Бактериологичната лаборатория. Устройството и правилата за работа в бактериологичната лаборатория. Структурата на бактериологичната лаборатория

За микробиологични
изследвания в болници и клиники или
съществуват независимо от тях
бактериологични лаборатории.
Те получават за изследване различни
материал, получен от болни хора
(храчка, урина, гной, изпражнения, кръв, спинална
течност и др.).
Освен това има и санитарни и бактериологични лаборатории, в които
водата се подлага на бактериологичен контрол,
въздух и храна.
2

Обектите на изследване в бактериологичните лаборатории са:

Обектите на изследване в
бактериологичните лаборатории са:
1. Изхвърляне от тялото: урина, изпражнения, храчки, гной и
също кръв, патологичен и трупен материал.
2. Обекти на околната среда: вода, въздух, почва, отмивки
от инвентарни позиции, фуражи, технологични суровини
получени от клането на селскостопански животни.
3. Хранителни продукти, мостри от месо и месни продукти,
мляко и млечни продукти, които трябва да се дават
оценка за годност за хранителни цели.
3

предназначени

бактериологична лаборатория
предназначени
– за изследване на материали, съдържащи
патогени на бактериални инфекции,
– за определяне на санитарни и микробиологични показатели,
– контрол на състоянието и напрежението
специфичен имунитет и други
микробиологични изследвания.
4

бактериологична лаборатория

Спецификата на микробиологичната работа изисква помещението, предназначено за лабораторията, да бъде изолирано:
- от всекидневните,
- хранителни блокове и
– други неосновни производствени помещения.
Бактериологичната лаборатория трябва да се намира в
помещения, изолирани от други лаборатории с
необходимо оборудване и мебели.
Лабораторията трябва да разполага с:
- отделен вход,
- гардероб и
- душ.
5

бактериологична лаборатория

Бактериологичната лаборатория включва:
- помещение за приемане и регистриране на материали;
– лабораторни зали за бактериологични
изследователски и помощни помещения;
- автоклав или стерилизация ("чиста",
"мръсни") за дезинфекция на отпадъци
материал и замърсени съдове;
– пералня, оборудвана за миене на съдове;
– бактериологична кухня – за готвене,
разливане, стерилизация и съхранение на хранителна среда;
– вивариум за отглеждане на опитни животни;
- материал за съхранение на резервни реактиви,
посуда, оборудване и домакински инвентар.
6

бактериологична лаборатория

Посочени помощни помещения като
са включени самостоятелни структурни единици
в състава на големи бактериологични
лаборатории.
в малки лаборатории
бактериологична кухня и
стерилизационната е обединена в едно
стая;
- специално складово помещение
няма опитни животни.
7

бактериологична лаборатория

Микробиологични стаи
лаборатории според степента на опасност за
персоналът е разделен на 2 зони:
I. "Заразна" зона - стая или група
лабораторни помещения, където
манипулиране на патогенни биологични
агенти и тяхното съхранение, персоналът е облечен в
подходящ вид защитно облекло.
II. "Чиста" зона - помещения, където не извършват
работа с биологичен материал, персоналът е облечен
в лично облекло.
8

Лабораторни помещения

Под лабораторните помещения, в които произвеждат
всички бактериологични изследвания
най-светлите и просторни стаи.
Стените в тези стаи са на височина 170 см от пода
боядисани в светли цветове с маслена боя или
покрийте с плочки.
Подът е покрит с релин или линолеум.
Този вид покритие ви позволява да използвате при почистване
помещения с дезинфекционни разтвори.
Във всяка стая трябва да има мивка с водопровод и съд с дезинфектант.
решение.
9

10. Бактериологична лаборатория

Задължителните пространства включват:
Лаборатории по чревни инфекции
Лаборатории за капкови инфекции
Санитарно-бактериологична лаборатория
Серологична лаборатория
Помощни помещения:
средноварня,
измиване
Стерилизация
Регистър
Складови помещения
Баня за служители
Вивариум
Всяка лаборатория трябва да бъде оборудвана с микроскоп,
автоклави, термостати, сушене и стерилизация
шкафове, апарати за кръвосъсирване, центрофуги,
лабораторни везни, рН метър, измивна вана
10

11. Бактериологична лаборатория

В една от стаите е оборудван остъклен бокс с изолирано помещение с вестибюл (предбокс) за
извършване на работа в асептични условия.
В кутията поставят маса за култури, табуретка, над работното място
инсталирайте бактерицидни лампи.
В преддверието има шкаф за съхранение на стерилни
материал.
Прозорците и вратите на помещенията на "заразната" зона трябва да бъдат
запечатан.
Съществуващата изпускателна вентилация от "инфекциозната" зона трябва
да бъдат изолирани от други вентилационни системи и
оборудвани с фини въздушни филтри.
11

12. Стаи за микробиологични изследвания

Стаи за микробиологични
изследователско оборудване:
термостати,
хладилници,
центрофуги,
везни,
водни бани,
електромагнитни бъркалки.
На масите поставете необходимото
оборудване.
Работа със заразен материал
извършва се в кутия с предварителна кутия.
12

13. Бактериологична лаборатория

В кутията получените проби се разглобяват, подготвят и фиксират
петна-отпечатъци, извършват посеви на микроорганизми върху
хранителни среди.
Следователно в кутията има маси, върху които се поставят
необходими инструменти за работа: стелажи за епруветки,
епруветки и петриеви панички с хранителни среди, стерилни
пипети, хаванчета, съдове с дезинфектанти за използвани
съдове и др.
В предбокса в бикс е необходимо да има стерилен
рокли, шапки, маски, както и в съблекалнята трябва да бъде
вътрешни обувки.
В преддверието можете да поставите термостати, хладилници,
центрофуги и друго оборудване.
В кутии и пред-кутии ежедневно се извършва мокро
почистване, дезинфекция и облъчване с
бактерицидни лампи за 30-40 минути преди започване
работа и след работа.
13

14. Автоклав

В автоклав трябва да имате две
автоклав:
един автоклав за чисти материали (за
стерилизация на съдове, хранителни среди,
инструменти);
друг автоклав за заразени материали
(за неутрализиране на заразени
инструменти и материали).
14

15. Измиване

Прането е предназначено за пране и
обработка на ястията.
Пералното помещение трябва да има мивка с
студена и топла вода и печка.
Пералнята трябва да е оборудвана
почистващи средства и оборудване
съдове
В пералното помещение са разположени сушилни шкафове.
15

16. Вивариум

Вивариумът е използвано помещение
за отглеждане на лабораторни животни.
Вивариумът трябва да разполага с:
карантинен отдел,
помещения за опитни и здрави животни,
съоръжения за измиване и дезинфекция на клетки, инвентар и
гащеризони,
кухня за готвене,
килер,
фураж,
инсинератор.
Всички помещения на вивариума трябва да бъдат
изолирани един от друг.
16

17.

