Patogene korinebakterije - F. K
Korinebakterije su gram-pozitivni mikroorganizmi u obliku štapa koji su široko rasprostranjeni u prirodi i naseljavaju ljudsko tijelo. Većina članova ovog roda nije patogena za ljude. Neke vrste uzrokuju teške zarazne bolesti, na primjer.
Rod Corynebacterium se sastoji od obveznih patogena i patogena tipičnih oportunističkih infekcija. Svaka vrsta mikroorganizma ima specifične biološke karakteristike i uzrokuje različite patologije. Najčešće su zahvaćena koža i unutrašnji organi. Uvođenjem nesterilnih katetera i ugradnjom inficiranih proteza razvija se bakterijemija.
Corynebacteria - patogeni:
- Infekcije urinarnog trakta - uretritis, prostatitis, oštećenje bubrega;
- Respiratorne bolesti -,;
- Purulentno-septički procesi - bakteremija, septikemija, apsces mozga, osteomijelitis, endokarditis, septički artritis,
- Kožne bolesti - pseudomikoza;
- Infekcije uzrokovane kateterom i rane.
Neke korinebakterije su predstavnici različitih normocinoza ljudskog tijela. Žive na koži gornjim divizijama respiratorni trakt, vizuelni analizator, urogenitalni trakt. Dakle, C. striatum ima tropizam za kože, C. durum - na respiratorni epitel respiratornih organa, C. glucuronoliticam - na epiteliocite urinarnog trakta kod muškaraca. Mnoge vrste se izdvajaju od objekata okruženje.
Atoksigena C. diphtheriae normalno kolonizira kožu i ždrijelo bez izazivanja bolesti. Nepatogene vrste korinebakterija u prihvatljivoj količini su dio normocenoze debelog crijeva. Ali ponekad ovi mikrobi dovode do razvoja infekcije, pa čak i epidemije. Ova karakteristika je zbog prisustva drugih faktora virulencije u ovim mikroorganizmima.
Sve korinebakterije su uslovno podeljene u grupe:
- Mikroorganizmi opasni za toplokrvne životinje
- Mikrobi koji inficiraju biljke
- Uvjetno patogene bakterije koje ne štete zdravlju.
Infekcijama su najosjetljivija djeca, starije osobe i osobe s imunodeficijencijom i višeorganskim patologijama. U većini slučajeva identifikacija vrste corynebacterium spp uzrokuje značajne poteškoće zbog njihovih morfobioloških karakteristika.
Svojstva korinebakterija
Corynebacterium diphtheria
Corynebacterium diphtheriae je uzročnik opasne ljudske bolesti - difterije. Trenutno se patologija bilježi izuzetno rijetko i to samo kod osoba koje, najvjerovatnije, nisu pravovremeno cijepljene.
Do širenja infekcije dolazi vazdušnim kapljicama ili kontaktom tokom komunikacije sa bolesnim osobama ili preko zaraženih predmeta. U slučaju kontaminacije hrane, prehrambeni put postaje relevantan. U epidemiološkom smislu najveću opasnost predstavljaju zdravi nosioci bakterija.
Ovisno o lokaciji primarnog žarišta infekcije, razne forme bolesti. Nakon 7-10 dana inkubacije, prva Klinički znakovi. Na mjestu lokalizacije patološkog žarišta razvija se fibrinozna upala. Dovodi do uništenja epiteliocita i krvnih sudova. Postupno formirani eksudat sadrži mnogo fibrinogena, koji koagulira i formira plak na sluznici sivo-bijelo. Čvrsto prianja uz submukozni sloj i ne može se ukloniti. Kada pokušate ukloniti plak, počinje krvarenje. Osim lokalne karakteristike upala zbog lokalizacije ulaznih vrata infekcije javlja se teška intoksikacija s groznicom, zimicama, hiperhidrozom, bolovima u tijelu, letargijom, bljedilom kože, adinamijom, hipotenzijom i drugim znakovima.
Difterija grla je najopasniji oblik infekcije koji može dovesti do razvoja, što je i uzrok fatalnost. Uzrokuje ga oticanje sluznice larinksa i teška asfiksija.
Glavna dijagnostička metoda difterije je mikrobiološka. Uz pojavu gustih fibrinskih filmova i otoka ždrijela ili drugih dijelova tijela, potrebno je od pacijenta uzeti bris na difteriju i započeti ovu studiju. Iscjedak iz grla, sluz iz nosa, plak iz krajnika - biomaterijal koji se dostavlja u bakteriološku laboratoriju na analizu. Inokulira se na podloge koje sadrže serum ili krv s kalijevim teluritom, koji inhibira rast sekundarne mikroflore. Nakon inkubacije, uzgojene kolonije se mikroskopiraju, akumulira se čista kultura i vrši se konačna identifikacija vrste. Za kliničare su važni rezultati tipizacije sero- i faga. Određivanje toksigenosti izolovane kulture je od velikog dijagnostičkog značaja.
Etiotropna terapija difterije se sastoji u uvođenju antitoksičnog seruma, antibiotika i sulfonamida pacijentima. Poboljšava se simptomatska i patogenetska terapija opšte stanje pacijenata, ublažavanje njihovih simptoma. Nakon uklanjanja akutnih manifestacija patologije, indicirana je fizioterapija za saniranje - ultrazvučna i laserska terapija direktno na žarište.
Da bi se spriječio razvoj tako ozbiljne bolesti kao što je difterija, provodi se opća imunizacija stanovništva DTP vakcinom u skladu sa Nacionalnim rasporedom imunizacije. Masovna vakcinacija je sada značajno smanjila učestalost i smrtnost od difterije.
Corynebacterium non diphtheriae su stanovnici vanjskog okruženja. Nalaze se na koži i sluznicama unutrašnjih organa, kao predstavnici normocenoza. Kod oslabljenih osoba u riziku, ovi mikrobi mogu uzrokovati upalne procese koji su teški kao i bolesti uzrokovane bezuvjetnim patogenima. Da bi se odabrala prava etiotropna terapija i izliječio pacijent, potrebno je precizno i brzo identificirati mikrob.
Corynebacterium glucuronolyticum
Corynebacterium glucuronolyticum - mikroorganizmi izolovani od ljudi sa bolestima genitourinarnog sistema. Oni su uzročnici su prostatitisa i uretritisa kod muškaraca, ali mogu živjeti u optimalnoj količini u tijelu zdravi ljudi, kao predstavnici ove biocenoze.
Pod uticajem negativnih faktora aktivni rast i razmnožavanje Corynebacterium glucuronolyticum. Bakterije počinju stjecati patogena svojstva, uzrokujući lokalnu upalu. Parenhim prostate nabubri, povećava se i infiltriran je limfocitima. Upala se širi na žljezdano tkivo, mijenja se struktura organa, uništavaju se epiteliociti, gubi sekretorna funkcija žlijezde.
Difteroidi su dio normocinoze urogenitalnog trakta muškaraca zajedno sa stafilokokom, enterokokom, pojedinačnim mikoplazmama i ureaplazmama. Tokom seksualne aktivnosti, uretru koloniziraju potencijalne uropatogene bakterije. Sa hipotermijom, nervnim naprezanjem, dugotrajna upotreba Antibiotici uzrokuju upalu prostate, uzrokovanu oportunističkim bakterijama. Istovremeno, funkcije lokalnih zaštitnih faktora tijela su narušene.
Bolesnici s prostatitisom ili uretritisom uzrokovanim Corynebacterium glucuronolyticum žale se na bol u perineumu, skrotumu, penisu, pojačan na kraju mokrenja; disurični poremećaji: poliurija, nokturija, nepotpuno pražnjenje Bešika, slab mlaz; seksualna slabost - erektilna disfunkcija i ejakulacija.
Dijagnostičke mjere:- Palpacija prostate po rektumu - promjena veličine žlijezde, heterogena konzistencija, izmjena gustih i mekih područja, bolne senzacije.Na hemogramu - znaci upale.
- Bakteriološki pregled mokraće i sekreta prostate vrši se u mikrobiološkoj laboratoriji. Biomaterijal se zaseje na standardne podloge za primarnu identifikaciju, izrasle kolonije se mikroskopski ispituju, a zatim se proučava struktura, fiziologija, enzimska i biohemijska aktivnost izolovanog patogena. Corynebacterium glucuronolyticum dobro raste na krvnom agaru. Nakon 24 sata na njemu se pojavljuju konveksne kolonije bjelkasto-žućkaste nijanse bez zona hemolize.
- PCR dijagnostika - određivanje genetskog materijala korinebakterija u test uzorku.
