Glikogeno chic reakcijos technika – rezultatų įvertinimas. Alergenai ir toksinai diagnostiniams odos tyrimams Alergenai ir toksinai

Alergenai ir toksinai

Diagnostiniai vaistai

Antitoksinis žmogaus imunoglobulinas nuo kokliušo (Rusija)

Išgrynintas koncentruotas skystas antidifterinis serumas arkliams (Rusija)

Serumai ir imunoglobulinai

Sausa tuberkuliozės vakcina BCG-M (švelniai pirminei imunizacijai, Rusija)

Sausa tuberkuliozės vakcina (BCG), skirta intraderminiam vartojimui (Rusija)

Akt-Hib (Hib-wak, Pietų Korėja)

Monovakcina nuo kokliušo (Rusija)

Sudėtyje yra kokliušo bakterijų, konservantas – mertiolatas. Vartoti tik esant epidemiologinėms indikacijoms kokliušo infekcijos srityse.

Vienoje dozėje yra 10 mcg polisacharido Haemophilus influenzae b tipo, konjuguotas su stabligės toksoidu, konservantas – trometamolis. Naudojamas vaikų nuo 2 mėnesių vakcinacijai pagal epidemiologines indikacijas.

Mycobacterium bovis BCG-1. Vakcinos padermė gauta ilgai (13 metų) auginant galvijų mikobakterijų tuberkuliozę nepalankiomis sąlygomis bulvių glicerino terpėje, pridedant tulžies. Naudojamas specifinei tuberkuliozės profilaktikai. Vakcinacija atliekama 5-7 gyvenimo dienomis, kai organizme nėra mikobakterinės infekcijos. Revakcinuojami visi sveiki vaikai, paaugliai ir suaugusieji iki 30 metų, kurie neigiamai reaguoja į tuberkuliną. Imuniteto mechanizmas sergant tuberkulioze nebuvo iki galo atskleistas. Klinikinėje praktikoje pagrindinis vakcinos imuniteto intensyvumo kriterijus yra neigiamos odos reakcijos į tuberkuliną perėjimas prie teigiamos.

Sudėtyje yra gyvų vakcinos padermės bakterijų, liofilizuotų 1,2 % natrio glutamato tirpale Mycobacterium bovis BCG-1. Naudojamas švelniai specifinei tuberkuliozės profilaktikai (pirminė vakcinacija) naujagimiams vietovėse, kuriose tuberkuliozei padėtis nepalanki.

Sudėtyje yra antikūnų prieš difterijos bacilų egzotoksiną. Antitoksinis aktyvumas išreiškiamas tarptautiniais vienetais (10 000 ir 20 000 TV/ml). Vartojamas difterija sergantiems pacientams gydyti. Be terapinių tikslų, antidifterinis serumas naudojamas difterijos bacilų kultūrų toksiškumui nustatyti gelio nusodinimo reakcijoje.

Sudėtyje yra imunologiškai aktyvi donoro kraujo plazmos frakcija su antikūnais prieš kokliušo mikrobo egzotoksiną (ne mažiau kaip 750 vienetų antitoksinių antikokliušo antikūnų). Vartojamas kokliušo gydymui.

Sudėtyje yra išgryninto difterijos toksino 0,2 ml 1/40 DLM jūrų kiaulytės toksino. Naudojamas intraderminiams tyrimams imuninės diagnostikos tikslais. Asmenims injekcijos vietoje išsivysto uždegiminė reakcija. Jei kraujyje yra daugiau nei 0,03 TV antitoksino, testas yra neigiamas. Anksčiau Schick testas dažnai buvo naudojamas difterijai jautriems asmenims nustatyti. Šiuo metu dėl komplikacijų galimybės jo vartojimas apsiriboja griežtomis epidemijos indikacijomis.

Schick testas gali padėti diferencinei diagnozei tarp atipinės difterijos ir kitų ligų, kai kartu nešiojamos difterijos bacilos (tai atvejais, kai Schick testas diagnozuojamas prieš skiriant antidifterinį serumą).