в бактериологична лаборатория
стаите са подредени по такъв начин, че
"мръсни" и "чисти" потоци не са
пресечени и не пипани
17

18. Правила за работа в бактериологична лаборатория

Персоналът на лабораторията трябва да спазва следното
регламенти:
1. Допуска се работа със специално облекло - халат и шапка. в бокса
работа със стерилна престилка, маска, шапка, поставя се при необходимост
гумени ръкавици и очила.
Задължително се преобуйте!
2. Забранено е напускането на лабораторията с якета и облекло
връхни дрехи върху халат.
3. В лабораторията е забранено пушенето и приемането на храна.
4. Всички материали, влизащи в лабораторията за анализ, трябва
да се третират като заразени.
Следователно трябва да се внимава при разопаковането на материала.
Контейнерите трябва да бъдат избърсвани отвън с дезинфекционен разтвор и поставени
върху тави или в кювети.
18

19. (продължение)

5. При контакт със заразен материал върху халат, ръце, маса, обувки е необходимо
извършва дезинфекция и информира ръководителя на лабораторията за това.
6. Заразеният материал трябва да бъде унищожен чрез автоклавиране. инструменти и
също повърхността на работния плот след работа се дезинфекцира.
7. Забранява се изнасянето на оборудване, инвентар, материали от лабораторията без
предварителна дезинфекция.
8. Пипети, предметни стъкла, покривни стъкла и други използвани прибори,
дезинфекцирани чрез потапяне в дезинфектант.
9. В края на работа работното място се привежда в ред и се дезинфекцира старателно.
В него се съхраняват култури от микроорганизми, необходими за по-нататъшна работа
хладилник.
10. Само лица, които са били предупредени за потенциал
опасности и които са изпълнили специални изисквания (например имунизация, защитно облекло
и т.н.)
19

20. В бактериологичната лаборатория се поддържа следната документация:

1. Инвентарна книга на музейните видове култури.
2. Журнал за движение на материала в лабораторията.
3. Регистър за стерилизация и унищожаване
заразен материал.
4. Регистър на заразените опитни животни.
5. Журнал за изследвания (експертизи).

ТЕМА НА УРОКА: Бактериологична лаборатория и правила за работа в нея. Класификация на микроорганизмите. Морфология на бактериите. Методи за определяне на вида на микробите. бактериоскопски метод. Микроскопска техника с имерсионна система.

УЧЕБНА ЦЕЛ: Запознайте се с устройството на бактериологичната лаборатория и правилата за работа в нея. Запознайте се с принципите на класификация на микроорганизмите. Изучаване на морфологичните особености на бактериите и методите за определяне на вида на микробите. Да овладее бактериоскопския метод на изследване и техниката на микроскопия с имерсионна система.

ЦЕЛИ НА УРОКА:

1. Запознайте се със структурата на бактериологичната лаборатория и правилата за работа в нея.

2. Запознайте се с принципите на класификация на микроорганизмите.

3. Да се ​​изследват морфологичните особености на бактериите и методите за определяне на вида на микробите.

4. Овладейте техниката на микроскопия с имерсионна система.

Бактериологично лабораторно устройство

Бактериологичната лаборатория е предназначена за изследване на материали, съдържащи патогени на бактериални инфекции, за определяне на санитарни и микробиологични показатели, контрол на състоянието и интензивността на специфичния имунитет и други микробиологични изследвания. Бактериологичната лаборатория трябва да бъде разположена в помещения, изолирани от други лаборатории с необходимото оборудване и мебели. Лабораторията трябва да има отделен вход, гардероб и душ кабина. Бактериологичната лаборатория трябва да включва следните помещения:

Стая за получаване и регистриране на материали;

боксове за микробиологични изследвания;

автоклав;

измиване;

Вивариум.

Стаите за микробиологични изследвания са оборудвани с термостати, хладилници, центрофуги, везни, водни бани и електромагнитни бъркалки. Върху масите се поставя необходимото оборудване. Работата със заразен материал се извършва в боксс предбоксьор. На входа на бокса трябва да има постелка, напоена с дезинфектант. В кутията получените проби се разглобяват, подготвят се и се фиксират петна-отпечатъци, извършват се инокулации на микроорганизми върху хранителни среди. Затова в кутията се поставят маси, на които се поставят необходимите за работа инструменти: контейнери с дезинфектанти за използвани съдове, стелажи за епруветки, епруветки и петриеви панички с хранителни среди, стерилни пипети, хаванчета и др., капачки, маски, а също и в съблекалнята трябва да има сменяеми обувки. В преддверието могат да се поставят термостати, хладилници, центрофуги и друго оборудване. В кутии и предварителни кутии мокро почистване, дезинфекция и облъчване с бактерицидни лампи се извършват ежедневно в продължение на 30-40 минути преди и след работа.

AT автоклавиранинеобходимо е наличието на два автоклава: един автоклав за чисти материали (за стерилизация на стъклария, хранителни среди, инструменти); друг автоклав за заразени материали (за изхвърляне на заразени инструменти и материали).

измиванепредназначени за миене на съдове. Съдовете, пипетите и инструментите, замърсени със заразен материал, трябва да се измиват само след стерилизация. Разполага със сушилни шкафове.

вивариумсе отнася за помещенията, използвани за отглеждане на лабораторни животни. Във вивариума е необходимо да има карантинен отдел, помещения за опитни и здрави животни, помещения за измиване и дезинфекция на клетки, инвентар и гащеризони, кухня за приготвяне на храна, килер, фураж и инсинератор. Всички помещения на вивариума трябва да бъдат изолирани една от друга.

В бактериологичната лаборатория се определя вида на инфекцията, която е причинила определено заболяване на тялото. За тази цел кръвта, урината, цереброспиналната течност и други телесни течности се култивират върху различни хранителни среди. Понякога културите се правят от кожата, носната лигавица и фаринкса. Очните лекари, диагностицирали "конюнктивит", също често насочват пациента за бактериологично изследване.

Ако подозирате остър или хроничен конюнктивит, изследването помага да се изясни диагнозата и да се определи вида на бактериите, причинили конюнктивит. Изследването започва с факта, че с помощта на специално устройство се взема съдържанието на конюнктивалния сак и се засява върху специален бульон, а след това върху хранителна среда. След 24-48 часа върху хранителната среда се развиват колонии от бактерии. След специално оцветяване те се изследват под микроскоп и се определя видът на микроорганизмите, живеещи върху конюнктивата. Най-често това са бактерии, по-рядко - други микроорганизми (гъбички, амеба).

За да се вземе решение за използването на най-ефективния антибиотик, се определя чувствителността на патогенните бактерии към лекарствени вещества.

В заключение ще дадем няколко числа и още веднъж ще ви напомним как можете да се предпазите от инфекция.

Не забравяйте, че земята, водата и въздухът са обитавани от микроорганизми. С всяко движение, мигане, дъх ние сме в контакт с тях. Нашите лигавици не им позволяват да навлязат в жизненоважните органи. Обърнете внимание на интересните факти, събрани от един от любителите на микробиологията.

1 g уличен прах съдържа около 2 милиона микроорганизми, те влизат във въздуха от земята. Най-много микроби се намират в горните 50 cm на почвата.

Водните басейни съдържат от 5 до 10 000 бактерии на 1 кв. см, а в градската река - 23000 на 1 кв. см.

Но данните за броя на микроорганизмите в 1 кв. м въздух около нас: във въздуха в гора или парк - от 100 до 1000 микроби на 1 кв. м, в морски въздух на 100 км от брега - само 0,6, на надморска височина 2000 м - 3.

Съвсем различна картина се наблюдава на централната улица на средностатистически град - 3500 микроби на 1 кв. м, в новата къща - 4500, в старата - 36 000, в болницата - 79 000, в общежитието - 40 000.

Тези числа говорят сами за себе си. Микроорганизмите включват вируси, бактерии, гъбични спори и плесени. В допълнение, самият прах по отношение на химичния състав, особено по улиците на града, в апартаментите, в различни индустрии, съдържа химични и физични примеси, които са вредни за тялото. Нашите лигавици и кожа не винаги могат да се справят с такова натоварване без наша помощ. За да не се разболеете, трябва да запомните правилата за превенция.

БАКТЕРИОЛОГИЧНА ЛАБОРАТОРИЯ- научно-практическа институция, която извършва бактериологични, имунологични и други микробиологични изследвания. В съответствие с обособяването на микробиологията като цяло и бактериологията като един от нейните клонове, съществуват бактериологични лаборатории с разнообразни задачи и функции. Клиничните и диагностичните бактериологични лаборатории в болниците извършват изследвания, необходими за установяване или изясняване на диагнозата на инфекциозно заболяване, контролирайки ефективността на лечението.