Liječenje prostatitisa i uretritisa je antimikrobno. Pacijentima se propisuju fluorokinoloni, makrolidi i tetraciklini.
Corynebacterium glucuronolyticum je uzročnik bolesti urogenitalnog trakta kod muškaraca. Danas su infektivni prostatitis i uretritis prilično česta oboljenja i ozbiljan problem. medicinski problem. Specifične dijagnostičke metode i terapijski principi ostaju nedovoljno shvaćeni. Pacijenti, koji su "zaradili" takvu bolest, pate cijeli život. Samo efikasan antimikrobni tretman pomoći će im da se nose s patologijom.
Difteroidi su mikroorganizmi iz roda Corynebacterium koji su trenutno slabo poznati. To uključuje ovaj mikrob, koji ima drugo ime - Hoffmanov štapić. Njegova corynebacterium je dobila u čast svog otkrića.
Corynebacterium pseudodiphtheriticum
Difteroidi su sveprisutni: nalaze se u zraku, tlu, vodi i hrani. Mikrobi su otporni na faktore okoline - temperaturu, sunčevu svjetlost, vlažnost. Kloramin i druga dezinficijensa koja sadrže klor uništavaju ih za nekoliko minuta. Difteroidi žive u različitim biocenozama zdravog ljudskog tijela - u nazofarinksu, na koži, u uretri, genitalnim organima i spermi.
Znakovi koji razlikuju ovu vrstu od patogenih korinebakterija:
- Nedostatak volutina
- Haotičan raspored u razmazu,
- Masivan rast na jednostavnim hranljivim podlogama na 37 stepeni.
Corynebacterium pseudodiphtheriticum uzrokuje gnojno-upalne procese kada je makroorganizam oslabljen virusnim infekcijama, stresom, onkopatologijama, sekundarnom imunodeficijencijom. U ovom slučaju, bolest se ne razvija u uobičajenim staništima bakterija. Oni nisu sposobni za stvaranje toksina. Prodirući u krv, korinebakterije doprinose razvoju bakterijemije. Poznati slučajevi teški bronhitis i pneumonija na pozadini dugotrajne imunosupresije. Ovi mikrobi mogu uzrokovati endokarditis, limfadenitis, dermatološka oboljenja i infekcije urinarnog trakta.
U organizmu se razvijaju disbiotičke promjene s povećanjem broja difteroida do 10 u 5. ili 6. stepenu mikrobnih ćelija. U ovom slučaju javljaju se karakteristične kliničke manifestacije.
Liječenje bolesti uzrokovanih Corynebacterium pseudodiphtheriticum sastoji se u primjeni bakteriofaga, antibiotika, izvođenje plazmafereze i drugih metoda pročišćavanja krvi.
Ako su difteroidi izolovani iz krvi, cerebrospinalne tekućine, urina i drugih sterilnih supstrata, moraju se smatrati potencijalnim patogenima i provesti odgovarajuće liječenje. U mikrobiološkoj laboratoriji to se radi ispitivanjem osjetljivosti izolovanog mikroba na antibiotike.
Video: predavanje - korinebakterije, stadijumi infekcije difterije
Corynebacteria diphtheria
Rod Corynsbacterium uključuje uzročnik Corynebacterium diphtheriae i uslovno natogene corynebacteria. pseudodiphtheria corynebacteria C. pseudodiphtheriticum, C. xerosis i C. ulcerans koji žive u ljudskom tijelu.
Corynehactcrium diphtheriae je 1883. otkrio E. Klsbs. dodijelio je 1884. F. Leffler.
Morfologija, kulturološka, biohemijska svojstva. Corynebacteria diphtheria su tanke, blago zakrivljene gram-pozitivne šipke duge 1-5 µm, ne formiraju bićice, spore ili kapsule. karakteristika morfološke karakteristike od ovih bakterija: zadebljanja u obliku batine na krajevima, u kojima se nalaze zrna volutina, raspored štapića u razmazu jedan u odnosu na drugi, u obliku slova V. Zrna volutina se otkrivaju kada se boje Lefflerovo plavo (boje se intenzivnije od tijela bakterije) ili prema Psyseru (tijelo bakterije obojeno u žuta, voluta zrna - tamnoplava) (umetak u boji sl. 34).
Fakultativni anaerob. Optimalna temperatura za rast je 37°C, pH 7,6. Raste na posebnim hranljivim podlogama: na izbornoj podlozi - zgrušanoj surutki, na Claubergovoj podlozi. koji sadrži zgrušani serum i kalijum telurit. Ovisno o biološkim svojstvima razlikuju se biovari štapića difterije: štapići biovara gravisa formiraju velike sive kolonije sa nazubljenim rubovima, radijalne pruge, nalik na cvijet tratinčice na Claubergovoj podlozi; biovar mitis - male, crne, konveksne kolonije sa glatkim rubovima; intermedijer - kolonije srednjeg tipa. Najveću virulentnost ima tip gravis. Karakterističan je rast na koso naboranom serumu - čak i uz obilnu sjetvu, kontinuirani rast se ne formira, kolonije se ne spajaju, rast podsjeća na kaldrmu ili šagrenu.
Razlike u enzimskim svojstvima određene vrste corynebacteria se koristi u njihovoj diferencijaciji (tabela 10).
Antigeni. Prema O-atigenu, C. diphtheriae se dijeli na 11 serovara. Pagogeni faktori. Glavno svojstvo uzročnika difterije
Toksigenost. Egzotoksin bacila difterije izaziva lokalnu inflamatornu reakciju i opću intoksikaciju organizma sa oštećenjem nadbubrežnih žlijezda, miokarda i nervnog sistema. Postoje toksigeni i netoksični sojevi C. diphtheriae. Difteriju uzrokuju toksični sojevi. Sposobnost proizvodnje egzotoksina povezana je s prisustvom profaga u ćeliji koji nosi tox + gen odgovoran za sintezu toksina.
Jačina toksina se mjeri u Dim - najmanjoj količini toksina koja ubije zamorca teškog 250 g u roku od 3-4 dana. Toksin svih bacila difterije je isti antigenski, nema serotipova.
Osim toksina, korinebakterije difterije proizvode enzime: hijaluronidazu, neuraminidazu, fibrinolizin, koji osiguravaju njihovu distribuciju u tkivima, ali se bakterijemija klinički ne manifestira.
Održivost.Štapići protiv difterije otporni su na sušenje, na djelovanje niskih temperatura. Dolazeći sa pljuvačkom i filmovima na posuđe, dječje igračke se ovdje mogu čuvati dugo vremena. Osetljiv na dezinfekciona sredstva, odmah uginuti kada se prokuha.
Bolest kod ljudi. Izvor infekcije su bolesni ljudi i prenosioci. Glavni put prijenosa je zračni, moguć je i kontaktno-kućni - putem posuđa, igračaka. Bolesti se javljaju kod osoba koje nemaju antitoksični imunitet. Kod osoba sa antitoksičnim imunitetom, u nedostatku antimikrobnog imuniteta protiv korinebakterinske difterije, ovi patogeni se mogu razviti s lokalizacijom na sluznici ždrijela ili nosa.
Period inkubacije bolest 2-10 dana. Na mjestu primjene razvija se upala, formira se film difterije. Egzotoksin prodire u krv, razvija se toksinemija. Klinički oblici difterije: difterija ždrijela (85-90% svih slučajeva), nosa, larinksa, očiju, vanjskih genitalija, kože, rana itd.
Imunitet. Nakon bolesti ostaje stabilan antitoksični imunitet, ali ponovljeni slučajevi međutim, nivo antitoksina u krvi može se odrediti pomoću RNHA sa eritrocitnim diapyustikumom koji sadrži eritrocite sa adsorbiranim toksoidom difterije na njima.
Laboratorijska dijagnostika. Rana dijagnoza je neophodna za brzo liječenje. Materijal za istraživanje uzima se iz lezija sa dva sterilna pamučna štapića. U studiji za nošenje, sluz se uzima iz grla i iz nosa. Veoma je važno materijal odmah poslati u laboratoriju.