Per pastaruosius dvejus metus atlikti Schick testo diagnostinės vertės tyrimai titravimo metodu pagal V.I.Ioffe, su 1/40, 1/10, 1/5 DLM difterijos toksino (1, 4 ir 8 odos dozės). prie išvados, kad imuniteto aukščio nustatymas padeda diferencinėje diagnozėje.

Dauguma toksikogeninių difterijos bacilų nešiotojų turi intensyvų antitoksinį imunitetą, pasireiškiantį neigiamomis reakcijomis ne tik į vieną, bet ir į 4 bei 8 toksino (K.V. Blumenthal) odos dozes.

Kai kuriems difterija sergantiems pacientams, kuriems prieš serumo skyrimą buvo galima nustatyti imuniteto būklę pagal Schick reakciją, pastaroji po vienos odos dozės buvo teigiama.

Taigi, jei esant abejotinam klinikiniam vaizdui ir nustačius toksikogenines difterijos bacilas, Schick testas įprastomis sąlygomis (1/40 DLM toksino) duoda teigiamą rezultatą, difterijos prielaida yra labiau pagrįsta.

Agliutinacijos reakcija taip pat gali padėti diferencinėje diagnozėje, nes sergant difterija 2-3 savaitę nuo ligos pradžios natūraliai padaugėja antikūnų kraujyje, tuo tarpu, anot autorių, vežimas kartu neduoda pastebimo poveikio. antikūnų padidėjimas per nurodytą laikotarpį .

Apibendrinant, reikia pasakyti, kad atsisakymas diagnozuoti difteriją, kai nustatomas difterijos bacilas, visais atvejais turėtų būti pakankamai pagrįstas įtikinamais klinikiniais duomenimis.

Atsižvelgiant į tai, kad diferencinė diagnostika tokiais atvejais dažnai sukelia didelių sunkumų, ypač vietiniam gydytojui, šiuos pacientus rekomenduojama nukreipti į diagnostikos skyrius. Nesant diagnostinių lovų, difterijos diagnozę galima pašalinti tik pasikonsultavus su patyrusiu gydytoju.

„Difterija vaikams“, M.E. Sukhareva, K.V. Blumenthal

BL aptikimas tipiškame folikulinio tonzilito klinikiniame vaizde, kai iš po tonzilių gleivinės atsiranda pūliuojantys folikulai, kaip ir soros grūdeliai, taip pat gali būti lengvai vertinamas kaip gretutinis vežimas, nes difterijos plokštelių salelės visada yra ant tonzilių paviršiaus. gleivinę. Lėtinį tonzilitą dažnai lydi daugiau ar mažiau ilgalaikis difterijos bacilų nešiojimas ir dėl to dažnai tenka atskirti netipinę difteriją...

Patyrusiam gydytojui nesunku diagnozuoti grybelinį tonzilitą (sukeltas leptotrix) kartu su difterijos bacilų nešiojimu, nes ryklės mikozės klinikinis pasireiškimas iš esmės nepanašus į difterijos procesą; bet, matyt, tos pačios priežastys, dažniausiai lėtiniai nosiaryklės pažeidimai, vienu metu prisideda prie ilgalaikės grybelio vegetacijos ir difterijos bacilų nešiojimo. Diferencinė diagnostika sudėtingesnė...

8 metų Liuda P. paguldyta į vardo ligoninę. I. V. Rusakova 1960 09 09 su diagnoze „ryklės difterija? Mergina tinkamai pasiskiepijusi nuo difterijos, labai dažnai kenčia nuo gerklės skausmo. Susirgo rugsėjo 5 d., temperatūra 37,5°, galvos skausmas, vidutinio sunkumo gerklės skausmas. Rugsėjo 6 - 7 dienomis temperatūra siekė 38 - 39°, blogai jaučiausi, gerklės skausmas tęsėsi...