Специализацията на бактериологичните лаборатории в болниците се определя от профила на болницата (остри инфекциозни заболявания, детски инфекциозни болести, венерически болести, туберкулоза и др.). Бактериологичните лаборатории в санитарно-епидемиологичните станции, подобно на клиничните лаборатории, се занимават с диагностична работа, обслужват болници, които нямат собствени лаборатории, провеждат профилактични прегледи на населението и санитарно-бактериологично изследване на хранителни продукти и вода.

В допълнение към медицинските има широка мрежа от ветеринарни бактериологични лаборатории, които извършват диагностични и превантивни изследвания на инфекциозни заболявания при животните (виж Ветеринарна лаборатория). Високоспециализирани са бактериологични лаборатории, които изпълняват контролни функции, като бактериологични лаборатории във водопроводи, контролни лаборатории в предприятия, произвеждащи ваксини, серуми и други бактериални препарати. Към дезинфекционните съоръжения са организирани специални бактериологични лаборатории. Тяхната задача е бактериологичен контрол на качеството на дезинфекцията. Наред с бактериологичните лаборатории с медицински и ветеринарен профил съществуват специализирани бактериологични лаборатории, обслужващи нуждите на хранително-вкусовата промишленост (винарски, пекарни, пивоварни и други предприятия), селското стопанство и др. За разлика от изброените по-горе бактериологични лаборатории, които решават практически задачи, в структурата на съответните изследователски институти се предвиждат бактериологични лаборатории от различни профили, предназначени за решаване на различни изследователски задачи. Бактериологичните лаборатории могат да бъдат стационарни и подвижни. Последните се използват за санитарна и противоепидемична поддръжка на военни части, както и в експедиционни, полеви условия (виж Лаборатория, във военно полеви условия). Освен мобилни, войските разполагат и със стационарни лаборатории. Спецификата на изследванията, провеждани в бактериологичните лаборатории, определя структурата на лабораториите и начина на работа в тях.

Основно изискване към бактериологичните лаборатории и произтичащо от спецификата на нейната работа е създаването на условия, които осигуряват извършването на изследванията в максимално стерилни условия и гарантират персонала и другите от евентуално заразяване. Структурата на бактериологичната лаборатория включва: самата лаборатория и редица допълнителни подразделения към нея. Третирайте ги: sredovovarnya, измиване, подготовка, стерилизация и вивариум (виж). Тези подразделения, като самостоятелни структурни единици, са част от големи бактериологични лаборатории. В малките бактериологични лаборатории няма вивариуми и специално подготвително помещение, а средните и стерилизационните помещения могат да бъдат обединени в едно помещение.

Устройство и оборудване

Ориз. 5. Стъклени шпатули. Фиг.6. Шпатула от платинена тел.

Помещенията на бактериологичните лаборатории трябва да са достатъчно светли и просторни. Стените трябва да са боядисани с блажна боя, а подът да няма пукнатини. Прозорците на лабораторията трябва да са ориентирани на север или северозапад. Когато са ориентирани на юг, прозорците са окачени с бели завеси. Бактериологичната лаборатория трябва да има мивка или мивка, над която на рафт се поставя бутилка с разтвор за дезинфекция на ръцете. Работният плот на бактериолога, ако е възможно, се поставя на разстояние 1 m от прозореца и се покрива с линолеум или стъкло. На масата се поставя газова горелка (при липса на газова горелка, горелка за алкохол). Задължително оборудване на работното място е буркан с пипета с дезинфекционен разтвор (3% разтвор на карболова киселина), затварящ се порцеланов или стъклен съд за памучна вата, държач за бактериална примка, набор от бактериални стандарти, поставки за епруветки, емайлирани кювети, пинсети, ножици и скалпел, чисти предметни стъкла с и без дупки, както и покривни стъкла. Обикновено се използват предметни стъкла с размери 26 x 76 mm и дебелина 1 - 1,2 mm, покривни стъкла с размери 18 x 18 или 20 x 20 mm. Бактериологичната лаборатория трябва да бъде оборудвана с метални табла за пренасяне на петриеви панички, поцинковани кофи или резервоари за изхвърляне на заразени прибори или оборудване. Микроскопите се съхраняват в калъф или под стъклен капак. Работният плот не трябва да е затрупан с ненужни предмети. Обикновено в бактериологичната лаборатория е оборудвана допълнителна малка маса за оцветяване на фиксирани препарати. На такава маса се поставят: набор от необходими багрила и реактиви в блок с пипети и гумени кутии (фиг. 1), емайлирана кювета или кристализатор със стойка за препарати, телени пинсети или пинсети Cornet (фиг. 2) за фиксиращи предметни стъкла, листове филтърна хартия за отстраняване на течността от измитите препарати, шайба (фиг. 3) или бутилка с вода. Бактериологичната лаборатория е оборудвана с разнообразна посуда, необходима за изследване. В допълнение към обичайните химически прибори (цилиндри, колби, чаши, мерителни пипети и др.) са необходими специални прибори, предназначени за бактериологични и имунологични анализи: 1) стъклени петриеви панички, използвани за отглеждане на бактерии върху твърди среди и получаване на изолирани бактериални колонии; 2) бактериални подложки (фиг. 4) - плоски бутилки (с размери 22 x 17 x 5 cm), които се използват за отглеждане на голям брой бактерии; 3) Тръби на Ру със стеснение за отглеждане на бактерии върху картофени плитки; 4) епруветки на Васерман с дължина 90 mm и вътрешен диаметър 9-10 mm за настройка на реакцията на свързване на комплемента и реакция на аглутинация; 5) утаителни тръби с дължина 90 mm и диаметър 3-5 mm за провеждане на реакцията на утаяване; 6) бактериални епруветки, използвани за отглеждане на бактерии върху твърди и течни хранителни среди; 7) Пастьорови пипети, използвани за инокулация на течни материали, разреждане на течности чрез капков метод, нанасяне на багрила и др. ; 8) Пипети на Мор или пипети със сферично разширение в средната част за инокулация на заразен течен материал, както и автоматични пипети или пипети с гумени круши, с изключение на засмукване на материала с уста. За култивиране на култури в течни хранителни среди, съхранение и бутилиране на хранителни среди, реактиви и др., се използва обикновена лабораторна стъклария. Стъклената посуда, използвана в бактериологична лаборатория, трябва да бъде предварително излугвана, за което обикновено се вари в 1-2% разтвор на солна киселина. Дезинфекцията на бактериологичните съдове, в които се култивират микроби, трябва да се извършва само с помощта на висока температура, без да се използват дезинфектанти, тъй като присъствието на последните, дори под формата на следи, може допълнително да потисне развитието на микроби. Инокулацията на микроорганизми в бактериологичната лаборатория се извършва с помощта на бактериологични бримки, стъклени или платинени шпатули (фиг. 5 и 6). Култивирането на бактерии се извършва във въздушен термостат (виж), а в големи бактериологични лаборатории - в специални термостатични помещения.

Ако имате нужда от прецизен контрол на температурата и относително краткотрайно култивиране на бактерии или при настройване на имунологични реакции, удобно е да използвате водни ултратермостати. Всяка бактериологична лаборатория, в която се изследват анаероби, трябва да бъде оборудвана с анаеробен балон (виж), ексикатори и вакуумни помпи за отстраняване на въздуха. Последните се използват и при филтриране. За постигане на най-добрите асептични условия, необходими за засяване, изолиране или субкултивиране на култури, бактериологичните лаборатории са оборудвани със специални остъклени кутии с предварителни кутии. Кутията съдържа газова горелка, съд с дезинфекционен разтвор и по възможност бактерицидна увио лампа. При липса на стационарна кутия, когато извършвате работа, която изисква висока степен на асептика, можете да използвате преносима настолна кутия (вижте Кутии, микробиологични).

