kilmės ypatumų turi antrą pavadinimą – autoantikūnai. Imuniteto susilpnėjimo procese jie liečiasi su branduoliniais baltymų junginiais, nukleino rūgštimis ir citoplazmos antigenais, todėl atsiranda uždegiminių ligų simptomų, tokių kaip:

• struktūriniai audinių ir organų pokyčiai;
• ryškus nepagrįstas nuovargis;
• raumenų ir sąnarių skausmas;
• odos pažeidimas;
• svorio metimas ir kt.

Antinukleariniai antikūnai (ANA) gali susidaryti esant gana įvairioms autoimuninėms patologijoms, tačiau dažniausiai jie atsiranda sergant sistemine raudonąja vilklige (SRV).

ANF ​​reikia vartoti, jei yra užsitęsusio uždegiminio proceso požymių

Nuoroda! Remiantis statistika, daugiau nei 90% pacientų, sergančių CTD, tokių antikūnų gamyba yra nenormali. Šiuo metu ištirta apie 200 jų rūšių, kurios gavo apibendrintą pavadinimą – antibranduolinis faktorius. Jas daugiausia atstovauja G klasės imunoglobulinai, tačiau kartais randama M arba A.

Antinuklearinio faktoriaus kraujo tyrimo esmė

Prieš gilinantis į ANF tyrimo atlikimo specifiką, verta paminėti, kad technika buvo išrasta ir pradėta naudoti gana seniai - praėjusio amžiaus 60-aisiais. Tačiau jis tapo plačiai paplitęs diagnostikos praktikoje tik XX amžiaus 80-ųjų pradžioje po patobulinimo. Dar 1961 metais mokslininkas Beckas kaip substratą panaudojo laboratorinių gyvūnų ląsteles, o tik 1982 metais Tanas naudojo ištisinę žmogaus ląstelių liniją HEp-2 ANF paieškai.

Nors pagrindinis šio tyrimo tikslas yra nustatyti raudonosios vilkligės diagnozę, jis vis dar laikomas universaliu kitų kolagenozių (MCTS) metodu. Pastarieji apima:

• sklerodermija;
• dermatomiozitas;
• mazginis periarteritas;
• lėtinis aktyvus hepatitas ir kt.

Vienas iš patogiausių, taigi ir dažniausiai naudojamų antibranduolinio faktoriaus nustatymo metodų pacientų kraujyje yra netiesioginė imunofluorescencija. Tyrimas atliekamas žmogaus gerklų adenokarcinomos HEp-2 persodinamos epitelioidinės linijos (turinčios tam tikrą skaičių branduolinių antigenų) ląsteles užtepus kraujo serumu, naudojant pažymėtą konjugatą (junginį) su antikūnais.

Toks pasirinkimas nebuvo atsitiktinai – HEp-2 ląstelės yra labai patogus substratas tiriant biomedžiagą. Jie turi gana didelius branduolius ir, pasodinti ant laboratorinių stiklelių, auga vienu sluoksniu. Kitos žmogaus ląstelių linijos taip pat gali būti naudojamos kaip substratas, tačiau sėkminga morfologija ir auginimas neabejotinai daro HEp-2 nepakeičiama medžiaga.

Diagnostikos metu, kai paciento serumas yra inkubuojamas su ląstelės substratu, esant ANA, jie derinami su atitinkamais branduolio antigenais. ANF ​​surišimo su HEp-2 vietos nustatomos naudojant konjugatą, pažymėtą fluoresceinu (dažiu). Įvykusių reakcijų rezultatams įvertinti naudojamas liuminescencinis mikroskopas, leidžiantis atskirti susidariusių raiščių pobūdį ir laipsnį.

Fluorescencinis mikroskopas laboratoriniams tyrimams ANF

Nuoroda! Žmogaus HEp-2, priešingai nei gyvūnų audinių kriosekcijos, pasižymi didesniu ląstelių dalijimosi greičiu, todėl galima aptikti antikūnus prieš antigenus, kurie ekspresuojami tik dalijimosi metu. Taip pat žmogaus substrate nėra ląstelinės matricos, kuri sumažina tiriamos liuminescencijos vizualizacijos kokybę.

Kokios antigenų grupės naudojamos tyrime?

Dekoduojant medžiagas visada reikia atsižvelgti į tai, kad ANA spektras apima gana didelę autoantikūnų grupę prieš nukleoproteinus, ribonukleoproteinus, histonus, DNR ir kitus branduolio struktūrinius vienetus. Iš to išplaukia, kad testo funkcionalumas yra skirtas aptikti antikūnus prieš branduolio ir citoplazmos komponentus, kurie iš pradžių buvo nustatyti sergant SLE.

Vėliau tyrimo diagnostikos galimybės buvo išplėstos, dėl tokių antikūnų nustatymo kitose KTD. Atrankos metoduose, skirtuose bendros ANA aptikti, paprastai naudojamas tam tikras antigenų rinkinys, kurie laikomi pagrindiniais autoimuninės CTD žymenimis.