Difterijos bacilų aptikimas kultūrose iš gerklės ar nosies, esant tipiškam gripo kryžmens arba kryžmens su viršutinių kvėpavimo takų kataru klinikiniu paveikslu, negali būti lemiamas argumentas, patvirtinantis kryžminio difterijos etiologiją. Tokiais atvejais būtina identifikuoti izoliuotus mikrobus, tačiau visiškai įmanoma užsikrėsti BL gerklėje ar nosyje kartu su nedifterijos kryželiu. Štai ištrauka iš istorijos...

8 metų Borya B. buvo paguldyta į pavadintos ligoninės difterijos diagnostikos skyrių. I. V. Rusakova 1960 09 27 su diagnoze „ryklės difterija? Berniukas tinkamai paskiepytas nuo difterijos. Ne kartą kenčia nuo gerklės skausmo. Susirgau rugsėjo 24 d., temperatūra 39,5°, šaltkrėtis, gerklės skausmas. 25. IX vaiką apžiūrėjo gydytoja: temperatūra išliko aukšta, ryški ryklės hiperemija, gelsva, laisva, bet gana plati...

Citocheminiai metodai siekti cheminių ir fermentinių medžiagų identifikavimo ląstelėse, tam naudojant spalvų reakcijas. Citocheminiai preparatai išsaugo ląstelių struktūrą, kuri leidžia identifikuoti ląsteles ir nustatyti tiriamo junginio lokalizaciją ląstelėse. Štai kodėl hematologijoje pirmenybė teikiama ne biocheminei, daug darbo reikalaujančiai, destruktyviai ląstelių struktūrai ir susijusiai su labai nevienalyte ląstelių populiacija, o citocheminiams metodams.

Citochemijaįrodė, kad tarp morfologiškai identiškų ląstelių yra reikšmingų cheminių ir fermentinių skirtumų.

Glikogenas (CHIK reakcija) (PAS) – Hotchkiss metodas – Mac Minus

CHIC reakcijos principas. Polisacharidai identifikuojami pagal reakciją, kuri oksiduoja alkoholio grupes, kurios paverčiamos aldehidinėmis grupėmis, o pastarąsias identifikuoja pagal spalvos reakciją su Schiff reagentu.

CHIC reakcijos reagentai: 1. Fiksuojantis alkoholio-formalino mišinys: 9 dalys absoliutaus etilo alkoholio + 1 dalis 40% formalino; laikyti +4° temperatūroje.

2. Periodinė rūgštis, 1% vandeninis tirpalas. Tirpalas yra bespalvis. Laikyti rudo stiklo butelyje, tamsoje, laboratorinėje temperatūroje. Gelsvas tirpalas yra netinkamas naudoti.

3. Šifo reagentas. 1 g bazinio fuksino praskieskite 200 ml distiliuoto vandens iki virimo temperatūros. Maišykite 5 minutes, atvėsinkite iki 50°, filtruokite ir įpilkite 20 ml normalios druskos rūgšties. Atvėsinkite iki 25°, įpilkite 2 g natrio arba kalio metabisulfito, kuris visiškai ištirps. Tirpalas turi stovėti parą tamsioje ir šaltoje temperatūroje (+4°). Tada įpilkite 2 g aktyvintos anglies, pakalbėkite 1 minutę. ir filtruoti.
Gautas filtratas yra skaidrus ir bespalvis. Leidžiamas šiek tiek gelsvas atspalvis; jei tirpalas pasidaro rausvas, jis tampa netinkamas naudoti. Laikyti +4° temperatūroje hermetiškai uždarytame rudo stiklo butelyje.

4. Žalia šviesa -1% vandeninis tirpalas.

5. Diastazė: nesuskystintos žmogaus seilės arba 0,1 % amilolitinio-diastatinio fermento tirpalas fiziologiniame fiziologiniame tirpale.