Ориз. 7. Автоматичен брояч на колонии с устройство за телевизионен контрол: 1 - петриево блюдо с пораснали колонии; 2 - електронно табло с цифри, показващи броя на колониите в петриево блюдо; 3 - ТВ екран за наблюдение на увеличено изображение на колонии, отглеждани в петриево блюдо.

Бактериалните култури, терапевтичните и диагностичните серуми, фагите и други биологични субстрати (серуми, пептонни разтвори и др.) се съхраняват в хладилник. Бактериалните култури трябва да се съхраняват в запечатани епруветки или ампули, за които бактериологичните лаборатории трябва да разполагат с горелка за запояване или обикновена горелка. Задължителен аксесоар на всяка бактериологична лаборатория е микроскопът (виж). За повечето изследвания се използват микроскоп MBI-3 и осветители. Изследователските бактериологични лаборатории са оборудвани и с фазово-контрастни, луминесцентни и електронни микроскопи. За количествено определяне на колонии от бактерии, отглеждани върху петриеви панички, се използват броячи на различни системи. Един такъв брояч е автоматичен брояч със сканиращо устройство и устройство за телевизионно управление, което може да брои до 500 чаши на час (фиг. 7). Важни елементи от оборудването на бактериологичните лаборатории са устройствата за разклащане, използвани в случаите, когато е необходимо да се осигури смесване и разклащане на материала за определено време (дефибриниране на кръвта, хомогенизиране на материала и др.). За утаяване на плътни частици (микробни клетки, клетки от тъкани, суспензия от изследвания материал), които са в течност, се използват центрофуги (виж). За повечето изследвания най-често се използват центрофуги, въртящи се със скорост 3000 - 3500 rpm. При липса на електрически центрофуги се използват ръчни центрофуги.

Дейността на бактериологичните лаборатории до голяма степен зависи от спазването на основното изискване - работа в асептични условия със стерилни предмети (инструменти, хранителни среди, съдове). Следователно в оборудването на бактериологичните лаборатории оборудването за стерилизация заема значително място (виж). Всяка бактериологична лаборатория разполага с автоклав (виж), апарат на Кох, пещ на Пастьор (виж пещ на Пастьор), апарат за коагулация на суроватка. За стерилизация чрез кипене се използват конвенционални стерилизатори (вижте), нагрявани от електрическа мрежа или по друг начин.

За стерилизация на течни субстрати, които се променят при влияние на температурата, използвайте бактериални филтри (вижте). Сушенето на навлажнени предмети (съдове, инструменти) след стерилизация с пара или налягане се извършва в сушилни шкафове (виж). Оборудването на бактериологичните лаборатории, необходимо за приготвяне на най-често използваните хранителни среди, в допълнение към посоченото оборудване, включва устройства за разливане на среди, комплекти реактиви и прибори за извършване на определени химични анализи (определяне на аминен азот, триптофан, хлориди). и др.), както и инструменти и реактиви за определяне на pH на средата; универсален индикатор, индикатори и компаратор на Михаелис или потенциометър.

Работата с животни в бактериологичните лаборатории се извършва в специално помещение - вивариум. В собствените бактериологични лаборатории не се допускат опити с животни. За извършване на основна работа с животни (вземане на кръв, поставяне на биологични проби, диагностични реакции и др.) трябва да имате: везни за претегляне на мишки, прасета и зайци, машини или устройства за тяхното фиксиране (фиг. 8), комплект от спринцовки, номера за етикетиране на животни (или бои), депилатори.

Спецификата на бактериологичната работа определя особено високи изисквания към чистотата на помещенията на бактериологичните лаборатории. От особено значение е чистотата на въздуха, липсата на прах в него. По-добре е помещенията на бактериологичните лаборатории да се почистват в края на работния ден или няколко часа преди началото на работа, тъй като прахът, издигнат във въздуха по време на почистването, повишава съдържанието на микроби в него и затруднява стерилната работа . Препоръчително е след почистване на помещенията преди работа те да бъдат облъчени с увиобактерицидни лампи за 0,5-1 час. За предотвратяване на вътрелабораторна инфекция и възможност за разпространение на инфекция при работа в бактериологични лаборатории трябва да се спазват следните основни правила: 1) всички лица в лабораторията трябва да носят престилки; 2) не се допуска прекомерно говорене и ходене; 3) всеки служител трябва да използва само определеното му работно място; 4) в бактериологичната лаборатория е забранено да се яде и пуши; 5) при работа с инфекциозен материал е необходимо да използвате инструменти (пинсети, игли, куки) и в никакъв случай да не го докосвате с ръце; целият инвентар, който е бил в контакт с инфекциозен материал, подлежи на стерилизация или унищожаване; 6) при изсмукване на течен материал се препоръчва използването на гумени крушки; пипетите трябва да бъдат затворени с памучни тапи; 7) преливането на заразени течности от съд в съд се извършва върху тава или кристализатор, напълнен с дезинфекцираща течност; 8) всички работи, свързани със сеитба, повторно засяване, изолиране на култури и приготвяне на препарати от заразен материал, се извършват на горелката, докато се изгарят краищата на епруветки, бримки, шпатули и др.; 9) епруветки, колби, флакони и др., където заразеният материал се поставя в процеса на работа, незабавно се етикетират с естеството на материала, името и номера на културата и датата; 10) ако инфекциозният материал е попаднал върху околните предмети, е необходимо незабавно да се извърши цялостна дезинфекция: изсипете това място с дезинфекционен разтвор и след това, ако е възможно, го изгорете с тампон с горящ алкохол; 11) предмети и материали, заразени по време на работа, се регистрират, събират в резервоари или кофи, затварят, запечатват и стерилизират в същия ден; 12) културите, ако е необходимо, се съхраняват в колони с агар под масло в запечатани епруветки с етикети; 13) регистрацията и отчитането на всички култури, както и заразените животни по време на работа, се водят в дневник в специален формуляр.

Въведение

Като общата част на всяка друга наука, общата бактериология не се занимава с конкретни въпроси (да речем идентифицирането на отделни видове бактерии), а с проблеми като цяло; неговата методология обхваща основните процедури, които се използват широко в голямо разнообразие от лабораторни изследвания. Това ръководство за изследване не е предназначено да идентифицира група микроорганизми. Това е задачата на следващите публикации - по частна и санитарна микробиология. Въпреки това, методите, представени в него, могат да бъдат полезни във всяка област, където трябва да се работи с бактерии, и могат да бъдат приложени към практически проблеми, включително изолирането и типизирането на бактерии.

Бактериологията се превърна в наука едва след като бяха разработени уникални техники, които продължават да влияят и проникват в по-късно възникващи области на науката като вирусология, имунология и молекулярна биология. Техниката за използване на чисти култури, разработена от Р. Кох и имунологичните реакции и химичния анализ, въведени за първи път от Л. Пастьор, не са загубили своето значение дори и сега.

Методиката на общата бактериология е отразена в това издание с помощта на такава конструкция, която е характерна за стандартните учебници по тази дисциплина. Въпреки това, за разлика от лабораторните семинари по курса по микробиология за университетите, той е представен по-подробно в някои раздели и е само за справка. Тази структура отчита особеностите на обучението и специализацията на бактериолозите и ветеринарно-санитарните експерти. Често материалът се представя произволно, така че някои методи се споменават няколко пъти, поради желанието да се демонстрира тяхната връзка.