Jedan od briseva se koristi za kulturu, a od drugog se rade brisevi za mikroskopski pregled, ali to rijetko daje pozitivan rezultat. Glavna je bakteriološka studija - sjetva na ploču s hranljivim podlogom, proučavanje uzgojenih kolonija: razmazi, proučavanje morfologije, određivanje sadržaja toksina precipitacijom u agaru sa antitoksičnim serumom. Definicija vrste C. diphlheriae vrši se prema biohemijskim svojstvima. U rezultatima bakteriološko istraživanje naznačiti: "izolovana toksigena C. diphtheriae" ili "izolovana netoksična C. diphtheriae". Budući da učinkovitost liječenja ovisi o najranijem mogućem početku, koristi se ubrzana metoda za detekciju toksina difterije direktno u ispitivanom materijalu pomoću RIGA reakcije odlaganja. Princip reakcije: ispitivani materijal u različitim razrjeđenjima se dodaje određenoj količini antitoksičnog seruma, zatim se dodaje komplet za dijagnostiku eritrocita koji sadrži toksoid difterije. U kontroli (bez test materijala) antitoksični serum je pokazao reljefnu aglutinaciju eritrocita. Ako testni materijal sadrži toksin, on se spaja sa serumom i uzrokuje kašnjenje u PHHA.
Preventivni i kurativni preparati. Važan u prevenciji difterije je aktivna imunizacija, koji se sprovodi, počevši od navršenih tri meseca, vakcinom koja sadrži toksoid difterije: DPT, DTP. U budućnosti se revakcinacija provodi za djecu, a zatim i za odrasle. Kontraindikacije za vakcinaciju su vrlo ograničene.
Postoje vakcine sa smanjenim sadržajem antigena: DTP-m, ADS-m, AD-m. koristi se za imunizaciju osoba koje su kontraindikovane da prime punu dozu vakcine.
Za liječenje bolesnika najvažnija je rana specifična seroterapija antitoksičnim antidifterijskim serumom u dozama ovisno o lokalizaciji procesa. Serum se primjenjuje po Bezredk metodi. Istovremeno se provodi antibiotska terapija (benzilpenicilin, eritromicin, rifampicin itd.).
Sadržaj članka
Corynebacterium diphtheria
Prvi put opisao E. Klebs 1983., a izolovao F. Leffler 1984. godine.Morfologija i fiziologija
Korinebakterije difterije imaju oblik karakterističan za cijeli rod. Nalaze se pod uglom jedna prema drugoj u obliku rimskih petica. Volutinska zrna se detektuju bojenjem octenom plavom bojom po Neisser metodi, koja boji samo inkluzije bez uticaja na citoplazmu. Bacil difterije okružen je mikrokapsulom i ima pili. C. diphtheriae su zahtjevne za hranljivi supstrat. Potrebne su im mnoge aminokiseline, ugljikohidrati, mineralne soli. Obično se uzgajaju na zgrušanom krvnom serumu i na krvnom agaru sa kalijum teluritom. Na posljednjoj podlozi formiraju se kolonije dva tipa: gravis - tamno siva i mitis - crna, koje se međusobno razlikuju po biohemijskim karakteristikama.Antigeni
C. diphtheriae sadrži K-antigen u mikrokapsuli, što im omogućava da se diferenciraju u serovare i grupno-specifičan polisaharidni antigen ćelijskog zida, koji daje poprečne veze. serološke reakcije sa mikobakterijama i nokardijom. Patogenost i patogeneza. Faktori virulencije bakterija difterije su pili i mikrokapsula, uz pomoć kojih se pričvršćuju za epiteliocite krajnika, rjeđe larinksa, dušnika, nosne šupljine, konjuktive oka i vulve. Tada dolazi do kolonizacije epitelnih ćelija, što je praćeno pojavom upalni proces. Toksičnost je povezana sa izlučivanjem histotoksina, koji se sastoji od dvije podjedinice: toksičnog polipeptida i transportnog polipeptida odgovornog za isporuku toksične komponente do ciljnih stanica. Formiranje prvog kontroliraju bakterijski geni, drugog - geni faga koji je lizogenizirao bakterijsku stanicu. Ovo ukazuje da samo lizogene ćelije C. diphtheriae mogu lučiti histotoksin.Fiksacija histotoksina se dešava na receptorima membrana mišićnih ćelija srca, srčanog parenhima, bubrega, nadbubrežnih žlezda i nervnih ganglija. Istovremeno, sinteza proteina na ribosomima je blokirana, što na kraju dovodi do smrti ćelije. Kod difterije, u pravilu, nema bakterijemije i septikemije zbog lokalizacije C. diphtheriae u stanicama larinksa, gdje se razvija fibrinozno-nekrotična upala sa stvaranjem filmova, limfadenitisom i edemom, što može dovesti do gušenja. Osim difterije larinksa, C. diphtheriae uzrokuje difteriju površina rana i genitalnih organa. Korinebakterije slične difteriji uključuju sljedeće: C. xerosis izaziva hronični konjuktivitis, C. ulcerans - blage oblike bolesti sličnih difteriji, C. pyogenes i C. haemolyticum - ulcerozno-nekrotični faringitis, tonzilitis, gingivostomatitis. C. pseudodyphtheriae je stalni stanovnik kože i sluzokože.Imunitet
Intenzitet postinfektivnog imuniteta kod difterije je posljedica visokog nivoa antitoksina u krvnom serumu. Antibakterijska antitela nastala tokom difterije – aglutinini, precipitini i druga – nemaju zaštitna svojstva. Prisustvo ili odsustvo antitoksičnog imuniteta procjenjuje se prema Shik reakciji - neutralizaciji toksina antitoksinom. Unošenjem V40 DLM toksina difterije u kožu podlaktice javlja se crvenilo i otok u odsustvu antitoksina u krvi. U prisustvu antitoksina, Schick test je negativan.Ekologija i epidemiologija
Stanište za C. diphtheriae su ljudi u čijem se grlu nalaze. Djeca su najosjetljivija na difteriju. Međutim, u proteklih 30 godina difterija je "narasla". Kod odraslih je difterija teška i može biti fatalna. U okolišu bakterije difterije ostaju održive nekoliko dana jer podnose isušivanje. Infekcija se javlja kapljicama u zraku i rjeđe kontaktom.Difterija
Difterija - akutna, pretežno djetinjasta infekciona zaraza, koji se manifestuje karakterističnom fibrinoznom upalom na mjestu patogena i teška intoksikacija egzotoksin difterije organizma. Njegov uzročnik je Corynebacterium diphtheriae, koja pripada rodu Corynebacterium. Ovaj rod uključuje još oko 20 vrsta bakterija koje su patogene za ljude, životinje i biljke. Od njih najveća vrijednost za praktičnu medicinu imaju sljedeće: 1. C. ulcerans - može izazvati faringitis, lezije kože, otkriva se i kod zdravih ljudi, u mliječnim proizvodima i posudama za njihov transport, neki sojevi su toksični.2. C. jeikeium (ranije Corynebacterium JK) - izaziva upalu pluća, endokarditis, peritonitis, inficira rane, kožu.3. C. cistitidis (ranije Corynebacterium grupa D2) - pokreće stvaranje kamenaca u urinarnog trakta i pneumonija.4. C. minutissimum - izaziva eritrazmu, plućne apscese, endokarditis.5. C. haemolyticum - može izazvati tonzilitis, celulitis, moždane apscese, osteomijelitis, hronični dermatitis.6. C. kseroza - nekada se smatrala uzročnikom kseroze (hronični konjuktivitis), sada se naziva saprofiti.7. C. pseudodiphtheriticum je saprofit koji živi na mukoznoj membrani ljudskog nazofarinksa.Prikupljanje i dostava materijala u laboratoriju
Materijal za studiju je film iz krajnika, lukova, nepca, jezika, sluzi iz grla i nosa, rjeđe iscjedak iz oka, ušiju, rana, vagine i zahvaćenog područja kože. Na zahtjev epidemiologa, pregledaju se brisevi sa igračaka i drugih predmeta, nekih prehrambenih proizvoda (mlijeko, sladoled). Materijal se uzima prije početka etiotropnog tretmana na prazan želudac ili 2 sata nakon obroka.Za uzimanje materijala koriste se brisevi, suvi ili prethodno navlaženi 5% otopinom glicerola, stavljaju se u epruvetu i steriliziraju. sa tim. Ispitani materijal se uzima iz orofarinksa i nosa sa dva odvojena tampona, nastojeći da se rotacionim pokretima uzme na granicu zdravog i zahvaćenog područja, a da se tampon ne dodiruje sluzokožom obraza, zuba i jezika, što je pritisnuti lopaticom. Laringoskopijom se direktno iz larinksa uzima film ili sluz. Filmovi i sluz iz usta i nosa moraju se uzeti u svim slučajevima, čak i kod difterije rijetkih lokalizacija (koža, rana, oko, uho, vulva).film pažljivo samljeven između dva stakalca.Nakon uzimanja materijala stavljaju se brisevi u istim epruvetama, na kojima su upisani broj, datum i vrijeme uzimanja uzorka i ime ljekara. Moraju se dostaviti u laboratoriju najkasnije 3 sata nakon uzimanja materijala. Ako shema uzorkovanja predviđa zauzetost uz pacijentov krevet, tada se epruvete i čaše s inokulacijama odmah šalju u laboratorij ili se inkubiraju na 37 °C i isporučuju nakon 20-23 sata, po hladnom vremenu, u vrećicama s jastučićima za grijanje.Bakterioskopski pregled