Tai apima IgG klasės antikūnus:

• SS-A (Ro) – branduoliniai ribonukleoproteinai;
• SS-B (La) – branduoliniai baltymai;
• Scl-70, baltymas-fermentas (topoizomerazė-1);
• natūrali dvigrandė DNR;
• RNP/Sm, antigenų kompleksas;
• Jo-1, RNR sintetazės fermentas;
• CENP-B (centromeras)
• Hep-2 ląstelės;
• mitochondrijos (PDC).

AHA praktiškai nekenksmingos organizmui – nepajėgia prasiskverbti į gyvus audinius. Tačiau kai kuriais atvejais jie gali susijungti į antigeno-antikūnų kompleksus, dėl kurių sunaikinami struktūriniai audiniai. Vienas iš tokių pavyzdžių yra inkstų parenchimos pažeidimas sergant SRV. Kadangi CTD procese dalyvauja keli organai, ANA nustatymas nėra itin svarbus diagnozei, o laikomas tik tam tikrų simptomų patvirtinimu.

ANF ​​analizės galimybės, išreikštos procentais

Studijuojant rezultatus

Atlikus visas reikiamas procedūras – paėmus biomedžiagą ir jos laboratorinį paruošimą tyrimui, rezultatai įvertinami ir interpretuojami. Tai apima antikūnų titro (koncentracijos) ir liuminescencijos tipo nustatymą. Svarbus diagnozės parametras yra koncentracijos indeksas, didesnis nei 1:160. Pavyzdžiui, reumato paūmėjimo metu jis gali viršyti 1:640, o remisijos laikotarpiu sumažėja iki 1:160–1:320.

Švytėjimo tipas rodo ANA taikinius, o tai yra ypač svarbus klinikinis taškas, vadovaujantis tolesniems gydytojo veiksmams skiriant diagnostines priemones. Atsižvelgiant į branduolių švytėjimo pobūdį naudojant HEp-2, bus nustatyta daugiau nei 20 branduolinio dažymo variantų, atsižvelgiant į biomedžiagoje esančių antikūnų tipus. Tarp pagrindinių yra šie švytėjimo tipai.

• Periferinis. Švytėjimas rodo anti-DNR antikūnų buvimą, o tai patvirtina SLE. Pagrindiniai periferinio tipo antigenų tipai yra histono baltymai ir DNR.
• Difuzinis (homogeniškas). Toks švytėjimas stebimas sergant SRV, kartu su inkstų struktūros pažeidimais ir panašiomis KTD, nefritu, sklerodermija, taip pat vaistų sukelta SRV. Šio tipo antigenus atstovauja dsDNR, histonatai ir nukleosomos.
• Branduolinis (branduolinis). Šis tipas būdingas sisteminei sklerodermijos formai, nustatomas esant ligoniams antikūnams – RNR polimerazė 1, PM/Scl, NOR, U3RNP.
• Citoplazminis. Šio tipo apšvietimas rodo ANA buvimą tRNR sintetazėse, būtent Jo-1, ir stebimas sergant polimiozitu.
• Granuliuotas. Jis nustatomas sergant Sjögreno sindromu, infekcine mononukleoze, mišriu CTD (Sharp sindromu, MCTD) ir vaistų sukeltu vilkligės sindromu. Šio tipo antigenai yra SS-A, SS-B, Sm, U1-RNP ir PCNA.
• Didelis granuliuotas. Jis būdingas mišriai CTD ir, daugelio mokslininkų nuomone, yra susijęs su RNP antigeno buvimu.
• Smulkios granulės. Nustatomas antikūnų, susidariusių prieš ribonukleininius baltymus – ASSP (ACCP), SS-A, SS-B ir kt., buvimas. Tokie antikūnai būdingi SRV, taip pat specifinėms jos odos formoms, reumatoidiniam artritui, sklerodermijai, polimiozitui, Sjögreno sindromui.
• Centromerinis. Šis tipas dažniausiai stebimas sergant sklerodermija. Nors viename kraujo mėginyje, ypač tiriamųjų, sergančių difuzine CTD, atskirtoje plazmoje galima aptikti antikūnų prieš įvairius branduolinius komponentus.
• Taškiniai intarpai branduolyje. Šis tipas dažniausiai nustatomas sergant autoimuninėmis kepenų ligomis. Su juo galima derinti keletą fluorescencinių tipų, pavyzdžiui, branduolinį ir smulkią granuliuotą, o tai atsiranda dėl antikūnų prieš Scl-70.

Nuoroda! Pastebėta, kad padidėjus plazmos biomedžiagos praskiedimui, liuminescencijos parametrai gali keistis, nes daugeliui antikūnų būdingas aktyvumo pokytis esant skirtingam koncentracijos laipsniui.