бактериологична лаборатория

Бактериологичните лаборатории като структурни звена са организирани като част от регионални, областни, междуобластни ветеринарни лаборатории, както и в структурата на зонални ветеринарни лаборатории. Те се организират и в центровете за санитарен и епидемиологичен надзор, в инфекциозни болници, общи болници, някои специализирани болници (например в туберкулоза, ревматология, дерматовенерология) и поликлиники. Бактериологичните лаборатории са част от специализирани изследователски институции. Постоянно се използват бактериологични лаборатории за потвърждаване или установяване на класификацията за хранителна годност на месото според ESS.

Обектите на изследване в бактериологичните лаборатории са:

1. Изхвърляне от тялото: урина, изпражнения, храчки, гной, както и кръв, патологичен и трупен материал.

2. Обекти на външната среда: вода, въздух, почва, измивания от инвентарни предмети, фуражи, технологични суровини, получени от клането на селскостопански животни.

3. Хранителни продукти, проби от месо и месни продукти, мляко и млечни продукти, които трябва да бъдат оценени за годност за хранителни цели.

Бактериологична лаборатория и оборудване на работното място

Спецификата на микробиологичната работа изисква помещението, предназначено за лабораторията, да бъде изолирано от битови помещения, хранителни блокове и други неосновни производствени помещения.

Бактериологичната лаборатория включва: лабораторни помещения за бактериологични изследвания и битови помещения; автоклав или стерилизация за обеззаразяване на отпадъчни материали и замърсени прибори; перални, оборудвани за миене на съдове; бактериологична кухня - за приготвяне, бутилиране, стерилизация и съхранение на хранителни среди; вивариум за отглеждане на опитни животни; материал за съхранение на резервни реактиви, прибори, оборудване и домакински инвентар.

Изброените битови помещения, като самостоятелни структурни единици, са част от големи бактериологични лаборатории. В малките лаборатории бактериологичната кухня и стерилизационната кухня са обединени в едно помещение; няма специално помещение за отглеждане на опитни животни.

Според степента на опасност за персонала помещенията на микробиологичните лаборатории са разделени на 2 зони:

I. "Заразна" зона - помещение или група помещения в лаборатория, в които се работи и съхраняват патогенни биологични агенти, персоналът е облечен в подходящ тип защитно облекло.

II. "Чиста" зона - помещения, в които не се работи с биологичен материал, персоналът е облечен в лично облекло.

Под лабораторните стаи, в които се извършват всички бактериологични изследвания, се разпределят най-светлите, просторни стаи. Стените в тези помещения на височина 170 см от пода са боядисани в светли цветове с блажна боя или покрити с плочки. Подът е покрит с релин или линолеум. Този вид покритие ви позволява да използвате дезинфекционни разтвори при почистване на стаята.

Във всяка стая трябва да има мивка с водопровод и рафт за бутилка дезинфекционен разтвор.

В едно от помещенията е оборудван остъклен бокс - изолирано помещение с вестибюл (предбокс) за извършване на работа в асептични условия. В кутията поставят маса за култури, табуретка, бактерицидни лампи са монтирани над работното място. В преддверието се поставя шкаф за съхранение на стерилен материал. Прозорците и вратите на помещенията на "заразната" зона трябва да са херметични. Съществуващата изпускателна вентилация от "инфекциозната" зона трябва да бъде изолирана от други вентилационни системи и оборудвана с фини въздушни филтри.

Лабораторията е оборудвана с лабораторни маси, шкафове и рафтове за съхранение на оборудване, прибори, бои и реактиви, необходими за работа.

Правилната организация на работното място на бактериолог и лаборант е много важна за работата. В близост до прозорците са монтирани лабораторни маси. Когато ги поставяте, трябва да се стремите светлината да пада отпред или отстрани на работещия, за предпочитане от лявата страна, но в никакъв случай отзад. Желателно е стаите за анализ, особено за микроскопия, да имат прозорци, ориентирани на север или северозапад, тъй като за работа е необходима дори дифузна светлина. Осветеността на повърхността на масите за работа трябва да бъде 500 лукса. За удобство на дезинфекцията повърхността на лабораторните маси е покрита с пластмаса или тапицирана с желязо. За всеки лаборант се обособява отделно работно място с размери 150х60 см.

Всички работни места са оборудвани с предмети, необходими за ежедневна бактериологична работа, чийто списък е даден в таблица 1.

Маса 1.

Необходими предмети за бактериологична работа

Име на предмета	Приблизително количество
1. Комплект бои и реактиви за оцветяване
2. Слайдове	25-50
3. Покривни стъкла	25-50
4. Чаши с дупки	5-10
5. Поставка за епруветки
6. Бактериална примка
7. Стъклени шпатули
8. Метални шпатули
9. Буркан с памук
10. Пипети градуирани 1, 2, 5, 10 ml	25 от всеки том
11. Пастьорови пипети	25-50
12. Пинсета, ножица, скалпел	до 1
13. Контейнери с дезинфекционни разтвори
14. Микроскоп с осветител
15. Лупа 5 ´
16. Маслен съд с масло за потапяне
17. Филтърна хартия	3-5 листа
18. Буркан с дезинфекционен разтвор за пипети
19. Алкохолна или газова горелка
20. Инсталация за оцветяващи препарати
21. Пясъчен часовник за 1 или 2 минути	до 1
22. Круша с гумена тръба
23. Молив върху стъкло
24. Буркан със спиртни тампони
25. Необходими стерилни съдове	-

Дезинфекция

Дезинфекцията е унищожаване на микроорганизми в обекти на околната среда.

В микробиологичните лаборатории мерките за дезинфекция се използват много широко. При приключване на работа с инфекциозен материал служителите на бактериологичните лаборатории извършват превантивна дезинфекция на ръцете и работното място.

Отработеният патологичен материал (изпражнения, урина, храчки, различни видове течности, кръв) се подлага на дезинфекция, преди да се изхвърли в канализацията.

Градуирани и пастьорови пипети, стъклени шпатули и метални инструменти, замърсени с патологичен материал или култура от микроби, веднага след употребата им се спускат в стъклени буркани с дезинфекционен разтвор, разположени на масата на всяко работно място.

Предметните стъкла и покривните стъкла, използвани в работата, също подлежат на задължителна дезинфекция, тъй като дори в фиксирана и оцветена намазка понякога остават жизнеспособни микроорганизми, които могат да бъдат източник на вътрелабораторно замърсяване. Само тези съдове, в които са отглеждани микроорганизми, не се третират с дезинфектанти. Сгъва се в метални резервоари или биксове, запечатва се и се предава за автоклавиране.

Изборът на дезинфектант, концентрацията на разтвора му, съотношението между количеството на дезинфектанта и материала, който се дезинфекцира, както и продължителността на периода на дезинфекция се определят в зависимост от конкретните условия, като се вземат предвид, първо на всичко, стабилността на микробите, които се дезинфекцират, очакваната степен на замърсяване, състава и консистенцията на материала, в който се намират.

Дезинфекция на ръцете след работа със заразен материал и при контакт с кожата.В края на работа със заразен материал ръцете се дезинфекцират профилактично. Памучен тампон или марля се навлажнява с 1% разтвор на хлорамин, първо лявата и след това дясната ръка се избърсват в следната последователност: задната част на ръката, палмарната повърхност, междупръстните пространства, нокътните легла. Така първо се третират най-слабо замърсените участъци, след което се преминава към най-силно замърсените участъци от кожата. Избършете ръцете в продължение на 2 минути с два последователни тампона. Когато ръцете са замърсени с култура от патогенен микроб или патологичен материал, замърсените участъци от кожата първо се дезинфекцират. За тази цел те се покриват за 3-5 минути с памучна вата, навлажнена с 1% разтвор на хлорамин, след което памукът се изхвърля в резервоар или кофа с отпадъци и ръцете се третират с втори тампон в същото начин, както при превантивна дезинфекция. След третиране с хлорамин ръцете се измиват с топла вода и сапун. При работа с бактерии, които образуват спори, ръцете се третират с 1% активиран хлорамин. При попадане на инфекциозен материал върху ръцете експозицията на дезинфектанта се увеличава до 5 минути.