CHIC reakcijos atlikimo technika

1) 10 minučių tepinėlių fiksavimas alkoholio ir formalino mišiniu; nuplauti distiliuotu vandeniu;
2) oksidacija 1% periodinės rūgšties tirpalu, 10 min.; nuplauti distiliuotu vandeniu;
3) dažymas Šifo reagentu uždengtame inde, tamsoje ir šaltyje, 2 valandas; nuplauti tekančiu vandeniu;
4) kontrastinis dažymas 1 % žalia šviesa 1 minutę; nuplauti tekančiu vandeniu.

Valdymas priskirtas tepinėlis inkubuojamas su diastaze, 60 min. kambario temperatūroje, kad selektyviai pašalintų glikogeną. Nuplovus distiliuotu vandeniu, jis apdorojamas įprastu būdu.

CHIC reakcijos rezultatų įvertinimas

Glikogenas, tamsiai raudonos spalvos, atrodo grūdelių pavidalu arba išsibarstę. Reakcijai stebėti naudojami subrendę granuliocitai. Be glikogeno, teigiamą reakciją duoda ir kitos angliavandenių medžiagos, tokios kaip mucinas, mukoproteinai, cerebrozidai ir fibrinas. Glikogeno atskyrimas nuo šių komponentų atliekamas iš anksto apdorojant diastaze, po kurio glikogenas nebedažomas.

IN granulocitai glikogenas yra išsklaidytos formos jau promielocitų stadijoje ir bręsdamas pradeda daugėti. Normaliomis sąlygomis limfocitai yra neigiami arba 20% jų gali būti keli maži glikogeno grūdeliai. Monocitai yra neigiami arba smulkiai granuliuoti.

Intensyvumas spalvinimas nustatomas pusiau kiekybiškai. Reakcijoje PAS atsispindi glikogeno indikatoriumi arba vidutiniu reakcijos indikatoriumi (Astaldi). Normalus glikogeno kiekis svyruoja nuo 0,10 iki 0,30. Paprastai tik patologinių limfocitų apkrovos laipsnis yra didesnis nei 3.

Tai buvo nurodyta CHIC reakcijos metodu:
a) Atliekant tam tikrų citologinių ūminės leukemijos tipų diferencinę diagnozę:
- Mieloblastai ir promieloidai yra PHIK neigiami arba įgauna silpną difuzinę spalvą. Auer kūnai duoda teigiamą reakciją, kuri susilpnėja po virškinimo su seilėmis.
- Limfoblastai sergant ūmine leukemija ir limfosarkoma sukelia aštrią CHIC teigiamą reakciją grūdelių arba didelių glikogeno blokų pavidalu.
- Eritroblastai, sergantys eritremija ir ūmine eritroleukemija, duoda ryškiai teigiamą išsklaidytą arba granuliuotą reakciją, priešingai nei įprasti eritroblastai, kurie yra neigiami PAS;
- Monocitoidiniai blastai yra nenuosekliai silpnai teigiami, smulkaus granuliavimo.

b) Lėtinės limfinės leukemijos diagnozei nustatyti ir gydymo veiksmingumui stebėti: padidėjęs glikogeno rodiklis rodo sunkią ligos formą ir liūdną prognozę.
Glikogeno augimas patologinių limfocitų atveju, leukemijai nebūdingas reiškinys, paaiškinamas metabolinio aktyvumo padidėjimu bet kokio tipo limfoidų proliferacija.

c) Atskirti Gošė ląsteles nuo kitų makrofagų su kaupimu.

Schick reakcija rodo, kad kraujyje yra arba nėra reikiamo antitoksino kiekio, apsaugančio organizmą nuo difterijos. Šiuo metu ši reakcija naudojama rečiau, nes praktikoje diegiami jautresni metodai (RPGA).