Bakterioskopski pregled materijala od pacijenta vrši se samo na zahtjev liječnika i to samo u cilju prepoznavanja nekrotične angine Simanovsky-Plaut-Vincent (identifikacija vretenastih štapića i Vincentovih spiroheta, koje ne rastu konvencionalnim metodama uzgoja). Dugogodišnji mikroskopski pregled i identifikacija zrna volutina, obojenih po metodama Lefflera i Neissera, bila je osnova za laboratorijsku dijagnostiku difterije i otkrivanje bakterionosioca. Sada, zbog varijabilnosti bakterija difterije pod uticajem antibiotika, ne preporučuje se primarna mikroskopija test materijala. Razmazi se boje prema Gramu, Loeffleru i Neisseru. Možete ih farbati sirćetnom kiselinom metil ljubičastom, toluidin plavom ili bentiazol i tiazinskim bojama.Bacili difterije u razmazima se nalaze pod uglom, u obliku latiničnih slova V, X, Y, ili formiraju grozdove nalik na gomilu razbacanih šibica. Zrna volutina nalaze se, po pravilu, na polovima mikrobnih ćelija. Bakterije pseudo-difterije i difteroidi su postavljeni paralelno (u obliku "palisade") i, naravno, nemaju zrna volutina. Babesh-Ernst zrna se mogu otkriti pomoću fluorescentne mikroskopije kada se mrlje boje korifosfinom. Zrna dobijaju narandžasto-crvenu boju na pozadini žuto-zelenih tela bakterijskih ćelija.Bakteriološka istraživanja
Klinički materijal se zaseje na krvni agar i krvno-teluritni agar (ili Clauberg II medijum) koji se sipa u Petrijeve posude. Kultura krvnog agara neophodna je za otkrivanje druge mikroflore. Osim toga, neki sojevi Cdiphtheriae su osjetljivi na djelovanje kalijevog telurita, pa se njihov rast na teluritnoj podlozi može suzbiti. Da bi se otkrio nosilac bakterije difterije, inokulacije se rade samo na krvno-teluritnom agaru, jer inokulum možda ne sadrži veliki broj bacili difterije, čiji će rast na neselektivnim podlogama biti potisnut od strane druge mikroflore. U tom slučaju je dozvoljena i upotreba transportnog medija.Telurin krvni agar
U 100 ml 2% rastopljenog i ohlađenog na 50°C hranljivog agara, pH 7,6, dodati 10-15 ml defibrinisane krvi i 2 ml 2% rastvora kalijum telurita. Smjesa se dobro promiješa i sipa u sterilne Petrijeve zdjelice u sloju debljine 3-4 mm.srijeda Clauberg II
U 100 ml 3% hranljivog agara pH 7,6, rastopljenog i ohlađenog na 50°C, dodati 3 ml 2% rastvora kalijum telurita, 10 ml mešavine glicerola i 50 ml hemolizovane krvi. Glicerinska smjesa se priprema dodavanjem 20 ml sterilnog glicerola u 40 ml defibrinirane krvi. Smjesa se može čuvati u frižideru do 4 mjeseca. Za pripremu hemolizirane ("lakirane") krvi, 16 ml defibrinirane krvi dodaje se u 34 ml sterilne destilovane vode.Transportni polutečni medij
1 g bilo kojeg komercijalnog agara dodaje se u 100 ml Hottinger digesta ili mesnog peptona bujona, podešenog na pH 7,6, steriliziranog u autoklavu na 112 °C 30 minuta, doda se 10 ml seruma i 1 ml 2% kalijevog telurita. dodano aseptično. Medij se sipa u epruvete od 5 ml. Ako je moguće, koristi se i složeniji Ames transportni medijum (AMIES) modifikovan po Stuartu.Sjetva od jednog pacijenta se vrši na jednu čašicu, koristeći polovinu podloge za setvu iz orofarinksa (krajnici, lukovi, uvula), a drugo - za setvu drugim briskom iz nosa. Ako postoji materijal za proučavanje kože, očiju, ušiju i drugih lokalizacija, dodajte još jednu šalicu. Nemoguće je sijati materijal od nekoliko pacijenata na jednu šolju. Podloge se prije sjetve zagriju u termostatu 15-20 minuta.Prilikom sjetve ispitni materijal utrljajte ga tamponom najprije u posebno mjesto krvnog agara površine2x1 cm, zatim slično na krvno-teluritnom agaru (ili Clauberg II mediju), dok se bris cijelo vrijeme okreće kako bi se iz njega posijao sav materijal. Zatim se istim tamponom inokuliraju preostale površine podloge (pola čaše). Ova tehnika inokulacije proizvodi izolirane kolonije (čiste kulture) koje se koriste direktno sa ploče za toksičnost i naknadnu identifikaciju. Inokulisane posude ili epruvete sa transportnim medijumom inkubiraju se u termostatu na 37 ° C 20-24 sata.Drugog dana se stereoskopskim mikroskopom ispituje priroda kolonija. Ako rast izostane na oba podloga, materijal se ponovo uzorkuje.Odabiru se ploče sa tipičnim i sumnjivim kolonijama C. diphtheriae za dalju identifikaciju kulture u svim testovima. Mikroskopiranje sumnjivih kolonija se može izostaviti.Kolonije bacila difterije na krvnom agaru su bjelkaste ili žućkaste, neprozirne, okrugle, blago konveksne, prečnika 1-2 mm. Obično imaju masnu konzistenciju, mada neke mogu formirati krhke, tvrde R-kolonije.Na KonomiC.diphtheriae krvno-teluritnoj podlozi, nakon 24 sata rasta, sive su, konveksne, glatke ivice, viskozne. Nakon 48 sati postaju tamno sive ili crne s metalnim odsjajem, jednakih ili blago nazubljenih ivica, glatke ili radijalno napregnute površine (R-oblik), viskozne ili lomljive kada ih dodirne petlja. Prema strukturi 48- sat kolonije na teluritnoj podlozi i Neke enzimske karakteristike uzročnika difterije razlikuju četiri kulturološke i biohemijske varijante (biovari) - gravis, mitis, belfanti, intermedius. Biovar gravis obično formira sive ili crne mat suhe kolonije, lomljive, ravne, glatke, prečnika 1,5-2 mm, radijalno napregnute površine, vrlo je toksičan, ne izaziva hemolizu, razgrađuje škrob i glikogen. Biovars mitis i belfanti rastu. u obliku sivih ili crnih, okruglih glatkih konveksnih kolonija sa ravnim ivicama, 1-1,5 mm u prečniku, ove opcije su manje toksične, izazivaju hemolizu, ali ne razgrađuju skrob i glikogen.Biovar intermedius formira male, sive, prozirne kolonije prečnika 0,5-1 mm, ravne glatke površine, blago je toksičan, ne razgrađuje škrob i glikogen.Ako izostane tipičan rast, pripremaju se brisevi iz drugih, sumnjivih kolonija. Ako se u njima nađu štapići spora, kokice, gljivice itd., studije o difteriji se prekidaju i daju negativan odgovor. Međutim, važno je imati na umu da se bakterije difterije koje su formirale atipične kolonije na podlogama s inhibitorima rasta (kalijev telurit) mogu skratiti, zgusnuti, ali zadržati polimorfizam i karakterističan položaj.Kada tipične kolonije rastu, odmah počinju proučavati svoju toksičnost i identifikaciju. Toksigena svojstva se ispituju u najmanje 2 izolirane kolonije inokulacijom jedne polovice svake kolonije na podlogu kako bi se utvrdila toksičnost i ne spaljivana petljom na podlozi Pisu, a druga polovina na kosom serum agaru kako bi se izolirala čista kultura i sačuvala je do kraj laboratorijske dijagnostike. U slučaju da na posudi rastu i toksigene i netoksične sorte C. diphtheriae, potrebno je, uz višestruki rast sumnjivih kolonija, istražiti toksigena svojstva oko 20 kolonija, inokulirajući materijal iz 5-6 kolonija u jednu. plaketa. Uz rast samo jedne kolonije, zaseje se na podlogu za određivanje toksigenosti i kalcinacijom petlje u epruvetu sa Pisu medijumom u agar gelu i pozitivnim cistinaznim testom, izolovana kultura je utvrđena kao toksična C. difterije. Ako nakon 24 sata nema linija padavina, ploče se inkubiraju još jedan dan. U slučaju negativnog Pisa testa, kultura se identifikuje kao vrsta korinebakterije.Čista kultura na kosom serum agaru se sije na ugljikovodične podloge s glukozom, saharozom, rastvorljivim škrobom, uzimaju se uzorci za detekciju ureaze, pirazinamidaze i nitrat reduktaze . Četvrtog dana se bilježe rezultati svih inokulacija i daje obrazložen bakteriološki zaključak o izolovanoj kulturi.Takve metode identifikacije korinebakterija se koriste.Određivanje toksičnosti in vitro