Стерилизация

Стерилизацията, за разлика от дезинфекцията, включва унищожаване на всички вегетативни и спорови, патогенни и непатогенни микроорганизми в стерилизирания обект. Стерилизацията се извършва по различни начини: пара, сух горещ въздух, кипене, филтриране и др. Изборът на един или друг метод на стерилизация се определя от качеството и свойствата на микрофлората на обекта, който се стерилизира.

Подготовка и стерилизация на лабораторно оборудване

Преди стерилизация лабораторната стъклария се измива и подсушава. Епруветки, бутилки, бутилки, дюшеци и колби се затварят с памучно-марлени запушалки. Над запушалките на всеки съд (с изключение на епруветките) се поставят хартиени капачки.

Гумените, корковите и стъклените запушалки се стерилизират в отделен плик, завързан на гърлото на съда. Петриевите блюда се стерилизират опаковани в хартия по 1-10 бр. Пастьорови пипети 3-15 бр. увити в опаковъчна хартия. В горната част на всяка пипета се поставя парче памук, за да се предотврати навлизането на материала в околната среда. Когато опаковате пипетите, трябва да се внимава много да не се счупят запечатаните краища на капилярите. По време на работа пипетите се изваждат от опаковката за горния край.

В горната част на градуираните пипети се вкарва предпазна памучна вата, както при пипетите на Пастьор, след което се увива в дебела хартия, предварително нарязана на ленти с ширина 2-2,5 см и дължина 50-70 см. Лентата се поставя на масата , левият му край е сгънат и ги увийте с върха на пипетата, след което, като завъртите пипетата, увийте около нея хартиена лента. За да не се разгъне хартията, противоположният й край се усуква или залепва. Обемът на увитата пипета е написан на хартия. Ако има каси, в тях се стерилизират градуирани пипети.

Стерилизирайте лабораторната стъклария

а) суха топлина при 180°C и 160°C съответно за 1 час и 150 минути.

б) в автоклав при налягане 1,5 atm. в рамките на 60 минути, за унищожаване на споровата микрофлора - 90 минути при 2 atm.

Стерилизация на спринцовки. Спринцовките се стерилизират разглобени: отделно цилиндъра и буталото в 2% разтвор на натриев бикарбонат за 30 минути. При работа със спороносна микрофлора стерилизацията се извършва в автоклав при 132±2°C (2 atm.) за 20 минути, при 126±2°C (1,5 atm.) - 30 минути. Стерилизираната спринцовка се събира, след като се охлади, в цилиндъра се поставя бутало, поставя се игла, след отстраняване на дорника от нея. Иглата, цилиндъра и буталото се вземат с пинсети, които се стерилизират заедно със спринцовка.

Стерилизация на метални инструменти. Металните инструменти (ножици, скалпели, пинсети и др.) се стерилизират в 2% разтвор на натриев бикарбонат, което предпазва от ръжда и загуба на острота. Препоръчително е остриетата на скалпелите и ножиците да се увият с памучна вата преди потапяне в разтвора.

Стерилизация на бактериални бримки. Бактериалните бримки, изработени от платинена или нихромова тел, се стерилизират в пламъка на алкохолна или газова горелка. Този метод на стерилизация се нарича калциниране или пламък.

Примката в хоризонтално положение се поставя в долната, най-студена част на пламъка на горелката, така че изгореният патогенен материал да не се пръска. След като изгори, примката се прехвърля във вертикално положение, като първо долната, а след това горната част на жицата се нагрява до червено и държачът на примката се изгаря. Запалването като цяло отнема 5-7 s.

Препарат за стерилизация и стерилизация на хартия, марля и памук. Памучна вата, марля, филтърна хартия се стерилизират в пещ със суха топлина при температура 160 ° C в продължение на един час от момента, в който температурата е показана с термометър или в автоклав при налягане 1 atm. в рамките на 30 минути.

Преди стерилизация хартията и марлята се нарязват на парчета, а памучната вата се навива под формата на топки или тампони с желания размер. След това всеки вид материал поотделно, едно или повече парчета, се увива в плътна хартия. Ако опаковката е счупена, стерилизираният материал трябва да се стерилизира отново, тъй като неговата стерилност е нарушена.

Стерилизация на ръкавици и други каучукови изделия. Гумени изделия (ръкавици, тръби и др.), Замърсени с вегетативна форма на микроби, се стерилизират чрез кипене в 2% разтвор на натриев бикарбонат или течаща пара в продължение на 30 минути; при замърсяване със спороносна микрофлора, в автоклав при налягане 1,5-2 atm. в рамките на 30 или 20 минути. Преди стерилизация гумените ръкавици се поръсват отвътре и отвън с талк, за да се предпазят от залепване. Между ръкавиците се поставя марля. Всеки чифт ръкавици се увиват отделно в марля и в този вид се поставят в бикс.

Стерилизация на патогенни микробни култури. Епруветки и чаши, съдържащи микробни култури, които не са необходими за по-нататъшна работа, се поставят в метален резервоар, капакът се запечатва и се предава за стерилизация. Култури от патогенни микроби, вегетативни форми, се убиват в автоклав за 30 минути при налягане 1 atm. Доставката на резервоари за стерилизация в автоклава се извършва от специално назначено лице срещу разписка. Режимът на стерилизация се записва в специален дневник. При унищожаване на култури от микроби от групи I и II на патогенност, както и материал, заразен или съмнителен, че е заразен от патогени, причислени към тези групи, резервоарите с отпадъчен материал се прехвърлят върху метални тави с високи стени в присъствието на придружаващо лице, което има право да работи със заразен материал.

Видове стерилизация

Стерилизация чрез варене. Стерилизирането чрез варене се извършва в стерилизатор. В стерилизатора се налива дестилирана вода, тъй като чешмяната вода образува котлен камък. (Стъклените предмети се потапят в студена, металните в гореща вода с добавка на натриев бикарбонат). Стерилизираните продукти се варят на слаб огън за 30-60 минути. За начало на стерилизация се счита моментът на завиране на водата в стерилизатора. В края на изваряването инструментите се вземат със стерилна пинсета, която се изварява заедно с останалите предмети.

Стерилизация със суха топлина. Стерилизацията чрез суха топлина се извършва в пещ на Пастьор. Подготвеният за стерилизация материал се поставя върху рафтовете, така че да не влиза в контакт със стените. Килерът се затваря и след това се пуска парното. Продължителността на стерилизацията при температура 150°C е 2 часа, при 165°C - 1 час, при 180°C - 40 минути, при 200°C - 10-15 минути (при 170°C хартията и памукът се обръщат жълто, а при по-висока температура овъглено). Началото на стерилизацията е моментът, когато температурата във фурната достигне желаната височина. В края на периода на стерилизация фурната се изключва, но вратите на шкафа не се отварят, докато не се охлади напълно, тъй като студеният въздух, навлизащ в шкафа, може да причини пукнатини по горещите съдове.

Парна стерилизация под налягане. Парна стерилизация под налягане се извършва в автоклав. Автоклавът се състои от два котела, поставени един в друг, корпус и капак. Външният котел се нарича водно-парна камера, вътрешният се нарича стерилизационна камера. Парата се произвежда в парен котел. Материалът за стерилизация се поставя във вътрешния котел. В горната част на стерилизационния съд има малки отвори, през които преминава парата от парната камера. Капакът на автоклава е херметически завинтен към корпуса. В допълнение към изброените основни части, автоклавът има редица части, които регулират работата му: манометър, водомерно стъкло, предпазен клапан, кранове за изпускане, въздух и конденз. Манометърът се използва за определяне на налягането, което се създава в стерилизационната камера. Нормалното атмосферно налягане (760 mm Hg. Art.) се приема за нула, следователно в неактивен автоклав стрелката на манометъра е на нула. Съществува определена връзка между показанията на манометъра и температурата (Таблица 2).