Veiksniai, galintys iškreipti rezultatus

Tyrimo metu gautų duomenų patikimumui įtakos gali turėti tik keli veiksniai, galintys parodyti ir klaidingai teigiamą, ir klaidingai neigiamą rezultatą. Taigi neįtikimas poslinkio į viršų atsakas stebimas vyresniems nei 60 metų pacientams (statistikos duomenimis 10–37 proc. atvejų) ir vartojant vaistus, sukeliančius vaistinę vilkligę (tam tikrus antibiotikus, kontraceptikus, sulfonamidus, tiazidinius diuretikus).

Pastebima, kad 5-55% moterų, turinčių krūtų implantus, AHA koncentracijos lygis padidėja. Klaidingą diagnozę, kai poslinkis žemyn, gali sukelti gliukokortikoidinių vaistų – prednizolono, metipredo ar deksametazono – vartojimas.

Sisteminės reumatinės ligos
Antibranduolinis faktorius (ANF) ir švytėjimo tipas

Antibranduolinio faktoriaus (ANF) nustatymas yra pagrindinis antibranduolinių antikūnų nustatymo metodas, leidžiantis aptikti daugumą antibranduolinių antikūnų rūšių, įskaitant autoantikūnus prieš nukleino rūgštis (dsDNR, ssDNR, RNR), konformacinius ir netirpius antigenus. ANF ​​nustatymo rezultatas yra autoantikūnų buvimas diagnostiniame titre, galutinis serumo praskiedimo titras, atspindintis autoantikūnų afinitetą ir koncentraciją, taip pat ląstelės branduolio liuminescencijos tipą. (testas 01.02.15.005). Konkrečios technikos ypatybės pirmiausia priklauso nuo substrato pasirinkimo, kuris gali skirtis nuo kriosekcijos (žiurkių kepenų ar inkstų) iki kultivuotų proliferuojančių ląstelių linijų (Hep2, Kb, HeLa), taip pat nuo audinių fiksavimo metodo, kuris gali turėti įtakos daugelio branduolinių antigenų išsaugojimas ANA.

Antinuklearinių antikūnų nustatymo testų kūrimo istorija:

XX amžiaus pradžia – „hialininiai kūnai“ leukocitų citoplazmoje

1948 m. Hargraves, Richmond, Morton – metodas LE ląstelėms aptikti in vitro ilgalaikio leuko suspensijos inkubacijos metu pacientams, sergantiems SLE

1951 m. Lee, Michael, Vural – atrado serumo faktorių, kuris stimuliuoja limfocitų branduolių fagocitozę periferinio kraujo leukocitais.

1957 Holoborow, Weir, Johnson naudojo netiesioginės imunofluorescencijos metodą, kurį 1950 m. sukūrė Coons, kad aptiktų ANF žmogaus kepenų kriosekcijose.

1961 Beck – panaudotas laboratorinių gyvūnų audinys

1982 m. Tan – naudojant ištisinę žmogaus ląstelių liniją HEp-2, šis testas tapo auksiniu standartu nustatant ANA

1958 m. Jonesas – pacientų, sergančių Sjögreno sindromu, kraujyje atrado faktorių, galintį nusodinti ląstelių branduolių ekstraktus, o tai buvo postūmis aprašyti daugumą antibranduolinių antikūnų tipų.

Netiesioginė imunofluorescencija nuolatinėje Hep2 ląstelių linijoje

ANF ​​aptikimo metodą sukūrė Tan (Tan, 1982), kaip substratą naudodamas žmogaus transplantuojamą epitelio ląstelių liniją HEp-2 (ATCC nuorodos Nr. CCL-23). Ši ląstelių linija, gauta iš žmogaus gerklų adenokarcinomos, yra didelė poliploidinė nekeratinizuota plokščioji epitelio ląstelė, kuri sudaro vieną sluoksnį ant plastiko ir stiklo.

Paveikslas: HEp-2 ląstelių linija, nudažyta hematologiniu dažymu.

Palyginamas šios linijos nepretenzingumas, dideli branduoliai ir visų žmogaus antigenų buvimas netiesioginės imunofluorescencijos metodą, naudojant ištisinę HEp-2 ląstelių liniją, pavertė pagrindiniu ANF nustatymo metodu. Anglų literatūroje nėra vieno šio metodo pavadinimo, kartais šis metodas trumpai vadinamas FANA (fluorescencinis antinuklearinių antikūnų aptikimas). Nomenklatūros vienybės trūkumas sukėlė painiavą vardan laboratorinių tyrimų. Kartais terminu „priešbranduoliniai antikūnai“ imunologinės laboratorijos nurodo tyrimus, pagrįstus fermentų imunologinio tyrimo ir imunocheminės analizės metodais, ir imunofluorescencijos metodu. Rusų kalbos literatūroje manome, kad būtina išlaikyti vietinį šio rodiklio pavadinimą - „antinuklearinis faktorius“ (ANF), kad imunofluorescencinis metodas būtų atskirtas nuo kitų ANA nustatymo testų.