Zasniva se na interakciji toksina sa antitoksinom u agar gelu. Na mjestima optimalnog kvantitativnog omjera toksina i antitoksina u debljini agara precipitat se taloži u obliku tankih nježnih bijelih linija ("strelice", "antene"). Ovaj test se u mnogim zemljama u inostranstvu naziva Elek-test.Test toksičnosti se obično izvodi sa čistim kulturama. Može se odrediti i kulturama kontaminiranim stranom mikroflorom, ubrzava se dnevno laboratorijska dijagnostika difterija. Ali u slučaju negativnog testa, ponavlja se sa izolovanom čistom kulturom.Za postavljanje ovog testa, mikrobiološka industrija proizvodi poseban suvi standardni medij za određivanje toksičnosti mikroba difterije (VTDM) i standardne papirne diskove natopljene antitoksičnim antidifterijskim serum i osušene Papirni diskovi se nanose na površinu svježe pripremljene VTDM podloge sa antitoksinom (ne više od četiri po čašici). Na udaljenosti od 0,5 cm od diska oko njega se sije kulture u obliku "plakova" prečnika 7-8 mm, naizmjenično "plakova" proučavane kulture i kontrolnog soja. Rezultati se uzimaju u obzir. nakon 18-24 i 48 godina. Kriterijum za specifičnost precipitata je fuzija taložnih linija proučavane kulture sa linijama toksigenog soja. U ovom slučaju, izolirana kultura se smatra toksigenom.U nedostatku standardnih papirnih diskova, mogu se koristiti trake filter papira impregnirane antitoksinom difterije. izrađuju se direktno u laboratoriji. Papirne trake izrezane na željenu veličinu i autoklavirane na 121°C 30 minuta navlaže se sa 0,25 ml pročišćenog antitoksina difterije, koji sadrži 500 IU po ml. U tom slučaju, traka papira navlažena antitoksinom nanosi se na čašu sa odgovarajućom podlogom, suši otvaranjem čaše 15-20 minuta u termostatu i okretanjem naopačke. Nakon toga, na obje strane trake, kulture se inokuliraju „plakovima“, naizmjenično test i kontrolni sojevi. bakteriološka dijagnostika difterije", Kijev (1999.). Toksigenost bakterija difterije određivana je supkutano ili intradermalno uvođenjem kulture u dva zamorca, od kojih je jednom dan ranije ubrizgano 100-1000 IU antitoksičnog seruma protiv difterije. ova metoda se gotovo nikada ne koristi u bakteriološkim laboratorijama zbog vrlo osjetljive i vrlo specifične metode za određivanje gena toksina difterije lančanom reakcijom polimerizacije nedavno je razvijena definicija toksigenosti: visoka osjetljivost, brzina dobijanja rezultata (4-6 h), ne zahteva izolaciju čiste kulture. Ali njegova implementacija zahtijeva posebnu opremu, skupe reagense i odgovarajuću prostoriju, te se stoga može izvesti samo u specijaliziranoj laboratoriji. Svi netoksični sojevi bakterija difterije izolovani od pacijenata i nosilaca bakterija moraju se poslati u ukrajinski centar za državni sanitarni i epidemiološki nadzor (gdje postoji takva laboratorija) radi konačnog određivanja toksigenih svojstava C. diphtheriae.Određivanje cistinaze (Piso test)
C. diphtheriae, C. ulcerans luče enzim cistinazu, proizvode ga bakterije pseudodifterije i drugi difteroidi.Izolovana kultura se inokulira injekcijom u podlogu sa cistinom, sipa se u koloni u uske epruvete. Cistin-pozitivne bakterije razgrađuju cistin oslobađanjem sumporovodika, koji s olovnim acetatom, koji ulazi u medij, stvara olovni sulfat, uslijed čega medij postaje tamni. Smeđa boja. C. diphtheriae uzrokuje ne samo potamnjenje podloge nakon bockanja, već formira tamnosmeđi "oblak" oko njega na udaljenosti od 1 cm od površine. Rezultati se uzimaju u obzir nakon 20-24 sata inkubacije u termostatu.Određivanje ureaze (Sachse test)
Bakterije difterije ne stvaraju ovaj enzim. Samo neke druge vrste korinebakterija daju pozitivan test na ureazu. Za postavljanje uzorka, izolirana kultura se sije u bujon s ureom. Ureaza razgrađuje ureu, mijenja pH podloge, praćeno njenim crvenilom. Ako se enzim ne oslobodi, nema promjene u boji čorbe.Određivanje pirazinamidaze
Određivanje pirazinamidaze se vrši hidrolizom pirazinamida do pirazinske kiseline i amonijaka. Za to se 0,25 ml sterilne destilovane vode ulije u sterilnu epruvetu, u kojoj se priprema gusta suspenzija izolirane kulture, zatim se dodaje jedna dijagnostička tableta Rosko 598-21. Inkubirajte 4 sata na 37°C, nakon čega dodajte jednu kap svježe pripremljenog 5% vodeni rastvor amonijum gvožđe sulfat. U prisustvu enzima, suspenzija postaje crvena ili narandžasta. Patogene korinebakterije ne luče pirazinamidazu i stoga ne mijenjaju boju suspenzije.Saharolitički enzimi
Saharolitički enzimi se određuju inokulacijom kompletne petlje izolovane kulture u svaku epruvetu skraćenog šarenog Hiss reda (glukoza, saharoza, rastvorljivi škrob). Rezultati se uzimaju u obzir nakon 24 sata inkubacije u termostatu. Razgradnja škroba može biti odložena do 48 sati.Određivanje nitrat reduktaze
Definicija nitrat reduktaze je dodatni test za identifikaciju C. belfanti i C. ulcerans koji ne formiraju ovaj enzim. U epruvetu sa bujonom, u koju je dodat 0,1% KN03, test kultura se inokuliše, inkubira u termostatu jedan dan. Obavezna kontrola sa neinokulisanom podlogom. U slučaju prisustva nitrat reduktaze, kada se 3 kapi Kasatkinovog reagensa dodaju u zasijanu juhu, pojavljuje se crvena boja. Podloga u kontrolnoj epruveti ne menja boju.Od nedavno se koriste papirni indikatorski diskovi sa glukozom, saharozom, ureom i skrobom iz "B" seta za identifikaciju korinebakterija za identifikaciju enterobakterija (firma "ImBio", Nižnji Novgorod). U 4 epruvete priprema se gusta suspenzija ispitivane kulture i u svaku se uroni disk s odgovarajućim ugljikohidratom ili drugim reagensom. Nakon inkubacije u termostatu, oslobađanje ureaze se bilježi nakon 40-120 minuta, a saharolitička aktivnost se utvrđuje nakon 5-24 sata. U prisustvu ureaze, bijeli disk s ureom postaje ružičasto-grimiz, u nedostatku ostaje bijel. Diskovi sa glukozom i saharozom u prisustvu odgovarajućih enzima mijenjaju boju iz crvene u žutu nakon 5-6 sati. Prilikom određivanja amilaze u epruvetu sa odgovarajućim supstratom dodaje se indikatorski disk sa jodom. Ako nema enzima, pojavljuje se tamnoplava boja; ako postoji, boja otopine ostaje nepromijenjena.Specifična prevencija i liječenje
Vakcinacija protiv difterije se provodi unošenjem difterijskog toksoida dobivenog preradom toksina difterije formalinom. Kod nas se za vakcinaciju koristi DTP - adsorbovana vakcina protiv pertusisa-difterije-tetanusa. Antitoksični serum koristi se za specifičnu terapiju, a antibiotici - za saniranje nosilaca bakterija. Od antibiotika koriste se penicilin, vankomicin, eritromicin itd.Pitanje 2. Corynebacterium diphtheria Corynebacterium diphtheriae (rod Corynebacterium)
C. diphtheriae - bakterije u obliku štapa; uzrokovati difteriju (grč. diphtheria - koža, film) - akutna infekcija koju karakterizira fibrinozna upala u ždrijelu, larinksu, rjeđe u drugim organima, te pojave intoksikacije.