Таблица 2.

Съотношението на показанията на манометъра и точката на кипене на водата

Червената линия на скалата показва максималното допустимо работно налягане в автоклава. Предпазният клапан служи за защита срещу прекомерно натрупване на налягане. Той е настроен на предварително определено налягане, т.е. налягането, при което трябва да се извърши стерилизацията, когато стрелката на манометъра излезе извън линията, вентилът на автоклава автоматично се отваря и изпуска излишната пара, като по този начин забавя по-нататъшното повишаване на налягането .

На страничната стена на автоклава има мерно стъкло, показващо нивото на водата в парния котел. Върху тръбата на водомерното стъкло са нанесени две хоризонтални линии - долна и горна, показващи съответно допустимите долни и горни нива на водата във водно-парната камера. Въздушният кран е предназначен да отстранява въздуха от камерите за стерилизация и водна пара в началото на стерилизацията, тъй като въздухът, като лош топлопроводник, нарушава режима на стерилизация. В долната част на автоклава има кондензиращ кран за освобождаване на стерилизационната камера от кондензата, образуван при нагряването на стерилизирания материал.

Правила за автоклав. Преди да започнете работа, проверете автоклава и инструментите. В автоклавите с автоматичен контрол на парата стрелките на електровакуумния манометър на камерата за водна пара се настройват в съответствие с режима на стерилизация: долната стрелка е настроена на 0,1 atm. долна, горна - с 0,1 атм. над работното налягане водно-парната камера се напълва с вода до горната маркировка на мерителното стъкло. По време на пълнене с вода, клапата на тръбата, през която влиза парата в камерата, се държи отворена, за да може свободният въздух да излиза от котела. Стерилизационната камера на автоклава се зарежда с материала за стерилизация. След това капакът (или вратата) на автоклава се затваря, плътно закрепен с централна ключалка или болтове; за да се избегне изкривяване, болтовете се завинтват на кръст (в диаметър). След това включете източника на топлина (електрически ток, пара), като затворите вентила на тръбата, свързваща източника на пара със стерилизационната камера. С началото на изпарението и създаването на налягане в камерата за вода и пара се извършва продухване (отстранява се въздух от стерилизационния котел). Методът за отстраняване на въздуха се определя от конструкцията на автоклава. Първоначално въздухът излиза на отделни порции, след което се появява равномерна непрекъсната струя пара, което показва, че въздухът е напълно изгонен от стерилизационната камера. След отстраняване на въздуха вентилът се затваря и започва постепенно повишаване на налягането в стерилизационната камера.

Началото на стерилизацията е моментът, в който манометърът покаже зададеното налягане. След това интензивността на нагряване се намалява, така че налягането в автоклава да остане на същото ниво за необходимото време. В края на времето за стерилизация нагряването се спира. Затворете вентила в тръбопровода, подаващ пара към стерилизационната камера, и отворете клапана на тръбата за кондензат (надолу), за да намалите налягането на парата в камерата. След като стрелката на манометъра падне до нула, бавно разхлабете затягащите устройства и отворете капака на автоклава.

Температурата и продължителността на стерилизацията се определят от качеството на стерилизирания материал и свойствата на микроорганизмите, с които е заразен.

Контролът на температурата в стерилизационната камера се извършва периодично с помощта на бактериологични тестове. Биотестовете се произвеждат от бактериологичните лаборатории на Централната епидемиологична служба. Ако тези тестове не успеят, се проверява техническото състояние на автоклава.

Парна стерилизация. Стерилизирането с течна пара се извършва в апарат с течна пара на Кох или в автоклав с незавинтен капак и отворен изходен кран. Апаратът на Кох е метален кух цилиндър с двойно дъно. Пространството между горната и долната долна плоча се запълва 2/3 с вода (има кран за източване на водата, останала след стерилизацията). Капакът на апарата има отвор в центъра за термометър и няколко малки отвора за излизане на парата. Материалът за стерилизация се зарежда свободно в камерата на апарата, за да се осигури възможност за най-голям контакт с парата. Началото на стерилизацията е времето от момента, в който водата заври и парата влезе в стерилизационната камера. В апарат с течна пара се стерилизират предимно хранителни среди, чиито свойства се променят при температури над 100°C. Стерилизирането с течаща пара трябва да се повтори, тъй като еднократното нагряване при температура 100 ° C не осигурява пълна дезинфекция. Този метод се нарича фракционна стерилизация: обработката на стерилизирания материал с течаща пара се извършва в продължение на 30 минути всеки ден в продължение на 3 дни. В интервалите между стерилизациите материалът се поддържа при стайна температура, за да покълнат спорите във вегетативни форми, които умират при последващо нагряване.

Тиндализация. Тиндализацията е фракционна стерилизация при използване на температури под 100°C, предложена от Tyndall. Нагряването на материала за стерилизация се извършва във водна баня, оборудвана с термостат, за един час при температура 60-65 ° C за 5 дни или при 70-80 ° C за 3 дни. Между нагряванията обработеният материал се държи при температура 25°C, за да покълнат спорите във вегетативни форми, които умират при следващи нагрявания. Тиндализацията се използва за дехидратиране на хранителни среди, съдържащи протеин.

Механична стерилизация с бактериални ултрафилтри. Бактериалните филтри се използват за освобождаване на течността от бактериите в нея, както и за отделяне на бактерии от вируси, фаги и екзотоксини. Вирусите не се задържат от бактериални филтри и следователно ултрафилтрацията не може да се счита за стерилизация в общоприетия смисъл на думата. За производството на ултрафилтри се използват фино порести материали (каолин, азбест, нитроцелулоза и др.), които могат да улавят бактерии.

Азбестовите филтри (Seitz филтри) са азбестови плочи с дебелина 3-5 mm и диаметър 35 и 140 mm за филтриране на малки и големи обеми течност. У нас азбестовите филтри се произвеждат в два класа: “F” (филтриращи), задържащи суспендирани частици, но пропускащи бактерии, и “SF” (стерилизиращи), по-плътни, задържащи бактерии. Преди употреба азбестовите филтри се монтират във филтърни апарати и заедно с тях се стерилизират в автоклав. Азбестовите филтри се използват еднократно. Мембранните ултрафилтри са изработени от нитроцелулоза и представляват бели дискове с диаметър 35 mm и дебелина 0,1 mm.

Бактериалните филтри се различават по размер на порите и са обозначени със серийни номера (Таблица 3).

Таблица 3

Бактериални филтри

Мембранните филтри се стерилизират чрез кипене непосредствено преди употреба. Филтрите се поставят в дестилирана вода, загрята до температура 50-60°С, за да се предотврати тяхното усукване, варят се на тих огън 30 минути, като водата се сменя 2-3 пъти. Стерилизираните филтри се изваждат от стерилизатора с фламбирани и охладени пинсети с гладки върхове, за да се избегнат повреди.

За филтриране на течности бактериалните филтри се монтират в специални филтърни устройства, по-специално във филтъра Seitz.