Būtina aptikti IgG klasės ANF, nes kitų imunoglobulinų klasių ANF aptikimas neturi nepriklausomos diagnostinės vertės. Standartiniai paciento serumo skiedimai yra inkubuojami su audinių substratu, todėl antibranduoliniai antikūnai iš paciento serumo gali prisijungti prie atitinkamų branduolinių taikinių. Tada autoantikūnų surišimo vietos aptinkamos naudojant fluoresceinu pažymėtą anti-žmogaus antiserumą.

Nors kitos žmogaus ląstelių linijos gali būti naudojamos kaip substratai, dėl geros morfologijos ir lengvo auginimo, būtent Hep-2 linijos tapo visuotinai priimtu netiesioginės imunofluorescencijos substratu. Jo naudojimas pagerina tyrimo jautrumą dėl ryškios fluorescencijos net esant reikšmingam paciento serumo praskiedimui, o didelė, turtinga euchromatino šerdis leidžia tiksliai apibūdinti liuminescencijos tipą. Be to, naudojant Hep-2 ląstelių liniją, padedama aptikti Ro/SS-A antikūnus, taip pat antikūnus prieš nukleolinius antigenus, kurie yra prasti naudojant kriosekcijas iš laboratorinių gyvūnų audinių. Kiti HEp-2 privalumai yra didelis ląstelių dalijimosi dažnis, leidžiantis aptikti antikūnus prieš antigenus, ekspresuojamus tik ląstelių dalijimosi metu, ir audinių ląstelių matricos nebuvimas, dėl kurio sunku vizualizuoti specifinę liuminescenciją, palyginti su histologiniu. skyriuose.

Antibranduolinių faktorių titrai

ANF ​​titras apibrėžiamas kaip paskutinis paciento serumo skiedimas, turintis aiškią ląstelių branduolių fluorescenciją. Naudojant laboratorinių gyvūnų audinius, ANF diagnostinis titras yra 1:8-1:10, o naudojant HEp-2 ląstelių liniją, rekomenduojama naudoti pradinį 1:80. Šiuo atveju ANF titrai paprastai yra mažesni nei 1:160.

Naudojant titrus, mažesnius nei 1:160, kliniškai sveikiems asmenims silpnai teigiamų rezultatų dažnis bus ne didesnis kaip 5%, o kartu neleis praleisti reikšmingų ANA titrų pacientams, sergantiems difuzinėmis jungiamojo audinio ligomis.

Galutiniam titrui nustatyti dažniausiai naudojamas titravimas x2 žingsniais (1:160-1:320 - 1:640 - 1:1280 - 1:2560 - 1:5120 ir kt. Galima naudoti ir grubų titravimą. Fone reumatinių ligų paūmėjimo atveju ANF titrai paprastai yra didesni nei 1:640, o remisijos metu titrai sumažėja iki 1:160-1:320.

Yra rekomendacijų dėl ANF aptikimo rezultatų įvertinimo balais, nurodant turinį „kryžiukais“. Tai leidžia laboratorijoms taupyti reagentus ir sumažinti darbo sąnaudas tyrimams. Šiuo atveju galutinio titro nustatyti neįmanoma. Reikia atsižvelgti į tai, kad galutinis titras yra svarbesnis nei autoantikūnų, prijungtų prie substrato, kiekis, nes jis yra tiesiogiai susijęs su jų sąveikos su antigenu afinitetu. Pageidautina nustatyti galutinį titrą visiems teigiamiems pacientams, kurie leidžia išsiaiškinti, ar serume yra didelio afiniteto autoantikūnų, kurie yra labiau susiję su proceso aktyvumu.

Antibranduolinio faktoriaus branduolio liuminescencinis tipas

Jau pirmoje klinikinėje netiesioginės imunofluorescencijos taikymo ANF aptikimui naudojant laboratorinių audinių kriosekcijas patirtį buvo pastebėta, kad pacientų, sergančių autoimuninėmis ligomis, serumas skirtingais būdais „nudažydavo“ ląstelių branduolius, o tai lėmė selektyvią kai kurių ląstelių liuminescenciją. branduolinės struktūros. Išsiaiškinus šį reiškinį, imunofluorescencinio tyrimo metu buvo aprašyti vadinamieji branduolio „liuminescencijos tipai“. Taip yra dėl to, kad kiekvienas ANA tipas turi specifinius ląstelių taikinius, dėl kurių ląstelės branduolio, branduolio ir citoplazmos liuminescencijos tipas atspindi ANA sąveiką paciento serume su antigeno turinčiomis struktūromis viduje. ląstelė. Liuminescencijos tipas priklauso nuo specifinių autoantikūnų buvimo paciento kraujo serume, kuriais remiantis galima padaryti preliminarią išvadą dėl tų AHA tipų, kurių yra šiame serume. Tačiau laboratorinių gyvūnų histologinių audinių pjūvių naudojimas neleidžia patikimai nustatyti liuminescencijos tipo. Tuo pačiu metu persodinamų ląstelių linijų, tokių kaip Hep-2, naudojimas leidžia apibūdinti daugybę branduolinio ir citoplazminio dažymo variantų. Yra trys pagrindinės antigenų grupės, kurių antikūnų buvimas lemia skirtingus liuminescencijos tipus:

Ląstelės branduolio liuminescencijos tipas žymiai padidina ANF aptikimo informacijos turinį, todėl jį reikia reguliariai nustatyti nustatant šį rodiklį. HEp-2 ląstelių naudojimas leidžia apibūdinti daugiau nei 20 skirtingų branduolinio dažymo variantų, kurie priklauso nuo tiriamame serume esančios ANA spektro. Tačiau praktinei laboratorijai pakanka išskirti 6 pagrindinius autoantikūnų prisijungimo prie antigenų turinčių ląstelių struktūrų variantus.

Išskirkite vienarūšius, periferinius, granuliuotus (mažus / didelius), nukleolinius, centromerinius ir citoplazminius branduolio liuminescencijos tipus. Kiekvienas liuminescencijos tipas turi labai būdingų bruožų, leidžiančių atskirti vieną variantą nuo kito, taip pat antigenų rinkinį, su kuriuo pacientų serume reaguoja autoantikūnai. Liuminescencijos tipų aprašymas yra vertinga klinikinė informacija savaime, be to, liuminescencijos tipas gali rodyti tam tikrų laboratorinių tyrimų poreikį ateityje.

At vienalytis tipasšvytėjimas autoantikūnai reaguoja su tais antigenais, kurie yra difuziškai pasiskirstę branduolyje, t.y. yra chromatino dalis. Būdinga tai, kad aptikus homogeninį liuminescencijos tipą, besidalijančiose ląstelėse ryškiai nusidažo kondensuotos chromosomos. Pagrindiniai chromatino struktūriniai vienetai yra nukleosomos – DNR ir histonų kompleksai. Taigi, homogeniškas liuminescencijos tipas rodo, kad yra antikūnų prieš nukleosomas, dsDNR ir antikūnus prieš histonus. Jis pasireiškia pacientams, sergantiems SRV ir vaistų sukelta vilklige, taip pat pacientams, sergantiems sklerodermija. Paprastai aukšto ANF titro aptikimas su homogenine liuminescencija rodo SLE diagnozę.

periferinis tipas liuminescencija dažnai izoliuojama atskirai, nors tai yra savotiškas vienalytis liuminescencijos tipas. Jo aptikimas yra ląstelių fiksacijos artefaktas, dėl kurio chromatinas branduolyje persiskirsto į periferiją. Svarbu atskirti periferinį liuminescencijos tipą nuo branduolinės membranos dažymo, kuris pastebimas sergant autoimuninėmis kepenų ligomis. Periferinis liuminescencijos tipas randamas pacientams, turintiems antikūnų prieš dvigrandę DNR, ir daugiausia nustatoma pacientams, sergantiems SRV.

Granuliuotas tipas yra labiausiai paplitęs ir tuo pačiu nespecifiškiausias. Kartais toks švytėjimas buitinėje literatūroje vadinamas „dėmėtu“ arba „tinkliniu“. Pavadinimas „granuliuotas“ tiksliau atspindi šį reiškinį, nes šiuo atveju autoantikūnai reaguoja su branduolyje esančiomis granulėmis, atstovaujančiomis supramolekulinius nukleoproteinų kompleksus. Tokie baltymų ir nukleorūgščių kompleksai branduolyje atlieka nemažai funkcijų, būtinų normaliam ląstelės funkcionavimui. Tokie kompleksai visų pirma apima spliceosomas, kurios atlieka po transkripcinį mRNR pertvarkymą, reikalingą baltymų sintezei ribosomose. Kompozicijoje yra daug skirtingų nukleoproteinų, kurie, aptikus granuliuotą liuminescencijos tipą, sukelia įvairius antigeninius taikinius. Pagrindiniai autoantigenai, antikūnai, prieš kuriuos galima vizualizuoti granuliuotą liuminescencijos tipą, yra Sm, U1-RNP, SS-A, SS-B antigenai ir PCNA. Ląstelės dalijimosi procese praranda didžiąją dalį susidariusių nukleoproteinų kompleksų, todėl mitozinės figūros ląstelių linijoje su granuliuoto tipo liuminescencija nėra nudažytos. Granuliuotas branduolio liuminescencijos tipas pastebimas pacientams, sergantiems SLE, SS, SS, DM / PM, RA ir daugeliu kitų autoimuninių ligų. Kliniškai sveikų asmenų, sergančių ANF be sisteminės ligos požymių, kraujo serume vyrauja žemi granuliuoto tipo ANF titrai.