Morfološka i kulturna svojstva.
Corinebacterium diphteriae su tanke, blago zakrivljene ili ravne gram-pozitivne šipke raspoređene pod uglom jedna prema drugoj u obliku rimskih petica. Na krajevima su zadebljani zbog prisustva zrna. valuta na jednom ili oba pola ćelije. Zrna valute se sastoje od polifosfata, intenzivnije percipiraju anilinske boje od citoplazme ćelije i lako se detektuju kada se boje po Neiseru u obliku plavo-crnih granula, dok su tijela bakterija obojena žuto-zelenom bojom. Kada se boje po Gramu, zrna valute se ne detektuju.
Crtanje brisa iz čiste kulture. Neisser mrlja Razmaz iz čiste kulture.
Obojen Lefflerovom alkalno plavom bojom
Bacil difterije nema otpornost na kiselinu, nepokretan je, ne stvara spore, ima mikrokapsulu sa faktorom vrpce uključenim u njegov sastav. Sastav ćelijskog zida uključuje galaktozu, manozu, arabinozu, kao i veliki broj lipida, uključujući mikolne kiseline koje nisu otporne na kiseline.
Uzročnik difterije je fakultativni anaerob, heterotrof, koji raste na 37 °C na složenim hranjivim podlogama: zgrušani krvni serum, teluritni krvni agar.
Na elektivnim podlogama, nakon 8-14 sati, formira tačkaste, konveksne žućkasto-krem kolonije sa glatkom ili blago zrnatom površinom. Kolonije se ne spajaju i imaju izgled šagrene kože.
Na teluritnom mediju, uzročnik difterije formira crne ili crno-sive kolonije nakon 24-48 sati kao rezultat redukcije telurita u metalni telur.
Uzročnik difterije ima visoku enzimsku aktivnost. Diferencijalna dijagnostička svojstva C. diphteriae su:
nedostatak sposobnosti fermentacije saharoze i razgradnje uree,
sposobnost proizvodnje enzima cistinaze.
Uzročnik difterije nije homogen u kulturi i biohemijska svojstva. U skladu sa preporukama Regionalne kancelarije SZO za Evropu, C. diphteriae se deli na 4 biovara: gravis, mitis, intermedius, belfanti.
Na teluritnom srednjem biovar gravis formira suhe, neprozirne, velike, ravne, sivkasto-crne kolonije, izdignute u sredini. Periferija kolonije je svijetla sa radijalnim prugama i neravnim rubom. Takve kolonije podsjećaju na cvijet tratinčice. Biovar mitis formira male, glatke, sjajne, crne, konveksne kolonije sa glatkim rubom, okružene zonom hemolize. Biovari intermedius i belfanti zapravo pripadaju biovaru mitis, jer ne razgrađuju škrob, a ova osobina je najstabilnija kod C. diphteriae.
Antigenska struktura. C. diphteriae ima O-antigen (lipidne i polisaharidne frakcije koje se nalaze duboko u ćelijskom zidu) i K-antigen (površinski termolabilni protein). O antigen je unakrsna vrsta. Na osnovu K-antigena razlikuje se oko 58 serovara.
faktori patogenosti. Glavni faktori patogenosti C. diphteriae su površinske strukture, enzimi i toksini.
Površinske strukture (pio, komponente mikrokapsula: faktor vrpce, K-antigen, mikolne kiseline) imaju proteinsku i lipidnu prirodu, pospješuju adheziju mikroba na ulaznim vratima, sprječavaju fagocitozu bakterija, imaju toksični učinak na ćelije makroorganizma i uništavaju mitohondrije.
Enzimi patogenosti: neuraminidaza, hijaluronidaza, hemolizin, dermonekrotoksin. Neuraminidaza cijepa N-acetilneuraminsku kiselinu od glikoproteina sluzi i staničnih površina, lyase dijeli ga na piruvat i N-acetilmannozamin, i piruvat stimuliše rast bakterija. Kao rezultat akcije hijaluronidaza povećava propusnost krvnih sudova i oslobađanje plazme preko njihovih granica, što dovodi do oticanja okolnih tkiva. Dermonekrotoksin uzrokuje nekrozu stanica na mjestu patogena. Fibrinogen plazme koji je prešao granice krvnih žila dolazi u kontakt sa trombokinazom nekrotičnih ćelija organizma i pretvara se u fibrin, što je suština upale difterije. Unutar filma difterije, C. diphtheriae pronalazi zaštitu od efektora imunog sistema i antibiotika, umnožavajući se, formiraju se u velikom broju glavni faktor patogenosti -histotoksin difterije.
Histotoksin difterije ima blokirajuće dejstvo na sintezu proteina u organima koji se najintenzivnije snabdevaju krvlju: kardiovaskularni sistem, miokard, nervni sistem, bubrezi i nadbubrežne žlijezde.
Epidemiologija. U prirodnim uslovima od difterije boluje samo osoba koja nema otpornost na patogen i antitoksični imunitet. Bolest je sveprisutna. Najveći broj oboljelih zabilježen je u drugoj polovini septembra, oktobru i novembru. Najosjetljivija su djeca predškolskog i osnovnoškolskog uzrasta. Među odraslim osobama u rizičnu grupu spadaju radnici u javnom ugostiteljstvu i trgovini, školama, predškolskim i zdravstvenim ustanovama.
C. diphteriae je otporna na faktore okoline: u kapljicama pljuvačke zalijepljenim za posuđe ili igračke, na kvakama na vratima, mogu opstati do 15 dana, na objektima okoline - 5,5 mjeseci, a mogu se razmnožavati u mlijeku. Kod ključanja C. diphteriae umire u roku od 1 min, u 10% rastvoru vodonik peroksida - nakon 3 min, u 5% rastvoru karbonske kiseline i 50-60% alkohola - nakon 1 min.
Histotoksin difterije je vrlo nestabilan i brzo se uništava svjetlom, toplinom i oksidacijom.
Patogeneza.
izvor infekcije su:
1. nosioci toksigenih sojeva - posebno su opasni oni nosioci koji nemaju kliničke manifestacije bolesti, jer imaju antitoksični imunitet.
2. Bolesnici: Među pacijentima najveći značaj imaju osobe sa lokalizacijom procesa u gornjim disajnim putevima. Pacijent je epidemiološki opasan tokom čitavog perioda bolesti, čak i tokom perioda oporavka, ispušta toksične sojeve u okolinu.
Main mehanizam infekcije je aerosol. Putevi prijenosa:
vodeća uloga pripada vazduhoplovstvu,
ponekad se mogu sprovesti vazdušno-prašinski, kontaktno-domaćinski, a takođe i prehrambeni (preko mleka) putevi prenosa.
ulazna kapija infekcije su sluznice orofarinksa (nepčani krajnici i okolno tkivo), nosa, grkljana, dušnika, kao i sluzokože očiju i genitalnih organa, oštećena koža, površina rane ili opekotine, nezacijeljena pupčana rana.
Najčešće difterija ždrijela ( 90-95%). Period inkubacije traje od 2 do 10 dana. Patogeneza difterije je infekcije toksinima kada mikrob ostane na ulaznim vratima infekcije, i sve kliničke manifestacije povezane su s djelovanjem egzotoksina.
Početna faza infektivnog procesa je adhezija mikroba na mjestu ulazne kapije. Reproducirajući se tamo, mikrob oslobađa g istotoksin, koji ima lokalni učinak na ćelije tkiva, a također ulazi u krvotok, što dovodi do toksinemije.
U području ulaznih kapija razvija se upalna reakcija, koja je praćena nekrozom epitelnih stanica i edemom, formira se bijeli plak sa sivkastom ili žućkastom nijansom, koji sadrži veliki broj mikroba koji proizvode toksin.
Obilježje difterije je fibrinozni film:
Ako se formira sluzokoža jednoslojni epitel(larinks, dušnik, bronhi). lobarna upala, ovdje se film nalazi površno i lako se odvaja od tkiva ispod.
Ako se formira sluzokoža slojevit epitel(orofarinks, epiglotis, glasne žice). difterija kada su sve ćelije čvrsto povezane jedna s drugom i za podlogu vezivnog tkiva. Fibrinozni film je u ovom slučaju čvrsto zalemljen za osnovna tkiva i ne uklanja se tamponom. Kada to pokušate, sluzokoža krvari.