Състои се от 2 части: горна, оформена като цилиндър или фуния, и долна опорна част на апарата, с така наречената филтърна маса, изработена от метална мрежа или чиста керамична плоча, върху която има мембранен или азбестов филтър. е поставен. Носещата част на апарата има формата на фуния, чиято заострена част е разположена в гумената запушалка на гърлото на Бунзенова колба. В работно състояние горната част на устройството е фиксирана към долната с винтове. Преди започване на филтрацията, връзките на различните части на инсталацията се запълват с парафин за създаване на херметичност. Изходната тръба на колбата е свързана с дебелостенна гумена тръба към водоструйна, маслена или велосипедна помпа. След това филтрираната течност се излива в цилиндъра или фунията на апарата и помпата се включва, създавайки вакуум в приемния съд. В резултат на получената разлика в налягането филтрираната течност преминава през порите на филтъра в приемника. Микроорганизмите остават на повърхността на филтъра.

Приготвяне на цитонамазки

За изследване на микроорганизми в оцветена форма се прави намазка върху предметно стъкло, изсушава се, фиксира се и след това се оцветява.

Тестовият материал се разстила на тънък слой върху повърхността на добре обезмаслено предметно стъкло.

Натривки се приготвят от микробни култури, патологичен материал (храчки, гной, урина, кръв и др.) И от органи на трупове.

Техниката за приготвяне на намазки се определя от естеството на изследвания материал.

Изготвяне на намазки от микробни култури с течна хранителна среда и от течен патологичен материал (урина, цереброспинална течност и др.). Малка капка от тестваната течност се нанася с бактериална примка върху предметно стъкло и примките се разпределят с кръгови движения в равномерен слой под формата на кръг с диаметър на монета от стотинка.

Изготвяне на кръвни натривки. Капка кръв се нанася върху предметното стъкло, по-близо до единия му край. Второто - полирано - стъкло, което трябва да е по-тясно от предметното стъкло, се поставя върху първото под ъгъл 45° и се доближава до капката кръв, докато влезе в контакт с нея. След като кръвта се разтече по полирания ръб, стъклото се плъзга отдясно наляво, като кръвта се разпределя равномерно в тънък слой по цялата повърхност на стъклото. Дебелината на щриха зависи от ъгъла между стъклата: колкото по-остър е ъгълът, толкова по-тънък е щрихът. Правилно приготвената намазка има светлорозов цвят и еднаква дебелина навсякъде.

Приготвяне на гъста капка. Капка кръв се нанася в средата на предметното стъкло с пастьорова пипета или стъклото се нанася директно върху изпъкналата капка кръв. Кръвта, нанесена върху стъклото, се намазва с бактериална бримка, така че диаметърът на полученото петно ​​да съответства на размера на монета от пени. Стъклото се оставя в хоризонтално положение, докато кръвта изсъхне. Кръвта в "дебелата капка" се разпределя неравномерно, образувайки неравен ръб.

Приготвяне на намазка от вискозен материал (храчка, гной). Храчките или гнойта, отложени върху предметно стъкло по-близо до тесния ръб, се покриват с друго предметно стъкло. Чашите са леко притиснати една към друга.

След това свободните краища на очилата се хващат с 1 и 2 пръста на двете ръце и се разпръскват в противоположни посоки, така че при движение двете чаши да прилягат плътно една към друга. Намазките се получават с равномерно разпределен материал, заемащ голяма площ.

Приготвяне на цитонамазка от култури с плътна хранителна среда. Капка вода се нанася в средата на чисто, добре обезмаслено предметно стъкло, в него се вкарва бактериална бримка с малко количество от изследваната микробна култура, така че капката течност да стане леко мътна. След това излишъкът от микробен материал върху примката се изгаря на пламък и намазката се приготвя по горния метод.

Приготвяне на цитонамазки от органи и тъкани. С цел дезинфекция повърхността на органа се обгаря с нагорещени клончета на пинсети, на това място се прави разрез и с остри ножици се изрязва малко парче тъкан от дълбочина, което се поставя между две предметни стъкла. . След това продължете по същия начин, както при приготвянето на намазка от гной и храчки. Ако тъканта на органа е плътна, тогава се прави изстъргване от дълбочината на разреза със скалпел. Полученият чрез остъргване материал се разнася на тънък слой върху повърхността на стъклото със скалпел или бактериална примка.

За изследване на взаимното разположение на елементите на тъканта и микроорганизмите в нея се правят намазки. За целта се улавя с пинсета малко парче тъкан, изрязано от средата на органа, и се нанася последователно няколко пъти с изрязаната повърхност върху предметното стъкло, като по този начин се получават поредица от петна-отпечатъци.

Изсушаване и фиксиране на петна. Намазка, приготвена върху предметно стъкло, се изсушава на въздух и се фиксира след пълно изсъхване. При фиксиране намазката се фиксира върху повърхността на предметното стъкло и следователно по време на последващото оцветяване на препарата микробните клетки не се отмиват. Освен това убитите микробни клетки се оцветяват по-добре от живите.

Прави се разлика между физичен метод на фиксиране, който се основава на въздействието на висока температура върху микробна клетка, и химични методи, включващи използването на агенти, които предизвикват коагулация на протеини. Невъзможно е да се фиксират петна, съдържащи патогени от I-II група на патогенност над пламъка.

Физически начин на фиксиране. Предметното стъкло с препарата се взема с пинсети или I и II пръст на дясната ръка зад ребрата с удар нагоре и с плавно движение 2-3 пъти над горната част на пламъка на горелката. Целият процес на фиксиране трябва да отнеме не повече от 2 s. Надеждността на фиксирането се проверява чрез следната проста техника: върху задната повърхност на лявата ръка се нанася повърхността на предметното стъкло, свободно от намазката. При правилно фиксиране на намазката стъклото трябва да е горещо, но да не предизвиква усещане за изгаряне.

Химическа фиксация. Химикалите и съединенията, показани в таблица 4, също се използват за фиксиране на петна.

Таблица 4

Вещества за химична фиксация

Стъклото с изсъхнало петно ​​се потапя в бутилка с фиксиращ агент и след това се суши на въздух.

Оцветяване на щрихи

Техника за оцветяване на петна. За оцветяване на петна се използват разтвори на боя или оцветяваща хартия, предложена от A.I. Син. Лекотата на приготвяне, лекотата на използване, както и възможността за съхранение на хартията за оцветяване за неопределено дълго време бяха основата за широкото им използване в различни методи за оцветяване.

Оцветяване на щрихи с хартия за оцветяване. Върху изсъхналия и фиксиран препарат се нанасят няколко капки вода, поставят се цветни хартии с размери 2х2 см. През цялото време на оцветяване хартията трябва да остане влажна и да прилепва плътно към стъклената повърхност. При сушене хартията се навлажнява допълнително с вода. Продължителността на оцветяването на цитонамазката се определя от метода на оцветяване. В края на оцветяването хартията се отстранява внимателно с пинсети, а петното се измива с чешмяна вода и се изсушава на въздух или филтърна хартия.

Оцветяване на петна с багрилни разтвори. Върху изсушения и фиксиран препарат с пипета се нанася багрило в такова количество, че да покрие цялата натривка. При оцветяване на петна с концентрирани разтвори на багрила (карбов фуксин на Ziehl, карболова тинтява или кристално виолетово), оцветяването се извършва през филтърна хартия, която задържа частиците на багрилото: лента от филтърна хартия се поставя върху фиксирана петна и върху нея се излива разтвор на багрилото. то.

За микроскопско изследване се оцветяват приготвени петна, изсушени и фиксирани. Оцветяването е просто и сложно. Простото оцветяване се състои в нанасяне на която и да е боя върху петно ​​за определен период от време. Най-често алкохол-вода (1:10) фуксин на Pfeiffer, метиленово синьо на Leffler и сафранин се използват за просто оцветяване. Еозинът като кисело багрило се използва само за оцветяване на цитоплазмата на клетките и оцветяване на фона. Киселинният фуксин е напълно неподходящ за оцветяване на бактерии.