Labai aukštų ANF titrų (1:2560-1:10000) aptikimas naudojant grubus granuliuotas tipas branduolio liuminescencija dažniausiai rodo mišrios jungiamojo audinio ligos diagnozę ir reikalauja papildomo tyrimo norint nustatyti RNP antigeną, kuris yra pagrindinis serologinis šios ligos žymuo.

Nukleoliniai antigenai gali veikti kaip ANA taikiniai, todėl galima aptikti nukleolinis tipas fluorescencija. Nukleolinio liuminescencijos tipo nustatymas būdingas sklerodermijai ir jos atmainoms. nukleolinis tipas fluorescencija nustatomas pacientams, turintiems antikūnų prieš branduolio komponentus, tokius kaip RNR polimerazė 1, NOR, U 3 RNP, PM/Scl.

centromero tipas fluorescencija pastebima, kai atsiranda antikūnų prieš chromosomų centromerus, ir randama tik besidalijančiose ląstelėse. Jo buvimas būdingas sklerodermijos CREST variantui.

Citoplazminis tipas švytėjimas rodo antikūnus prieš tRNR sintetazes, ypač Jo-1, kurie pastebimi sergant polimiozitu. Be to, jis aptinkamas pacientams, sergantiems ANA, nukreipta prieš kitus ląstelės citoplazmos komponentus: antikūnus prieš aktiną sergant autoimuniniu hepatitu, antikūnus prieš mitochondrijas esant pirminei tulžies cirozei.

Galima apibūdinti daugybę kitų liuminescencijos atmainų, o šie ląstelės branduolio dažymo tipai gali būti būdingi tam tikrai ANA veislei. Taigi antikūnai prieš Scl-70 HEp-20 ląstelių imunofluorescenciniame tyrime suteikia smulkiagrūdį branduolio ir branduolių dažymą, anti-p80 - šviečiančius taškus branduolyje, kurių nėra mitozinėse ląstelėse. Tačiau būtina atkreipti dėmesį į tokių reiškinių retumą ir įvairovę, todėl įprastų tyrimų metu jų identifikuoti nebūtina.

Dažnai gali būti kelių tipų liuminescencijos derinys, pavyzdžiui, smulkiagrūdė ir nukleolinė, kuri būdinga antikūnams prieš Scl-70. Be to, dažnai esant mažam praskiedimui, vyrauja vienos rūšies fluorescencija, pavyzdžiui, granuliuota, o tolesnio skiedimo metu aptinkami homogeniniai arba centromeriniai fluorescencijos tipai, o tai rodo įvairių tipų ANA buvimą paciento serume. Nors liuminescencijos tipas suteikia gydytojui tam tikrus duomenis, palankius tam tikrai diagnozei, būtina atsižvelgti į gana mažą jos specifiškumą ir reiškinių įvairovę, dėl kurios reikia atlikti tolesnį laboratorinį tyrimą.

ANA nustatymas yra pagrindas naudoti kitus laboratorinius tyrimus, patikslinančius ANA spektrą pacientų kraujyje. Atsižvelgiant į itin didelį šio testo informacijos turinį, tolesni bandymai ir tolesnio tyrimo rezultatų analizė turėtų būti interpretuojami atsižvelgiant į liuminescencijos tipo ir ANF titro įvertinimo rezultatus.

Nors reikšmingų ANA titrų nebuvimas beveik visada neleidžia diagnozuoti aktyvios sisteminės reumatinės ligos, naudojant HEp-2 ląstelių liniją, 2-4% pacientų, atitinkančių SRV diagnozavimo kriterijus, ANA nenustatoma arba titrai žemi. Šie pacientai kartais vadinami " ANF ​​neigiamas SLE“, norint patikslinti tokių pacientų diagnozę, reikia atlikti tolesnį tyrimą, visų pirma, nustatyti antikūnus prieš SS-A antigenus. Šie antigenai yra labai tirpūs ir gali būti prarasti iš ląstelių branduolių. Siekiant sumažinti šią pacientų kategoriją, naudojami kompleksiniai tyrimai, įskaitant antikūnų prieš ekstrahuojamus branduolinius antigenus, vadinamuosius " jungiamojo audinio ligų patikra», testas 000723. Neigiamas tokio tyrimo rezultatas leidžia su labai didele tikimybe atmesti SRV ir kitų sisteminių reumatinių ligų diagnozę.

Sinonimai: ANA, antinukleariniai antikūnai, antibranduolinis faktorius, ANF, antibranduoliniai antikūnai, antibranduoliniai antikūnai, ANA, fluorescenciniai antibranduoliniai antikūnai, antibranduolinis faktorius, ANF

Mokslinis redaktorius: M. Merkuševa, PSPbGMU im. akad. Pavlova, medicinos verslas.