Schick reakcija atliekama vaikams, paskiepytiems nuo difterijos ir baigusiems vakcinaciją ir bent vieną pakartotinę vakcinaciją. Sulaukus 13 metų ir vyresnio amžiaus, reakcija gali būti diagnozuota net ir neturint žinomos vakcinacijos istorijos. Imuniteto prieš difteriją būklė tikrinama ne anksčiau kaip praėjus 6 mėnesiams po paskutinės revakcinacijos ir ne anksčiau kaip po dviejų mėnesių po ūmios ligos.

Schicko reakcija taip pat taikoma naujai atvykusiems vaikams į grupes, kurios kenčia nuo difterijos, kai nėra informacijos apie skiepus. Vaikai, kuriems pasireiškė neigiama Schick reakcija, papildomai neskiepijami. Papildomi skiepai, neatsižvelgiant į imuninį sluoksnį komandoje, skiriami vaikams, kurių reakcija teigiama ir abejotina.

Schick reakcijos rezultatai įrašomi į profilaktinio skiepijimo apskaitos kortelę (f. 63), nurodant reakcijos nustatymo ir tyrimo datą, toksino seriją ir toksiną gaminusį institutą.

Schick reakcijai atlikti naudojamas praskiestas aktyvus (nekaitintas) difterijos toksinas. 0,2 ml yra viena Chic dozė.

Schick reakcijai atlikti reikia naudoti vieno gramo (tuberkulino) švirkštus, kruopščiai patikrintus su tiksliomis padalomis, kurios neleidžia skysčiui prasiskverbti tarp švirkšto sienelių ir jo stūmoklio.

Griežtai draudžiama atlikti Schick reakciją patalpose, kuriose tą dieną buvo atlikta revakcinacija nuo tuberkuliozės, taip pat naudoti švirkštus, adatas ir kitus imunizacijai nuo tuberkuliozės instrumentus.

Oda injekcijos vietoje nuvaloma vata, sudrėkinta 70% etilo alkoholiu. Toksinas (0,2 ml) įšvirkščiamas į odą į vidurinę delno paviršiaus dalį, dažniausiai į kairįjį dilbį. Įvedimas atliekamas lėtai, naudojant žinomą įtampą, būdingą skysčio injekcijai į odą. Injekcija atliekama labai nežymiai pakreipus švirkštą link dilbio, beveik lygiagrečiai odos paviršiui. Adatos pjūvis turi visiškai patekti į odą ir būti matomas per epidermį. Injekcijos vietoje turi susidaryti maždaug 1 cm skersmens balkšva, aiškiai išreikšta pūslelė (papulė), kurios vietoje plauko folikulų yra įdubimas („citrinos žievelė“). Ši pūslelė (papulė) išnyksta per 10–15 minučių. Jei suleidus toksiną pūslelė (papulė) nesusidaro arba išnyksta per greitai, tai rodo, kad suleista neteisingai, giliai, o po oda patekęs toksinas reakcijos gali ir nesukelti. Dėl to gali būti gauti neteisingi rezultatai.

Į reakciją atsižvelgiama po 72 arba 96 valandų Rezultatai vertinami taip:

a) Schick reakcija yra teigiama, jei toksino injekcijos vietoje atsiranda paraudimas ir infiltracija. Reakcijos laipsnis nurodomas: "+" - jei paraudimas yra 1 -1,5 cm skersmens, (+ + " - jei 1,5 - 3 cm, "+ + + " - jei didesnis nei 3 cm;

b) Schick reakcija yra neigiama, kai toksino injekcijos vietoje nėra paraudimo ar infiltrato;

c) Schick reakcija yra abejotina, jei paraudimas ir infiltratas pavartojus toksiną yra neaiškiai išreikštas arba jei reakcija yra ryški, paraudimo skersmuo yra maždaug 0,5 cm (žymimas „±“).

Kontraindikacijos Schick reakcijai: spazmai, epilepsija, pustulinės ligos, kontaktas su sergančiais virusiniu hepatitu, bronchine astma.