Imunitet. Nakon bolesti formira se stabilan i intenzivan humoralni antitoksični imunitet. Trajanje imuniteta nakon vakcinacije je 3-5 godina.
Mikrobiološka dijagnostika.
Materijal za istraživanje je fibrinozni film, sluz iz grla ili nosa.
Prikupljanje materijala mora se obaviti u roku od 3-4 sata (najkasnije 12 sati) od trenutka kontakta pacijenta. Za uzimanje materijala koriste se suhi pamučni štapići, ako se sjetva izvrši u roku od 2-3 sata, pri transportu materijala brisevi se navlaže 5% otopinom glicerina.
Dijagnostičke metode:
Glavna dijagnostička metoda je bakteriološki. bakteriološka laboratorija nakon 48 sati treba dati odgovor o prisustvu ili odsustvu C. diphteriae u analizama.
Materijal se sije na hranljivi medij. Odabiru se sumnjive kolonije i identificira se izolirana kultura:
Prema prisustvu cistinaze (Pisoux test): test kultura se inokulira u kolonu hranljivog agara sa cistinom. Kulture se inkubiraju na 37° C 24 sata C. diphteriae uzrokuje da podloga pocrni tokom injekcije zbog stvaranja olovnog sulfida.
Prema prisustvu ureaze (Sachs test): pripremaju se alkoholni rastvor uree i rastvor indikatora - fenol crveno, koji se pre upotrebe pomešaju u odnosu 1:9 i sipaju u epruvete za aglutinaciju. Proučene bakterije se uvode u petlju i trljaju po zidu uredjaja. U pozitivnom slučaju, nakon 20-30 minuta inkubacije na 37°C, podloga postaje crvena kao rezultat cijepanja uree ureazom.
Sposobnost C. diphteriae da proizvodi toksin (utvrđena testom precipitacije na agaru). Da bi se to učinilo, traka filter papira impregnirana antitoksičnim serumom protiv difterije koji sadrži 5000 AJ/ml stavlja se u Petrijevu posudu s hranjivim agarom koji sadrži 15-20% konjskog seruma, 0,3% maltoze i 0,03% cistina. Čaša se suši na 37 0 C 30 minuta i test sojevi se inokuliraju plakovima na udaljenosti od 0,6-0,8 cm od ruba papira. Inokulacije se inkubiraju na 37 0 C tokom 24 sata.U pozitivnom slučaju nastaje talog u mediju u obliku bijelih linija - "antena" na spoju toksina sa antitoksinom.
Za određivanje toksičnosti uzročnika difterije može se koristiti biotest. Zamorcu se intradermalno ili supkutano ubrizgava test kultura. Toksigene kulture ubijaju životinje u roku od 3-5 dana, hiperemične nadbubrežne žlijezde nalaze se na obdukciji, a nekroza kože u slučaju intradermalne infekcije.
Za bakterioskopski pregled(kao samostalna dijagnostička metoda, rijetko se koristi zbog polimorfizma patogena, ali se može izvesti na zahtjev liječnika) od materijala se pripremaju razmazi na više stakala, jedan bris se boji po Gramu, drugi po Neiseru, treći se tretira fluorohromom - korifosfinom za luminescentnu mikroskopiju.
Prisutnost antitoksičnog imuniteta procjenjuje se po Schick reakciji - reakciji neutralizacije toksina antitoksinom. 1/40 DLM toksina difterije se ubrizgava u kožu podlaktice. Crvenilo i otok na mjestu uboda ukazuje na odsustvo antitoksina u krvi. Negativan Schick test ukazuje na prisustvo antitoksina.
Za ubrzano otkrivanje toksina difterije, kako u bakterijskim kulturama tako i u krvnom serumu, primijeniti: RNGA sa dijagnostikom eritrocita antitijela, RIA i ELISA. Od korištenih metoda molekularnog genetičkog istraživanja PCR.
Preparati za specifično liječenje difterije.
Kako bi se neutralizirao histotoksin difterije, specifični konjski pročišćeni koncentrirani serum protiv difterije, koji se dobija hiperimunizacijom konja antitoksinom difterije.
Specifično liječenje serumom protiv difterije počinje odmah kada se klinički sumnja na difteriju. Neophodno je odabrati optimalan način primjene seruma, jer antitoksin može neutralizirati samo toksin koji nije povezan s tkivima. Da bi se spriječio razvoj anafilaktičkog šoka, serum se primjenjuje frakciono prema A.M. Bezredke. Uvođenje seruma kasnije od 3. dana bolesti je nepraktično.
Dizajnirano humani imunoglobulin protiv difterije za intravensku primenu. Njegova upotreba daje manje nuspojava.
Da bi se suzbila reprodukcija C. diphteriae na mjestu ulazne kapije, antibiotici su obavezni. Lijekovi izbora su penicilin ili eritromicin, ili drugi β-laktami i makrolidi.
Pripreme za specifična prevencija difterija.
Za stvaranje umjetnog aktivnog antitoksičnog imuniteta, primijeniti toksoid difterije. Pročišćeni i koncentrirani lijek dio je povezanih vakcina:
1. adsorbovana vakcina protiv pertusisa-difterije-tetanusa (DTP vakcina),
2. adsorbirani toksoid difterije-tetanusa (ADS-toksoid),
3. adsorbovani toksoid difterije-tetanusa sa smanjenim sadržajem antigena (ADS-M),
4. adsorbovani toksoid difterije sa smanjenim sadržajem antigena (AD-M).
Kod djece se stvara osnovni imunitet prema rasporedu vakcinacije. Samo 95% pokrivenosti stanovništva vakcinacijom garantuje efikasnost vakcinacije.
Rod Corynebacterium .
Uzročnik difterije je Corynebacterium diphtheriae i velika grupa sličnih po morfološkim i biohemijskim svojstvima mikroorganizama iz roda Corynebacteria nazivaju se korineformne bakterije ili difteroidi. Predstavljene su gram-pozitivnim nepokretnim štapićima, često sa zadebljanjima na krajevima, nalik na buzdovan (coryne - mace). Difteroidi su široko rasprostranjeni u zemljištu, vazduhu, prehrambeni proizvodi(mlijeko). Među njima se mogu izdvojiti tri ekološke grupe:
Ljudski i životinjski patogeni;
biljni patogeni;
Nepatogene korinebakterije.
Mnoge vrste difteroida su normalni stanovnici kože, sluzokože ždrijela, nazofarinksa, očiju, respiratornog trakta, uretru i genitalije.
Difterija .
Difterija je akutna zarazna bolest djetinjstvo, koji je okarakterisan intoksikacija organizam toksin difterije i karakteristika fibrinozna (difteritska) upala na mjestu lokalizacije patogena (phther - film).
Morfološka i tinktorijalna svojstva. C. diphtheriae - tanki polimorfni štapići s krajevima u obliku batine, često sadrže volutinske inkluzije, otkrivene bojenjem metilen plavim ili Neisserom. Kod potonjeg, štapići su obojeni slamnato žuto, zrna volutina (polimetafosfata) su tamno smeđa. U kulturama su štapići međusobno pod uglom (obilježja podjele), tvoreći različite oblike - raširene prste, V, Y, L, itd. Imaju mikrokapsulu, kao i fimbriju, koji olakšavaju prianjanje na epitel sluzokože.
kulturna dobra. Bakterije korijena difterije ne rastu na jednostavnim podlogama. Potrebne su podloge sa krvlju ili krvnim serumom (Leffler, Roux medij), na kojima se rast uočava nakon 10-12 sati, a za to vrijeme prateća (kontaminirajući uzorci) mikroflora nema vremena da se u potpunosti razvije.
Najoptimalniji telurit medij i telurit-McLeod čokoladni agar. Visoke koncentracije kalijevog telurita u ovim medijima inhibiraju rast strane flore. Corynebacterium diphtheria reducira telurit u metalni telur, koji njihovim kolonijama daje tamno sivu ili crnu boju.
Ovaj patogen proizvodi biotipovi - gravis, mitis, intermedius, koji se razlikuju po morfologiji, antigenskim i biohemijskim svojstvima, težini bolesti kod ljudi. Gravis tip često uzrokuje izbijanje i teži tok, karakteriziraju ga velike kolonije nazubljenih rubova i radijalne pruge u obliku tratinčice (R-forma). Tip mitis izaziva pretežno blage sporadične bolesti, formira male glatke kolonije sa glatkim rubovima (S-oblici) na gustim podlogama. Intermedijus tip zauzima srednju poziciju, a na gustim medijima formira RS-oblike koje su po karakteristikama prelazne, ali još manje. Na tečnim medijima izazivaju zamućenje medija, formiraju mrvljivi talog.
biohemijska svojstva. Corynebacterium diphtheria fermentira glukozu, maltozu. Nedostatak aktivnosti u vezi saharoza i urea bitan diferencijalni znak među difteroidima. Possess cistenaza aktivnost (cijepa cistein) - Piso test.