Autoimuninės ligos, kai imuninė sistema atakuoja paties organizmo audinius, laikomos vienos pavojingiausių. Dauguma autoimuninių patologijų yra lėtinės ir gali sukelti rimtus vidaus organų ir sistemų veiklos sutrikimus.

Vienas iš dažniausiai naudojamų autoimuninių būklių diagnozavimo testų yra antinuklearinių antikūnų (ANA) testas, kuris atliekamas trimis būdais:

• fermentinis imunologinis ELISA tyrimas (nustatomas bendras ANA lygis),
• RNIF netiesioginės imunofluorescencinės reakcijos metodas (aptinkama iki 15 ANA veislių)
• imunobloto metodu.

Bendra informacija

Antibranduoliniai (antinukleariniai) antikūnai – tai grupė autoantikūnų, kurie, reaguodami su paties organizmo ląstelių branduoliais, juos sunaikina. Todėl ANA analizė laikoma gana jautriu žymekliu diagnozuojant autoimuninius sutrikimus, kurių daugumą lydi jungiamojo audinio pažeidimai. Tačiau kai kurių tipų antinukleariniai antikūnai randami ir sergant neimuninės etiologijos ligomis: uždegiminėmis, infekcinėmis, piktybinėmis ir kt.

Antinukleariniai antikūnai yra specifiškiausi šioms ligoms:

• sisteminė raudonoji vilkligė (SRV) – odos ir jungiamojo audinio liga;
• dermatomiozitas - odos, raumenų, skeleto audinių ir kt. pažeidimas;
• mazginis periarteritas - arterijų kraujagyslių sienelės uždegimas;
• sklerodermija - jungiamojo audinio tankinimas ir sukietėjimas;
• reumatoidinis artritas - sąnarių jungiamojo audinio pažeidimas;
• Sjögreno liga – audinių pažeidimas su liaukinėmis apraiškomis (ašarų ir seilių liaukų sekrecijos sumažėjimas).

Antinuklearinių antikūnų galima aptikti daugiau nei 1/3 pacientų, sergančių lėtiniu pasikartojančiu hepatitu. Be to, ANA lygis gali padidėti šiais atvejais:

• infekcinė mononukleozė(virusinė liga, kartu su didžiuliu vidaus organų pažeidimu);
• leukemija (piktybinė kraujo liga) ūmine ir lėtine forma;
• hemolizinė anemija(anemija dėl raudonųjų kraujo kūnelių naikinimo);
• Waldenströmo liga (kaulų čiulpų pažeidimas);
• kepenų cirozė(lėtinė liga, susijusi su kepenų audinio struktūros pasikeitimu);
• maliarija;
• raupsai (odos infekcija);
• trombocitopenija (sumažėjusi trombocitų gamyba);
• limfoproliferacinės patologijos (limfinės sistemos navikai);
• myasthenia gravis (patologinis raumenų nuovargis);
• timomos (užkrūčio liaukos navikas).

Kartu su antinuklearinių antikūnų nustatymu fermentinio imunologinio tyrimo procese, įvertinama imunoglobulinų koncentracija: IgA , IgM , IgG. Šių komponentų aptikimas kraujyje gali rodyti didelę reumatinių ligų ir kolagenozės išsivystymo tikimybę.

Tuo atveju, kai ryšys tarp antikūnų koncentracijos ir paciento simptomų nenustatomas, pats antinuklearinių antikūnų buvimas kraujyje yra diagnostikos kriterijus ir gali turėti įtakos gydymo pasirinkimui. Aukšto antibranduolinių antikūnų kiekio palaikymas ilgą gydymo kursą rodo nepalankią ligos prognozę. ANA reikšmių sumažėjimas gydymo metu gali rodyti remisiją (dažniau) arba artėjančią mirtį (rečiau).

Taip pat antinuklearinių antikūnų galima aptikti sveikiems žmonėms iki 65 metų (3-5 proc. atvejų), po 65 metų (iki 37 proc.).

Indikacijos

Patartina ištirti antibranduolinį faktorių šiais atvejais:

• Autoimuninių ir kai kurių kitų sisteminių ligų diagnozė be ryškių simptomų;
• Visapusiška sisteminės raudonosios vilkligės diagnostika, jos forma ir stadija bei gydymo taktikos ir prognozės parinkimas;
• Vaistinės vilkligės diagnozė;
• Profilaktinis pacientų, kuriems diagnozuota raudonoji vilkligė, ištyrimas;
• Specifinių simptomų buvimas: užsitęsęs karščiavimas be nustatytos priežasties, sąnarių, raumenų skausmai, odos bėrimai, padidėjęs nuovargis ir kt.;
• Sisteminių ligų simptomų buvimas: odos ar vidaus organų (inkstų, širdies) pažeidimas, artritas, epilepsijos priepuoliai ir traukuliai, karščiavimas, be priežasties karščiavimas ir kt.;
• Skiriant vaistų terapiją su dizopiramidu, hidralazinu, propafenonu, prokainamidu, AKF inhibitoriais, beta adrenoblokatoriais, propiltiouracilu, chlorpromazinu, ličiu, karbamazepinu, fenitoinu, izoniazidu, minociklinu, hidrochlorotiazidu, statinais, nes yra sumažėjusi vaistų lumatopuso rizika.