Antigenska struktura. Odredite O- i K-antigene. Polisaharidne komponente O-antigena ćelijskog zida imaju međugenerička svojstva, uzrokujući nespecifične unakrsne reakcije sa mikobakterijama, aktinomicetama (nokardija).
Površinski K-antigeni su kapsularni proteini koji imaju specifičnost vrste i imunogenost. Postoji 11 serotipova. Serotipovi 1-5 i 7 pripadaju biovaru gravis. Serotipizacija kultura se vrši u RA sa dijagnostički serumi na odgovarajuće serovare i poliglutinirajući serum.
U serološkoj dijagnostici kod ljudi češće se koristi RPHA, koji je osjetljiviji od RA. Trenutno se koristi i ELISA. Mnogi sojevi Corynebacterium diphtheria (posebno oni koji nisu toksični) su spontano aglutinirajući i poliaglutinirajući.
faktori patogenosti. Toksigeni sojevi uzročnika difterije proizvode jaku egzotoksin(termolabilni visokotoksični imunogeni protein). Netoksični sojevi ne uzrokuju bolest.
Toksin uzrokuje nepovratno blokiranje izduženja polipeptidnog lanca, tj. bilo koji sinteza proteina. Uglavnom su zahvaćeni određeni sistemi: simpatički-nadbubrežni, srčani i krvni sudovi, perifernih nerava. Postoje strukturni i funkcionalni poremećaji miokarda, demijelinizacija nervnih vlakana dovodi do paralize i pareze.
Samo lizogeni sojevi inficirani bakteriofagom (beta-fagom) koji nosi tox gen, koji kodira strukturu toksina (tj. nose gene umjerenog profaga u svom hromozomu), pokazuju sposobnost proizvodnje toksina. Tipizacija faga se koristi za razlikovanje sojeva corynebacterium diphtheria.
Epidemiologija. Rezervoar - osoba (bolesnik, rekonvalescent, bakterionosac). Glavni put prijenosa je vazdušni, sezonalnost je jesen-zima. Uzročnik je dobro očuvan niske temperature, osušeno stanje (slina, sluz, prašina).
Kliničke i patogenetske karakteristike. Uzročnik na mjestu unošenja uzrokuje fibrinoznu upalu sa stvaranjem fibrinoznog filma čvrsto zalemljenog za tkiva. Djelovanje egzotoksina (opisano u odjeljku “faktori patogenosti”) je bitno u nastaloj patologiji. Prema lokalizaciji izdvaja se difterija orofarinksa (najčešće), respiratornog trakta, nosa i rijetka lokalizacija (oči, vanjski spolni organi, koža, površina rane). Difterija ždrijela može uzrokovati sapi i asfiksiju.
Laboratorijska dijagnostika. Glavna dijagnostička metoda je bakteriološka. Koristi se za identifikaciju pacijenata, nosilaca bakterija, kontakata. Sterilnim brisevima uzimaju se materijal za mikroskopiju i usev - sluz iz grla i nosa, filmovi sa krajnika i drugih mesta sumnjivih na prisustvo lezija difterije.
Uzročnik se izoluje inokulacijom na selektivnu teluritnu podlogu i krvni agar. C.xerosis (mogući uzrok hroničnog konjunktivitisa) se često otkriva na sluznici oka, C.pseudodiphtheriticum (Hofmannov bacil) u nazofarinksu, a otkrivaju se i drugi difteroidi.
Za razlikovanje uzročnika difterije od difteroida, pokazatelji kao što su sposobnost obnavljanja telurita i stvaranja tamnih kolonija, Pisu test, fermentacija ugljikohidrata (glukoza, maltoza, saharoza) i uree, sposobnost rasta u anaerobnim uvjetima (tipično uzročnika difterije).
Obavezni korak je određivanje toksičnosti kulture. Najčešće metode su biološki testovi na zamorcima, reakcija taloženja na agaru. ELISA sa antitoksinom, genetskim sondama i PCR se također koriste za otkrivanje fragmenta A tox gena.
Tretman. Koriste se antitoksični serum protiv difterije, antibiotici i sulfa lijekovi.
Postinfektivni imunitet- otporan, pretežno antitoksičan. Za kvantifikacija nivo antitoksičnog imuniteta, ranije se koristio Schick test (intradermalno ubrizgavanje toksina), sada - RPHA sa eritrocitnim dijagnostikom dobijenim senzibilizacijom eritrocita toksoidom difterije.
Prevencija. Zasniva se na masovnoj imunizaciji stanovništva. Koriste se različiti preparati koji sadrže toksoid difterije - DTP, ADS, ADS-M, AD i AD-M.
Rod Bordetella . veliki kašalj
Bordetelle su male kokobacile, imaju oblik jajolikog štapića, gram-negativne, nestabilne tokom spoljašnje okruženje. Postoje tri glavne vrste.
1. B.pertussis - uzročnik velikog kašlja - akutne zarazne bolesti, praćene upalom larinksa, dušnika i bronhija i paroksizmalnim kašljem.
2. B.parapertussis - uzročnik parapertusisa.
3. B. bronchiseptica - uzročnik bolesti nalik hripavcu kod pasa, mačaka i zečeva, može izazvati kod ljudi respiratorne bolesti po tipu SARS-a (relativno retko).
kulturne karakteristike. Bordetelle su zahtjevne za okoliš, posebno uzročnik velikog kašlja. Za primarnu izolaciju ovih hemofilnih mikroorganizama koristi se krompir-glicerol agar sa dodatkom krvi (Borde-Zhang medij) ili kazein-ugljen agar (CUA). Na krvnim podlogama uzročnik velikog kašlja uzrokuje stvaranje malih kolonija metalne nijanse sa zatamnjenjem medija, na AMC - smeđkasto-smeđom obojenošću kolonija. Glavni oblici kolonija - glatka (S) - tzv. I faza (virulentne kulture) prelaze kroz međuoblike u grube (R) - faza IV, koja je praćena promjenom kulturnih, biohemijskih i antigenskih svojstava, gubitkom virulencija.
antigenski sastav. Postoje uobičajeni (generički) i specifični (specifični) antigeni. Specifični za vrstu su somatski O-antigeni (aglutinogeni) otkriveni u RA.
faktori patogenosti. Glavni faktor je termolabilan egzotoksin proteinske prirode, sa tropizmom za živčani i vaskularni sistem. Postoji termostabil endotoksin, koji ima toksična i senzibilizirajuća svojstva. Trahealni citotoksin uzrokuje oštećenje trepljastog epitela. Bakterije proizvode hijaluronidazu, lecitinazu, plazmakoagulazu.
Epidemiologija. Izvor infekcije kod velikog kašlja i paravelikog kašlja su pacijenti sa tipičnim i izbrisane forme infekcije. Mehanizam infekcije je vazdušnim putem. Uzročnik koji uđe u sluznicu respiratornog trakta se umnožava, oslobađa egzo- i endotoksine, nekrotizira sluznicu, iritira receptore za kašalj i centar za kašalj oblongata medulla izaziva grčevite napade kašlja.
Laboratorijska dijagnostika. Sjetva se vrši metodom "kašljastih ploča" ili se materijal uzima brisom stražnjeg ždrijela uz setvu na Borde agar - Zhangu i AMC. Identifikacija izolovanih kultura se vrši prema morfološkim i kulturnim osobinama, kao iu RA sa specifičnim serumima. Za ekspresnu dijagnostiku i identifikaciju koristi se metoda fluorescentnih antitijela.
Za serološku dijagnostiku koriste se različite metode - RA, RSK, RPGA sa proučavanjem uparenih seruma uzetih u dinamici infektivnog procesa.
Tretman. U srcu tretmana antibiotska terapija antibiotici (gentamicin, ampicilin, itd.).
Imunitet i imunoprofilaksa. Postinfektivni imunitet je stabilan, specifičan za vrstu, zbog humoralnih i ćelijskih faktora.
Za vakcinaciju se koriste mrtve faze I bordetele. AT DTP vakcina postoji komponenta pertusisa (20 milijardi mikrobnih tijela/ml).