Kas duoda kryptį

Be bendrosios praktikos gydytojo, analizei siunčiami tokie siauri specialistai, kaip pvz

• reumatologas,
• dermatovenerologas,
• nefrologas,
• pediatras.

ANA norma ir įtakos veiksniai

Paprastai antinuklearinių antikūnų plazmoje nėra arba jie aptinkami nedideliu kiekiu. Rezultatas priklauso nuo to, kaip atliekamas testas:

1. Bandymas atliktas ELISA metodu

• mažiau nei 0,9 balo – neigiamas (normalus);
• nuo 0,9 iki 1,1 balo – abejotina (antrą testą rekomenduojama daryti po 7-14 dienų);
• daugiau nei 1,1 balo – teigiama.

2. Atliekant kiekybinę RNIF analizę, mažesnis nei 1:160 titras laikomas norma.
3. Imunoblotavimas - norma „neaptikta“ (bendra išvada / priešingai kiekvieno tipo antikūnams).

Kas gali turėti įtakos rezultatui

• paciento paruošimo taisyklių ar venos punkcijos algoritmo pažeidimas, kurį padarė sveikatos priežiūros darbuotojas;
• vaistų (karbamazepino, metildopos, penicilamino, tokainido, nifedilino ir kt.) vartojimas;
• uremijos buvimas pacientui (apsinuodijimas baltymų apykaitos produktais) gali duoti klaidingai neigiamą rezultatą.

Svarbu! Rezultatų interpretavimas visada atliekamas kompleksiškai. Neįmanoma nustatyti tikslios diagnozės remiantis tik viena analize.

Antinukleariniai antikūnai kraujyje (teigiamas rezultatas)

Antinuklearinių antikūnų aptikimas gali rodyti šias ligas:

• sisteminis raudonoji vilkligė ;
• autoimuninio pobūdžio pankreatitas (kasos uždegimas);
• I tipo cukrinis diabetas;
• autoimuniniai skydliaukės pažeidimai;
• piktybiniai vidaus organų pažeidimai;
• autoimuninis hepatitas;
• jungiamojo audinio ligos;
• myasthenia gravis;
• difuzinė intersticinė fibrozė (lėtinės formos plaučių audinio pažeidimas);
• Raynaud sindromas(mažųjų galinių arterijų išemija) ir kt.

ANA titro padidėjimas atliekant kiekybinį fermentų imuninį tyrimą (RNIF) rodo:

• sisteminė raudonoji vilkligė aktyvioje stadijoje - titras padidinamas iki 98%;
• Krono liga(granulominiai virškinamojo trakto pažeidimai) - apie 15%;
• opinis kolitas (storosios žarnos gleivinės uždegimas) - nuo 50 iki 80%;
• sklerodermija;
• Sjögreno liga;
• Raynaud liga - iki 20%;
• Sharp sindromas (mišri jungiamojo audinio liga);
• vaistinė vilkligė.

Svarbu! Iššifruojant analizę svarbu suprasti, kad neigiamas rezultatas neatmeta autoimuninių sutrikimų buvimo pacientams, kuriems būdingi simptomai. Teigiamas rezultatas be klinikinio autoimuninio proceso vaizdo turi būti aiškinamas atsižvelgiant į kitų laboratorinių tyrimų duomenis.

Treniruotės

Antinuklearinio faktoriaus ELISA biomedžiaga – veninio kraujo serumas.

• Venepunkcija atliekama ryte ir nevalgius (nuo paskutinio valgymo turi būti praėję ne mažiau kaip 8 valandos). Galite gerti gryną negazuotą vandenį;
• Prieš pat kraujo paėmimą (2-3 val.) nerekomenduojama rūkyti ir naudoti nikotino pakaitalus (pleistras, purškalas, kramtomoji guma);
• Procedūros išvakarėse ir dieną negalima gerti alkoholinių ir energetinių gėrimų, nerimauti ir dirbti sunkų fizinį darbą;
• Likus 15 dienų iki tyrimo, susitarus su gydančiu gydytoju, vaistai (antibiotikai, antivirusiniai, hormoniniai ir kt.) atšaukiami;
• Norint gauti patikimą rezultatą, patartina analizę pakartoti po 2 savaičių.

ELISA atsako galima tikėtis per 1 dieną po venipunktūros, o kritinėmis situacijomis, kai tyrimas atliekamas "cito" - apie 3 valandas.

Šaltiniai:

• Informacija iš laboratorijų Invitro ir Helix svetainių;
• Duomenys iš JAV nacionalinės medicinos bibliotekos PubMed.

Kiti reumatologiniai patikros tyrimai